大鼠精索静脉曲张模型附睾中丙二醛、总抗氧化物及唾液酸含量的改变及意义

目的:探讨大鼠左侧精索静脉曲张后同侧附睾组织中丙二醛(MDA)、总抗氧化物(TAC)和附睾管腔中唾液酸(SA)含量的改变及意义。方法:用8只雄性SD大鼠建立左侧精索静脉曲张模型,另取8只SD大鼠作为对照组。硫代巴比妥酸法和铁离子还原法分别检测附睾组织中MDA和TAC含量;5甲-基苯二酚法检测附睾腔液中SA含量。结果:大鼠左侧精索静脉曲张模型建立后的第7 d,同侧附睾组织中MDA和TAC含量,模型组与对照组相比,差异有显著性(P<0.005);附睾管腔液中SA含量,模型组明显低于对照组,差异有显著性(P<0.005)。结论:大鼠左侧精索静脉曲张会导致同侧附睾组织中活性氧增加,TAC含量下降,进而影响到附睾上皮细胞合成和分泌SA的功能。     

大鼠睾丸扭转复位后附睾上皮细胞凋亡及唾液酸变化

目的:探讨大鼠睾丸扭转复位后,附睾上皮细胞凋亡与唾液酸分泌的关系。方法:24只雄性SD大鼠建立左侧睾丸扭转复位模型,分为对照组、扭转2h和4h共3组,每组8只。TUNEL法检测附睾上皮细胞凋亡,5-甲基苯二酚法检测扭转侧附睾唾液酸的含量。结果:睾丸扭转2h复位后24h,扭转侧附睾上皮细胞凋亡指数与对照组相比上升不明显(P>0.05),唾液酸含量改变不明显(P>0.05);扭转4h复位后24h,扭转侧附睾上皮细胞凋亡指数与对照组相比上升极显著(P<0.001),唾液酸含量下降明显(P<0.05)。结论:睾丸扭转2h复位后24h,附睾上皮细胞未发生凋亡,其分泌唾液酸功能不受影响;扭转4h复位后24h,附睾上皮细胞凋亡严重,其分泌唾液酸功能下降。     

Palomo和改良Palomo曲张精索内静脉结扎术对大鼠附睾的影响

目的:探讨Palomo曲张精索内静脉结扎术(PV)和改良Palomo曲张精索内静脉结扎术(MPV)对大鼠同侧附睾的影响。方法:50只雄性青春期SD大鼠,随机分为对照组、实验性精索静脉曲张(EV)组、PV组和MPV组。部分结扎左肾静脉建立大鼠EV模型,MPV组大鼠行保留睾丸动脉的曲张精索内静脉结扎术(MPV),PV组大鼠行包含睾丸动脉的曲张精索内静脉集束结扎术(PV)。检测各组大鼠左侧附睾的显微结构、超微结构、唾液酸和肉毒碱含量。结果:EV组和PV组附睾上皮的显微结构和超微结构明显异常。对照组唾液酸和肉毒碱浓度显著高于EV组和PV组(P<0.05),与MPV组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EV可导致大鼠同侧附睾组织结构和功能的损害,MPV可以修复这些损害,而PV则进一步加重这些损害。     

大鼠精索静脉曲张氧化应激介导附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1损伤及对附睾功能的影响

目的:探索精索静脉曲张(VC)大鼠模型中氧化应激介导附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1损伤及对附睾功能影响。方法:将45只体重220～235 g的SD大鼠随机分为假手术组(单纯暴露并分离左肾静脉)、实验组(部分缩窄左肾静脉并充分结扎精索静脉侧支)和治疗组[造模术后给予150 mg/(kg·d)维生素E灌胃60 d],每组各15只。模型构建后60d分别观察左侧附睾组织学改变,采用qPCR、免疫组化染色、免疫荧光染色及Western印迹等检测左侧附睾上皮连接蛋白ZO-1及连接相关蛋白表达水平,同时检测附睾组织超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)活性,丙二醛(MDA)、α葡糖苷酶含量以及精子活力指标。结果:与假手术组相比,实验组左侧附睾上皮结构紊乱,上皮细胞数量减少,可见部分上皮细胞脱落至附睾管腔。qPCR检测claudin11、β-catenin、JAM-A、cadherin12、ZO-1等多个连接蛋白表达,结果显示除实验组较假手术组ZO-1表达明显下调外(P0.05),其余蛋白均无显著差异。免疫组化染色、免疫荧光染色Western印迹结果显示,与假手术组相比,实验组ZO-1表达明显降低(P0.05);经维生素E治疗后,治疗组ZO-1表达较实验组明显升高(P0.05)。实验组较假手术组大鼠附睾组织中MDA明显升高[(1.21±0.18)nmol/mg protein vs(0.41±0.05)nmol/mg protein,P0.05)],SOD[(298.62±67.84)U/mg protein vs(814.65±73.64)U/mg protein,P0.05)]、T-AOC[(0.24±0.04)nmol/mg protein vs(0.84±0.07)nmol/mg protein,P0.05)]、α葡糖苷酶[(5.82±1.24)U/mg protein vs(11.72±2.72)U/mg protein,P0.05)]明显降低;经维生素E干预后,治疗组SOD [(497.73±48.03)U/mg protein]、T-AOC[(0.42±0.06)nmol/mg protein]、α葡糖苷酶[(9.11±1.91)U/mg protein]较实验组明显回升(P0.05),MDA[(0.69±0.12)nmol/mg protein]明显下降(P0.05)。附睾精子活力检测,实验组较假手术组前向运动精子百分率明显降低[(31.33±6.32)%vs(71.21±5.21)%,P0.05],经维生素E干预后治疗组[(60.68±5.31)%]明显提高(P0.05)。结论:精索静脉曲张通过氧化应激导致附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1表达下调,附睾功能损伤。抗氧化剂维生素E能有效改善精索静脉曲张附睾氧化应激水平,促进ZO-1表达上调,改善附睾功能。     

强精胶囊对精索静脉曲张大鼠附睾功能性指标及精子质量的影响

目的:观察强精胶囊对精索静脉曲张大鼠附睾功能性指标及精子质量的影响.方法:100只青春期雄性SD大鼠,随机抽取10只为假手术组,90只缩窄左肾静脉建立精索静脉曲张模型,随机分为模型组、强精胶囊高中低剂量组、五子衍宗胶囊组和少腹逐瘀胶囊组.分别给予相应药物灌胃,观察大鼠附睾精子密度与活力的变化,检测附睾α-糖苷酶的含量(葡萄糖氧化酶法)和L-肉毒碱的含量(DTNB法).结果:模型组大鼠附睾精子活力与密度低下、α-糖苷酶与L-肉毒碱含量低下;强精胶囊高剂量组精子活力与密度、α-糖苷酶与L-肉毒碱含量较中、低剂量组、五子衍宗胶囊组、少腹逐瘀胶囊组明显增高(P<0.01).结论:强精胶囊可以改善模型大鼠精子密度与活力,提高附睾α-糖苷酶与L-肉毒碱的含量.     

双侧附睾肿块伴不育患者α-葡糖苷酶结果分析

目的:通过测定不育患者精浆α-葡糖苷酶含量与双侧附睾肿块大小和精子密度的关系,探讨α-葡糖苷酶在附睾梗阻性无精子症诊断中的价值。方法:根据精子密度将76例不育患者分为正常精子密度组(n=27),少精子症组(n=21),梗阻性无精子症组(n=28),分别测定不育患者和正常对照人群的性激素、精浆α-葡糖苷酶及WBC染色,各组分别行阴囊触诊和阴囊B超检查双侧附睾肿块的大小。结果:梗阻性无精子症组精浆α-葡糖苷酶含量(22.01±6.10)U/m l与各组比较差异有显著性(P<0.05),且精浆α-葡糖苷酶含量和双侧附睾肿块体积(r=-0.417,P<0.05)与白细胞(r=-0.342,P<0.05)呈负相关。结论:α-葡糖苷酶在判断附睾肿块导致的梗阻性无精子症中有一定的诊断价值。     

大鼠睾丸扭转复位后附睾上皮细胞凋亡及肉碱变化

目的:探讨大鼠睾丸扭转复位后,附睾上皮细胞凋亡与肉碱分泌的关系。方法:24只健康成年雄性SD大鼠随机均分为:对照(扭转0 h)、A组(扭转2 h)和B组(扭转5 h),建立左侧睾丸扭转复位模型。TUNEL法检测附睾上皮细胞凋亡,DTNB法检测扭转侧附睾肉碱的含量。结果:睾丸扭转2 h复位后24 h,扭转侧附睾上皮细胞凋亡指数与对照组相比,上升不明显(P>0.05),肉碱含量改变不明显(P>0.05);扭转5 h复位后24 h,扭转侧附睾上皮细胞凋亡指数与对照组相比,上升极显著(P<0.01),肉碱含量明显下降(P<0.05)。结论:睾丸扭转2 h复位后24 h,附睾上皮细胞凋亡增加无显著性,其浓缩分泌肉碱的功能不受影响;扭转5 h复位后24 h,附睾上皮细胞凋亡严重,其浓缩分泌肉碱的功能下降。     

精浆中性α-葡糖苷酶与附睾梗阻性无精子症梗阻部位的相关性研究

目的:探讨精浆中性α-葡糖苷酶与附睾梗阻性无精子症梗阻部位的相关性。方法:59例附睾梗阻性无精子症患者,术前检测精浆中性α-葡糖苷酶水平,然后采用显微镜下阴囊探查术确定附睾梗阻部位。分析精浆中性α-葡糖苷酶与附睾梗阻部位的相关性。结果:双侧附睾尾部梗阻25例,双侧附睾体部梗阻15例,双侧附睾头部梗阻12例,一侧附睾头部对侧尾部梗阻4例,一侧附睾体部对侧尾部梗阻3例。双侧附睾尾部、体部、头部梗阻术前精浆中性α-葡糖苷酶水平分别为(4.1±1.9)、(13.8±4.4)、(46.8±19.3)mU/1次射精,3组间差异显著(P<0.05)。结论:精浆中性α-葡糖苷酶与附睾梗阻部位具有显著的相关性,可用于判断附睾梗阻的部位、手术愈后,缩短探查手术的时间。     

海洛因及补偿嘌呤核苷酸对大鼠附睾中性α葡糖苷酶的影响

目的:研究海洛因依赖及戒断大鼠附睾中性α葡糖苷酶含量的变化,及嘌呤核苷酸干预的影响。方法:采用逐渐递增剂量法腹腔注射海洛因,建立海洛因依赖及戒断大鼠模型,80只Wistar大鼠随机均分成对照组(生理盐水)、核苷酸组(不给海洛因)、海洛因组、海洛因+核苷酸组(同时给药)、戒断3d组、戒断9d组、核苷酸3d组(海洛因停药后给核苷酸3d)及核苷酸9d组(海洛因停药后给核苷酸9d),检测各组大鼠附睾中性α葡糖苷酶含量的变化。结果:与对照组比较,海洛因组中性α葡糖苷酶的活性明显降低(P<0.05);戒断3d组与戒断9d组的中性α葡糖苷酶活性亦低于对照组,但没有显著性差异;与对照组相比,核苷酸组、海洛因+核苷酸组、核苷酸3d组和核苷酸9d组的中性α葡糖苷酶活性变化不明显,差异亦无显著性(P>0.05)。结论:海洛因使大鼠附睾中性α葡糖苷酶活性下降,并且在停药后仍会持续一段时间,不能立即恢复。嘌呤核苷酸补偿可以使中性α葡糖苷酶含量保持相对稳定。     

α-生育酚对精索静脉曲张大鼠生殖细胞凋亡的影响

目的:探讨α-生育酚对精索静脉曲张(VC)大鼠睾丸生殖细胞损害的保护作用。方法:采用成年雄性Wistar大鼠10只复制精索静脉曲张疾病模型,4周后开始每日肌注α-生育酚0.5mg/(100g体重),共4周(生育酚组)。同时设手术组及假手术组进行对照。8周后用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)检测睾丸生殖细胞凋亡指数(AI)。结果:生育酚组动物左侧睾丸重量显著高于手术组(P<0.05),低于假手术组(P<0.05);生育酚组细胞凋亡率[左侧(5.34±1.28)%,右侧(5.87±1.25)%]高于假手术组[左侧(4.72±1.02)%、右侧(4.88±1.28)%](P<0.05),而显著低于手术组[左侧(9.05±2.51)%,右侧(7.22±1.35)%](P<0.05)。结论:α-生育酚能降低精索静脉曲张大鼠生殖细胞的凋亡指数,延缓睾丸细胞损害的病程,对精索静脉曲张导致的睾丸损害具有一定的保护作用。     

实验性精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸、附睾精子结合抗原11 mRNA及其蛋白异构体表达的影响

目的:研究实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对青春期大鼠睾丸和附睾中精子结合抗原11(SPAG11)mRNA及其蛋白异构体SPAG11E表达的影响,并探讨其与精索静脉曲张导致男性不育的关系。方法:40只SD大鼠随机分为ELV2周组、4周组,假手术对照2周组、4周组,每组10只。ELV组行部分结扎左肾静脉建立青春期SD大鼠ELV模型,假手术对照组仅显露左肾静脉过程,但不结扎。应用RT-PCR和免疫组化法(n=5)检测SPAG11 mR-NA及SPAG11E蛋白在ELV2周组和ELV4周组及各自对照组大鼠双侧睾丸、附睾中的表达变化。结果:RT-PCR结果显示,SPAG11基因376bp的特异扩增产物仅见于大鼠附睾组织中。免疫组化结果显示,SPAG11E蛋白主要与睾丸生精上皮的圆形和长形精子细胞的顶体泡和顶体、睾丸间质细胞的胞质相结合;在附睾管上皮主细胞胞质和顶部静纤毛中表达。对RT-PCR的相对吸光度值和免疫组化的灰度值进行统计学分析显示:①左侧附睾ELV2周和4周组SPAG11 mRNA和SPAG11E蛋白的表达与各自右侧组及各自对照组比较均有显著减弱(P<0.05或P<0.01);左侧附睾ELV4周组SPAG11mRNA与SPAG11E的表达较ELV2周组显著减少(P<0.05或P<0.01);右侧附睾ELV4周组SPAG11E的表达也较ELV2周组显著减少(P<0.01);②两实验组双侧睾丸SPAG11E蛋白的表达与相应对照组比较均未见明显差异(P>0.05),且在ELV2周组和ELV4周组之间该蛋白的表达也无显著性差异(P>0.05)。结论:SPAG11是特异表达于附睾的基因,在大鼠睾丸和附睾中均可见其蛋白异构体SPAG11E免疫阳性反应,其定位及表达水平具有细胞特异性和区域特异性,而且SPAG11 mRNA及SPAG11E蛋白在ELV模型鼠附睾中的表达发生了明显变化,这提示SPAG11不仅可能在大鼠精子发生、成熟过程中发挥重要作用,还可能与精索静脉曲张所致的男性不育相关。     

实验性精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸、附睾中CRES蛋白表达的影响

目的:研究青春期大鼠实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对睾丸和附睾中胱蛋白酶抑制剂相关的附睾精子发生(CRES)蛋白表达的影响,探索精索静脉曲张导致不育的机制。方法:建立青春期雄性SD大鼠ELV模型,采用免疫组化及蛋白印迹方法检测CRES蛋白在ELV 2周组(n=8)、4周组(n=8)及其相应的对照组(n均=5)大鼠睾丸和附睾头、体、尾中的表达变化。结果:免疫组化显示,CRES蛋白在ELV实验组和对照组大鼠睾丸和附睾中均有表达。在睾丸中,CRES蛋白主要定位于圆形和长形精子细胞的胞质、精子的顶体以及残余体中,其表达与生精周期密切相关,Ⅰ~Ⅲ和Ⅸ~ⅩⅣ期表达最强,Ⅶ~Ⅷ期表达次之,Ⅳ~Ⅵ期表达减弱。在附睾中,CRES蛋白主要表达于从附睾起始段到尾部的上皮主细胞的胞质中,且以体、尾部表达最强,头部次之,管腔分泌物也呈阳性表达。实验组比对照组CRES蛋白表达增强。W estern印迹显示:实验组和对照组大鼠睾丸和附睾在相对分子质量(Mr)为19 000和14 000处均可见CRES蛋白条带,其中以Mr19 000处表达更为明显。实验组CRES蛋白的表达比对照组明显增强。对免疫组化和W estern印迹结果进行灰度值和积分吸光度值(IA)测定,并经统计学分析显示:ELV 2周组和4周组比其相对应的对照组表达增强且差异有显著性(P<0.05或P<0.01),而ELV各组间未见CRES蛋白表达有明显差异(P>0.05)。结论:CRES蛋白在大鼠睾丸和附睾中均有表达,睾丸中表达呈现生精周期特异性和细胞特异性,附睾中表达呈现附睾上皮区段和细胞特异性;CRES蛋白在青春期ELV大鼠睾丸和附睾中的表达比对照组明显增强。这些结果提示CRES蛋白在精子发生和精子成熟过程中可能起着重要的作用,并且可能与ELV引起的不育或生育力低下有关。     

大鼠睾丸扭转复位后附睾唾液酸含量变化及意义

目的 :探讨大鼠睾丸扭转 2h和 4h复位后 2 4h附睾唾液酸含量的变化和意义。　方法 :用 2 4只雄性SD大鼠建立左侧睾丸扭转复位模型 ,分为对照组、扭转 2h组和 4h组 ,每组 8只。 5 甲基苯二酚法检测扭转侧附睾唾液酸的含量。　结果 :睾丸扭转 2h复位后 2 4h扭转侧附睾唾液酸含量 [(2 3.385± 9.2 2 0 )mg/mgprot]改变不明显 ;睾丸扭转 4h复位后 2 4h附睾唾液酸含量 [(13.72 5± 7.80 1)mg/mgprot]下降明显 (P <0 .0 5 )。　结论 :睾丸扭转 2h复位后 2 4h附睾分泌唾液酸功能不受影响 ,扭转 4h复位后 2 4h附睾分泌唾液酸功能下降 ;附睾耐受缺血再灌注损伤的时间可能较长。     

alpha-1,4-Glucosidase activity in infertile oligoasthenozoospermic men with and without varicocele

This work aimed to assess seminal alpha-1,4-glucosidase activity in infertile oligoasthenozoospermic men associated with and without scrotal varicocele. Eighty men were investigated. They were divided into three groups: group 1 (n = 20), fertile normozoospermic men; group 2 (n = 30), oligoasthenozoospermia with varicocele; and group 3 (n = 30), oligoasthenozoospermia without varicocele. The patients underwent medical history, clinical examination, conventional semen analysis and estimation of seminal plasma alpha-1,4-glucosidase activity by double-beam spectrophotometer method and serum testosterone by radioimmunoassay method. There was a significant decrease in the mean seminal alpha-1,4-glucosidase activity levels in infertile men versus controls (mean +/- SD; 7.66 +/- 0.433, 2.088 +/- 0.565, 5.384 +/- 0.85 mU ml(-1) respectively). Mean serum testosterone levels demonstrated nonsignificant differences between studied groups. Seminal alpha-1,4-glucosidase activity levels demonstrated significant correlation with sperm count, sperm motility percentage and serum testosterone in oligoasthenozoospermia with varicocele group and demonstrated nonsignificant correlation in other groups. It is concluded that varicocele-induced hypoxia is the adverse effect that causes both oligoasthenozoospermia and decreased seminal alpha-1,4-glucosidase levels.     

Effect of experimental varicocele on structure and function of epididymis in adolescent rats

Aim: To study the effect of experimental left varicocele (ELV) on epididymal structure and function in adolescent Sprague-Dawley rats. Methods: ELV was induced by partial ligation of the left renal vein. Sham-operated animals served as the controls. Four and 8 weeks after the operation, the histological, ultrastructural and biochemical (alpha-glucosidase activity and carnitine content) changes in different segments of the epididymis were observed. Results: In the treated animals, there were degeneration of the epididymal epithelium and edema of the interstitial tissue; numerous shedding cells, residual bodies, deformed sperm and macrophages appeared in the epididymal lumen. Morphometric measurement indicated a significant reduction in the epididymal tubular diameter (P<0.05) and a significant increase in the epididymal interstitial area (P<0.05) compared with the controls. Ultrastructural study showed sparse microvilli of the columnar epithelium, increased and enlarged lysosomes in the principal cells wi     

实验性精索静脉曲张大鼠附睾分泌蛋白的鉴定研究

目的　研究精索静脉曲张对附睾合成与分泌蛋白的影响 ,鉴定病理状况下附睾特异改变的蛋白成分。　方法　部分结扎左肾静脉建立实验性左侧精索静脉曲张大鼠动物模型。用 SDS-PAGE和双向电泳分离左附睾尾匀浆上清中的蛋白质组分 ,切下稳定出现改变的蛋白质所在的条带或斑点 ,进行胶内胰蛋白酶消化 ,酶解得到的最终肽混合物进行肽质量指纹谱测定。通过检索互联网上的蛋白质数据库确定该蛋白的可能成分。　结果　与对照动物相比 ,实验性左侧精索静脉曲张大鼠左附睾尾匀浆上清中一分子量约2 0× 1 0 3、等电点约 5.5的蛋白成分明显增加。经质谱分析结合网上数据库检索表明 ,该蛋白是附睾视黄酸结合蛋白。　结论　实验性左侧精索静脉曲张导致大鼠附睾中视黄酸结合蛋白含量升高 ,这一改变对精子在附睾中成熟及精子功能的影响有待进一步研究     

实验性精索静脉曲张对大鼠睾丸和附睾中血管内皮生长因子及其受体1表达的影响

目的:研究实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对青春期大鼠睾丸、附睾中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体fms样酪氨酸激酶(Flt-1)蛋白表达的影响。方法:建立青春期雄性SD大鼠ELV模型,采用免疫组化SP法检测VEGF和Flt-1在ELV组及假手术对照组睾丸、附睾组织中的表达变化。结果:VEGF和Flt-1蛋白在ELV组和对照组大鼠睾丸、附睾中均有表达,其定位和表达量具有细胞特异性和区域特异性。经图像分析和统计检测显示,ELV2周和4周组双侧睾丸和附睾中VEGF蛋白的表达与相应对照组比较均显著增加(P<0.01和P<0.05);ELV2周组双侧睾丸和附睾中Flt-1蛋白的表达与相应对照组比较也显著增加(P<0.01和P<0.01),但4周时在双侧睾丸和左侧附睾中Flt-1蛋白的表达显著下降(P<0.01和P<0.05),而右侧附睾未见明显差异(P>0.05)。结论:实验性精索静脉曲张可造成青春期大鼠睾丸、附睾中VEGF和Flt-1的表达量变化,该变化可能会影响精子的发生和成熟,因而可能是VC引起男性生育力下降甚至不育的原因之一。     

青春期大鼠实验性精索静脉曲张对附睾细胞线粒体Ca~(2+)和细胞色素C的影响

目的 :探讨外科所致的精索静脉曲张对青春期大鼠附睾细胞线粒体Ca2 + 及细胞色素C的影响。　方法 :对 4 0只青春期雄性Wistar大鼠 ,通过部分结扎左肾静脉或显露左肾静脉建立精索静脉曲张模型 (VG ,2 0只 )和假手术模型 (SOG ,2 0只 ) ,术后 10周 ,取双侧附睾 ,检测附睾头、体部细胞线粒体Ca2 + 、细胞色素C含量。　结果 :与SOG组相比 ,VG组附睾细胞线粒体Ca2 + 含量显著降低 (P <0 .0 0 1) ,细胞色素C含量显著增高 (P <0 .0 5 )。　结论 :外科所致精索静脉曲张大鼠附睾细胞钙稳态失衡、线粒体有损伤 ,这些变化可能是影响其生育能力的机制之一。