荧光定量PCR检测CK20在直肠癌外周血中表达的意义

目的:分析外周血中CK20基因产物的表达与直肠癌Dukes分期和组织学分型的关系,探讨用FQ-PCR检测CK20来预测直肠癌微转移以及判断患者预后的价值.方法:采集47例直肠癌患者外周血标本、10例良性肠道病患者及10例健康志愿者外周血标本.用FQ-PCR检测外周血CK20的表达情况.结果:10例良性肠道病患者及10例健康志愿者外周血中均检测不到CK20的表达,与直肠癌组有明显差异(72.34%,34/47)(χ2=37.434,P<0.01).47例直肠癌患者外周血中CK20的表达量与Dukes分期呈正相关(r=0.680,P<0.01).结论:直肠癌外周血中CK20的表达量与肿瘤分期有关,并且分期越晚CK20的表达量越多,用CK20FQ-PCR检测癌转移较常规病理组织学敏感,对直肠癌患者病情的判定、疗效评价及恢复情况具有重要临床意义.     

结直肠癌患者外周血CK20 mRNA的检测及意义

采用RT-PCR技术检测60例结直肠癌患者和10例健康志愿者骨髓、门静脉和外周血中的细胞角蛋白（CK）20 mRNA。10例志愿者三种标本中均未检测到CK20 mRNA。60例结直肠癌患者骨髓、门静脉血CK20 mRN阳性率分别为78.3%（47/60）、75.0%（45/60）;单次外周血采样CK20 mRNA阳性表达率为45.0%（27/60） 44.8%,两次采样总阳性表达率为70.0%（42/60）;外周血总阳性率略低于骨髓和门静脉血（P〉0.05）;外周血重复采样阳性率高于单次采样的阳性率（P〈0.05）;外周血CK20 mRNA阳性表达者1a内局部或远处转移率明显高于阴性表达者（P〈0.05）。认为结直肠癌患者外周血CK20 mRNA的检测与骨髓、门静脉血有相似的敏感性和特异性,可以作为结、直肠癌微转移的判断指标并指导其治疗和预后判断。     

结直肠癌患者血癌胚抗原mRNA检测的临床意义

背景:结直肠癌预后不佳,进一步研究结直肠癌患者肿瘤标记物的表达及其与肿瘤临床病理特征的关系对指导临床治疗具有重要意义.目的:检测结直肠癌患者的外周血癌胚抗原(CEA)、CEA mRNA以及肿瘤回流静脉血CEAmRNA,探讨血CEA mRNA检测在结直肠癌诊治中的临床意义.方法:以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测71例结直肠癌患者的外周血清CEA,同时以巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测其外周血(71例)和肠系膜上静脉血(35例)CEA mRNA.分析血CEA和CEA mRNA的表达与结直肠癌临床病理特征的关系.结果:结直肠癌患者的外周血CEA mRNA阳性率为69.0%,显著低于肠系膜上静脉血的82.9%(P<0.05),外周血CEA阳性率(45.1%)显著低于CEA mRNA阳性率(P<0.01).Dukes C期和D期结直肠癌患者的外周血CEA和CEA mRNA阳性率显著高于A期和B期患者(P<0.05).Dukes D期肝转移患者肠系膜上静脉血CEA mRNA阳性率为85.7%(6/7).结论:检测外周血CEA mRNA有助于结直肠癌患者的预后判断,肿瘤回流静脉血CEA mRNA的检测对结直肠癌肝转移的诊断具有重要意义.     

外周血肿瘤细胞CK20表达与结直肠癌患者术后复发和转移的关系

目的探讨结直肠癌患者外周血循环肿瘤细胞CK20阳性表达与术后患者肿瘤复发和转移的关系。方法选取2010年6月至2011年5月,211例结直肠癌患者作为研究对象,以CK20作为结直肠癌患者的肿瘤细胞标志物,采用Cellular FACTT方法检测术后外周血循环肿瘤细胞CK20表达情况,并结合临床病理指标及术后随访资料对患者肿瘤进展因素和临床预后进行相关性分析。结果 211例结直肠癌患者术后外周血循环肿瘤细胞CK20阳性率为59.2%(125/211),且与肿瘤TNM分期及肝转移密切相关(P<0.001);外周血循环肿瘤细胞阳性检出患者3年术后复发或转移率和无瘤生存期均明显劣于阴性检出患者(P<0.001);进一步多因素Cox风险模型分析发现,外周血肿瘤细胞CK20阳性可能是结直肠癌患者3年无瘤生存的独立影响因素(P<0.05)。结论外周血循环肿瘤细胞CK20阳性率与结直肠癌患者的肿瘤分期和肝转移密切相关,是结直肠癌患者3年无瘤生存转归的独立影响因素,对预测结直肠癌患者预后具有一定的临床意义。     

结直肠癌组织中CD40mRNA的表达变化及临床意义

目的 观察结直肠癌组织中CD40 mRNA的表达变化,并探讨其临床意义.方法 应用RT-PCR法分别检测30例结直肠癌及其癌旁组织中CD40 mRNA的相对表达量,并分析其表达与结直肠癌患者性别、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期相关性.结果 结直肠癌组织中CD40 mRNA的表达水平显著低于癌旁组织(P＜0.05);结直肠癌组织中CD40 mRNA的表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期相关(P＜0.05),与患者性别、浸润深度及远处转移无关(P＞0.05).结论 结直肠癌组织中CD40mRNA表达显著降低,并与肿瘤的浸润性生长相关;CD40分子可能成为判断结直肠癌预后的有效指标.     

CK19 mRNA在大肠癌患者外周血中的表达及临床意义

目的 探讨CK19 mRNA在大肠癌患者外周血的表达及临床意义.方法 应用巢式RT-PCR技术检测20例健康人、20例大肠腺瘤疾病患者和90例大肠癌患者外周血CK19 mRNA的表达.结果 健康人中CK19 mRNA不表达,大肠良性腺瘤疾病患者外周血中CK19 mRNA有1例表达,表达率为5%,大肠癌患者外周血中CK19 mRNA有53例,表达率为58.9%,CK19 mRNA表达率与肿瘤分期,瘤细胞的分化程度,肿瘤转移有显著相关性(均P<0.05).结论 CK19 mRNA作为检测大肠癌患者外周血微转移的分子标记物具有良好的敏感度和特异性同时CK19 mRNA可作为判断大肠癌患者的预后的指标.     

外周血CK7、CEA mRNA表达水平与食管癌患者肿瘤浸润深度及临床分期的关联性分析

目的研究外周血细胞角蛋白7(CK7)、癌胚抗原(CEA)mRNA表达水平与食管癌患者肿瘤浸润深度及临床分期的关联性。方法食管癌患者56例为观察组,另选同期健康体检者56例为对照组。对比两组CK7、CEA mRNA表达水平,并分析其与食管癌患者肿瘤浸润深度及临床分期的关联性。结果观察组CK7 mRNA、CEA mRNA阳性表达率均高于对照组(P0.05);食管癌组织中CK7、CEA mRNA表达水平与浸润深度、临床分期有关(P0.05)。结论外周血CK7、CEA mRNA表达水平在食管癌组织中均呈异常高表达,二者表达水平均与肿瘤浸润深度及临床分期有关。     

结直肠癌患者血清中血管内皮生长因子和一氧化氮表达水平及其临床意义

目的:探讨结直肠癌患者血清中血管内皮生长因子(VEGF)和一氧化氮(NO)表达水平及其临床意义.方法:分别采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法和分光光度法检测74例结直肠癌患者术前和45例结直肠腺瘤患者以及40例健康人血清中VEGF和NO的含量.结果:结直肠腺瘤患者血清VEGF和NO含量与健康人无明显差异(P＞0.05);结直肠癌患者血清VEGF和NO表达水平分别较结直肠腺瘤组以及健康人明显增高(P＜0.01),且结直肠癌浸润深度、有无淋巴结转移以及Dukes分期与血清VEGF和NO含量呈明显正相关(r=0.834,P＜0.01).结论:VEGF和NO与结直肠癌的发生发展密切相关,术前检测血清VEGF和NO含量可作为判断结直肠癌浸润转移以及Dukes分期的有效生物学指标.     

实时荧光定量RT-PCR检测结直肠癌中外周血端粒酶逆转录酶mRNA的表达及其临床意义

目的:建立外周血端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达量检测的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)系统,检测结直肠癌患者hTERT mRNA的表达并探讨其对结直肠癌微转移的诊断价值.方法:用实时荧光定量RT-PCR技术检测53例结直肠癌患者和21名健康人的外周血标本hTERT mRNA表达情况,分析其表达与肿瘤临床病理特征的关系并应用接受者操作特征曲线(ROC曲线)分析hTERT mRNA检测对结直肠癌的诊断价值.结果:结直肠癌组外周血hTERT mRNA表达水平显著高于正常对照组(t1=7.953,P＜0.05).其表达与肿瘤淋巴结转移、血行转移和TNM分期相关(t'/t=2.334,2.149,2.460,均P＜0.05)hTERT mRNA诊断结直肠癌的ROC曲线下面积0.91,诊断界值为Ct≤32.结论:应用实时荧光定量RT-PCR技术克服了传统PCR只能定性检测而不能定量检测的缺-点:外周血hTERT mRNA可作为诊断结直肠癌微转移的标记物.     

Detection of circulating gastric cancer cells in peripheral blood using real time quantitative RT-PCR

BACKGROUND/AIMS: Detection of occult cancer cells in peripheral blood or bone marrow has recently received a great deal of attention regarding the prediction of postoperative recurrence of the cancer, and for novel strategies of adjuvant therapy. This study addresses the detection of circulating tumor cells in peripheral blood in patients with gastric cancer using Quantitative RT-PCR. METHODOLOGY: Common mRNA targets for RT-PCR for detection of small numbers of cancer cells in gastric cancer are CK18, CK19, CK20, and CEA. Ten milliliter of peripheral venous blood was taken from 14 healthy Japanese volunteers and 101 patients with gastric cancer. Samples were analyzed using real-time TaqMan technology and a Model 7700-sequence system. The group of gastric cancer patients included 69 individuals with curative disease on preoperative diagnosis and 32 individuals with a non-curative operation or recurrence of the disease. RESULTS: The number of CK19 and CK20 mRNA copies was significantly increased in patients with a non-curative operation or recurrence of gastric cancer (CK19; p=0.0087, CK20; p=0.0022) compared with healthy volunteers. Cut-off levels of CK19 or CK20 copy numbers were determined by the maximum value of healthy volunteers. For CK19, there were 61 (88.4%) negative cases and 8 (11.6%) positive cases in 69 individuals with curative gastric cancer. There was a significant difference in tumor stages between CK19 positive and negative patients with curative disease on preoperative diagnosis. For CK20, there were 59 (85.5%) negative cases and 10 (15.5%) positive cases. There was no statistical difference between CK20 positive and negative cases for all clinicopathological factors. On postoperative day 14, there was a significant difference between positive and negative cases regarding tumor size, tumor stage, and lymph node metastasis for CK19, and tumor stage and lymph node metastasis for CK20. Five-year survival rates of patients with CK19 positive or negative cases were 50.0% or 79.0%, respectively (p=0.0347). While, for CK20, 5-year survival rates for positive cases was 51.9%, and for negative cases 78.9% (p=0.0490). CONCLUSIONS: Micrometastases of gastric cancer can be detected in circulating peripheral blood using quantitative real-time RT-PCR. CK19 is a better marker than CK18, CK20 and CEA, and could be clinically useful to estimate prognosis or to make a postoperative strategy of adjuvant treatment.     

结肠癌患者外周血VEGF-C和CK20 mRNA的表达与淋巴转移的关系

目的探讨结肠癌患者外周血VEGF-C mRNA和CK20 mRNA的表达与淋巴转移的关系。方法应用RT-PCR检测80例结肠癌患者、30例结肠良性肿瘤患者、30例健康人外周血VEGF-C mRNA和CK20 mRNA的表达。结果 VEGF-C mRNA在结肠癌患者外周血的阳性表达率为52.5%,在结肠良性肿瘤、健康人的表达率分别为10.0%、0,其中有淋巴结转移的结肠癌患者的阳性表达明显高于无淋巴结转移的阳性表达(P<0.05)。CK20 mRNA在结肠癌患者外周血的阳性表达率为60.0%,在结肠良性肿瘤、健康人的表达率均为0,其中有淋巴结转移的结肠癌患者的阳性表达明显高于无淋巴结转移的阳性表达(P<0.05)。结论结肠癌患者外周血VEGF-C mRNA和CK20 mRNA的表达与淋巴转移相关。     

大肠癌患者外周血人类斯钙素基因的检及其意义

目的探讨靶基因人类斯钙素(hSTC-1)在大肠癌患者外周血中的表达以及与肿瘤恶性程度的关系.方法采用RT-PCR方法检测15例健康成人、5例妊娠期妇女、14例消化道炎症疾病患者、57例大肠癌患者外周血的hSTC-1 mRNA.结果57例大肠癌患者外周血中hSTC-1 mRNA的阳性率为49.12%(28/57),并与大肠癌的临床分期有显著相关性(P＜0.05).而健康成人、妊娠期妇女、消化道炎症疾病患者外周血则无一例出现阳性.结论应用RT-PCR方法检测大肠癌患者外周血中的hSTC-1 mRNA具有高度敏感性和特异性,它有望成为判断大肠癌生物学行为恶性程度、转移和复发以及疗效观察的客观指标.     

巢式RT-PCR技术检测肺癌患者外周血及淋巴结中微量转移癌细胞

目的　建立检测肺癌患者外周血及淋巴结中微转移癌细胞的敏感分子检测方法 ,并探讨其临床应用价值。方法　采用巢式反转录聚合酶链反应 (RT- PCR)技术特异引物扩增细胞角蛋白 19(CK19) m RNA,检测76例肺癌患者外周血及淋巴结中 CK19m RNA的表达情况。结果　 76例肺癌患者中 39例外周血 CK19m RNA阳性 ,阳性率为 5 1.3% (39/ 76 ) ,2 7例肺良性病变中仅 1例阳性 ,阳性率 3.7% ,15例健康对照者均为阴性。全部肺癌患者 15 7枚淋巴结中 CK19m RNA阳性率 38.9% (6 1/ 15 7) ,常规病理方法检测淋巴结阳性率 14 .6 % (2 3/15 7) ,两者相比 ,P<0 .0 5 ;HE染色阴性的 134枚淋巴结中 ,经巢式 RT- PCR技术检测证实存在癌转移的阳性率为 2 8.3% (38/ 134) ,两者相比 ,P<0 .0 5。结论　巢式 RT- PCR技术是一种特异性和敏感性均较高的微量癌细胞转移检测方法 ,可能有助于肺癌微转移的早期诊断     

结直肠癌患者外周血中癌胚抗原-mRNA的表达及其临床意义

目的：肿瘤复发转移仍是威胁患者生存的重要原因，及早检出外周血中的循环肿瘤细胞并进行有效的综合治疗有着重要的临床意义。检测结“直肠癌患者外周血中癌胚抗原（CEA）－mRNA的表达及血清CEA蛋白的含量，并分析其临床价值。方法：35例有明确临床肿瘤病灶存在的结直肠癌患者、9例根治术后患者和37例健康志愿者，分别以逆转录PCR（RT－PCR）检测其外周血中CEA－mRNA的表达，时间分辨荧光方法测定其血清CEA蛋白的含量。结果：35例结直肠癌患者CEA－mRNA阳性率为45．7％，而健康对照组阳性率为2．7％，两者比较差异有显著性（P＜0．05）；9例术后患者CEA－mRNA仅2例阳性；CEA－mRNA阳性表达率与肿瘤分期相关，与肿瘤细胞分化程度并不相关。CEA－mRNA阳性组血清CEA蛋白阳性率（72．2％）显著高于CEA－mRNA阴性组（42．3％）。结论：外周血细胞中CEA－mRNA的表达与肿瘤分期相关，有可能作为结直肠癌微转换的一个监测指标。长期的随访有助于评价其临床价值。