单用TAM及联合应用5-FU对结肠癌细胞株生长抑制作用及增殖凋亡的影响

目的：探讨他莫昔芬(tamoxifen，TAM)单独或联合5-FU化疗对结肠癌细胞株生长抑制作用及凋亡的影响。方法：应用MTT法，比较单纯应用TAM和TAM与5-FU联合对SW480、HT29细胞株生长抑制作用，通过药物量-效关系曲线，观察TAM有无化疗增敏作用，同时检测PCNA和AI，探讨TAM联合5-FU对增殖、凋亡的影响。结果：单独应用TAM对SW480、HT29细胞株无生长抑制作用；TAM联合5-FU在一定浓度时可抑制SW480和HT29细胞的生长，提高对5-FU的敏感性，起到化疗增敏作用。通过对PCNA和AI2个指标的检测，随着浓度的增加和时间的延长，TAM联合5-FU抑制细胞的增殖和促进细胞的凋亡均呈上升趋势。结论：一定浓度的TAM能增加入结肠癌细胞株SW480、HT29对化疗药物5-FU的敏感性，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。     

Genistein联合5-FU对人结肠癌细胞株SW480增殖与凋亡的影响

目的:研究金雀异黄素(genistein)与5-FU对人结肠癌细胞株SW480增殖、凋亡的影响.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度genistein和5-FU单用或联用对结肠癌细胞株SW480的抑制作用;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况,并在透射电镜下观察凋亡细胞超微结构的改变;流式细胞术(FCM)分析药物作用后细胞周期的改变.结果:1)genistein与5-FU单用均能抑制SW480细胞的增殖,存在浓度依赖性和时间依赖性.2)genistein与5-FU联合作用时对抑制SW480细胞增殖有协同相加效应,在两者联合作用48 h,浓度分别为80 μmol/L和30 μg/mL时协同作用最明显(CI=0.51).3)TUNEL技术观察到genistein与5-FU单用或双用均可引起SW480细胞凋亡,且以双药效果为著.4)电镜观察到凋亡细胞核电子密度增加,核碎裂,可见凋亡小体,以双药联用最为显著.5)FCM分析SW480细胞经genistein处理后细胞生长阻断于G2期,与5-FU作用机制不同.结论:genistein可通过诱导细胞凋亡协同5-FU对大肠癌细胞株SW480的杀伤作用,为提高化疗药对结肠癌的治疗疗效提供新思路.     

芬太尼对结肠癌细胞株SW480增殖及侵袭的影响

目的：探讨不同浓度的芬太尼对结肠癌细胞株 SW480增殖和侵袭的影响。方法：选用不同浓度的芬太尼（0．5、5、50ng／ml）干预结肠癌细胞株 SW480,采用四甲基偶氮唑蓝（MMT）法检测细胞增殖,Transwell法测定细胞侵袭。结果：各组芬太尼孵育 SW480细胞48h 及72h 后,均能显著抑制细胞的增殖（P ＜0．05）,且呈浓度和时间依赖性。芬太尼孵育 SW480细胞48h,与对照组相比,各浓度组均浓度依赖性抑制凋亡（P＜0．05）。结论：芬太尼可抑制结肠癌细胞株 SW480的增殖及侵袭。     

芹菜素对人结肠癌细胞SW480增殖抑制作用的实验研究

目的:观察芹菜素对体外培养的人结肠癌SW480细胞的增殖抑制作用.方法:观察不同浓度[(10、30、60、90)μmol/L]的芹菜素在(24、48、72)h对人结肠癌SW480细胞增殖的影响:光学显微镜和电子显微镜观察芹菜素处理后人结肠癌SW480细胞形态结构的变化;运用四唑盐比色法(MTY)检测芹菜素对人结肠癌SW480细胞生长的影响.结果:经芹菜素处理的人结肠癌SW480细胞数量减少,部分细胞体积缩小,细胞膜完整,胞浆浓缩,核染色质固缩,细胞核碎裂,形成凋亡小体;MTT法检测显示芹菜素对人结肠癌SW480细胞的增殖有抑制作用,其抑制作用随着作用浓度的增加和作用时间的延长而增强.结论:芹菜素对人结肠癌SW480细胞的增殖有抑制作用,是一种高效低毒的药物.     

miR-140-5p调控Nrf2影响结肠癌细胞5-FU耐药性

目的 观察miR-140-5p对结肠癌耐药细胞株SW480/5-FU及其亲本细胞株SW480 5-FU敏感性的影响及其与核因子NF-E2相关因子2（NF-E2-related factor 2,Nrf2）的关系,探讨miR-140-5p调控结肠癌细胞5-FU耐药的可能机制。 方法 用结肠癌细胞株SW480构建结肠癌耐药细胞株SW480/5-FU,qRT-PCR法检测两株细胞中miR-140-5p的表达,CCK-8法和细胞集落形成实验评估miR-140-5p对两株细胞5-FU敏感性的影响;采用qRT-PCR法、Western blot法双荧光素酶报告基因验证miR-140-5p与Nrf2的关系,CCK-8法、细胞集落形成实验探讨miR-140-5p调控结肠癌细胞5-FU敏感性与Nrf2的关系。 结果 成功构建结肠癌耐药细胞株SW480/5-FU,其miR-140-5p表达水平显著低于亲本细胞株SW480（P＜0.05）;CCK-8法、细胞集落形成实验结果显示,miR-140-5p可增强SW480/5-FU细胞对5-FU的敏感性,而降低SW480对5-FU的耐药性;qRT-PCR法、Westren blot法、双荧光素酶报告基因实验共同证实miR-140-5p可结合并抑制Nrf2的表达;CCK-8、细胞集落形成实验表明,Nrf2过表达能逆转miR-140-5p对结肠癌耐药细胞SW480/5-FU的5-FU敏感性调控结果。结论 miR-140-5p可能通过结合并抑制Nrf2表达,增加结肠癌耐药细胞株SW480/5-FU对5-FU的敏感性。     

雷帕霉素与PD98059联合调控人结直肠癌细胞周期和mTOR信号转导通路

目的探讨雷帕霉素(RPM)与PD98059对人结直肠癌细胞的联合作用及机制。方法应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测RPM和PD98059对人结直肠癌细胞的生长抑制作用,应用流式细胞术检测RPM和PD98059对细胞周期的影响,应用免疫印迹法检测RPM和PD98059对于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路相关蛋白的调控。结果RPM与PD98059对人结直肠癌细胞株SW480、HCT116、HT29均有生长抑制作用,PD98059的作用具有一定的时间-浓度依赖性。在相同作用条件下,RPM与PD98059的联合抑制效果明显优于PD98059单独用药。RPM与PD98059单独或联合用药对人结直肠癌细胞株SW480、HCT116、H129的生长周期均有调控作用(P<0.01),但作用位点不同。RPM与PD98059可下调mTOR、p70s6K、4E-BP1蛋白的磷酸化水平,对SW480和HCT116细胞的总体4E-BP1蛋白水平也具有调控作用,以二者的联合作用最为显著。RPM与PD98059对SW480、HCT116、HT29细胞的mTOR和p70s6K总体水平无明显影响。结论RPM与PD98059可协同抑制人结直肠癌细胞株SW480、HCT116、HT29的生长,并阻滞其细胞周期。其作用机制可能涉及对mTOR信号转导通路相关蛋白磷酸化水平的调控。     

三苯氧胺联合化疗对人大肠癌细胞系SW480、HT29的作用

目的　研究三苯氧胺联合化疗药物对人结肠癌细胞系SW 4 80、HT2 9体外培养的影响及机制探讨。方法　应用MTT法 ,比较单纯用三苯氧胺和三苯氧胺与化疗药物联合对SW4 80、HT2 9细胞系生长抑制作用 ,通过化疗药物的量—效关系曲线 ,观察三苯氧胺有否化疗增敏作用 ,同时对mdr1编码产物Pgp的检测 ,探讨三苯氧胺可能的作用机制。 结果　在TAM浓度为 5 μmol/L时 ,能使SW4 80细胞系对 5 FU、MTX的敏感性分别提高 1.5 976、1.6 4 5 6倍 ;在 10 μmol/L时 ,使SW 4 80、HT2 9细胞系对 5 FU、MMC、MTX、ADM的敏感性分别提高 4 .15 2 4、2 .0 2 4 4、4 .7833、2 .2 32 3倍和 4 .7713、4 .786 5、4 .2 5 5 7、4 .4 713倍 ,差别有显著性 (P <0 .0 5 )。化疗药物使体外培养的SW 4 80、HT2 9细胞系产生耐药性 (P1,P2 <0 .0 5 ) ,TAM能显著逆转其耐药性 (P3,P4 <0 .0 5 )。结论　在体外实验中 ,一定浓度的TAM能增加人结肠癌细胞系SW 4 80、HT2 9对化疗药物 5 FU、MMC、MTX、ADM的敏感性 ,其机制可能为TAM抑制mdr1编码产物P gp的产生。     

三氧化二砷联合氟尿嘧啶抗人结肠癌Lovo细胞作用及其机制的研究

目的: 探讨三氧化二砷(As2O3)与氟尿嘧啶(5 FU)联合应用对人结肠腺癌细胞株Lovo的影响及其作用机制。方法:经不同浓度的As2O3 和(或)5- FU处理Lovo细胞后,采用MTT法测定细胞的增殖抑制效应;AO/EB荧光染色、DNA电泳、电镜和流式细胞术观察细胞凋亡和形态学及细胞周期变化;免疫组织化学法观察凋亡相关基因表达的变化。结果:与As2O3 或5 -FU单药作用相比,As2O3 与5- FU联合应用可显著增强人结肠癌细胞增殖抑制作用和诱导结肠癌细胞凋亡作用,联合用药后细胞周期分布发生改变,S期和G2/M期细胞比例下降,G0/G1 期细胞比例上升,癌细胞bcl- 2基因表达明显下降, bax和Fas基因表达显著增强。结论:As2O3与5 -FU联合应用具有显著协同抗大肠癌作用,其机制可能与增强诱导大肠癌细胞凋亡、细胞周期特异性药物与细胞周期调控剂联合增效以及调控凋亡相关基因的表达有关。     

TNF—α、VP—16联合诱导人结肠癌细胞凋亡株SW480细胞及其bcl—2表达的研究

目的 研究TNF-α、VP－16联合诱导人结肠癌细胞株SW480细胞凋亡及其对bcl-2基因表达的影响。方法 采用末端标记法（TNUEL）检测结肠癌SW480细胞凋亡情况;采用MTT法检测TNF-α、VP－16对SW480的细胞毒作用;采用免疫组化方法检测bcl-2基因的表达。结果 3000U／ml的rnTNF-α及不同浓度的VP－16作用于SW480细胞48h后能够抑制SW－480细胞生长,联合应用具有协同作用;与对照组比较,联合应用TNF-α、VP－16作用于SW480细胞48h后,凋亡细胞数显著增加（P＜0.05）;免疫组化结果检查显示,随着VP－16浓度的增加及与TNF-α联合作用,bcl-2基因表达阳性的细胞百分率逐渐降低。结论 联合应用TNF-α、VP－16有协同诱导SW480细胞凋亡及抑制bcl-2基因表达的作用。     

阿司匹林对人结肠癌细胞株SW480、HT29中VEGF、β-catenin表达的影响

目的 探讨阿司匹林对人结肠癌细胞株HT-29、SW480生长增殖的影响及其β-catenin、VEGF蛋白和mRNA的表达,并为结直肠癌的预防和治疗提供新的实验和理论依据。方法 采用MTT法检测阿司匹林对SW480、HT-29细胞生长增殖的影响;Real-time PCR和Western blot法检测HT-29、SW480细胞中VEGF、β-catenin mRNA及蛋白的表达情况。结果 在SW480、HT-29细胞的生长增殖过程中,阿司匹林对其有着显著的抑制作用,且具有量效、时效关系;除6 h干预组外,余各组阿司匹林均可抑制VEGF、β-catenin蛋白和mRNA的表达（P＜0.05）。结论 阿司匹林对人结直肠癌细胞株SW480、HT-29的生长增殖具有显著的抑制作用,并对SW480、HT-29中VEGF、β-catenin mRNA和蛋白质的表达具有显著的下调效应;而阿司匹林通过抑制β-catenin的表达,同时调节VEGF抑制肿瘤血管的生成可能是其预防和治疗结直肠癌的作用机制之一。     

DCLK1 对结直肠癌细胞化疗敏感性的影响及机制

目的:探讨双肾上腺皮质激素样激酶1（DCLK1）对结直肠癌耐药细胞化疗敏感性的影响及机制。方法:采用实时定量PCR和Western blot方法检测人结直肠癌细胞系HT29、SW480及其奥沙利铂（OXA）耐药株HT29/OXA和SW480/OXA中DCLK1的表达。采用siRNA干扰HT29/OXA和SW480/OXA细胞中DCLK1的表达,并用不同浓度OXA干预细胞,CCK-8法检测细胞增殖及其对OXA的敏感性,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Caspase-3活性检测试剂盒检测细胞的Caspase-3活性,Western blot检测细胞中DCLK1、Bax、Bcl-2、多药耐药蛋白1（MDR1）、P-糖蛋白（P-gp）等蛋白的表达。结果:与亲本细胞系比较,DCLK1在HT29/OXA和SW480/OXA细胞中的mRNA和蛋白表达水平均显著上调（P<0.05）。转染DCLK1 siRNA（si-DCLK1）后,HT29/OXA和SW480/OXA细胞的增殖活性均显著降低（P<0.05）,且它们对OXA的敏感性显著增加（P<0.05）;转染si-DCLK1后,HT29/OXA和SW480/OXA细胞的凋亡显著增加（P<0.05）,伴随Caspase-3活性上调（P<0.05）,Bax蛋白表达上调（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达下调（P<0.05）;转染si-DCLK1后,HT29/OXA和SW480/OXA细胞中MDR1和P-gp的蛋白表达均显著下调（P<0.05）。结论:DCLK1可能通过调控Bax/Bcl-2以及MDR1和P-gp的表达影响结直肠癌细胞的化疗敏感性。     

The effect of non-steroidal anti-inflammatory drugs on human colorectal cancer cells: evidence of different mechanisms of action

Non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) inhibit proliferation and induce apoptosis in human colorectal cancer cells in vitro. It remains unclear whether individual NSAIDs act by cyclooxygenase-2 (COX-2) inhibition and how NSAIDs exert their anti-proliferative effects. We investigated the effects of NS-398 (a selective COX-2 inhibitor), indomethacin (a non-selective COX inhibitor) and aspirin on four human colorectal cancer cell lines (HT29.Fu, HCA-7, SW480 and HCT116). NS-398 completely inhibited proliferation, induced G1 arrest and promoted apoptosis in COX-2-expressing cells (HT29.Fu and HCA-7). However, indomethacin had similar effects on all cells, regardless of COX-2 expression. NS-398 also had anti-proliferative activity on COX-2-negative cell lines (SW480 and HCT116). Aspirin inhibited proliferation of all cell lines but did not induce apoptosis. Indomethacin decreased beta-catenin protein expression in all cells (unlike NS-398 or aspirin). NSAIDs act on human colorectal cancer cells via different mechanisms. Decreased beta-catenin protein expression may mediate the anti-proliferative effects of indomethacin.     

Epigenetic silencing BCL6B induced colorectal cancer proliferation and metastasis by inhibiting P53 signaling

BCL6B, a homologue of BCL6, has been reported to be frequently methylated in human gastric cancer. The epigenetic change and the function of BCL6B remains to be elucidated in colorectal cancer. 7 colorectal cancer cell lines (RKO, HT-29, DLD1, LOVO, HCT116, SW480, SW620) and 102 cases of primary colorectal cancer samples were used in this study. Semi-quantitative RT-PCR, methylation specific PCR (MSP), Flow cytometry and western blot were employed. Loss of BCL6B expression was found in HT29, RKO LOVO, SW480, SW620 and DLD1 cells, and reduced expression was found in HCT116 cell line. Complete methylation was found in HT29, RKO, LOVO, SW480, SW620 and DLD1 cells, partial methylation was detected in HCT116 cells. Restoration of BCL6B expression was induced by 5-Aza treatment in these colorectal cancer cells. BCL6B was methylated in 79.4% (81/102) of primary human colorectal cancer and reduced expression was associated with promoter region hypermethylation (p < 0.05). Methylation of BCL6B is associated with late stage (p < 0.05) and lymph node metastasis (p < 0.05). Re-expression of BCL6B inhibited cell proliferation, invasion and migration in RKO and HT29 cells. BCL6B activated P53 signaling and induced apoptosis, Re-expression of BCL6B sensitized RKO and HT29 cells to 5-fluorouracil. In conclusion, BCL6B was frequently methylated in human colorectal cancer and its expression was regulated by promoter region methylation. Methylation of BCL6B is a prognostic and chemo-sensitive marker in colorectal cancer. BCL6B suppresses colorectal cancer growth by activating P53 signaling.     

USP7在结直肠癌组织中的表达及其通过调控Wnt/PCP通路对细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨泛素特异性蛋白酶7（ubiquitin specific protease 7,USP7）在结直肠癌组织中的表达及其通过调控Wnt/PCP通路对结直肠癌细胞SW480增殖、凋亡的影响和机制研究。方法:免疫组织化学法检测USP7在结直肠癌组织中的表达;qRT-PCR和Western blotting检测USP7在结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中的表达;qRT-PCR和Western blotting检测沉默USP7在SW480细胞中的表达;细胞克隆形成实验检测SW480细胞增殖能力;Transwell迁移实验检测SW480细胞迁移能力;流式细胞术检测SW480细胞的凋亡情况;Western blotting检测Wnt/PCP通路相关蛋白的表达。结果:USP7在结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中高表达（P＜0.05）;沉默USP7使SW480细胞中USP7的表达降低（P＜0.001）,细胞的增殖和迁移能力下降（P＜0.001）,细胞凋亡率增加（P＜0.001）;与shNC组相比,沉默USP7使Wnt7a蛋白和RhoA蛋白的表达水平显著下调（P＜0.001,P＜0.001）,JNK蛋白磷酸化程度显著降低（P＜0.01）。结论:USP7在结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中高表达。沉默USP7抑制SW480细胞增殖、迁移并诱导细胞凋亡,可能与Wnt/PCP通路有关。     

人参皂苷Rg3调控WNT/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞生长的实验研究

目的探讨人参皂苷Rg3通过影响WNT/β-catenin信号通路中关键蛋白β-catenin从而阻断结肠癌细胞生长机制的研究。方法 MTT法检测不同浓度人参皂苷Rg3对人结肠癌细胞系SW480、HCT116细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同浓度人参皂苷Rg3对SW480、HCT116细胞凋亡及磷酸化β-catenin的影响;RT-PCR和Western blot法检测HCT116细胞中β-catenin及c-myc的表达。结果人参皂苷Rg3具有抑制SW480、HCT116细胞增殖和促进凋亡的能力。一定浓度人参皂苷Rg3能够降低β-catenin蛋白的磷酸化程度,下调β-catenin mRNA的表达,下调β-cetanin和c-myc蛋白的表达。结论人参皂苷Rg3具有一定的抗肿瘤活性,可有效抑制HCT116和SW480细胞生长,且这种作用可能是通过下调β-catenin磷酸化来实现的。     

黄芩苷通过Notch通路对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨黄芩苷能否通过抑制人结肠癌SW480细胞中Notch通路的表达而抑制其增殖并促进其凋亡。方法:MTT法及流式检测术分别检测不同浓度黄芩苷对人结肠癌SW480细胞生长抑制及凋亡的影响；Western Blot法及RT-PCR法分别检测不同浓度黄芩苷对人结肠癌SW480细胞Notch1、Hes-1蛋白和Jagged1基因表达的影响。结果:随着药物剂量的增大，黄芩苷对人结肠癌SW480细胞的抑制率逐步上升；黄芩苷20 μmol/L组细胞凋亡率显著高于对照组；黄芩苷40 μmol/L组细胞凋亡率显著高于黄芩苷20 μmol/L组；黄芩苷20 μmol/L组细胞Notch1、Hes-1蛋白、Jagged1基因表达均显著低于对照组，黄芩苷40 μmol/L组Notch1、Hes-1蛋白、Jagged1基因表达均显著低于黄芩苷20 μmol/L组。结论:黄芩苷能抑制人结肠癌SW480细胞的增殖，促进其凋亡，这种作用可能是通过对细胞中Notch通路的负性调节而实现的。     

抑制TPD52基因表达对结直肠癌细胞凋亡及ROS含量的影响

目的:探讨抑制肿瘤蛋白D52（TPD52）基因表达对结直肠癌细胞活力、凋亡率及活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量的影响及机制。方法:正常结肠NCM460细胞作为对照细胞,分别用RT-PCR及Western blotting检测人结直肠癌Caco2、SW480、HCT116、HT29细胞TPD52的mRNA及蛋白表达。以LipofectamineTM 2000为载体,将抑制TPD52表达的siRNA（TPD52-siRNA）及阴性对照siRNA（NC）转染HCT116细胞,转染48 h,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率及ROS含量;Western blotting检测各组细胞增殖相关蛋白Ki67和PCNA及凋亡相关蛋白Bax和Survivin的蛋白表达。结果:与正常结肠NCM460细胞比较,Caco2、SW480、HCT116、HT29细胞中TPD52的mRNA及蛋白表达均明显升高,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。转染TPD52-siRNA的HCT116细胞TPD52的mRNA及蛋白表达均明显降低,与空白对照组和NC组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。与NC组比较,TPD52-siRNA组细胞活力明显降低,凋亡率升高,ROS含量升高,Ki67、PCNA和Survivin的蛋白表达明显降低,Bax的蛋白表达明显升高,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论:TPD52基因表达抑制可降低结直肠癌细胞活力和诱导凋亡,机制可能与细胞内ROS水平提高及Ki67、PCNA、Survivin表达下调和Bax表达上调有关。     

FOXJ1调控AKT信号通路对结直肠癌细胞凋亡和侵袭能力的影响

目的 探讨叉头框转录因子J1(FOXJ1)对人结直肠癌细胞凋亡和侵袭能力的影响及机制.方法 应用Western Blot方法检测人结直肠癌细胞HCT116、HT29、SW480及人正常肠上皮细胞FHC中FOXJ1的表达水平.细胞中转染pEGFP-N1-FOXJ1和pEGFP-N1,Western Blot检测细胞中FOXJ1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)的表达水平,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Transwell小室检测细胞的侵袭能力.结果 人结直肠癌细胞HCT116、HT29、SW480中FOXJ1的表达水平均明显低于人正常肠上皮细胞FHC(P﹤0.01).人结直肠癌细胞HCT116中FOXJ1的表达水平下降最多,后续选用HCT116细胞继续研究.转染pEGFP-N1后的细胞凋亡率、侵袭细胞数目及细胞中FOXJ1、Cleaved Caspase-3、MMP-2、AKT、p-AKT的表达水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05).转染pEGFP-N1-FOXJ1后的细胞凋亡率及细胞中FOXJ1、Cleaved Caspase-3的表达水平明显高于对照组(P﹤0.01);转染pEGFP-N1-FOXJ1后的侵袭细胞数目及细胞中MMP-2、p-AKT的表达水平明显低于对照组(P﹤0.01).结论 FOXJ1在人结直肠癌细胞中过表达.FOXJ1能够促进结直肠癌细胞凋亡,抑制结直肠癌细胞侵袭,其作用机制可能与AKT信号通路有关.     

HDAC3 overexpression and colon cancer cell proliferation and differentiation

An immunohistochemical analysis of human colorectal adenocarcinomas showed that cancer cells express widely varying levels of HDAC3. The SW480 colon cancer cell line was found to express high levels of HDAC3 compared to other colon cancer cell lines. p21 was poorly induced in SW480 cells relative to the lower HDAC3-expressing HT-29 cells. RNAi-induced reduction of HDAC3 in SW480 cells increased their constitutive, butyrate-, TSA-, and TNF-alpha-induced expression of p21, but did not cause all the gene expression changes induced upon general histone deacetylase (HDAC) inhibition. SW480 cells with lower HDAC3 expression appeared to be poised for gene expression responses with increased histone H4-K12 acetylation, but not K5, K8, or K16 acetylation. Even though p21 was readily activated in HT29 cells, HDAC3 siRNA nonetheless stimulated p21 expression in these cells to a greater degree than HDAC1 and HDAC2 siRNA. SW480 cells with lower HDAC3 levels displayed an enhanced cell cycle arrest and growth inhibition by butyrate, but without changes in apoptosis or sensitivity to chemotherapeutic agents. As reported for other colon cancer cell lines, butyrate induced the rapid downregulation of the secretory cell differentiation markers mucin 2 and intestinal trefoil factor in SW480 cells. Interestingly, selective HDAC3 inhibition was sufficient to downregulate these genes. Our data support a central role for HDAC3 in regulating the cell proliferation and differentiation of colon cancer cells and suggest a potential mechanism by which colon cancers may become resistant to luminal butyrate.     

miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制

目的:探究miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制。方法:在四株结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中,通过转染miR-302a mimic构建miR-302a过表达模型,RT-PCR检测过表达效果;CCK-8法检测转染48 h后高表达miR-302a细胞的增殖能力及对奥沙利铂的敏感性;蛋白质印迹法检测转染后P-gp蛋白及Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的变化。结果:相比正常小肠上皮细胞HIEC,miR-302a在结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中的表达较低。转染mimic后,miR-302a的表达明显上调（P<0.001）。增殖实验发现miR-302a的上调并不影响结直肠癌细胞的增殖,而在转染miR-302a的细胞中加入奥沙利铂,miR-302a组HT29、HCT8、SW480和SW1463细胞存活率相比miR-NC组分别降低2.46、1.89、2.39、2.86倍。进一步探究miR-302a增加奥沙利铂敏感性的机制,发现miR-302a可抑制P-gp蛋白的表达,并且抑制Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的表达。结论:miR-302a可增加结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性,其机制可能是通过抑制P-gp的蛋白表达,并抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达而实现。