胚胎脊髓移植联合神经生长因子对大鼠脊髓完全横断修复的作用

目的观察胚胎脊髓移植联合应用神经生长因子（NGF）对大鼠脊髓完全横断损伤的修复能力。方法40只Wistar雌性大鼠脊髓横断后，随即分成单纯应用完整庇胎脊髓移植组（A组），完整胚胎移植联合应用NGF组（B组）。术后观察大鼠行为学变化，术后8w处死动物进行免疫组化检查。结果移植胎体脊髓组织在脊髓横断部位存活。结论完整胚胎脊髓移植联合应用神经生长因子对大鼠脊髓完全横断损伤具有明硅的治疗修复作用。     

胚胎脊髓移植结合神经生长因子对损伤脊髓老年大鼠的修复作用

目的分析胚胎脊髓移植(FSC)结合神经生长因子修复损伤脊髓的老年大鼠模型。方法将28只体重250~300 g的健康Wistar大鼠用于制作脊髓损伤模型,其中和双下肢瘫痪标准相符的24只分为单纯脊髓损伤组(A组)、脊髓损伤结合外源性神经生长因子组(B组)、脊髓损伤结合FSC组(C组)、脊髓损伤结合FSC兼用神经生长因子组(D组)4组,每组6只。将10μl移植物注入B、C、D组体内。结果 B、C、D组移植手术后2、4、6、8 w的联合行为评分(CBS)、神经元面积均显著低于或高于A组(P<0.05),D组移植手术后2、4、6、8 w的CBS、神经元面积显著低于或高于B、C组(P<0.05)。结论 FSC结合神经生长因子能够有效修复老年大鼠的损伤脊髓功能。     

鼻嗅黏膜固有层移植及神经节苷脂治疗脊髓损伤的实验研究

目的 将从大鼠嗅黏膜中获取的鼻嗅黏膜固有层(OLP)组织薄片移植到大鼠脊髓横断区,同时应用神经节苷脂(GM1)治疗,观察其对损伤脊髓的修复作用.方法 采用SD大鼠胸脊髓半切损伤模型,随机分为5组:OLP+GM1组、GM1组、OLP组,单纯损伤组、空白对照组.术后应用电生理学及病理学检查,观察大鼠神经功能恢复情况.结果 OLP+GM1组部分大鼠出现刺激右后肢的逃避反应,其余各组运动功能无明显改善.组织学检查显示,OLP+GM1组嗅组织在移植区成活,并沿着一定路线辐射,核转录因子阳性纤维穿行于移植区.与GM1、OLP,单纯损伤组比较,术后4周OLP+GM1组N1波潜伏期(4.71±0.72)ms(P<0.01);术后8周OLP+GM1组核转录因子(NF)密度(7.31±0.26)×104个/mm2(P<0.05).结论 鼻嗅组织移植及GM1联合治疗脊髓损伤,具有明显的协同作用.     

嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤的修复作用及机制

目的探讨嗅鞘细胞（OECs）移植对损伤脊髓的作用及机制。方法取48只成年SD大鼠制备脊髓损伤模型,造模成功后将大鼠随机分为两组各24只,OECs组行OECs移植：取10μl的OECs悬液于脊髓损伤处及损伤段远、近端蛛网膜下腔分别注入8、1、1μl,并各留针2 min,缓慢退针;对照组予生理盐水10μl注入,其他操作同观察组。应用BBB运动功能评分比较两组行为学指标,HE染色、胶原纤维酸性蛋白（GFAP）免疫组化染色分别观察脊髓损伤组织学变化及T9星形胶质细胞增生情况。结果干预后2～8周OECs组运动功能恢复情况、BBB评分均显著高于对照组及干预前,P均〈0.01。干预后4周HE染色示对照组脊髓组织有较多空腔,神经纤维及细胞坏死,颜色较暗;而OECs组脊髓组织中无明显空腔,空泡小而少,色泽较亮。GFAP免疫组化染色示两组受损脊髓节段均出现星形胶质细胞反应性增生,但OECs组明显轻于对照组。结论 OECs对损伤脊髓具有修复和保护作用,其机制为促进损伤脊髓的轴突再生,减少星形胶质细胞增生。     

大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后GAP-43 mRNA的表达

目的探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子(BDNF)对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法将大鼠分为正常对照组,手术组A组(完全脊髓横断 完整胚胎脊髓移植);B组(完全脊髓横断 完整胚胎脊髓移植 BDNF)。手术显微镜直视下切除大鼠脊髓3～4mm,镜下观察确保完全离断,取同种孕13～14dwistar大鼠完整胚胎脊髓同时移植。B组通过微型泵定时定量泵入BDNF溶液(2mg/ml)。应用原位杂交方法于术后1～6w计数各组脊髓损伤区神经生长相关蛋白(GAP-43)mRNA神经元阳性细胞数。结果术后3w手术组开始恢复后肢运动功能,术后6w出现协调踏步动作。B组3、4、5w时阳性细胞数明显高于A组(P<0.01)。结论多个完整胚胎脊髓组织移植解决了脊髓完全离断情况下所需移植物总量较大的问题,联合应用BDNF,对脊髓损伤修复效果更为理想。     

嗅鞘细胞移植治疗EAE的研究

目的 探讨嗅鞘细胞（OECs）移植对实验性免疫性脑脊髓炎（EAE）的治疗 作用。方法 用新生wistar大鼠嗅球培养OECs。OECs移植组将OECs悬液注入EAE大鼠的侧脑室，假手术组注入等量生理盐水；观察两组大鼠运动功能评分、脑组织病理学变化及热休克蛋白70（HSP70）的表达。结果 OECs移植组运动功能评分显著优于假手术组（P〈0．05）；OECs移植组髓鞘修复明显优于假手术组；OECs移植组在各时间点上HSP70的表达均明显高于假手术组（P〈0．05）。结论 OECs移植可以促进EAE鼠的髓鞘修复，改善其运动功能，同时可使其脑组织HSP70大量表达，对损伤后的神经细胞有保护作用。     

神经干细胞与雪旺细胞共移植对大鼠臂丛神经根性撕脱伤的疗效

目的研究神经干细胞(NSCs)与雪旺细胞共移植对臂丛神经根性撕脱伤大鼠的治疗作用。方法随机将Wistar大鼠分为4组,A组(颈神经根撕脱组)、B组(颈神经根撕脱后定期回植组)、C组(颈神经根撕脱后定期回植并NSCs移植组)、D组〔颈神经根撕脱后定期回植并NSCs+雪旺细胞(SCs)共移植组〕;于术后不同时间点观察大鼠患肢功能恢复情况、神经电生理检测及相应脊髓损伤节段脊髓前角运动神经元存活率的检测。结果术后4²0 w时,B、C、D组大鼠患肢屈肘功能较A组有明显改善;A组神经-肌肉诱发电位潜伏期明显高于B、C、D组,而复合肌肉动作电位则低于B、C、D组,各组诱发电位潜伏期比较:B组>C组>D组;各组脊髓前角运动神经元存活率比较:D组>C组>B组>A组,组间两两比较有显著性差异(P<0.05)。结论神经根回植术联合细胞移植可以加强神经元的保护作用,在大鼠体内,移植的SCs可以存活并持续为NSCs提供保护、支持及营养等作用,还能够促进NSCs向神经元样细胞方向分化。     

大鼠脊髓损伤模型脊髓组织中Mst3b、GAP-43的表达及意义

目的观察大鼠损伤脊髓组织中哺乳动物ste20样蛋白激酶3b（Mst3b）、神经生长相关蛋白43（GAP-43）的表达变化,探讨其意义。方法 68只SD大鼠,取4只作正常对照（A组）,余随机均分为假手术（B）组、单纯损伤（C）组、肌苷治疗（D）组和6-硫代鸟嘌呤（6-TG,E）组。C、D、E组建立大鼠脊髓半横断损伤模型,B组只咬除棘突及椎板不损伤脊髓。各组分别于术后3、7、14、28 d采用免疫组化SP法检测脊髓中的Mst3b和GAP43蛋白。采用BBB运动功能评分法评定术后各时点C、D、E组动物左右肢功能。结果 A组大鼠脊髓组织中Mst3b、GAP-43无表达,B组极少表达,C、D、E组有明显表达（P均〈0.01）;Mst3b、GAP-43分别在术后7、14 d表达率最高,与大鼠左右肢功能的恢复趋势一致（P均〈0.01）;Mst3b与GAP-43的表达呈正相关（r=0.804,P〈0.01）。大鼠左右肢BBB评分D组高于C组,C组高于E组（P均〈0.01）。结论 Mst3b、GAP-43在大鼠正常脊髓组织中无表达,在损伤脊髓组织中表达明显,且二者表达呈正相关关系。Mst3b、GAP-43可能在脊髓损伤修复过程中起重要作用。     

嗅成鞘细胞提取液对阿尔茨海默病脑移植的影响

目的 探讨嗅成鞘细胞提取液对阿尔茨海默病(AD)脑移植的影响.方法 SD大鼠双侧海马注射Aβ1-40,建立AD大鼠模型.实验动物分为四组:正常对照组、空白对照组、人工脑脊液移植组、嗅成鞘细胞OECs提取液移植组,每组10只.两移植组分别加用人工脑脊液、OECs提取液培养胆碱能神经元,并移植到AD模型大鼠.运用行为学测试、NADPH-d组化、刚果红组织学染色结合积分吸光度测定等技术,观察、比较各组AD模型大鼠移植2个月后学习记忆能力、一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元数以及老年斑的变化.结果 ①行为学测试:人工脑脊液移植组、OECs提取液移植组大鼠达到学会标准所需训练次数(TN)、错误反应次数(EN)、潜伏期(D)、全天总反应时间(TRT)少且短于空白对照组(P＜0.05);OECs提取液移植组更为明显,与人工脑脊液移植组之间有显著差异(P＜0.05).②NADPH-d组化反应:人工脑脊液移植组、OECs提取液移植组NOS阳性神经元数较空白对照组明显增多(P＜0.05),且前两组之间有显著性差异.③刚果红染色:SP积分吸光度测定,三组间均有显著性差异(P＜0.05),OECs提取液移植组SP-IA值最小.结论 OECs提取液能明显提高AD脑移植的效果.     

嗅成鞘细胞与神经干细胞共移植对阿尔茨海默病大鼠的治疗作用

目的探讨嗅成鞘细胞(OECs)对神经干细胞(NSCs)移植治疗大鼠阿尔茨海默病(AD)的影响。方法 SD大鼠双侧海马注射Aβ1～40,建立AD大鼠模型。实验动物分为4组:NSCs移植组、NSCs与OECs移植组、AD模型组、正常对照组,每组30只。从SD胎鼠(孕16～18 d)取材,在体外分别培养和共培养OECs与NSCs,并将共培养的OECs与NSCs移植于AD大鼠大脑;观察各组大鼠行为学、移植细胞存活、迁移和分化以及宿主脑海马突触素表达的变化。结果①行为学测试:NSCs与OECs移植组潜伏期明显缩短、过平台次数明显增加,与NSCs移植组、AD模型组有显著性差异(P<0.05)。②根据标记跟踪,植入的NSCs与OECs大量存活,从注射部位分别向两侧海马区及其周围皮质迁移。③免疫荧光检测:植入NSCs能在AD脑内分化为神经元、神经胶质细胞以及少量胆碱能神经元,NSCs与OECs移植组分化为神经元的分化率13.97%,与NSCs移植组8.35%差异显著(P<0.05)。④海马突触素表达:NSCs与OECs移植组IA值最高,与NSCs移植组、AD模型组有显著性差异(P<0.05)。结论嗅成鞘细胞通过改善植入神经干细胞在AD脑内的存活、迁移和分化能力以及与宿主脑的联系,提高NSCs移植治疗大鼠AD的效果。     

LacZ-expressing olfactory ensheathing cells do not associate with myelinated axons after implantation into the compressed spinal cord

Studies have shown that implanting olfactory ensheathing cells (OECs) may be a promising therapeutic strategy to promote functional recovery after spinal cord injury. Several fundamental questions remain, however, regarding their in vivo interactions in the damaged spinal cord. We have induced a clip compression injury at the T10 level of the spinal cord in adult rats. After a delay of 1 week, OECs isolated from embryonic day 18 rats were implanted into the cystic cavity that had formed at the site of injury. Before implantation, OECs were infected with a LacZ-expressing retrovirus. At 3 weeks after implantation, LacZ-expressing OECs survived the implantation procedure and remained localized to the cystic cavity. At the electron microscopic level, the cystic cavity had clusters of LacZ-expressing OECs and numerous Schwann cells lacking LacZ expression. Although labeled OECs made no direct contact with axons, unlabeled Schwann cells were associated with either a single myelinated axon or multiple unmyelinated axons. Positively labeled OEC processes often enveloped multiple Schwann cell-axon units. These observations suggest that the role of OECs as the primary mediators of the beneficial effects on axon growth, myelination, and functional recovery after spinal cord injury may require re-evaluation.     

BDNF基因修饰的NSCs移植对大鼠脊髓损伤后轴突再生及后肢运动功能的影响

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)基因修饰的神经干细胞(NSC-BDNF)移植对脊髓损伤(SCI)的可行性及效果。方法将120只SCI大鼠随机分为四组各30只,假手术组(Sham组)仅做椎板切开术,伤后3 d损伤组(SCI组)脊髓内注射生理盐水溶液5μl,NSC组髓内注射移植细胞密度为2×105/μl的NSCs悬液5μl,NSC-BDNF组髓内注射NSC-BDNF悬液5μl。采用免疫组织化法检测1、3、7、14、28 d脊髓组织BDNF、神经丝蛋白(NF200)表达;行为学评分法判断后肢运动功能恢复情况。结果 NSC-BDNF组BDNF水平明显高于其他三组,且随着时间延长而增高(P<0.05或0.01);NSC-BDNF组NF200水平、运动功能评分明显高于SCI组、NSC组,低于Sham组,且随着时间延长而增高和降低(P<0.05或0.01)。结论 NSC-BDNF在损伤脊髓内可存活、迁移,并参与SCI神经轴突的结构重建,从而促进后肢运动功能恢复。     

大鼠脊髓半切损伤后外源性NEP1-40对神经中丝NF200表达的影响

目的探讨外源性Nogo受体拮抗剂（NEP1-40）在脊髓损伤修复过程中的作用及机制。方法将60只雌性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组各20只。后两组均建立大鼠T10脊髓右侧半横断损伤模型,治疗组通过损伤处置管从术后第1天开始每天予NEP1-4015μg溶于PBS缓冲液25μl,连续7d;模型组予等量的PBS缓冲液;假手术组仅去除椎板,不做脊髓半横断,术后不埋管,不用药。分别于术后7、14、21、28d采用Basso-Beattie-Bresnahan运动（BBB）评分法行大鼠行为学表现评分,免疫组化染色法检测受损节段脊髓中NF200的表达。结果治疗组各个时间点的BBB评分均高于模型组,NF200阳性细胞的数目均高于模型组（P均〈0.05）。BBB评分与NF200阳性细胞数量呈明显正相关（r=0.937,P〈0.01）。结论脊髓损伤后注射NEP1-40可增加NF200阳性神经元数目,促进轴突再生及运动功能恢复。     

人脐带间充质干细胞对ALI治疗作用的研究

目的探讨输入人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMscs）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠ALI的治疗作用。方法将30只Wistar大鼠随机分为3组：正常对照组、ALI模型组和HUMSCs移植组,每组10只。健康大鼠LPS气管滴入方法建立ALI模型,尾静脉输入HUMSCs。输入7h后,处死各组大鼠,取肺组织行病理学观察,测定肺湿／干重比（W／D）,ELISA法测定肺组织匀浆中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和IL-1β的含量。结果肺组织病理学显示：ALI模型组大鼠肺组织呈现典型的炎症病理变化,包括肺泡充血、水肿、出血,肺泡腔和血管壁中性粒细胞浸润,肺泡壁增厚等肺损伤性病变;HUMSCs移植组大鼠肺组织损伤程度明显减轻。与正常对照组比较,ALI模型组W／D、TNF-α和IL-1β含量明显升高（P〈0．05）。与Au模型组比较,HUMSCs移植组W／D、TNF-α和IL-1β含量明显降低（P〈0．05）。结论输入HUMSCs能减轻ALI,并能降低肺W／D和肺组织TNF-α及IL-1β含量。     

红花黄素对脊髓损伤大鼠的保护作用

目的探究红花黄素(SY)对脊髓损伤(SCI)的保护作用及其作用机制。方法将SCI模型大鼠分为模型(Model)组、重组高迁移率组蛋白(HMG)B1处理组(HMGB1组,8μg/kg)、SY干预组(SY组,40 mg/kg)、HMGB1+SY组(8μg/kg HMGB1+40 mg/kg SY),另设假手术(Control组),各组均12只,各组连续给药28 d。行为学运动(BBB)评分法评定运动行为;获取脊髓组织,采用苏木素-伊红(HE)染色观察脊髓组织病理形态学变化;免疫印迹法(WB)检测脊髓组织中HMG B1、Toll样受体(TLR)4、核转录因子(NF)-κB蛋白表达;制备脊髓组织匀浆液,采用酶联免疫吸附试验检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHP)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)水平;Tunel染色观察脊髓组织中神经元细胞凋亡情况;Western印迹法检测B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Cleaved-caspase3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果与Control组相比,Model组BBB评分显著降低,SOD、GSHP、CAT水平显著降低,MDA水平显著升高,HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著升高,脊髓组织神经细胞凋亡率显著升高,Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。与Model组相比,HMGB1组BBB评分显著降低,SOD、GSHP、CAT水平显著降低,MDA水平显著升高,HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著升高,脊髓组织神经细胞凋亡率显著升高,Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05);SY组、HMGB1+SY组与Model组及HMGB1组比较BBB评分显著升高,SOD、GSHP、CAT水平显著升高,MDA水平显著降低,HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著降低,脊髓组织神经细胞凋亡率显著降低,Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。结论 SY可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路,缓解SCI后氧化应激水平,减低脊髓组织神经元细胞凋亡,缓解脊髓组织、运动功能损伤。     

Sialidase enhances spinal axon outgrowth in vivo

The adult CNS is an inhibitory environment for axon outgrowth, severely limiting recovery from traumatic injury. This limitation is due, in part, to endogenous axon regeneration inhibitors (ARIs) that accumulate at CNS injury sites. ARIs include myelin-associated glycoprotein, Nogo, oligodendrocyte-myelin glycoprotein, and chondroitin sulfate proteoglycans (CSPGs). Some ARIs bind to specific receptors on the axon growth cone to halt outgrowth. Reversing or blocking the actions of ARIs may promote recovery after CNS injury. We report that treatment with sialidase, an enzyme that cleaves one class of axonal receptors for myelin-associated glycoprotein, enhances spinal axon outgrowth into implanted peripheral nerve grafts in a rat model of brachial plexus avulsion, a traumatic injury in which nerve roots are torn from the spinal cord. Repair using peripheral nerve grafts is a promising restorative surgical treatment in humans, although functional improvement remains limited. To model brachial plexus avulsion in the rat, C8 nerve roots were cut flush to the spinal cord and a peroneal nerve graft was inserted into the lateral spinal cord at the lesion site. Infusion of Clostridium perfringens sialidase to the injury site markedly increased the number of spinal axons that grew into the graft (2.6-fold). Chondroitinase ABC, an enzyme that cleaves a different ARI (CSPGs), also enhanced axon outgrowth in this model. In contrast, phosphatidylinositol-specific phospholipase C, which cleaves oligodendrocyte-myelin glycoprotein and Nogo receptors, was without benefit. Molecular therapies targeting sialoglycoconjugates and CSPGs may aid functional recovery after brachial plexus avulsion or other nervous system injuries and diseases.     

Sialidase enhances recovery from spinal cord contusion injury

Axons fail to regenerate in the injured spinal cord, limiting motor and autonomic recovery and contributing to long-term morbidity. Endogenous inhibitors, including those on residual myelin, contribute to regeneration failure. One inhibitor, myelin-associated glycoprotein (MAG), binds to sialoglycans and other receptors on axons. MAG inhibition of axon outgrowth in some neurons is reversed by treatment with sialidase, an enzyme that hydrolyzes sialic acids and eliminates MAG–sialoglycan binding. We delivered recombinant sialidase intrathecally to rats following a spinal cord contusive injury. Sialidase (or saline solution) was infused to the injury site continuously for 2 wk and then motor behavior, autonomic physiology, and anatomic outcomes were determined 3 wk later. Sialidase treatment significantly enhanced hindlimb motor function, improved bulbospinally mediated autonomic reflexes, and increased axon sprouting. These findings validate sialoglycans as therapeutic targets and sialidase as a candidate therapy for spinal cord injury.     

C4神经转位修复臂丛神经撕脱伤后C4节段脊髓组织中ChAT表达变化的研究

[目的]观察臂丛神经撕脱伤模型C4转位修复治疗后C4节段脊髓组织中乙酰胆碱转移酶(ChAT)的变化.[方法]Wistar大鼠30只,随机分为A、B、C组,各10只.A、B组建立臂丛神经撕脱伤模型.建模后,A组为实验组,行C4转位修复治疗;B为对照组,于椎间孔处切断C4和C6神经根后,不予吻合;C组为正常组,不进行手术.观察治疗后三组动物患肢功能;于术后3个月时,A组取C4、C6吻合口处神经0.5 cm,B组取C6断端0.5 cm神经,C组取C6神经根0.5 cm,均行HE染色,观察各组神经纤维情况;同时取三组动物C4段脊髓组织,采用免疫组化ABC法行ChAT染色,计数脊髓前角ChAT阳性运动神经元.[结果]①治疗后A组动物右侧前肢屈曲活动基本正常,肱二头肌未见萎缩;B组动物右侧前肢屈曲不能,呈伸直畸形,肱二头肌肌腹萎缩;C组动物正常.②HE染色后,A组可见多处再生神经纤维及髓鞘,分布均匀、致密,外膜连续,神经纤维排列较整齐;B组可见散在稀少神经纤维,排列紊乱无序,并有多处异物体形成;C组神经纤维分布均匀、致密,排列整齐.③A、B、C组C4脊髓前角ChAT免疫阳性运动神经元数分别为(23.27±3.35)、(19.53±2.97)、(25.53±3.42)个,A、C组与B组比较,P均＜0.05,A组与C组相近(P＞0.05).[结论]臂丛神经根性撕脱伤模型C4转位修复治疗后C4节段脊髓组织中ChAT 表达上调,这可能是C4转位修复治疗臂丛神经根性撕脱伤疗效好的原因之一.