miRNA-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的增殖与侵袭

目的:研究miRNA-34a(miR-34a)对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的生物调控作用。方法:采用定量PCR检测人乳腺上皮细胞MCF-10A,乳腺癌细胞株MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a的表达水平。通过miR-34a mimics分别上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达水平,MTT和Transwell检测肿瘤细胞增殖能力、侵袭力等生物学行为的变化。结果:乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a处于低表达水平。通过miR-34a mimics上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达后,细胞的增殖能力被miR-34a抑制（P＜0.05）,miR-34a对细胞侵袭有显著抑制作用（P＜0.05）。结论:miR－34a在乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453及Hs578T中低表达,miR-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的细胞增殖和侵袭能力。     

沙立度胺抑制乳腺癌细胞增殖的作用机制

目的研究沙立度胺抑制乳腺癌细胞增殖的机制。方法流式细胞仪检测沙立度胺对细胞凋亡和细胞周期的影响;半定量RT-PCR方法观察沙立度胺对MCF-7和MDA-MB-231细胞VEGF mR-NA表达的影响。结果沙立度胺作用后的乳腺癌细胞在流式细胞分析的DNA直方图上显现细胞凋亡峰(亚G1期);沙立度胺抑制两株细胞VEGF mRNA的表达。结论沙立度胺可能通过诱导MCF-7和MDA-MB-231细胞凋亡以及抑制细胞VEGF mRNA表达从而抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖。     

ROR1-AS1调控Notch1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡影响

摘 要：［目的］ 研究酪氨酸蛋白激酶跨膜受体 1 反义 RNA 1（tyrosine protein kinase transmembrane receptor 1 antisense RNA 1，ROR1-AS1）调控Notch1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)的影响。［方法］ 实时荧光定量PCR方法检测乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361细胞和正常乳腺上皮MCF10A细胞中ROR1-AS1表达变化。乳腺癌MCF-7细胞分成对照、sh-NC（转染shRNA 对照）、sh-ROR1-AS1（转染ROR1-AS1 shRNA）、sh-ROR1-AS1+Jagged1组（转染ROR1-AS1 shRNA，Notch1通路激活剂Jagged1处理）。CCK-8实验检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭，Western blot方法检测细胞中活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶9（cleaved cysteinyl aspartate-specific protease-9，C-Caspase-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3（cleaved cysteinyl aspartate-specific protease-3，C-Caspase-3）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、Notch1、Hes1蛋白表达。 ［结果］ 乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361细胞中ROR1-AS1水平明显高于正常乳腺上皮MCF10A细胞（P<0.05）。与对照组、sh-NC组比较，sh-ROR1-AS1组乳腺癌MCF-7细胞存活率降低(100.00%±9.82%，99.74%±12.05%，58.91%±6.33%)，细胞凋亡率升高(4.81%±0.26%，4.93%±0.34%，20.58%±2.11%），细胞迁移数目( 225.36±12.84个，224.89±19.56个，140.89±13.64个）和侵袭数目(180.47±16.32个，177.54±16.92个，110.44±10.87个)减少，细胞中C-Caspase-9、E-cadherin、C-Caspase-3蛋白表达水平增加，N-cadherin、Notch1、Hes1蛋白表达水平降低（P<0.05）。与sh-ROR1-AS1组比较，sh-ROR1-AS1+Jagged1组乳腺癌MCF-7细胞存活率升高(100.00%±11.58% vs 147.36%±12.05%），细胞凋亡率降低(19.54%±1.74% vs 8.36%±0.75%)，细胞迁移数目(139.58±12.78个 vs 175.26±16.94个)和侵袭数目（107.45±9.35个 vs 162.04±13.67个）均升高，C-Caspase-9、E-cadherin、C-Caspase-3蛋白水平降低，N-cadherin、Notch1、Hes1蛋白水平升高（P<0.05）。［结论］ 下调ROR1-AS1通过抑制Notch1信号减弱乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭和EMT能力，激活细胞凋亡。     

沙立度胺对人乳腺癌细胞增殖及血管内皮生长因子表达的影响

[目的]观察沙立度胺对人乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖以及血管内皮生长因子(VEGF)表达的抑制作用.[方法]应用MTT方法及半定量RT-PCR技术,分别观察沙立度胺对MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖及VEGF表达的抑制作用.[结果]沙立度胺在(10～100)μg/ml范围内对MCF-7和MDA-MB-231细胞有明显的抑制增殖作用,并伴随VEGFmRNA表达水平下降;50μg/ml明显抑制两株细胞VEGFmRNA的表达.[结论]沙立度胺在一定浓度范围内能抑制乳腺癌细胞VEGFmRNA的表达,抑制细胞增殖反应.     

大黄酸对肿瘤细胞EGFR和HER-2靶点的作用及其作用机制

一目的研究传统中药大黄中葸醌类化合物之一大黄酸对乳腺癌细胞表皮生长因子受体家族EGFR和HER-2靶点的作用及其作用机制。方法通过WesternBlot检测乳腺癌MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231、和MCF-7／ADR细胞中EGFR和HER-2的蛋白表达水平。用MTT方法检测大黄酸对乳腺癌细胞的增殖抑制作用。用RT-PCR方法检测大黄酸对EGFR和HER-2转录水平的影响。通过Western Blot方法研究大黄酸对乳腺癌细胞HER-2、P-HER-2、EGFR、P-EGFR蛋白表达的影响并研究相关的作用机制。结果MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231、和MCF-7／ADR 4株乳腺癌细胞系均显示EGFR高表达。关于HER-2,仅见SKBR-3细胞高表达;而MDA-MB-231和MCF-7／ADR细胞显示中等程度表达,MCF-7细胞低表达。大黄酸对乳腺癌MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231、和MCF-7／ADR细胞增殖抑制的IC50分别为28μg／ml、24μg／ml、24μg／ml和〉100μg／ml。Western Blot研究结果表明大黄酸对HER-2、P-HER-2和P-EGFR蛋白表达有抑制作用,并且随着剂量的增加抑制作用增强,但对EGFR蛋白表达没有明显抑制作用。RT-PCR研究发现大黄酸抑制HER-2的mRNA的水平,从转录水平上发挥对HER-2蛋白表达的抑制作用。进一步研究表明大黄酸通过抑制表皮生长因子家族EGFR和HER-2的酪氨酸激酶磷酸化,进而抑制RAS-RAF-MEK-ERK信号通路,抑制肿瘤细胞增殖,而对NF-κB和AKT诱导的细胞凋亡通路没有明显作用。结论传统中药大黄中的葸醌类化合物大黄酸能够抑制表皮生长因子家族EGFR和HER-2酪氨酸激酶的磷酸化,从而抑制了MAPK信号通路的磷酸化,达到抑制肿瘤细胞增殖的作用。同时大黄酸可以从转录水平抑制HER-2的蛋白表达。     

沉默CD44表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与侵袭的影响

目的:探索乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中CD44分子的表达水平差异及沉默CD44对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平;设计并合成CD44的siRNA片段(CD44-siRNA)转染乳腺癌细胞,利用qRT-PCR、Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平的变化;MTT检测MDA-MB-231细胞增殖;Transwell侵袭实验检测MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44在侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达高于非侵袭性乳腺癌细胞MCF-7,CD44-siRNA下调了 MDA-MB-231细胞中CD44 mRNA与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖和侵袭转移能力。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及其侵袭迁移力。     

Tspan29在乳腺癌组织中的表达及其对MCF-7和MDA-MB-231细胞恶性生物学行为的影响

目的：检测4次穿膜蛋白29（tetraspanins-29，Tspan29）在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平，探讨敲低Tspan29对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化（epithelieal-mesenchymal transition，EMT）的影响。方法：收 集2017年6月至2018年2月复旦大学附属肿瘤医院闵行分院手术切除的20例乳腺癌患者的癌组织和相应的癌旁组织标本，以及乳腺癌细胞系 MCF-7、MDA-MB-231 和人乳腺上皮细胞 MDA-kb2，用 qPCR 和 Western blotting 检测乳腺癌组织和细胞系中Tspan29 的表达水平。通过 siTspan29 对 MCF-7、MDA-MB-231 细胞中 Tspan29 进行干扰，用 qPCR 法检测转染细胞中 Tspan29mRNA 和蛋白的表达水平，PCR 芯片法检测 MCF-7 细胞中 EMT 相关基因的表达，用 CCK-8 法、Transwell 实验检测 MCF-7 和MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果：乳腺癌组织中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著高于癌旁组织（均 P<0.01），MCF-7和MDA-MB-231细胞中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著高于MDA-kb2细胞（均P<0.01）。siTspan29干扰后，MCF-7细胞中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著下降（均P<0.05）；MCF-7细胞中EMT相关基因中有2个基因显著上调， 有7个基因显著下调；MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著下降（均P<0.05）。结论：Tspan29在乳腺癌组织及细胞系中表达水平显著上调，敲低Tspan29对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭有显著的抑制作用。     

FGFR1抑制剂Ponatinib对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的:研究FGFR1(成纤维生长因子受体1)抑制剂Ponatinib对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响以及机制.方法:依据前期Western Blot结果筛选出实验组和对照组,用不同浓度Ponatinib处理人乳腺癌细胞株实验组和对照组.CCK-8法检测乳腺癌细胞增殖抑制率;流式细胞术检测乳腺癌细胞凋亡的影响;WesternBlot法检测Poantinib对FGFR1及其下游通路及凋亡相关蛋白的影响.结果:依据前期Western Blot结果,选取不表达FGFR1的MCF-7为对照组细胞,高表达FGFR1的MDA-MB-231、BT-549为实验组细胞.CCK-8结果及Annexin V-APC/7-AAD法结合流式细胞仪检测结果显示:Ponatinib呈浓度依赖性地诱导MDA-MB-231、BT-549细胞的增殖抑制和凋亡,对MCF-7细胞也有一定的增殖抑制和诱导凋亡作用,实验组细胞的增殖抑制率及凋亡率较对照组细胞高.Western Blot结果显示:MDA-MB-231、BT-549细胞中,p-FGFR1、p-Stat5、p-PLCγ1蛋白表达量均明显下调;Bcl-2、Mcl-1表达量下调,Bak表达量上调(BT-549中Bak、Bax表达量均上调).MCF-7细胞中,p-Stat5、p-PLCγ1蛋白表达量下调.结论:Ponatinib抑制MDA-MB-231、BT-549细胞增殖可能与下调p-FGFR1,进而下调p-Stat5、p-PLCy1有关,促进细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2、Mcl-1,上调Bak有关.     

hCLP46基因在不同侵袭转移潜能乳腺癌细胞表达中的差异及其意义

目的 探讨hCLP46基因在MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞中表达的差异性及其意义。方法 采用RT-PCR的方法检测2个细胞系(乳腺癌低度侵袭转移细胞系MCF-7、中度侵袭转移细胞系MDA-MB-231)中hCLP46 mRNA的表达差异。取MCF-7和MDA-MB-231细胞株进行培养,分别加入100 μmol/L的转化生长因子-β(TGF-β)并设对照组,培养72 h,用Western-blot方法分析P15蛋白表达。结果 RT-PCR检测hCLP46结果显示,在MCF-7和MDA-MB-231细胞系中,内参基因GAPDH的表达量相近,hCLP46基因在两个细胞系中均表达,其中MDA-MB-231细胞系中的表达高于MCF-7细胞系。两个细胞系分别加入TGF-β培养72 h后,与相应的对照细胞系相比,P15的表达均有降低,hCLP46基因高表达的MDA-MB-231细胞中P15表达较MCF-7细胞显著降低。结论 hCLP46基因过表达可能抑制TGF-β对MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌细胞P15基因的上调,hCLP46可能在乳腺癌的发病中起到一定作用。     

MDM2对人乳腺癌细胞上皮间质转化的影响及其机制研究

目的 探讨鼠双微粒体2（MDM2）在上皮间质转化（EMT）过程中的作用及其分子机制。方法 采用Western blotting检测人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞株中MDM2及EMT相关标记分子（E-cadherin、N-cadherin及Vimentin）水平;分别于MCF-7细胞中瞬时转染MDM2空质粒pcmv、MDM2过表达质粒pcmv-MDM2,MDA-MB 231细胞中瞬时转染针对MDM2三个不同靶点的干扰质粒36h后观察细胞形态,并采用Western blotting和免疫荧光检测EMT相关标记分子及MDM2的表达情况;采用Western blotting及实时定量PCR检测在MCF-7、MDA-MB-231细胞过表达MDM2后对促EMT转录因子Snail1、Twist 蛋白和mRNA水平的影响。结果 MCF-7细胞过表达MDM2后形态由鹅卵石形变为纺锤形,E-cadherin蛋白随MDM2表达水平的上调表达降低;MDA-MB-231细胞敲低MDM2后形态由长梭形变为卵圆形,Vimentin、N-cadherin蛋白随MDM2表达水平的下调表达依次降低;MCF-7及MDA-MB-231细胞过表达MDM2后Snail1、Twist的蛋白及mRNA水平均升高。结论 在乳腺癌细胞株中MDM2可促进EMT发生,其可能通过上调转录因子Snail1和Twist表达来实现。     

FBW7通过Notch信号通路影响骨肉瘤SOSP-9607细胞迁移与侵袭

目的:观察FBW7在骨肉瘤细胞SOSP-9607中的表达,探讨FBW7对骨肉瘤细胞迁移与侵袭的作用以及与Notch信号通路的关系。方法:培养人骨肉瘤SOSP-9607细胞,用慢病毒介导的siRNA转染SOSP-9607细胞,并分为sh-FBW7组（下调FBW7）、up-FBW7组（上调FBW7）和空白对照组。利用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白质印记法（Western blot）验证分析骨肉瘤细胞系SOSP-9607和正常成骨细胞系hFOB中FBW7 mRNA表达和蛋白表达水平。Transwell实验验证FBW7对骨肉瘤细胞迁移与侵袭作用的影响。 Western blot验证FBW7与Notch信号通路的关系。结果:qRT-PCR和Western blot检测结果显示:骨肉瘤细胞系SOSP-9607中FBW7 mRNA表达和蛋白表达明显低于正常成骨细胞系hFOB（P＜0.05）。Transwell结果显示:sh-FBW7组的迁移与侵袭细胞数明显高于空白对照组（P＜0.05）;up-FBW7组的迁移与侵袭细胞数明显低于空白对照组（P＜0.05）。上调骨肉瘤细胞中的FBW7可以抑制Notch1及其靶基因Hes1的表达;下调骨肉瘤细胞中的FBW7可以增加Notch1及其靶基因Hes1的表达。结论:FBW7在骨肉瘤SOSP-9607细胞中低表达,FBW7通过Notch信号通路影响骨肉瘤SOSP-9607细胞迁移与侵袭。     

不同人乳腺肿瘤细胞系中Jagged1基因和蛋白的表达水平

目的:研究Jagged1蛋白和mRNA在人乳腺癌细胞系中的表达。方法:分别使用蛋白印迹法及实时定量聚合酶链式反应检测Jagged1蛋白和基因在人乳腺癌细胞系中的表达情况。结果:Jagged1在不同的人乳腺肿瘤细胞系中蛋白和基因的表达水平不同。结论:Jagged1蛋白在人乳腺癌细胞系ZR-75-30和MDA-MB-231中高表达,Jagged1基因在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,HCC 1937中高表达,Jagged1可能是在人乳腺癌的发展进程中发挥着重要的作用。     

miR-101、EZH2和MYC调控乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖能力的机制

目的:研究miR-101、EZH2和MYC对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响,并探究三者之间的调控机制。方法:以实时荧光定量PCR法检测三阴型乳腺癌组织及相应正常乳腺组织中miR-101、EZH2与MYC的表达,以及乳腺癌细胞系和正常乳腺细胞中miR-101的表达水平。以LipofectamineTM 2000将miR-101 mimics、EZH2 siRNA和MYC siRNA以及相应的阴性对照转染至MDA-MB-231细胞,Western blot法检测EZH2、MYC蛋白的表达,MTT法检测MDA-MB-231细胞的增殖能力。结果:相对于正常乳腺组织,三阴型乳腺癌组织中miR-101 mRNA的表达降低,而EZH2、MYC mRNA表达则显著升高;三阴型乳腺癌细胞中miR-101 mRNA的表达低于正常乳腺细胞MCF-10A。miR-101 mimics转染使MDA-MB-231细胞中miR-101 mRNA含量显著升高。miR-101过表达抑制EZH2、MYC的表达;EZH2敲减也抑制了MYC蛋白的表达。EZH2或MYC敲减可使miR-101 mRNA的表达显著升高。MTT实验结果示,miR-101过表达或敲减EZH2、MYC均可抑制MDA-MB-231细胞的增殖能力。结论:miR-101通过EZH2与MYC形成反馈环路调控MDA-MB-231细胞的增殖能力。     

PPAPDC1A在体内外对乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响

目的:通过构建稳定过表达和干扰PPAPDC1A的乳腺癌细胞株,探讨PPAPDC1A对乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响。方法:利用CCK-8和Transwell实验检测PPAPDC1A稳定过表达和干扰后对乳腺癌细胞体外增殖和侵袭能力的影响。采用裸鼠皮下成瘤实验检测PPAPDC1A对乳腺癌细胞体内增殖和裸鼠致瘤性的作用。利用免疫组织化学染色法检测各组肿瘤组织中Ki-67的表达。通过裸鼠尾静脉注射实验检测PPAPDC1A对乳腺癌MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞体内转移能力的影响。结果:成功建立稳定过表达PPAPDC1A的乳腺癌MCF-7细胞株和稳定干扰PPAPDC1A的乳腺癌MDA-MB-231细胞株;CCK-8和Transwell实验结果显示,与MCF-7和MCF-7-Vector细胞株相比,MCF-7-PPAPDC1A细胞株的生长速度显著增快,穿膜细胞数量多（P＜0.05）;与此相反,MDA-MB-231-shPPAPDC1A组细胞的生长速度和穿膜细胞数明显少于MDA-MB-231-shNC和MDA-MB-231 细胞株（P＜0.05）。动物实验结果显示,与MCF-7-Vector组相比,MCF-7-PPAPDC1A组的肿瘤生长速度较快,肿瘤的体积较大,Ki-67的阳性率高,肺转移灶的数目增多（P＜0.05）;与此相反,与MDA-MB-231-shNC组相比MDA-MB-231-shPPAPDC1A组的肿瘤生长速度较慢,肿瘤的体积较小,Ki-67的阳性率低,肺转移灶的数目减少（P＜0.05）。结论:PPAPDC1A对乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移有促进作用。     

miR-26a通过调控E2F7、Myc抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力

目的:研究miR-26a对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力的影响,并分析miR-26a 调控增殖与迁移的可能机制。方法:应用实时荧光定量PCR法(QPCR)检测乳腺癌细胞系和正常乳腺上皮细胞中miR-26a的表达水平,并检测三阴型乳腺癌组织及相应正常乳腺组织中miR-26a与E2F7 mRNA的表达水平。应用脂质体介导的方法,以miR-26a mimics与E2F7 siRNA瞬时转染MDA-MB-231细胞,实时荧光定量PCR法检测miR-26a表达水平,Western blot法检测E2F7、Myc蛋白的表达水平。MTT法检测MDA-MB-231细胞的增殖能力,划痕实验检测MDA-MB-231细胞迁移能力。结果:乳腺癌细胞中miR-26a的表达水平均低于正常乳腺细胞MCF-10A,且三阴型乳腺癌细胞表达水平降低最明显。三阴型乳腺癌组织中miR-26a相对于正常乳腺组织表达减低,而E2F7 mRNA表达则显著升高。miR-26a mimics转染后miR-26a表达水平显著升高,miR-26a过表达可抑制E2F7、Myc蛋白的表达;E2F7 siRNA转染后E2F7表达水平减低,Myc蛋白表达亦减低。MTT实验结果示miR-26a过表达可抑制MDA-MB-231细胞增殖,划痕实验示miR-26a过表达可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力。结论:miR-26a可能通过抑制E2F7、Myc调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖与迁移能力。     

抑制Notch和PI3K/Akt信号通路对食管腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的 探讨Notch和PI3K/Akt两条信号通路对人食管腺癌细胞OE33增殖、侵袭及迁移能力的影响及两条信号通路之间的联系。方法 应用Notch信号通路阻滞剂DAPT和PI3K/Akt信号通路阻滞剂LY294002分别单独和联合处理OE33细胞,设置对照组;Western blot和实时定量PCR法检测OE33细胞中NICD、Hes1、p-Akt、PTEN蛋白和mRNA的表达变化;CCK-8法检测细胞的增殖抑制率;划痕实验用于检测细胞迁移能力的变化;Transwell细胞侵袭实验用于检测细胞的侵袭能力变化。结果 Notch1通路阻滞剂DAPT能减低Notch1通路相关蛋白NICD和Hes1的表达,并能提高p-Akt蛋白的表达;PI3K/Akt路阻滞剂LY294002不仅使p-Akt的蛋白表达水平减低,还能降低Hes1的蛋白表达水平,同时使NICD的蛋白和Hes1的mRNA表达水平增高。DAPT和LY294002联合处理组的NICD、Hes1、p-Akt的蛋白表达均较空白对照组和单药处理组降低,同时细胞的增殖、迁移和转移能力亦明显减弱。各处理组中PTEN的蛋白和mRNA表达水平较对照组均有一定程度的升高。结论 Notch和PI3K/Akt两条信号通路在食管腺癌细胞OE33中可能存在串话, 同时抑制这两种信号通路能有效的抑制OE33的增殖、侵袭及迁移。     

miR-4728-3p通过PI3K/AKT信号通路调控DOT1L基因抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨miR-4728-3p通过调控类端粒沉默干扰体-1(disruptor of telomeric silencing 1-like,DOT1L)基因对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:使用乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及人正常乳腺细胞MCF-10A。转染MCF-7和MDA-MB-231细胞随机分为NC组(转染miR-4728-3p-NC)和敲低组(转染miR-4728-3p-inhibitor)。利用RT-qPCR技术检测不同的细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量改变情况。集落克隆形成实验和EDU实验可以同时检测体内各个细胞异常增殖的情况;TUNEL荧光标记检测法和流式细胞术实验可以同时检测不同组癌细胞的凋亡变化;划痕实验和Transwell实验可以同时检测到在各个细胞内因不同处理而可能产生的细胞迁移率和侵袭力的改变;Western blot检测与细胞凋亡状态相关细胞蛋白以及与细胞通路凋亡相关细胞蛋白p-AKT和p-PI3K相对表达的含量。结果:在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231以及SKBR3中发现miR-4728-3p和DOT1L的表达高于人正常乳腺细胞MCF-10A(P＜0.05)。转染细胞miR-4728-3p后,与NC组细胞进行实验比较,发现敲低组细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量明显降低,且敲低组细胞的增殖能力明显减弱,细胞凋亡率明显升高,细胞迁移能力大大降低。敲低组的细胞凋亡活性蛋白相对表达明显发生变化。其中p-AKT与p-PI3K蛋白均被抑制激活。RT-qPCR和Western blot实验验证DOT1L是miR-4728-3p的下游靶向基因。结论:敲低miR-4728-3p可以下调DOT1L的表达从而促进乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞增殖,同时使乳腺癌细胞侵袭和迁移能力减弱。     

CDK4/6抑制剂联合内分泌治疗对乳腺癌细胞miRNA表达水平的影响

目的:分析CDK4/6抑制剂联合内分泌药物对人乳腺癌细胞中相关miRNA表达水平的影响。方法:培养人乳腺癌细胞MDA-MB-231、SK-BR-3、MCF-7株,使用CDK4/6抑制剂帕布昔利布和内分泌药物阿那曲唑作用于人乳腺癌细胞,MTT法检测细胞增殖情况,BD流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期情况,采用RT-PCR检测相关miRNA表达情况,Western blot 检测TNF-α、Survivin蛋白表达。结果:在药物作用12 h、24 h、48 h和72 h后的MDA-MB-231研究组、SK-BR-3研究组、MCF-7研究组细胞中miRNA-1321、miRNA-574-5p、miRNA-24-3p的表达水平均较对照组有所下降,而miRNA-1246、miRNA-494-3p、miRNA-29b-3p的表达水平有所升高;MDA-MB-231研究组、SK-BR-3研究组、MCF-7研究组细胞G0/G1期、S期的比例均较对照组细胞均有所升高,而G2/M期比例与对照组相比较均有所下降;MDA-MB-231研究组、SK-BR-3研究组、MCF-7研究组细胞中TNF-α及Survivin的表达水平均较对照组有所上升。结论:CDK4/6抑制剂联合内分泌药物可以调节人乳腺癌细胞中相关miRNA表达水平,从而抑制人乳腺癌细胞增殖。     

下调FAM111B对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨下调FAM111B对乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF7细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:构建siR-FAM111B慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231和MCF7细胞,qRT-PCR检查转染组与对照组FAM111B mRNA表达,Western blotting法检测各组细胞FAM111B蛋白表达。用CCK-8法检测细胞的增殖能力。流式细胞术检测Annexin-V/PI双染各组细胞的凋亡情况。Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果:siR-FAM111B成功转染MDA-MB-231和MCF7细胞,转染后应用qRT-PCR和Western blotting检测,结果显示,FAM111B mRNA与蛋白水平均下调。siR-FAM111B能抑制两种细胞的增殖。Annexin-V/PI双染结果显示,下调FAM111B诱导两种细胞凋亡。Western blotting结果显示,下调FAM111B可以促进两种细胞Bax的表达,抑制Bcl-2的表达。结论:下调FAM111B能够抑制乳腺癌细胞的增殖,通过调节线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。