PPAR-γ的激动剂吡咯列酮抑制肝癌细胞生长和诱导凋亡的实验研究

目的观察PPAR—γ的激动剂吡咯列酮对肝癌细胞的生长抑制作用和诱导凋亡作用。方法吡咯列酮作用于肝癌细胞株SMMC7721。MTT法检测肝癌细胞的生长抑制率：流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡率：RT—PCR检测肝癌细胞内PPAR-γmRNA的表达。结果吡咯列酮对肝癌细胞有明显抑制作用和诱导凋亡作用：细胞凋亡率与细胞生长抑制率之间无显著相关性（r=0.639，P=0.361）;肝癌细胞SMMC7721表达PPAR-γmRNA，随吡咯列酮浓度的增加肝癌细胞内PPAR-γmRNA的表达呈下降趋势。结论PPAR—γ的激动剂吡咯列酮可抑制肝癌细胞的生长和诱导其凋亡；但是，细胞凋亡率与生长抑制率之间无显著相关性，提示尚有诱导细胞凋亡以外的途径参与吡咯列酮对肝癌细胞的生长抑制作用;吡咯列酮可下调肝癌细胞内PPAR-γmRNA的转录．具体机制有待研究。     

罗格列酮增强顺铂抑制人肺腺癌细胞增殖作用

目的　探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPARγ)配体罗格列酮 (Rosiglitazone,RSG)的体外化疗增敏作用及机制。方法　体外培养人肺腺癌A549细胞,MTT法测定药物的细胞生长抑制率,吖啶橙 /溴化乙啶 (AO/EB)荧光双染,流式细胞仪(Flowcytometry,FCM)检测细胞凋亡,免疫细胞化学检测药物处理前后PPARγ,Bcl 2蛋白表达的改变。结果　RSG(1 25, 2 5μmol·L-1 )分别与CDDP合用,可增加CDDP对A549细胞的抑制率, (q> 1 )。RSG(1 25μmol·L-1 )可增强CDDP诱导A549细胞凋亡作用。RSG(1 25μmol·L-1 )处理后,A549细胞的PPARγ蛋白核内表达上调,Bcl 2蛋白表达下调, (P<0 01)。结论　过氧化物酶体增殖因子活化受体γ配体罗格列酮能增强顺铂抑制A549细胞增殖并诱导凋亡作用。PPARγ蛋白核内表达上调,Bcl 2蛋白表达下调在罗格列酮对A549细胞体外化疗增敏作用中发挥重要的作用。目的　探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPARγ)配体罗格列酮 (Rosiglitazone,RSG)的体外化疗增敏作用及机制。方法　体外培养人肺腺癌A549细胞,MTT法测定药物的细胞生长抑制率,吖啶橙 /溴化乙啶 (AO/EB)荧光双染,流式细胞仪(Flowcytometry,FCM)检测细胞凋亡,免疫细胞化学检测药物处理前后PPARγ,Bcl 2蛋白表达的改变。结果　RSG(1 25,     

腺病毒介导的FasL基因诱导肺癌细胞凋亡

目的研究外源性FasL基因对人肺癌细胞凋亡的影响以及FasL基因治疗肺癌的可能性.方法构建腺病毒载体介导FasL基因转移到低水平表达FasL的人肺腺癌细胞系A549,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术(FCM)检测FasL基因的表达,并观察A549肺癌细胞凋亡和生长,对肿瘤生长模型的治疗效果进行分析.结果外源性FasL基因在A549肺癌细胞获得高水平的表达,FasL能显著抑制A549的生长和集落形成,流式细胞仪检测显示细胞G1期阻滞并发生了凋亡.瘤内注射Ad-FasL对裸鼠体内移植瘤有较强的抑瘤作用.结论FasL基因参与了肺癌细胞凋亡的诱导,能抑制肺腺癌细胞的生长,因此该基因在肿瘤的基因治疗上有广泛的应用前景.     

紫杉醇通过上调miR-7抑制非小细胞肺癌细胞的抗增殖作用并促进其凋亡的应用研究

目的研究紫杉醇通过上调miR-7抑制非小细胞肺癌细胞的抗增殖作用并促进其凋亡的应用效果。方法选择CCK-8、Annexin-FITC/PI双染色法对紫杉醇抑制非小细胞肺癌的细胞株A549、H460细胞周期作用进行检测,并选择实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法对经紫杉醇处理、未经紫杉醇处理(空白对照组)后A549、H460细胞中不同miRNA的表达情况进行检测。结果紫杉醇可对A549、H460细胞增殖进行明显抑制,且随着应用剂量增加,A549、H460细胞的活性不断降低,显示出时间依赖性;经紫杉醇刺激培养后,A549、H460细胞凋亡水平呈明显升高;A549、H460细胞经紫杉醇刺激后,miR-7相关表达水平明显上调; miR-7过表达后Bcl-2相关mRNA的表达水平明显减少;且miR-7过表达后Bcl-2表达水平明显减少;miR-7 inhibitor可对miR-7表达进行抑制。结论紫杉醇能经诱导细胞凋亡对非小细胞肺癌细胞增殖进行抑制,而经紫杉醇处理后A549、H460细胞系miR-7的表达水平均明显上调,且miR-7过表达可使紫杉醇对非小细胞肺癌细胞相关抗增殖作用、促凋亡作用增强。     

PPARγ激动剂吡格列酮抑制胶质瘤细胞生长、凋亡的实验研究

目的探讨过氧化物酶体增长因子活化受体了激动剂（PPARγ）吡格列酮抑制胶质瘤细胞生长的机制。方法应用细胞增殖力测定、AO／EB荧光染色、流式细胞仪检测吡格列酮抑制胶质瘤细胞生长的情况。结果吡格列酮对胶质瘤细胞株U-251的生长有抑制作用,并呈时间与剂量依赖关系（P〈0．05）;可诱导胶质瘤细胞的凋亡,呈时间依赖关系（P〈0．05）,并出现细胞凋亡征象。结论PPARγ激动剂吡格列酮对胶质瘤细胞U-251具有生长抑制作用。其可诱导胶质瘤细胞凋亡可能是细胞生长抑制的机制之一。     

罗汉果提取物诱导肺癌细胞A549凋亡的研究

目的探讨罗汉果醇诱导肺癌细胞凋亡的作用及可能的分子机制。方法通过分离、纯化得到罗汉果醇单体,以肺癌细胞A549为对象,采用MTT法检测罗汉果醇对肺癌细胞的抑制作用;利用荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期;以蛋白印迹法检测罗汉果醇对p21、Bcl-2蛋白表达的影响。结果罗汉果醇能抑制肺癌细胞的增殖,具有促进细胞凋亡、阻滞细胞周期的作用;蛋白印迹检测表明,罗汉果醇可以促进p21表达升高,Bcl-2表达下降。结论罗汉果醇通过调节p21、Bcl-2的表达来诱导细胞凋亡和周期阻滞,从而促进肺癌细胞A549的凋亡。     

CIK细胞对Lewis肺癌细胞凋亡影响的实验研究

目的 观察CIK细胞对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用,探讨其抑瘤机制.方法 常规方法培养CIK细胞,以CIK细胞为效应细胞,Lewis肺癌细胞为靶细胞,以不同效靶比共同培养,MTT法检测细胞增殖情况,同时电镜观察Lewis肺癌细胞形态特征改变;流式细胞仪检测Lewis肺癌细胞的凋亡;免疫细胞化学法检测并比较FasL在单个核细胞和CIK细胞表面的表达;用MTF法检测抗FasL单克隆抗体对CIK细胞杀伤Lewis肺癌细胞的影响.结果 电镜观察:CIK细胞能促进Lewis肺癌细胞凋亡超微结构的改变;流式细胞仪检测:CIK细胞组凋亡率明显高于对照组;FasL在CIK细胞表达增加;抗Fas单抗可抑制CIK杀伤Lewis肺癌细胞的活性.结论 CIK细胞可在体内及体外抑制Lewis肺癌细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,Fas/FasL途径在其中发挥一定作用.     

15d-PGJ_2对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的观察15d-PGJ2上调过氧化质体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达以及对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖凋亡的影响。方法体外培养HSC-T6细胞,取对数生长期的细胞,应用1、2、3μmol.L-1不同浓度的PPARγ激动剂15d-PGJ2作用24h,同时以不加药物只加无血清培养基做为对照组,24h后应用RT-PCR的方法观察分析各组间肝星状细胞PPARγ mRNA表达的变化,Western blot检测相应的胞质内NF-κB抑制蛋白表达。MTT检测HSC增殖,吖啶橙荧光染色观察细胞凋亡,流式细胞仪分析细胞周期。结果经15d-PGJ2处理的HSC细胞中PPARγ mRNA表达比例上调;胞质内NF-κB蛋白表达明显抑制。MTT结果显示不同浓度的15d-PGJ2对HSC-T6细胞的增殖均有抑制作用,以2μmol.L-1组最为明显;吖橙啶染色显示经PPARγ激动剂处理组凋亡细胞数明显增多,流式细胞仪结果显示15d-PGJ2处理组细胞产生了G1期阻滞作用。结论15d-PGJ2能够上调PPARγ表达并抑制HSC-T6增殖及诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与抑制NF-κB活性有关。     

和厚朴酚及厚朴酚抗肺癌药理作用及机制的研究进展

和厚朴酚及厚朴酚是疏水性烯丙基联苯酚类结构的同分异构体,均有抗肺癌药理作用。和厚朴酚能抑制肺癌A549细胞、H1299细胞和Lewis细胞移植瘤在小鼠体内的生长和转移,而厚朴酚能预防乌拉坦诱导小鼠发生肺癌和抑制A549细胞移植瘤在小鼠体内生长。和厚朴酚及厚朴酚在体外能浓度相关地抑制人小细胞肺癌N446细胞、H446细胞,非小细胞肺癌中的肺腺癌A549、H1299、H441、H1975、Calu3、A2、PC、SPC-A-1、95D细胞,大细胞肺癌H460细胞,人肺鳞癌H226、H520、CH27细胞以及小鼠肺癌Lewis细胞增殖,并诱导其凋亡和坏死。和厚朴酚及厚朴酚抑制肺癌的主要机制是：（1）抑制I型去乙酰化酶的表达和酶活性,上调死亡受体-5（DR5）的表达,激活肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）信号通路;（2）激活与半胱天冬酶无关的凋亡通路;（3）阻滞癌细胞中的微管聚合,破坏微管结构;（4）阻滞蛋白激酶B（AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路,诱导癌细胞自噬;（5）阻滞磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/AKT信号通路而抑制癌细胞转移。     

苦参碱抗肺癌的药理作用及其临床研究进展

苦参碱能抑制多种肺癌细胞(A549细胞、SPC-A-1细胞、NIC-H460细胞、LTEP-a-2细胞、SK-MES-1细胞、PG细胞、Lewis细胞)增殖并诱导细胞凋亡。苦参碱是通过抑制PI3K/Akt信号通路、抑制端粒酶活性和人端粒酶逆转录酶表达以及促进自噬的机制,诱导肺癌细胞凋亡。苦参碱还可通过抑制表皮生长因子受体酪氨酸蛋白激酶(EGFR-TPK)的活性,下调缺氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子以及基质金属蛋白酶和黏附因子CD44和CD49的表达,抑制肿瘤组织内微血管形成以及癌细胞的黏附、迁移和侵袭能力,阻滞肿瘤生长和转移。在临床上苦参碱能增强化疗药抗肺癌的临床疗效。综述苦参碱抗肺癌的药理作用及其临床研究文献资料,并对其研究进展做了分析,为临床研究和开发苦参碱治疗肺癌的新适应证提供参考。     

Caspase-4活化参与TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡

目的研究caspase-4在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)诱导胃癌细胞凋亡中的作用。方法采用碘化丙啶染色,流式细胞术检测TRAIL和caspase-4抑制剂(z-LEVDfmk)单独或联合作用对胃癌细胞凋亡的影响;化学合成3条针对caspase-4基因的小干扰RNA(small interfering,siRNA),用脂质体法转染胃癌细胞,采用Western blot验证沉默效果,流式细胞术观察转染后对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的影响;Western blot检测TRAIL作用后葡萄糖调节蛋白78(78-ku glucose-regulated protein,GRP78)的表达情况,以内质网应激经典诱导剂衣霉素(tunicamycin,TM)为参照;Western blot检测TRAIL作用后caspase-3和caspase-4蛋白的表达情况。结果 z-LEVD-fmk能明显地抑制TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡(P<0.05);与阴性对照相比,转染caspase-4 siRNA后caspase-4蛋白表达水平明显下降,且转染后细胞凋亡率降低(P<0.05);和TM相比,TRAIL能诱导较低程度的内质网应激反应;在TRAIL处理的早期caspase-4和caspase-3即活化。结论 Caspase-4的活化参与了TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡,这可能与TRAIL诱导的内质网应激有关。     

茶黄素双没食子酸酯对肺癌A549细胞生长及VEGF基因表达的影响

目的观察茶黄素双没食子酸酯(TFDG)对肺癌A549细胞株生长的抑制、促凋亡效应及对血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的影响。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测TFDG对肺癌A549细胞生长的抑制作用,通过流式细胞术检测TFDG对肺癌A549细胞凋亡的影响,RT-PCR法检测A549细胞VEGF mRNA的表达。实验数据用x±s表示,采用单样本方差分析进行统计分析。结果 TFDG显著抑制A549肺癌细胞生长,具有时间依赖性和浓度依赖性;同时TFDG使A549细胞出现凋亡,凋亡率17.8%(P<0.05);TFDG可降低A549细胞VEGF mRNA表达,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论 TFDG能抑制A549细胞生长,促进其凋亡,抑制VEGFmRNA的表达。     

川楝素下调ATF2蛋白的表达增强顺铂对肺癌细胞的凋亡诱导活性研究

目的 探讨川楝素辅助治疗是否能增强顺铂对肺癌细胞的凋亡诱导活性并研究其机制。方法 MTT法检测肺癌细胞系A549在顺铂和川楝素处理下的细胞活力。Western blot试验检测顺铂和川楝素对A549细胞ATF2磷酸化水平,Bcl-xl蛋白表达水平、细胞色素c释放水平、caspase-9和caspase-3活化水平的影响。流式细胞术检测A549细胞在顺铂和川楝素联合处理下的细胞凋亡率。结果 MTT试验结果显示,川楝素辅助治疗能明显提降低顺铂对A549的IC₅₀。Western blot试验结果显示川楝素处理能显著抑制A549细胞ATF2的表达和磷酸化。MTT试验结果显示,转染ATF2表达质粒显著抑制川楝素对顺铂的协同抗肺癌活性。Western blot和流式细胞试验结果显示,川楝素能显著抑制A549细胞中顺铂诱导的Bcl-xl表达水平的上调,进而促进A549细胞中顺铂诱导的细胞色素c的释放、caspase-9和caspase-3活化及A549细胞的凋亡水平。结论 川楝素通过抑制ATF2蛋白的磷酸化增强顺铂对肺癌细胞的凋亡诱导活性。     

survivin基因在化疗药物诱导的肺癌细胞凋亡中的作用

目的　探讨survivin基因在化疗药物顺铂 (DDP)和足叶乙苷 (VP16 )诱导的肺癌细胞凋亡中的作用。方法　用肺腺癌A5 4 9细胞株进行培养传代 ,MTT试验检测DDP和VP16不同药物浓度对肺癌细胞生长的抑制作用 ,实验分为 :DDP、VP16和对照组。DDP和VP16组的肺癌细胞又分为高浓度和低浓度化疗药物处理组。用逆转率PCR检测sur vivin基因的表达。同时利用流式细胞术定量检测细胞凋亡。结果　不同浓度VP16和DDP对肺癌细胞生长均有明显的抑制作用 ,并有浓度和时间的依赖性。化疗药物组细胞凋亡率和survivin基因表达抑制率高于对照组 ,也有时间依赖性。结论　survivin基因的抑制在DDP和VP16诱导肺癌细胞凋亡中起重要作用     

银杏内酯B对肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨银杏内酯B（Ginkgolide B,GB）抑制肺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用机制。方法：以人肺腺癌细胞A549、人肺鳞癌细胞NCI-H520、人非小细胞肺癌NCI-H1975共3种肺癌细胞株为实验对象,MTT法检测GB对肺癌细胞增殖的抑制作用;Transwell小室法检测GB对肺癌细胞侵袭力的影响;划痕法检测GB对肺癌细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测GB对肺癌细胞增殖周期、凋亡的影响;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达。结果：GB对A549、NCI-H520及NCI-H1975细胞的生长抑制作用均呈时间和剂量依赖性,抑制率随着GB浓度的增加和处理时间的延长而升高;GB处理细胞后,小室膜下表面的细胞数与对照组相比明显减少,对A549、NCI-H520及NCI-H1975细胞的侵袭抑制率分别为35.6%、28.9%、30.2%;GB作用后肺癌细胞较对照组移行愈合率明显降低（P<0.05）。与对照组相比,低、中、高剂量的GB作用于肺癌细胞后,各给药组细胞G₀/G₁比例均明显升高（P<0.05）,细胞凋亡率显著增加（P<0.05）,并呈剂量相关性。并下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达（P<0.05）。结论：GB对肺癌细胞的侵袭迁移具有明显的抑制作用,对肺癌细胞生长的抑制作用与阻断细胞增殖周期、诱导凋亡有关。其作用机制与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平有关。     

新型化合物F-2对人肺癌NCI-H520细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的：探讨新型化合物F-2对人非小细胞肺癌NCI-H520细胞增殖迁移及凋亡的影响。方法： CCK-8实验检测肺癌细胞增殖情况;采用划痕实验检测化合物对H520细胞迁移的情况;倒置显微镜观察化合物刺激对细胞形态的影响;流式细胞术实验检测化合物对细胞凋亡的影响;Western blot实验检测化合物对细胞迁移及凋亡相关蛋白表达的影响。结果：化合物对H520细胞增殖有明显的抑制作用,且与浓度和时间呈依赖性关系。划痕实验结果表明化合物能够明显抑制肿瘤细胞迁移,并且western blot 实验结果表明化合物处理H520细胞后可上调Ｅ-cadherin的表达,下调N-cadherin蛋白的表达。Annexin-V／PI双染法结果显示,化合物可诱导H520细胞发生凋亡,且随着药物浓度增加凋亡率上升,并且增加了BaX/BcL-2蛋白表达比率。结论：化合物能够明显抑制肺癌细胞的增殖、迁移及诱导细胞凋亡,可能是通过阻断肿瘤细胞EMT过程,调节细胞凋亡过程中相关基因表达从而发挥抗肿瘤作用。     

加热诱导肺癌细胞凋亡的体外实验研究

目的:探讨同一温度不同时间和同一时间不同温度加热对凋亡坏死、survivin、caspase基因表达的影响及其作用机制.方法:对数生长期肺癌A549细胞.分别在同一温度不同时间和同一时间不同温度加热,用流式细胞仪检测细胞凋亡百分比和坏死百分比,用RT-PCR检测survivin和caspase基因的表达.结果:加热后细胞凋亡增加,加热温度42℃和加热时间2h最为明显.随加热温度升高和加热时间增加坏死增加.加热明显加强Casepase-3的表达和降低Survivin的表达,且42℃加热不同时间时,2h效果最明显,不同温度加热1h时42℃效果最明显.结论:(1)加热能明显抑制肺癌细胞生长,促进肺癌细胞的凋亡.(2)加热明显增强Casepase-3的表达和降低Survivin的表达,从而促进肺癌细胞的凋亡.(3)加热温度42℃、加热时间2h为肺癌细胞热疗的最佳条件.     

PPARγ表达上调抑制肝星状细胞增殖的实验研究

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达上调对肝星状细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养HSC—T6细胞至对数生长期,以不同浓度的PPARγ激动剂15d—PGJ2作用24h后应用RT—PCR的方法观察分析各组肝星状细胞PPARγmRNA的表达,MTT检测HSC增殖情况,流式细胞仪分析HSC—T6细胞凋亡情况。结果15d—PGJ2处理的HSC—T6细胞中PPARγmRNA表达比例上调;凋亡细胞数明显增多。不同浓度的15d—PGJ2均可抑制HSC—T6细胞的增殖,以2μmol／L组最为显著。结论PPARγ表达上调能够抑制HSC—T6增殖并诱导其凋亡。     

巴豆生物碱上调TRAIL配体、caspase-8的表达诱导HeLa细胞凋亡的体外研究

目的研究巴豆生物碱对人宫颈HeLa细胞诱导凋亡作用,并探讨其作用机制。方法 MTT法观察巴豆生物碱对HeLa细胞的抑制率;流式细胞仪检测HeLa细胞TRAIL及其受体DR5的表达及其巴豆生物碱对HeLa细胞TRAIL配体表达的影响;Caspase-8活性检测;RT-PCR检测TRAIL配体及Caspase-8、Caspase-3 mRNA的表达。结果巴豆生物碱对HeLa细胞生长有抑制作用,且呈剂量依赖关系。流式细胞仪检测HeLa细胞TRAIL及其受体DR5的表达阳性,巴豆生物碱处理HeLa细胞后发现TRAIL配体的表达明显上调,Caspase-8活性明显增加,TRAIL配体、Caspase-3及Caspase-8 mRNA高表达。结论巴豆生物碱对人宫颈癌HeLa细胞有增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用,其诱导机制可能与上调TRAIL配体和Caspase-8mRNA的表达有关。     

姜黄素通过激活过氧化物酶体增殖子活化受体γ诱导肝星状细胞凋亡

目的研究姜黄素对肝星状细胞(HSC)凋亡的作用,以及与过氧化物酶体增殖子活化受体γ(PPARγ)信号之间的关系。方法肝脏原位灌流酶消化、Nycodenz密度梯度离心方法分离培养大鼠HSC,传代培养并使用药物处理。Ho-echst33258染色检测细胞凋亡,免疫荧光染色检测PPARγ的细胞内分布。收集裂解细胞分别抽提RNA、总蛋白和核蛋白,半定量RT-PCR和Westernblot方法检测目标基因和蛋白表达水平。结果活化HSC几乎没有凋亡发生,而姜黄素处理诱导了HSC凋亡,促进了HSC中PPARγ的核转位和(或)重分布。姜黄素在转录和翻译水平,增强HSC胞核PPARγ表达,抑制了抗凋亡因子Bcl-2的表达,促进了促凋亡因子Bax表达;这些作用能够被PPARγ阻断剂所拮抗。结论姜黄素促进过氧化物酶体增殖因子活化受体γ表达和核转位/重分布,诱导肝星状细胞凋亡。