苦参碱对多发性骨髓瘤细胞凋亡及泛素蛋白酶体通路的影响

目的观察苦参碱对多发性骨髓瘤细胞株凋亡的影响及可能作用机制。方法以不同浓度的苦参碱(0.25、0.5、1.0、2.0 mg/ml)作用于人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226和U266,另设蛋白酶体抑制剂MG132为阳性对照。采用MTT法测定苦参碱对两种细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测两种细胞的早期凋亡水平,Western-blot法检测两细胞株泛素(Ub)、20S核心颗粒(p Ab)以及NF-κB信号通路相关蛋白(p-NF-κB p65B、IκBα、p-IκBα、IKKα)表达变化。结果在同等浓度苦参碱作用下,两细胞株细胞在48 h的增殖抑制率较本浓度24 h时明显增加(P0.05或P0.01)。随着苦参碱浓度的递增,各细胞株的凋亡率均逐渐增加(P0.05或P0.01)。随着苦参碱作用浓度的递增,RPMI 8226细胞Ub水平明显上调,同时p Ab呈进行性下降;而U266细胞Ub表达无明显变化,但p Ab水平同样表达下降。苦参碱能明显抑制两细胞株胞核内p-NF-κB p65B以及胞浆内p-IκBα蛋白表达水平,上调RPMI 8226胞浆内IκBα表达,且以浓度为2.0 mg/ml时作用最明显(P0.05或P0.01)。结论苦参碱能促进多发性骨髓瘤细胞的凋亡,并且有一定的浓度时间依赖性,其中的关键因素可能是苦参碱具有抑制蛋白酶体活性的作用。     

天然产物gochnatiolide A对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的研究兔儿风属植物中天然产物gochnatiolide A抗前列腺癌DU145细胞的作用及机制。方法采用CCK-8法和克隆形成实验检测gochnatiolideA对DU145细胞增殖的影响;DAPI染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测gochnatiolide A对DU145细胞凋亡和周期的影响;Western blotting法检测gochnatiolide A对DU145细胞内活化的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved-PARP)、活化的半胱氨酸蛋白酶9(cleaved Caspase-9)、p53、Bcl-2、核转录因子κB p65(NF-κB p65)和核转录因子κB抑制蛋白α、β(IKKα、IKKβ)表达的影响。结果与对照组比较,gochnatiolideA能够显著抑制DU145细胞增殖,其12、24、48 h的半数抑制浓度(IC_(50))值分别为4.15、2.80、1.74μmol/L。Gochnatiolide A可以浓度依赖性地促进细胞凋亡,阻滞细胞周期于G2期和S期;可以显著促进凋亡蛋白cleaved-PARP、cleaved Caspase-9和p53蛋白表达,抑制Bcl-2蛋白表达,抑制NF-κB通路中NF-κB p65、IKKα和IKKβ蛋白的表达。结论 Gochnatiolide A具有很好的抑制DU145细胞增殖及促进凋亡的作用,其机制可能与抑制NF-κB通路有关。     

去甲斑蝥素增强马法兰抗骨髓瘤作用机制研究

目的 研究去甲斑蝥素联合马法兰对多发性骨髓瘤细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制.方法 去甲斑蝥素单独或联合马法兰给药后,MTT法观察对人多发性骨髓瘤细胞U266株生长的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,Westernblotting检测核因子-κB P65 (NF-κB P65)、NF-1cB抑制因子IκBα、磷酸化IBα(p-IκBα)、survivin、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.制备多发性骨髓瘤小鼠模型,观察去甲斑蝥素及其与马法兰联合给药对肿瘤生长的抑制作用.结果 去甲斑蝥素能增强马法兰的细胞毒和诱导细胞凋亡作用.与马法兰单独给药组比较,联合给药组使U266细胞核NF-κB P65和胞浆p-IκBα的表达量分别由113±0.08、0.83±0.08降至0.26±0.02、0.090±0.002;马法兰对IκBα的表达无影响,但去甲斑蝥素能促进IκBα的表达,二者合用能显著促进胞浆IκBα的表达;与马法兰单独给药组比较,联合给药组survivin和Bcl-2的表达量分别由1.03±0.10、0.72±0.05降至0.52±0.04、0.06±0.01,而Bax由0.29±0.03升至0.75±0.06.体内实验也证实去甲斑蝥素能增强马法兰的抗肿瘤作用.结论 去甲斑蝥素通过抑制NF-κB/p-IκBα途径,调节下游信号分子survivin、Bcl-2和Bax的表达,增强马法兰的抗骨髓瘤作用.     

基于NF-κB/IRF4信号通路研究龙葵总碱抗小鼠浆细胞骨髓瘤的作用

目的:研究龙葵总碱对骨髓瘤移植裸鼠磷酸化核因子-κB抑制蛋白(inhibitor kappa b alpha,IκB-α)、核因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)/干扰素调节因子4(interferon regulatory factor4,IRF4)信号通路表达的影响,明确龙葵总碱抗骨髓瘤的作用靶点和机制。方法:传代培养人骨髓瘤细胞RPMI8226,选取90只裸鼠,随机分为空白组,模型组,硼替佐米组,龙葵总碱低、中、高剂量组,每组15只。除空白组外,其余小鼠制备多发性骨髓瘤模型,造模成功后连续灌胃给药龙葵总碱14天,皮下注射硼替佐米14天,断颈处死裸鼠,取出瘤体组织。瘤组织细胞应用CCK8检测不同浓度的龙葵总碱和硼替佐米对骨髓瘤细胞增殖的影响,采用流式细胞仪检测瘤组织细胞凋亡率;采用Western blot检测IκB-α、磷酸化IκB-α、NF-κB、P65、IRF4表达。结果:龙葵总碱能明显抑制人骨髓瘤细胞的增殖,呈时间和剂量依赖性,并能促进骨髓瘤组织细胞的凋亡,呈现剂量依赖性。Western blot显示龙葵总碱高、中剂量组磷酸化IκB-α、NF-κB与IRF4表达均显著减少,而其负调控因子IκB-α水平明显升高。结论:龙葵总碱通过抑制磷酸化IκB-α,引起NF-κB失活,促进骨髓瘤细胞IRF4表达减少,在一定程度上促使骨髓瘤细胞凋亡。     

青蒿琥酯对骨髓瘤RPMI 8226细胞增殖、凋亡及对Survivin、Caspase-3、Caspase-7的影响

目的探讨青蒿琥酯对体外培养的人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226的增殖、凋亡及对凋亡相关基因survivin及caspase-3、caspase-7表达的影响。方法采用MTT法检测青蒿琥酯对RPMI8226细胞增殖的抑制作用,光镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪分析细胞凋亡率,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测survivin和caspase-3、caspase-7mRNA表达水平变化,Western blotting检验Survivin蛋白表达变化,应用Caspase-3/7试剂盒检测Caspase-3、Caspase-7蛋白活性。结果青蒿琥酯质量浓度从2.5μg/mL增加至50μg/mL时,青蒿琥酯体外对RPMI8226细胞的抑制率由33.55%增加到74.71%。细胞凋亡率呈剂量依赖性增加,50μg/mL青蒿琥酯诱导RPMI8226细胞最大凋亡率达(68.1±5.9)%。不同质量浓度青蒿琥酯干预48h后Survivin mRNA及蛋白表达水平明显降低,Caspase-3、Caspase-7mRNA及蛋白活性明显升高(P0.01)。结论青蒿琥酯对RPMI8226细胞有生长抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与增强Caspase-3、Caspase-7活性,抑制抗凋亡分子survivin表达有关。     

雷公藤红素诱导非小细胞肺癌H1299细胞凋亡及其机制研究

目的:研究雷公藤红素对非小细胞肺癌H1299细胞形态、线粒体膜电位及凋亡的影响。方法:用AO/PI荧光染色实验检测不同浓度雷公藤红素对H1299细胞形态的影响;用线粒体膜电位实验检测不同浓度雷公藤红素对H1299细胞线粒体膜电位变化的影响;用RT-PCR及Western blot检测不同浓度的雷公藤红素对H1299细胞中XIAP、p53 mRNA和蛋白及NF-κB信号通路的影响。结果:雷公藤红素可剂量依赖性诱导H1299细胞形态及线粒体膜电位的变化,抑制XIAP mRNA和蛋白的表达,上调p53 mRNA和蛋白的表达,同时抑制NF-κB信号通路中IKKβ、IKKα、NF-κB p65的磷酸化水平。结论:雷公藤红素能通过上调p53 mRNA和蛋白的表达以及抑制NF-κB信号通路和XIAP mRNA和蛋白的表达来诱导H1299细胞发生凋亡,即通过线粒体途径和NF-κB信号通路起到抗肿瘤作用。     

丹皮酚对肝癌细胞HepG2凋亡及NF-κB通路的影响

目的：研究丹皮酚对TNFα诱导的人肝癌细胞HepG2凋亡及核转录因子κB（nuclear factor—κB,NF—κB）活化的影响。方法：培养H印G2细胞分别用肿瘤坏死因子α（TNFα）刺激和丹皮酚＋TNFα共同作用,并设立未加药的空白对照组,用流式细胞技术测定细胞凋亡率;Westem blot分析细胞核中NF—κB p65及其细胞浆中抑制因子IκBα的表达;EMSA方法检测NF-κB表达及活化情况。结果：丹皮酚（125—500μmol／L）能抑制刚如诱导的NF-κB活化及NF-κBp65的核转移,减少胞浆中IκBα的降解,且增强TNFα诱导的细胞凋亡。结论：下调NF—κB是丹皮酚增强TNFα诱导的HepG2细胞凋亡作用的部分机制。     

NF-κB p65基因沉默条件下HT29细胞中Survivin表达活性的研究

目的：以特异性siRNA转染结肠癌细胞HT29,沉默NF-κB p65基因的表达,研究肿瘤细胞中NF-κB p65调节Survivin基因的表达。方法：以噻唑蓝（MTT）法观察对细胞增殖活性的影响,明确最佳的作用浓度。通过Western Blot检测结肠癌细胞内NF-κB p65及Survivin蛋白表达水平的变化。将设计合成好的特异性针对NF-κB p65基因的片段,体外转染结肠癌细胞株HT29,Western Blot检测NF-κB p65基因沉默效应,进而观察对结肠癌细胞内Survivin蛋白表达水平的影响,明确NF-κB p65是否有Survivin表达的调节作用。结果：siRNA干扰后细胞内NF-κB p65蛋白表达水平降低,较对照细胞组差异有统计学意义（P〈0.01）。同时NF-κB p65基因沉默后,取消了先前缺氧条件下细胞内Survivin的表达增高,与对照细胞组相比无统计学意义差异（P〉0.05）。结论：采用特异性siRNA片段对结肠癌进行靶向NF-κB p65基因沉默,能有效降低Survivin基因的表达,抑制Survivin可能通过多种信号转导通路参与肿瘤的发生发展过程。     

基于JNK/p38 MAPK/NF-κB信号通路探究八桂止痛散对脂多糖诱导脊髓星形胶质细胞凋亡的影响

目的:基于JNK/p38 MAPK/NF-κB信号通路探究八桂止痛散对脂多糖(LPS)诱导的脊髓星形胶质细胞凋亡的影响。方法:从SD乳鼠脊髓中分离星形胶质细胞并鉴定。CCK-8法检测不同浓度八桂止痛散(2.5、5、10、20、40、80 mg/ml)对细胞存活的影响;随后分别设置对照组、LPS组、LPS+药物-L组、LPS+药物-M组、LPS+药物-H组、LPS+药物-H+Anisomycin组。CCK-8法、流式细胞术检测细胞存活、凋亡;ELISA法检测细胞中白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;qRT-PCR检测细胞中JNK、p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA表达水平;Western blot检测JNK/p38 MAPK/NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果:与对照组相比,LPS组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、JNK mRNA、p38 MAPK mRNA、NF-κB p65 mRNA表达、p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达显著增加...     

迷迭香酸通过诱导凋亡及抑制NF-κB信号通路发挥抗肝癌作用的机制研究

目的:探讨迷迭香酸对小鼠肝癌H22移植瘤生长的抑制作用及分子机制。方法:建立雄性昆明种小鼠肝癌H22皮下移植瘤模型,荷瘤小鼠随机分为如下4组(n=10):阴性对照组、迷迭香酸钠25,50mg/kg组、阿霉素组(ADM,5mg/kg),连续给药10天(ip)。测量实体瘤体积,计算药物抑瘤率;进行外周血白细胞分类计数;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法测定肿瘤组织中NF-κB的mRNA表达水平,免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织中Caspase-3、bcl-2、Bax及NF-κB p65、NF-κB p50、p-IκB-α蛋白表达水平。结果:迷迭香酸钠25、50mg/kg剂量组肿瘤生长变缓,抑瘤率分别为45.67%,52.82%。外周血白细胞及淋巴细胞数目较对照组明显上升。迷迭香酸钠25,50mg/kg组小鼠体重与对照组无明显差异。迷迭香酸钠50mg/kg组肿瘤组织发生明显细胞凋亡,Bax,Caspsase-3蛋白表达显著升高,bcl-2表达显著降低,同时NF-κB的mRNA表达及p-IκB-α蛋白表达显著减少,NF-κB信号通路受到抑制。结论:迷迭香酸钠能通过诱导凋亡、抑制NF-κB通路活性而在H22荷瘤小鼠体内发挥显著的抗肝癌作用,迷迭香酸钠具有良好抗肝癌活性,展现出低毒优点,有望成为抗肝癌新药。