抑制TNFR/RIPK信号通路对大鼠急性脊髓损伤后神经功能的影响

目的 :探讨应用坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)抑制TNFR/RIPK介导的坏死性凋亡信号通路对大鼠急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的作用。方法:72只雄性SPF级SD大鼠,体重0.25~0.30kg,随机分为4组:假手术组(Sham组,A组)、假手术+Necrostatin-1组(Sham+Nec-1组,B组)、SCI+二甲基亚砜(DMSO)(DMSO组,C组)、SCI+Nec-1组(Nec-1组,D组)。C、D组采用钳夹法制作大鼠急性SCI模型。所有大鼠硬膜下置管,A组不给药,B组和D组造模后30min经导管注射1μl Nec-1(25μg/μl),C组注射等量DMSO,1次/d,至取材时间点。各组分别于造模后12h、24h和3d三个时间点每组取6只大鼠,先行Basso/Beattie/Bresnahan(BBB)评分,再处死动物取脊髓组织。12h时间点动物处死前1h腹腔注射碘化丙啶(propidine iodide,PI)1mg/kg,取材检测脊髓组织PI红染细胞数;24h时取材采用苏木素-伊红(HE)染色观察脊髓损伤情况、尼氏(Nissl)染色观察神经元存活数目、Western Blot(WB)检测Bcl-2、坏死性凋亡蛋白RIPK1及RIPK3的表达水平;3d时取材行Tunel染色观察细胞凋亡情况。结果:造模后A组和B组各时间点的BBB评分均正常,C、D组各时间点均显著性低于A、B组,D组各时间点的BBB评分均显著高于同时间点C组(P0.05)。造模后12h,D组PI红染细胞较C组明显减少,神经元崩解减轻(P0.05)。造模后24h,A组和B组脊髓组织HE和Nissl染色正常,D组脊髓组织损伤程度和存活神经元数量均优于C组,差异有统计学意义(P0.05);A组和B组Bcl-2、RIPK1及RIPK3均低水平表达,C组RIPK1及RIPK3表达显著性升高,D组Bcl-2表达较C组上调,RIPK1及RIPK3表达显著性下降,C、D两组比较差异均有统计学意义(P0.05)。造模后3d,A组和B组可见少量凋亡小体,C组和D组明显增多,但D组凋亡小体数量较C组明显减少(P0.05)。结论:抑制TNFR/RIPK信号通路可以减轻大鼠急性SCI后的病理变化,改善行为学评分,促进脊髓神经功能恢复。     

脊髓损伤后下尿道功能恢复的机制

下尿道的贮尿和周期性排尿和功能有赖于位于脑，脊髓和周围神经节的神经回路，本文综述了下尿道的神经控制以及在脊髓损伤后控制紊乱方面的研究进展。     

基于Notch/STAT3信号通路探讨bFGF对大鼠脊髓损伤的治疗机制

目的 探讨bFGF对脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）大鼠的治疗作用及Notch/STAT3信号通路的影响。方法 取10周龄雄性SD大鼠40只,采用自由落体打击法建立T10节段SCI模型,其中32只造模成功随机分为模型组、bFGF组,每组16只;另取16只SD大鼠仅暴露T10棘突、硬脊膜和脊髓,作为假手术组。造模后bFGF组腹腔注射100μg/kg bFGF(1次/d,共28 d),模型组和假手术组大鼠同法注射生理盐水。造模后观察各组大鼠存活情况,于造模前及造模后即刻、14 d、28 d行BBB评分评估后肢功能。造模后28 d取损伤部位脊髓组织,行HE、Nissl和碘化丙啶（propidium iodide,PI）染色,观察脊髓组织病理变化、神经元存活（尼氏体数量）和凋亡（PI红染细胞数量）情况;免疫组织化学染色和ELISA法分别检测组织中星形胶质细胞活化标志物[胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）]及炎症因子[IL-1β、TNF-α、干扰素γ(interferon γ,IFN-γ)]水平;Western b...     

川芎嗪对大鼠脊髓损伤后神经功能恢复作用的研究

目的探讨川芎嗪(TMP)对大鼠脊髓损伤后后肢运动功能恢复的影响。方法雄性成年SD大鼠24只,随机均分为假手术组、对照组及TMP治疗组。采用改良Allen法建立大鼠胸段脊髓打击模型,HE染色观察伤后4周伤段脊髓残存组织的面积,采用斜板试验和运动功能评分观察大鼠后肢运动功能的恢复情况。结果大鼠脊髓损伤后1～4周,TMP治疗组后肢运动功能评分明显高于对照组,两组间差异有显著性(P<0.05)。伤后4周,TMP组伤段残存脊髓组织的面积大于对照组(P<0.01)。结论TMP能明显减少脊髓损伤后伤区的坏死和萎缩,并促进大鼠后肢运动功能的恢复。     

人胚胎神经干细胞延迟移植对脊髓损伤大鼠运动功能的影响及其机制

目的:初步探讨人胚胎神经干细胞(human fetal neural stem cells,hfNSCs)延迟移植对脊髓损伤大鼠运动功能的影响及其机制。方法:体外分离、培养和鉴定hfNSCs,选取200~250g的Wistar大鼠28只建立T9~T11节段脊髓挫伤模型,损伤后第9天取20只BBB评分为4~5分的大鼠随机分为对照组及移植组(每组10只),同时在T10水平脊髓中线两侧1.5mm处分别给予2μl不含hfNSCs的杜氏磷酸缓冲液(DPBS)及2μl含有105个体外培养第2代hfNSCs的DPBS,细胞移植后第7、14、28、42、56天用BBB评分评价两组后肢运动功能,移植后第28天及第56天用免疫组织化学法检测移植组大鼠损伤脊髓局部神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白2(MAP2)和2′,3′-环腺苷酸-3′-磷酸二酯酶(CNPase)的表达情况,以评价大鼠损伤脊髓局部hfNSCs的存活及分化情况。移植后第56天髓磷脂碱性蛋白(MBP)染色及透射电子显微镜扫描观察移植组与对照组损伤局部髓鞘形成情况。结果:体外培养的hfNSCs表达Nestin,并可分化为星形胶质细胞[(61.2±1.6)%]、神经元[(27.6±3.4)%]及少突胶质细胞[(6.0±5.5)%]。移植前及移植后第7、14天两组BBB评分比较无统计学差异(P>0.05),移植组在移植后第28、42、56天评分(分别为8.30±1.07分,11.30±1.05分,15.10±1.12分)较对照组(分别为7.00±0.98分,8.30±1.02分,9.10±0.96分)明显提高(P<0.05)。在移植后第28天hfNSCs可分化为GFAP阳性的星形胶质细胞、MAP2阳性的神经元和CNPase阳性的少突胶质细胞,在移植后第56天hfNSCs仍在损伤局部存活并可分化为星形胶质细胞和少突胶质细胞,但未见神经元分化;移植后第56天星形胶质细胞的积分光密度(IOD)值(1502.31±131.92)大于移植后第28天(628.98±119.31)(P<0.05),而少突胶质细胞在移植后第28天及第56天的变化无统计学差异。移植后第56天MBP染色证实人源性少突胶质细胞参与损伤区髓鞘的形成,透射电子显微镜扫描结果显示移植组有完整和连续的髓鞘形成,对照组髓鞘呈断裂及畸形表现。结论:hfNSCs延迟移植可促进脊髓损伤大鼠运动功能的恢复,其机制可能与促进损伤局部髓鞘的形成有关。     

原花青素对大鼠急性脊髓损伤的保护作用及机制研究

[目的]探讨原花青素对大鼠急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的保护作用.[方法]SD大鼠随机分为假手术组(A组)、脊髓打击损伤组(B组)、原花青素治疗组(C组).A组行T8椎板切除术,不伤及脊髓.B、C组采用改良Allens撞击法制备大鼠T8急性SCI模型.C组术后立即腹腔注射原花青素100 mg/kg,A、B组术后立即腹腔注射等量的生理盐水.分别于术后不同时间点评价大鼠后肢运动功能,检测脊髓匀浆超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量改变,观察脊髓组织病理学变化.[结果]术后A组大鼠后肢运动功能恢复.术后C组大鼠后肢运动功能较B组均有所改善,72 h后肢运动功能恢复更为显著(P＜0.01).术后48 hB组脊髓组织SOD活性较A组明显降低(P＜0.01),而MDA含量较A组明显增加(P＜0.01);应用GSPE后,术后48hC组脊髓组织SOD活性较B组明显升高(P＜0.01),脊髓组织MDA水平较B明显降低(P＜0.01);SCI后脊髓组织TNF-α含量、MPO活性均随时间推移逐渐增高;各时间点C组脊髓TNF-α含量、MPO活性较B组均有统计学意义(P＜0.01);A组大鼠各检测点脊髓组织形态结构均正常;B、C两组72 h切片变化最为显著;B组可见神经组织多灶性出血、大量神经元坏死、尼氏体溶解消失、核固缩变小及炎性细胞浸润;C组可见局部出血点、细胞轻度肿胀,胞质均匀及少量炎性细胞浸润.[结论] GSPE可明显改善大鼠运动功能,抑制氧化应激、炎症反应和细胞凋亡等,对SCI有神经保护作用.     

汉防己甲素对大鼠急性脊髓损伤的作用及意义

目的：探讨汉防己甲素（Tet）对急性脊髓损伤（ASCI）的保护作用及作用机制。方法：81只大鼠随机分为三组：生盐水对照组（NS组）、汉防己甲素治疗组（Tet组）和甲基强松龙治疗组（MP组），每组27只，用加速型Allen′s打击法制成脊髓急性损伤模型，监测大鼠ASCI后及用药后的血压变化，测定损伤区脊髓Ca^2 、MDA含量；采用氢清除法测定脊髓伤区血流量（SCBF）的变化；连续观测6周ASCI后运动功能评分情况，ASCI后4h,8h、6周取伤区标本进行组织病理检查，结果：ASCI后10s各组动物的MABP显著升高，1min内迅速降至正常水平，之后Tet组舒张压，平均动脉明显降低（P＜0．05），而收缩压降低不明显（P＞0．05）；ASCI后SCBF下降，但Tet组和MP组的SCBF较NS组高（P＜0．05）；损伤区Ca^2 及MDA含量Tet组和MP组均较NS组低，神经功能评分均较NS组高。结论：Tet能改善微循环，防止SCBF的减少；抗脂质过氧化损伤，减少脂质过氧化物MDA的生成；减轻Ca^2 的局部积聚，防止钙超载，阻断继发性损伤的链式反应，减轻组织继发性损伤。对实验性急性脊髓损伤有保护作用。     

硬膜外脊髓电刺激疗法对脊柱脊髓损伤晚期解除疼痛和改善神经功能的治疗

对１１例脊柱脊髓损伤晚期的顽固性疼痛、运动障碍、膀胱直肠功能障碍者施行了埋入式硬膜外脊髓电刺激（ＳＣＳ），对缓解疼痛、改善运动和神经性膀胱的功能，取得了较满意的效果。作者们认为ＳＣＳ疗法是一种安全、有效、易行的治疗方法     

氨基胍对大鼠急性脊髓损伤后脊髓水肿的作用机制研究

目的氨基胍(aminoguanidine,AG)能显著减轻脑外伤及中风动物模型脑水肿,提高神经功能恢复程度。探讨AG对大鼠急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后脊髓水肿的作用及相关机制。方法取成年雄性SD大鼠150只(体重230～255 g),分为对照组(A组,25只)、假损伤组(B组,25只)、SCI后未治疗组(C组,25只)和SCI后AG治疗组(75只);AG治疗组按给药剂量分为AG 75 mg/kg组(D组,25只)、AG 150 mg/kg组(E组,25只)和AG300 mg/kg组(F组,25只)。A组未行任何处理,B组仅行椎板切除术但不治疗;C、D、E、F组制备静压型大鼠SCI模型后,C组腹腔注射5%DMSO,D、E、F组腹腔注射相应剂量AG。于造模后0、12、24、48 h用干湿重法检测受损脊髓组织含水量以筛选最佳剂量,进一步用伊文思兰(Evans blue,EB)法评测血-脊髓屏障功能,用RT-PCR检测水通道蛋白4(aquaporins 4,AQP4)mRNA表达,Western blot和免疫组织化学染色检测AQP4蛋白表达。结果脊髓组织含水量检测示,E组在造膜后12、24、48 h对SCI后脊髓组织水肿有明显抑制作用(P<0.05),选择该剂量组用于后续实验。造模后12、24、48 h,E组EB含量明显低于C组(P<0.05),降低血-脊髓屏障通透性。RT-PCR检测结果示造模后12、24、48 h,B、E组AQP4 mRNA表达明显低于C组;Western blot检测示造模后24、48 h,B、E组AQP4蛋白表达明显低于C组;免疫组织化学染色示造模后48 h,B、E组AQP4蛋白表达明显低于C组,差异均有统计学意义(P<0.05);但各指标各时间点B、E组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论急性SCI后大鼠经150 mg/kg AG治疗后,能降低AQP4表达,改善脊髓水肿,减轻损伤。     

同种胚胎脊髓移植物对成年大鼠损伤脊髓组织形态与功能的修复作用

探讨大鼠胚胎脊髓组织移植物对成年大鼠损伤脊髓组织形态与功能的修复作用。在半切洞损伤的成年大鼠脊髓内，植入大鼠胚胎脊髓组织，术后行联合行为记分、诱发电位及组织学检查。结果：移植物能在宿主脊髓损伤部位存活，并能生长、分化、修复宿主脊髓的组织损伤，诱导宿生神经纤维联系的重建，改善宿主损伤脊髓的神经传导，促进功能恢复。以上结果提示：胚胎脊髓移植物对成年大鼠损伤脊髓组织形态与功能均具有修复作用。     

神经生长因子对大鼠脊髓损伤后一氧化氮合成酶含量的影响

探讨神经生长因子（ＮＧＦ）对脊髓损伤保护作用的机制。方法采用Ａｌｉｅｎ’ｓ法以２５ｇｃｍ致伤大鼠Ｔ８脊髓,经蛛网膜下腔导管分别于术后即刻、３０分钟、１、２、３、４、８、１２、２４小时各注入ＮＧＦ溶液,并与生理盐水组和正常对照组作对照。采用放射强度测定法测定一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）含量。结果与正常组相比较,ＮＯＳ含量在伤后１０分钟、１、２、４、８小时均显著升高（Ｐ＜０．０１）,ＮＧＦ治疗组与生理盐水组相比较,在伤后１０分钟、１、２、４、８小时ＮＯＳ活性明显下降（Ｐ＜０．０１）。结论ＮＧＦ通过抑制脊髓损伤后ＮＯＳ的升高效应,抑制了一氧化氮（ＮＯ）的神经毒性作用,从而保护了神经组织。     

脊神经前根吻合重建脊髓损伤大鼠神经反射通路的形态学研究

目的:观察利用脊神经前根吻合重建脊髓损伤大鼠股四头肌神经反射通路的形态学情况。方法:取4周龄SD大鼠20只,体重120～150g;将左侧L1神经前根与支配股四头肌的优势脊神经(L3)前根通过尾神经桥接吻合,右侧不作任何处理。神经吻合术后6个月,手术分离神经吻合段。将能分离神经吻合段的大鼠在L2脊髓水平左半侧切断脊髓制备大鼠脊髓半切损伤模型,饲养4周后左侧股神经注射Trueblue(TB)染色剂进行逆行荧光染色,观察L1脊髓前角是否有TB标记的阳性细胞;同时解剖分离神经吻合段进行HE染色及电镜观察。结果:饲养过程中大鼠死亡4只。成功分离出10只大鼠的神经吻合段。吻合段神经肉眼观察光滑圆润,无萎缩;HE染色光镜下吻合段神经纤维排列整齐,走行一致,为典型的有髓神经纤维结构;电镜下吻合段神经纤维具有明显神经轴突特征。TB荧光逆行示踪左侧L1脊髓前角可见荧光标记阳性的神经元,而右侧无标记阳性细胞。结论:L1与L3脊神经前根吻合可成功建立L2脊髓半切损伤大鼠的股四头肌脊髓旁神经反射通路。     

巨噬细胞极化在脊髓损伤中的作用机制

脊髓损伤是脊柱神经系统严重的创伤,损伤后局部组织破坏和微循环障碍,引起局部损伤加重和周围神经细胞广泛坏死。脊髓损伤后常常伴随炎症反应产生各种细胞因子和生物活性物质,引起巨噬细胞极化,巨噬细胞在IFN-γ、LPS、TNF-α等刺激极化成M1巨噬细胞,主要表现为促炎和损伤作用;在IL-4、IL-10、IL-13刺激下极化为M2巨噬细胞,主要表现出抗炎和修复作用。目前脊髓损伤后的治疗手段非常有限,通过调控脊髓损伤后M1和M2巨噬细胞抑制其促炎损伤作用,促进神经修复作用是脊髓损伤后治疗的一个新方向。本文将对巨噬细胞在脊髓损伤后的极化表型及其功能特点的研究进展做一综述。     

TRH对大鼠脊髓损伤后SCBF和SEP的影响

脊髓损伤（ＳＣＩ）后内源性阿片肽释放，并参与脊髓的继发损伤机制。ＴＲＨ可阻断阿片肽的自主神经效应，而不影响痛觉。本实验探讨大剂量ＴＲＨ（２ｍｇ／ｋｇ／ｈ）治疗对大鼠脊髓打击伤（Ａｌｌｅｎｓ法１０ｇｘ５ｃｍ）后脊髓血流量（ＳＣＢＦ）和脊髓诱发电位（ＳＥＰ）的影响。脊髓损伤后１ｈ，ＳＣＢＦ开始显著下降，持续至伤后２４ｈ，ＳＥＰ峰潜时呈进行性延长趋势；伤后即刻静脉注射ＴＲＨ（２ｍｇ／ｋｇ／ｈ，共５次），可使伤后即刻和２４ｈ的ＳＣＢＦ显著升高，并使伤后ＳＣＢＦ下降时间延迟３ｈ，同时ＳＥＰ峰潜时有不同程度改善。结果表明，ＴＲＨ对受伤脊髓早期有一定的防治作用，并具有一定的后发效应；同时也可促进脊髓的神经传导功能。本文亦对ＴＲＨ治疗ＳＣＩ的病理生物学机制进行了讨论。     

异丙酚对大鼠急性脊髓损伤的影响

目的 研究异丙酚对大鼠急性脊髓损伤的影响.方法 雌性SD大鼠60只,体重230～270 g,随机分为3组(n=20):假手术组、脊髓损伤组和异丙酚组.采用改良的Allen打击法致伤大鼠脊髓,打击后30 min,异丙酚组经尾静脉持续输注1%异丙酚60 mg·lg-1·h-1 1 h,其余2组持续输注0.9%生理盐水6 ml·kg-1·h-1 1 h.应用斜板实验评分法和BBB联合评分法评价后肢运动功能;采用原位末端标记法(TUNEL法)检测脊髓组织细胞凋亡;HE染色后光镜下观察脊髓组织病理学.结果 异丙酚组行为学评分高于脊髓损伤组(P＜0.05);与假手术组相比,脊髓损伤组各时点单位面积凋亡细胞数均升高(P＜0.01);与脊髓损伤组相比,异丙酚组各时点单位面积凋亡细胞数均降低(P＜0.05);脊髓损伤组脊髓病理损伤较异丙酚组重,可见大量神经元坏死.结论 持续静脉输注1%异丙酚60 mg·kg-1·h-1 h可减轻大鼠急性脊髓损伤,其机制与抑制细胞凋亡有关.     

淫羊藿苷在大鼠脊髓损伤中的神经保护作用

目的:研究淫羊藿苷在大鼠脊髓损伤中的神经保护作用。方法:108只SPF级雄性3月龄SD大鼠按随机数字表法分为实验组、对照组及假手术组3组,每组36只。对照组和实验组采用改良Allen法制作脊髓损伤模型,假手术组仅切开椎板不损伤脊髓。术后即刻实验组给予淫羊藿苷(100 mg/kg)灌胃,对照组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,每日2次。术后1、2、3 d采用BBB评分法评定大鼠运动功能;术后72 h采用分光光度法检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的活性,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白介素(interleukin,IL)-1β的含量,免疫组化染色检测MPO、TNF-α、IL-1β的表达;采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;采用TUNEL法检测细胞凋亡并计算细胞凋亡指数(apoptosis index,AI);光镜观察脊髓损伤后组织病理学的改变并行组织病理学评分。结果:术后各时间点对照组和实验组大鼠BBB评分均显著低于假手术组(P0.05);术后2、3 d实验组大鼠BBB评分均显著高于对照组(P0.05)。术后72 h,对照组和实验组MPO活性和TNF-α、IL-1β的含量显著高于假手术组(P0.05);实验组显著低于对照组(P0.05)。对照组和实验组MPO、TNF-α、IL-1β的表达显著高于假手术组(P0.05);实验组显著低于对照组(P0.05)。对照组和实验组MDA含量显著高于假手术组,实验组显著低于对照组(P0.05);对照组和实验组SOD活性显著低于假手术组,实验组显著高于对照组(P0.05)。对照组和实验组脊髓组织中AI显著高于假手术组,实验组显著低于对照组(P0.05)。对照组和实验组脊髓组织病理学评分均显著高于假手术组,实验组均显著低于对照组(P0.05)。结论:淫羊藿苷能够抑制脊髓损伤后的炎症、脂质过氧化和细胞凋亡,减轻脊髓组织病理学损伤,改善脊髓损伤大鼠的运动功能,有效保护脊髓组织,具有明显的神经保护作用。     

Effects of nerve growth factor on N-methyI-D-asparate receptor 1 after spinal cord injury in rats

To explore the effects of the nerve growth factor ( NGF ) on N-methyI-D-asparate receptor 1(NMDAR 1 ) after spinal cord injury. Methods: Spinal cord injury of Wistar rats was performed with Allen's method by a 10 g x 2.5 cm impact on the posterior T8 spinal cord. NGF was given to the rats of the treatment group via subarachnoid space tube at once,2, 4, 8, 12 and 24 hours after spinal cord injury,respectively. The expression of NMDAR1 mRNA in spinal cord was detected by in situ hybridization. Results: Rare expression sequence of NMDAR1 mRNA was found in rat spinal cord of the normal group. A strong expression sequence of NMDAR1 mRNA was found in rat spinal cord of the normal saline group. The expression of NMDAR1 mRNA in the NGF group was significantly decreased as compared with that in the normal saline group ( P ＝ 0.01 ). Conclusions: NGF can relieve damage of injured spinal cord by prohibiting the expression of NMDAR1 mRNA.