H_2S对ATP诱导小胶质细胞活化的影响

目的:研究硫化氢(hydrogen sulfide,H_2S)对三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)诱导大鼠小胶质细胞炎性因子释放的调节,并探讨小胶质细胞条件培养基对神经元样细胞凋亡的影响。方法:选定的大鼠小胶质细胞随机分4组:(1)正常对照组:常规培养;(2)ATP组:细胞接种24 h后用ATP处理;(3)Na HS(sodium hydrosulfide,H_2S供体)+ATP组:ATP处理前用Na HS预孵育30 min,且Na HS始终存在于反应体系中;(4)KN-62(异喹啉衍生物,嘌呤受体拮抗剂)+ATP组:ATP处理前用KN-62预孵育30 min。用ELISA检测各组细胞上清液中TNF-α、IL-6的变化,用Western Blot检测各组丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)P38和JNK表达水平。用人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)研究条件培养基对神经元的影响,其方法与上述大鼠小胶质细胞处理相同。用倒置显微镜观察SH-SY5Y细胞形态变化及凋亡情况,用MTT法检测各组细胞活力。结果:当ATP浓度3 mmol/L时,大鼠小胶质细胞释放TNF-α和IL-6水平增加(P0.05),同时上调大鼠小胶质细胞p-P38、p-JNK蛋白表达水平(P0.05)。当ATP浓度5 mmol/L时,小胶质细胞活化后的条件培养基可以使SH-SY5Y细胞形态发生改变,其细胞活力降低(P0.05)。ATP引起的上述变化可以通过Na HS预处理而逆转(P0.05),其作用与P2X7R阻断剂KN-62相类似。结论:H_2S可下调被ATP诱导的p-P38和pJNK MAPK蛋白表达,减少TNF-α和IL-6等炎性因子的释放,从而对神经元产生保护作用。     

孕酮减轻ATP诱导的SH-SY5Y细胞损伤

目的:探讨孕酮对抗腺苷三磷酸(ATP)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的神经保护作用和机制。方法:取对数生长期的SH-SY5Y细胞按照孕酮或ATP浓度的不同进行分组,CCK-8法检测细胞存活率,YO-PRO-1染色检测细胞膜通透性,Fluo-3染色检测细胞内Ca~(2+)浓度的变化,Western blot法检测嘌呤能P2X_7受体表达的变化。结果:与对照组相比,不同浓度(1、3、5和7 mmol/L)ATP作用2 h,SH-SY5Y细胞存活率显著降低(P0.05),细胞摄入YO-PRO-1的荧光强度明显增加(P0.05),且呈剂量依赖性。浓度为3、10和30 nmol/L的孕酮预孵育30 min可减轻ATP损伤作用,细胞存活率较单纯ATP组明显升高(P0.05或P0.01)。孕酮(30nmol/L)或P2X_7受体拮抗剂KN-62(500 nmol/L)预孵育30 min均可显著抑制ATP诱导的胞内YO-PRO-1的荧光增强(P0.01),而孕酮和KN-62两者之间没有明显差异。正常组细胞内钙离子含量少,ATP组细胞内钙离子荧光强度较对照组明显增高(P0.05),孕酮(30 nmol/L)或KN-62(500 nmol/L)预孵育30 min可明显降低(P0.05)ATP诱导的胞内钙荧光增强,而孕酮和KN-62两者之间的作用无明显差异。ATP组SH-SY5Y细胞P2X_7受体表达较对照组明显增加(P0.05),而孕酮(30 nmol/L)预孵育30 min则可显著降低ATP诱导的P2X_7受体表达(P0.05)。结论:孕酮可抑制ATP诱导的P2X_7受体表达、膜孔形成和胞内Ca~(2+)升高,降低细胞死亡率,明显减轻高浓度ATP对SH-SY5Y细胞的损伤作用。     

人2型大麻素受体过表达诱导宫颈癌Caski细胞凋亡

目的构建人2型大麻素受体(h CB2R)基因真核表达载体,探讨h CB2R在细胞中的表达、定位以及h CB2R对宫颈癌Caski细胞的生长的影响及机制。方法构建GV230-h CB2R质粒,经双酶切、测序鉴定后,转染HEK293细胞和Caski细胞,Western blot法及免疫荧光细胞化学染色联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测CB2R表达及细胞定位;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法及实时荧光定量PCR检测h CB2R、Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果双酶切获得1128 bp的目的片段,测序结果与h CB2R基因注册序列(NM_001841.2)的同源性为99%;转染HEK293细胞后,可表达相对分子质量(Mr)40 000的h CB2R蛋白,HEK293细胞膜和细胞质中均有CB2R表达;过表达的CB2R,可上调Bax、Bad的表达,抑制Bcl-2的表达,促进宫颈癌Caski细胞凋亡。结论上调Caski细胞h CB2R表达可增强Bax、Bad表达,抑制Bcl-2表达,诱导细胞凋亡。     

硫化氢保护被ATP损伤的PC12细胞

目的:观察硫化氢的供体硫氢化钠(Na HS)对三磷酸腺苷(ATP)诱导的PC12细胞活力、胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)及膜通透性的变化,探讨硫化氢神经保护作用的嘌呤信号机制。方法:将对数生长期高分化的PC12细胞,随机分为4组,分别为(1)正常对照组:常规培养,不进行ATP处理;(2)ATP组:接种细胞24 h后ATP处理;(3)Na HS+ATP组:Na HS预先孵育30 min后再用ATP处理,并且Na HS始终存在于反应体系中;(4)KN-62(P2X7受体阻断剂)+ATP组:KN-62预先孵育30 min,其余同Na HS+ATP组。MTT检测各组细胞活力,Fura-2/AM荧光染料检测各组[Ca2+]i,检测荧光染料YO-PRO-1的相对荧光单位以反映膜的通透性。结果:(1)0.3mmol/L ATP对细胞活力无影响,但1、3、5、10 mmol/L ATP则呈浓度依赖式明显降低细胞活力,200μmol/L Na HS干预可明显逆转ATP引起的细胞活力下降(P0.05),而800μmol/L Na HS预处理则加剧ATP对PC12细胞的损伤(P0.05)。(2)ATP处理PC12细胞会引起[Ca2+]i迅速升高并且呈浓度依赖性,Na HS预处理能对抗ATP引起的[Ca2+]i升高(P0.05)。(3)随着ATP浓度的增加及作用时间的延长,PC12细胞内YO-PRO-1的荧光强度显著增加,Na HS预处理可明显减少细胞对YO-PRO-1的摄取(P0.05)。结论:硫化氢可保护ATP损伤的PC12细胞,可能与其抑制[Ca2+]i升高和YO-PRO-1荧光增强有关。     

三磷酸腺苷对N9小胶质细胞的损伤作用及其机制

目的:研究三磷酸腺苷(ATP)对N9小胶质细胞的损伤作用及其机制。方法:取对数生长期N9小胶质细胞,随机分为3组:(1)正常对照组:常规培养,不进行ATP处理;(2)ATP组:接种24 h后行ATP处理;(3)KN-62(P2X₇受体阻断剂)干预组:KN-62孵育30 min后行ATP处理,且KN-62存在于ATP作用整个过程。XTT法测各组N9小胶质细胞的活力;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;细胞免疫荧光检测P2X₇受体表达;Western blotting检测细胞P2X₇受体蛋白水平;ELISA检测细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)含量。结果:500 μmol/L ATP和1 mmol/L ATP对细胞活力损伤程度较小,作用24 h后,细胞活力仍可达88.5%±5.5%和88.2%±8.4%。当ATP浓度达到或高于2 mmol/L时,细胞活力迅速降低,细胞发生皱缩,且随ATP作用时间延长,细胞活力逐渐降低,细胞密度逐渐减少,细胞皱缩程度加重,而KN-62干预后细胞活力较ATP组明显增多,细胞密度及形态明显好于ATP组。细胞周期及凋亡检测结果显示,ATP可使细胞周期阻滞于S期,细胞凋亡比例明显较对照组增多(P<0.01),KN-62干预可显著减轻ATP引起的细胞周期阻滞,细胞凋亡比例显著减少(P<0.01)。免疫荧光显示,ATP及KN-62干预对N9小胶质细胞上P2X₇受体的表达分布没有影响。Western blotting显示,正常对照组、ATP组及KN-62干预组间P2X₇受体蛋白水平没有明显差异(P＞0.05)。ELISA结果显示,ATP及KN-62干预对IL-1β的释放没有作用。结论:高剂量ATP可诱发N9小胶质细胞损伤,其机制可能与P2X₇受体介导的细胞周期阻滞和细胞凋亡有关,而与小胶质细胞的炎症反应无关。     

小鼠精子发生相关蛋白3基因在小鼠生精细胞的特异表达及对HEK 293T细胞凋亡和自噬的影响

目的检测小鼠精子发生相关蛋白3(spata3)基因在小鼠生精细胞的表达情况,并借助过表达细胞模型进一步分析该基因对人胚肾HEK 293T细胞凋亡及自噬的影响,旨在探讨spata3在精子发生过程中的意义。方法分别采用RT-PCR和免疫印迹法检测spata3基因mRNA及蛋白产物在小鼠各组织中的表达;应用免疫组织化学和免疫荧光染色观察SPATA3蛋白在生精细胞中的定位;借助脂质体将真核表达载体Plv-EGFP-2(a)purospata3瞬时转染HEK 293T细胞,进一步在蛋白水平分析细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)、BAX和Bcl-2及自噬相关蛋白LC3A/B的变化。结果 Spata3基因及其编码产物在小鼠睾丸组织特异表达;粗线期精母细胞和圆形精子细胞的胞质与胞核均有显著SPATA3蛋白的阳性着色,长形精子细胞的胞质也有大量分布;过表达spata3的HEK 293T细胞内活化型Caspase-3和PARP降解产物的含量较对照组差异无显著性,BAX表达量0.815±0.020较裸细胞组0.469±0.012和空载体转染组0.588±0.018均有所增高,Bcl-2含量0.214±0.020低于裸细胞0.507±0.021和空载体转染组0.545±0.024,LC3A/B-Ⅱ的表达量0.741±0.037则显著高于裸细胞组0.136±0.011和空载体转染组0.169±0.012。结论 Spata3基因在小鼠生精细胞特异表达,过表达spata3对HEK 293T细胞凋亡无明显影响,但可以促进细胞自噬。     

microRNA-25在脑缺血/再灌注损伤诱导的细胞凋亡过程中的作用

目的 在体外培养的SH-SY5Y细胞和IMR-32细胞中,观察microRNA-25（miR-25）对缺血/再灌注（I/R）损伤诱导的细胞凋亡的作用及其可能机制。方法 在体外培养的人SH-SY5Y细胞和IMR-32细胞中,用氧葡萄糖剥夺/再恢复（OGDR）模拟脑缺血/再灌注损伤。合成miR-25过表达片段,并构建慢病毒载体质粒,用脂质体将载体质粒转导入细胞中。MTT法检测细胞活力、TUNEL法检测凋亡、RT-PCR、Real-time PCR和Western blotting分别检测目的基因mRNA和蛋白的表达情况。 结果 与正常培养组相比,OGDR组中细胞内miR-25表达下调,细胞活力明显下降,凋亡明显增多,同时Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调（n=3,P<0.05）;而与OGDR组相比,过表达miR-25组内细胞活力明显升高,凋亡明显减少,同时Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达下降Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高（n=3,P<0.05）。结论 I/R损伤后miR-25表达上调可能通过Bax/Bcl-2-Caspase-3途径进而抑制I/R损伤诱导的凋亡,为I/R损伤的临床治疗提供潜在的治疗靶点。     

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ通过介导凋亡加重H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的:探讨钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(Ca~(2+)/calmodulin-dependent protein kinase II,Ca MKII)在H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中的作用。方法:H9c2心肌细胞随机分为4组:正常对照(control)组、Ca MKII特异性抑制剂KN-93(1μmol/L)对照(KN-93)组、H/R组和KN-93+H/R组,其中KN-93组及KN-93+H/R组先用1μmol/L KN-93预处理2 h后,再进行其它处理。倒置显微镜观察各组H9c2心肌细胞的形态变化,CCK-8法检测各组H9c2心肌细胞的活力,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测各组培养基中LDH的活性,Western blot法检测Ca MKII及其底物受磷蛋白(phospholamban,PLN)的磷酸化水平以及凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的表达,TUNEL染色和流式细胞术观察细胞凋亡。结果:与control组相比,KN-93组各项指标均无显著性差异;H/R组细胞皱缩,大量死亡,细胞活力明显降低,培养基中LDH活性明显升高(P0.01),Ca MKII及PLN的磷酸化水平和cleaved caspase-3的蛋白水平显著增加(P0.01),TUNEL染色阳性细胞数和流式细胞凋亡率显著增加(P0.01);1μmol/L KN-93干预H/R可明显改善细胞形态,增加细胞活力,降低培养基中LDH活性(P0.01),减少Ca MKII和PLN的磷酸化水平以及cleaved caspase-3的蛋白水平(P0.05),降低TUNEL染色阳性细胞数和流式细胞凋亡率(P0.01)。结论:Ca MKII通过介导细胞凋亡参与H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤。     

miR-449a过表达抑制人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖并促进其凋亡

目的探讨miR-449a对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y的增殖和凋亡的影响。方法用Lipofectamine TM2000将miR-449a模似物或miR-449a对照转染至SH-SY5Y细胞,分为空白、miR-449a模似物和miR-449a对照SHSY5Y细胞组;实时荧光定量PCR(q-PCR)检测各组细胞中miR-449a表达;CCK8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,Western blot检测c-Myc蛋白和Bax/Bcl-2蛋白表达。结果 miR-449a模似物瞬时转染SH-SY5Y细胞后,miR-449a的表达水平明显高于正常对照组(P0.05);SH-SY5Y细胞增殖能力受到明显抑制(P0.05);凋亡率明显增加(P0.05);c-Myc蛋白表达显著降低(P0.05);细胞促凋亡蛋白Bax表达升高;抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(P0.05)。结论 miR-449a可通过c-Myc影响SH-SY5Y细胞的增殖和周期,通过调节Bax/Bcl-2影响其凋亡。     

缺血后处理和CGS-21680后处理对兔心肌缺血再灌注后细胞凋亡的影响

目的:观察缺血后处理和选择性腺苷A2a受体激动剂CGS-21680后处理对兔缺血再灌注损伤心肌的影响,并探讨其作用机制。方法:健康新西兰大耳白兔36只,随机分成三组:缺血再灌注组(I/R组)、缺血后处理组(IPO组)、CGS-21680后处理组,每组12只。建立兔心肌I/R模型,于再灌注末颈静脉取血测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB);采用伊文思蓝和NBT染色后计算各组兔心肌梗死范围;原位末端标记(TUNEL)法检测各组兔心肌细胞凋亡;实时荧光定量RT-PCR检测各组心肌组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA和Bcl-2mR-NA的表达。结果:(1)与I/R组比较,IPO组和CGS-21680后处理组CK-MB水平显著下降,心肌梗死范围分别减少34.5%、31.2%。(2)TUNEL法结果:IPO组和CGS-21680组的细胞凋亡指数(AI)分别为9.57±1.34%和11.31±0.97%,与IR组(18.32±1.75%)相比明显降低并有显著差异(P0.01)。(3)荧光定量RT-PCR结果:与IR组比较,IPO组和CGS-21680组的促凋亡基因Caspase-3mRNA的表达明显下调,抗凋亡基因Bcl-2mRNA的表达显著上调,P均0.05。结论:缺血后处理和CGS-21680后处理可减少心肌梗死范围,减少细胞凋亡,保护I/R损伤心肌,其机制可能与下调促凋亡基因Caspase-3和上调抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。     

Functional expression of three P2X(2) receptor splice variants from guinea pig cochlea

ATP has been suggested to act as a neurotransmitter or a neuromodulator in the cochlea. The responses to ATP in different cell types of the cochlea vary in terms of the rate of desensitization and magnitude, suggesting that there may be different subtypes of P2X receptors distributed in the cochlea. Recently three ionotropic P2X(2) receptor splice variants, P2X(2-1), P2X(2-2), and P2X(2-3,) were isolated and sequenced from a guinea pig cochlear cDNA library. To test the hypothesis that these different splice variants could be expressed as functional homomeric receptors, the three P2X(2) receptor variants were individually and transiently expressed in human embryonic kidney cells (HEK293). The biophysical and pharmacological properties of these receptors were characterized using the whole cell patch-clamp technique. Extracellular application of ATP induced an inward current in HEK293 cells containing each of the three splice variants in a dose-dependent manner indicating the expression of homomeric receptors. Current-voltage (I-V) relationships for the ATP-gated current show that the three subtypes of the P2X(2) receptor had a similar reversal potential and an inward rectification index (I(50 mV)/I(-50 mV)). However, the ATP-induced currents in cells expressing P2X(2-1) and P2X(2-2) variants were large and desensitized rapidly whereas the current in those cells expressing the P2X(2-3) variant was much smaller and desensitized slower. The order of potency to ATP agonists was 2-MeSATP > ATP > alpha,beta -MeATP for all three expressed splice variants. The ATP receptor antagonists suramin and PPADS reduced the effects of ATP on all three variants. Results demonstrate that three P2X(2) splice variants from guinea pig cochlea, P2X(2-1), P2X(2-2), and P2X(2-3), can individually form nonselective cation receptor channels when these subunits are expressed in HEK293 cells. The distinct properties of these P2X(2) receptor splice variants may contribute to the differences in the response to ATP observed in native cochlear cells.     

HIV／TB重叠感染者HAART治疗前后Th17／Treg免疫调节的初步研究

目的初步探讨HIV／TB重叠感染者在高抗逆转录病毒治疗（HAART）治疗前后Th17／Treg的免疫调节作用。方法HIV／TB重叠感染者（HIV／TB组）10例和单纯HIV感染者（HIV组）10例分别接受HAART治疗,应用流式细胞术分析患者HAART治疗前和治疗后1个月的外周血Th17和CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）细胞表型。结果HIV／TB组IL-17＋CD4＋T细胞的百分率在治疗前后分别为1．90％±0．9％和4．65％±1．48％,HIV／TB组在治疗后较治疗前IL—17＋T细胞升高,差异有统计学意义（P〈0．01）;HAART治疗前后IL-17的百分率差值在HIV／TB组与HIV组中分别为2．65％±1．62％,0．67％±0．46％,HIV／TB组治疗后IL-17＋T的上升速度显著高于单纯HIV感染组（P〈0．01）。HIV／TB组Treg的百分率在治疗前后分别为16．48％±4．91％,8．29％±3．13％,治疗前后差异有统计学意义（P〈0．01）;治疗前后Treg的百分率差值在HIV／TB组与HIV组中分别为8．91％±4．82％,2．63％±2．34％,HIV／TB组治疗后Treg下降速度高于HIV组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论TB和HAART治疗均影响Th17／Treg的免疫应答,Th17表达上调,促炎作用增强,Treg表达下调,抑炎作用减弱,而且HIV／TB重叠感染者在HAART治疗过程中更容易出现Th17／Treg平衡紊乱,可能与HAART治疗后出现结核性免疫重建综合征有相关性。     

胞外高浓度ATP诱导SH-SY5Y细胞的自噬和凋亡

 目的：观察胞外高浓度ATP损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用,探讨损伤中自噬和凋亡发生的规律和特点。方法：培养的SH-SY5Y细胞按照加入ATP的浓度和作用时间进行分组。CCK-8法检测细胞生存率,单丹磺酰戊二胺染色检测自噬空泡的变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率变化,蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ）的表达。结果：（1）与对照组相比,不同浓度（3、6、9、12、15 mmol/L）的ATP作用3 h均使SH-SY5Y细胞存活率明显降低,且呈剂量依赖性;不同作用时间（1、2、3、6 h）ATP（6 mmol/L）也可使SH-SY5Y细胞存活率明显降低,3 h达高峰,呈时间依赖性。（2）ATP作用1 h时SH-SY5Y细胞自噬空泡显著增多（P<005）,随时间延长,6 h时降到对照水平;ATP作用1 h时,LC3-Ⅱ表达显著增强（P<005）,形成高峰,与自噬空泡增多的时点重合,2 h、3 h时LC3-Ⅱ表达水平逐渐减弱,6 h时降到对照水平。（3）与对照组相比,ATP作用3 h后细胞凋亡率达高峰（P<005）,6 h时仍然保持在3 h的水平;cleaved caspase-3表达量同步增强（P<005）,6 h时达高峰。结论：胞外高浓度ATP能够诱导SH-SY5Y细胞自噬和凋亡;自噬增强在前,凋亡高潮在后;随着ATP作用时间的延长,凋亡占主导地位。     

硫化氢对培养的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨硫化氢(H₂S)对内皮素-1(ET-1)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导途径的作用。方法:体外培养雄性SD大鼠主动脉VSMC, 将细胞分成对照组、血清组、内皮素组、NaHS组、血清+NaHS组和内皮素+NaHS组进行研究, 以不同浓度梯度NaHS处理VSMC, 观察对VSMC[³H]-TdR掺入和MAPK活性的影响。结果:加入5×10^-5-5×10^-4mol/LNaHS可明显浓度依赖性地抑制由内皮素诱导的VSMC增殖, 其[³H]-TdR掺入量减低, 抑制率分别为16.8%-37.4%(P＜0.01), 其MAPK活性明显减低, 抑制率为7.4%-33.6%(P＜0.05或P＜0.01)。结论:H₂S对内皮素诱导的VSMC增殖有抑制作用, 同时使MAPK活性下调。推测H₂S对VSMC增殖的抑制效应可能由MAPK信号途径所介导。     

天麻对帕金森病大鼠黑质凋亡细胞表达及酪氨酸羟化酶阳性神经元的影响

目的研究和探讨帕金森病（PD）的发病机理及天麻防治PD的作用机制。方法采用6-羟基多巴胺（6-OHDA）大鼠模型,通过免疫组化技术观察天麻对PD大鼠黑质酪氮酸羟化酶阳性（TH^＋）神经元及Caspase-3阳性（Caspase-3^＋）神经元表达水平的影响。结果PD大鼠脑组织黑质致密部（SNpc）及腹侧被盖区（VTA）TH^＋神经元表达水平组间比较差异有统计学意义（F值分别为13．29、5．04,P〈0．01）。与正常组大鼠脑组织SNpc和VTA区TH^＋神经元表达水平[（32．13±4．84）,（30．23±3．21）]比较,模型组大鼠TH^＋神经元表达水平[（18．89±3．73）和（24．20±6．35）]明显下降（P〈0．01）;经天麻和美多巴治疗后TH^＋神经元丢失减少,天麻小剂量组TH^＋神经元表达水平分别为（26．24±3．06）和（26．31±6．1）,中剂量组分别为（22．44±3．81）和（26．91±6．28）;大剂量绀分别为（20．95±4．71）和（27．3±7．1）;美多巴组分别为（27．89±4．56）和（25．974±5．14）;其中,天麻小剂量组和美多巴组SNpc区TH^＋神经元表达水平和模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。PD大鼠脑组织SNpc及VTA区Caspase-3阳性细胞表达水平组间比较差异有统计学意义（F值分别为6．09、5．53,P〈0．01）。与正常组Caspase-3阳性细胞表达水平[（9．83±3．03）,（7．04±1．76）]比较,模型组火鼠Caspase-3阳性细胞表达水平[（14．53±2．33）和（12．84±2．58）]明显升高（P〈0．01）;经天麻和美多巴治疗后Caspase-3阳性细胞表达水平下降,天麻小剂量组分别为（10．68±1．83）和（7．72±1．92）,中剂量组分别为（11．29±2．8）和（10．38±3．79）;大剂量组分别为（11．89±2．97）和（11．37±1．86）;美多巴组分别为（9．99±3．3）和（10．69±3．11）;其中,美多巴组SNpc区和天麻小剂量组VTA区Caspase-3阳性细胞表达水平和模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。天麻和美多巴治疗各组TH^＋神经元表达与Caspase-3^＋神经元表达呈相反趋势。结论细胞凋亡可能是PD大鼠中腑多巴胺神经元丢失的主要方式。天麻可通过调节Caspase-3减少细胞凋亡,其中,小剂量天麻对治疗PD具有较好的作用。本研究结果提示天麻可不同程度地保护多巴胺神经元。     

干性基因在儿童急性B淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

目的 本研究旨在探讨初诊急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）患儿骨髓中干性基因的表达及其与临床预后指标的关系.方法 应用Real-time PCR检测32例初诊B-ALL患儿（B-ALL组）和5例骨髓象正常儿童（对照组）的骨髓单个核细胞上干性基因（Oct4、JAG1、Nanog、Sox2、Fgf4等）的表达,比较B-ALL组和对照组的差异,在此基础上结合临床资料（如性别、年龄、外周血白细胞、危险度分层等）进行相关性分析.结果 B-ALL组儿童的相关于性基因Nanog、JAG1、CD133-2、CD44和Runx1的表达水平较对照组明显增高,分别为对照组的2.74±1.00、4.31 ±2.41、10.23±3.21、4.66±1.73和7.44±3.01倍（P＜0.01）,Oct4、Sox2、D LL1、Fgf4和COX-2表达水平较对照组明显降低,分别为对照组的15.00％±0.06、13.00％±0.08、18.12％±0.11、4.73％±0.03和9.59％±0.00（P ＜0.01）;初诊B-ALL组干性基因表达与其性别、年龄、外周血白细胞计数、骨髓幼稚细胞比例、FAB分型、细胞遗传学异常、融合基因表达等均无相关性,其中JAG1基因表达与B-ALL危险度分层有明显相关性（r=0.755,P＜0.01）,其余基因表达与危险度分层无明显相关.结论 与正常儿童的骨髓相比较,初诊B-ALL患儿骨髓中干性基因存在异常表达（上调或下调）,其中JAG1基因表达与B-ALL的临床危险度分层显著相关,提示JAG1基因可能是B-ALL的危险因子,可能对判断患儿预后及指导临床治疗有潜在价值.