多色流式细胞术检测HIV/AIDS病人中的Th细胞亚群

目的建立多色流式方法,检测艾滋病病毒(HIV)感染者/艾滋病(AIDS)病人(简称HIV/AIDS病人)中的辅助性T细胞亚群。方法用3种细胞表面抗体CD3、CD4、CD8,6种细胞内因子抗体γ干扰素(IFN-γ)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素17(IL-17)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-2、L-10,建立多色流式染色方案。根据多色流式荧光搭配原则,制定最佳配色方案。用1例HIV/AIDS病人外周血标本分别进行最适检测电压调节、荧光补偿设定、减一阴性对照(FMO对照)。确定条件后,对3例HIV/AIDS病人外周血标本进行检测分析。结果根据阴性细胞确定检测电压,用补偿微球(CompBeads)单色染色与细胞单色染色确定适宜补偿,减一阴性对照确定阴性边界,建立了九色流式方法检测HIV/AIDS病人外周血中辅助性T淋巴细胞亚群的方案,在单细胞水平同时检测多个因子。结论建立的多色流式方案可检测HIV/AIDS病人外周血中的辅助性T细胞亚群,能在单细胞水平同时检测多个因子,所需样品少,操作简便、相对快速并能准确定量。     

多色流式细胞术检测CHB患者外周血多重细胞因子分泌的Th细胞亚群

目的建立多色流式胞内细胞因子检测方法,明确慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)免疫清除期患者外周血Th淋巴细胞亚群细胞因子的分泌特点,探讨CHB患者多重细胞因子的表达模式。方法选取2017年3月至2017年4月就诊于首都医科大学附属北京地坛医院的CHB免疫清除期患者10例及健康对照者10例为研究对象。根据多色流式荧光搭配原则,确立外周血T淋巴细胞CD3、CD4、CD8及细胞因子GM-CSF、TNF-α、IFN-γ的六色流式细胞配色方案。利用健康对照者外周血单个核细胞(peripheral blood mo-nonuclear cell,PBMC)调节最适检测电压及荧光补偿,明确PMAIonomycin的体外刺激方案。分离10例CHB患者外周血PBMC细胞,PMA-Ionomycin体外刺激5小时后,行多重流式细胞因子染色,利用多色流式细胞仪LSR Fortessa获取细胞,Flowjo10.0流式细胞软件分析健康对照者及CHB患者外周血Th细胞亚群胞内细胞因子共表达水平。采用Graph Pad Prism 7.0对所得数据进行统计分析。结果建立了多重细胞因子的胞内染色方案,明确了GM-CSF、TNF-α、IFN-γ在Th细胞上的共表达分析策略,确认存在分泌双重细胞因子GM-CSF~+TNF-α~+、GM-CSF~+IFN-γ~+的Th细胞亚群。通过检测CHB患者外周血样本,发现CHB患者分泌GM-CSF、GM-CSF~+TNF-α~+、GMCSF~+IFN-γ~+的Th细胞亚群百分率均显著高于健康对照组,差异具有统计学意义(t=2.576、4.208、2.671,P均0.05)。结论建立的多色流式细胞因子胞内染色方案可用于明确CHB患者外周血分泌双重细胞因子的Th细胞亚群的分布模式;双重细胞因子分泌的Th细胞亚群的检测可能为临床上CHB患者免疫状态的评估提供可靠依据。     

北京市50例HIV/AIDS病人CCR5 CXCR4 HLA-DR和CD38表达与疾病进展关系

目的了解艾滋病病毒(HIV)感染者/艾滋病(AIDS)病人(HIV/AIDS病人)淋巴细胞表面CCR5、CX-CR4、HLA-DR和CD38表达,分析其与疾病进展的关系,探讨HIV感染的免疫学基础。方法收集50例HIV/AIDS病人及14例健康对照的抗凝全血,用流式细胞仪检测CCR5、CXCR4、HLA-DR和CD38表达,并分析其与疾病进展情况的相关性。结果艾滋病组、HIV感染者和正常对照CCR5/CD4,CXCR4/CD4,CD38/CD4,CCR5/CD8,CD38/CD8和HLA-Dr/CD8表达有显著性差异,CXCR4/CD4和CD38/CD4与疾病进程呈明显正相关,CCR5/CD8和CD38/CD8与疾病进程呈明显负相关。结论 HIV/AIDS病人淋巴细胞表面CCR5、CXCR4和CD38表达与疾病进展密切相关。     

CXCR3 CCR5及其配体在类风湿关节炎患者滑液和外周血中的表达

目的 在单细胞水平上，研究类风湿关节炎（RA）患者滑液及外周血中单核/巨噬细胞，T淋巴细胞上趋化因子受体CCR5及ＣＸＣＲ３的表达。并测定CCR5的配体MIP-1β。激活正常T细胞表达和分泌因子（RANTES）及T细胞亚群，探讨其在RA发病中的作用机制。方法 分离RA患者滑液单个核细胞（SFMC），外周血单个核细胞（PBMC）及正常人PBMC（对照），以三色荧光素标记物进行流式细胞术分析CD14^ ,CD3^ 细胞膜表面趋化因子受体CCR5，CCR3及细胞内趋化因子MIP-1β，RANTES和细胞因子白细胞介素（IL）-4，干扰素（IFN）-γ的表达率。结果 与PBMC相比，RA患者SFMC中的单核/巨噬细胞，T细胞上趋化因子受体CCR4及CEXR3表达显著增高；且单核/巨噬细胞分泌趋化因子MIP-1β，RANTES的百分比较高；SFMC中Th1细胞亚群（即IFN-γ^ T细胞）的表达率与滑液及外周血中T淋巴细胞上趋化因子受体CCR4及CXCR3的表达率显著相关。结论 趋化因子受体CCR5^ ,CXCR3^ 的单核/巨噬细胞，T细胞积聚在RA患者的病变关节内，且单核/巨噬细胞分泌较多趋化因子；CCR5，CXCR3可能参与调节细胞移动。与Th1细胞亚群及其“伙伴”细胞在RA关节内积聚有关；可能与RA的发病相关。     

应用趋化因子受体标记对系统性红斑狼疮患者Th细胸亚群改变及其意义的初步研究

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)活动期患者Th红胞亚群平衡的改变及其意义.方法以趋化因子受体CCR5和CCR3为Th红胞亚群表面标记,利用三色流式细胞分析法对SLE患者外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+T细胞亚群平衡变化进行分析.结果活动期SLE患者外周血CC4+CCR5+CCR3-细胞百分比与正常人比较差异无显著性(P>0.05).CD4+CCR5-CCR3+和(或)CD4+CCR5+CCR3-细胞百分比异常升高者出现组织脏器损伤的概率较高.肾上腺糖皮质激素治疗可使异常升高的CD4+CCR5-CCR3+和(或)CD4+CCR5+CCR3-细胞百分比有所降低.结论多数活动期SLE患者体内存在Th2细胞优势,Th2和(或)Th1细胞的改变与组织脏器损伤有一定的相关性.     

类风湿关节炎患者外周血CD4 T细胞关节局部趋化机制

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血CD4 T细胞比例变化情况及其对关节局部趋化的机制。方法流式细胞术分析RA患者外周血单个核细胞(PBMC)中CD4 T细胞的比例,并分析CD4 T细胞比例与RA疾病活动性评分系统(DAS28)评分间的关系。激光共聚焦方法检测RA患者滑膜局部浸润CD4 T细胞情况。流式细胞术分析RA患者CD4 T细胞表面趋化因子受体表达情况。结果与对照组相比,RA患者外周血PBMC中CD4 T细胞的比例显著降低(P0.01),且RA患者外周血CD4 T细胞比例与DAS28评分呈明显负相关(r=-0.753 0,P=0.001 2)。关节局部CD4 T细胞浸润的激光共聚焦结果显示,与对照组相比,RA患者滑膜中具有更多的CD4 T细胞浸润。趋化因子受体分析结果显示,RA患者外周血CD4 T细胞表面CCR5、CXCR1和CXCR3的表达显著升高(P0.01)。结论 RA患者外周血CD4 T细胞表面表达升高的CCR5、CXCR1和CXCR3可能参与外周血CD4 T细胞向滑膜局部的趋化。     

HIV/AIDS外周血T淋巴细胞活化与病情进展的临床研究

目的 探讨HIV/AIDS外周血T淋巴细胞活化水平与病情进展的关系.方法 检测105例HIV/AIDS患者外周血可溶性CD27(sCD27)水平,CD28+CD8+、CD28+CD4+、HLA-DRCD8+和CD38+CD8+比例以及CD4+T淋巴细胞计数,并在正常体检人群中随机抽取15名健康人作为对照组.分别用流式细胞技术和ELISA方法检测和分析T细胞活化指标(CD2+CD8+、CD28+CD4+、CD38+CD8+、HLA-DRCD8+、sCD27)与疾病分期、CD4+T淋巴细胞计数的相关性.结果 HIV/AIDS的sCD27水平和HLA-DRCD8+和CD38+CD8+比例较正常人显著升高(P＜0.05),sCD27在AIDS C3期患者中明显升高,与B3期患者比较有显著性差异,CD28+CD4+、CD28+CD8+、HLA-DRCD8+和CD38+CD8+比例在CD4+T淋巴细胞计数超过200/ul的患者中显著升高(P＜0.05).结论 T淋巴细胞活化水平与AIDS病情进展密切相关,HIV/AIDS的T淋巴细胞活化水平明显升高,CD4+T淋巴细胞计数超过200/μl患者的T淋巴细胞活化水平高于CD4+T淋巴细胞计数低于200/μl的患者.     

HIV/AIDS患者血清IL-18浓度变化与辅助受体CCR5/CXCR4表达的关系研究

目的 研究人类免疫缺陷病毒／获得性免疫缺陷综合征（HIV／AIDS）患者血清白细胞介质（IL）-18浓度的变化，及其与病毒载量、CD4^＋T细胞表面辅助受体CCR5／CXCR4表达的相关性。方法 应用酶联免疫吸附试验（ELISA）对42例HIV／AIDS患者及12例正常对照者的血清IL-18浓度进行定量检测，分析其变化，并对其变化与病毒载量的相关性进行分析。应用流式细胞仪检测全部HIV／AIDS患者CD4^＋ T细胞表面辅助受体CCR5／CXCR4的表达情况，并分析其与病毒载量及血清IL-18浓度变化之间的相关性。结果 42例HIV／AIDS患者血清平均IL-18浓度显著高于正常对照组（P〈0．01），且按美国疾病控制与预防中心（CDC）1993年标准，CDCC期显著高于A期（P〈0．01）。所有患者血清IL-18浓度变化与HIV病毒载量之间呈正相关（P〈0．05），与辅助受体CX-CR4的表达也呈正相关（P〈0．01）。HIV病毒载量与辅助受体CXCR4的表达具有正相关性（P〈0．05）。结论 HIV／AIDS患者体内持续增长的IL-18加剧了其免疫功能的紊乱和低下，IL-18可能与疾病本身的致病机制有关。     

糖尿病足患者外周血T细胞的分化

目的探讨糖尿病足(DFU)患者外周血中T细胞分化情况及其功能。方法采用流式细胞术分析DFU患者外周血中CD4~+、CD8~+T细胞亚群分布情况,包括初始T细胞、活化T细胞及效应T细胞;分析DFU患者外周血CD4~+、CD8~+T细胞迁移分子CC趋化因子受体(CCR)5、CCR4、CXC趋化因子受体(CXCR)3的表达情况;分析DFU患者外周血CD4~+、CD8~+T细胞分泌炎症因子干扰素(IFN)γ,白细胞介素(IL)2,肿瘤坏死因子(TNF)-α情况。结果与对照组比较,DFU患者外周血初始CD4~+、CD8~+T细胞比例显著降低,活化与效应T细胞比例显著升高(P<0.05);迁移分子受体CCR4表达无显著差异(P>0.05),CCR5与CXCR3表达在DFU患者中显著降低(P<0.05);DFU患者中,炎症因子IFNγ在活化T细胞中高表达,在效应T细胞中几乎不表达,而IFNγ与TNF-α在效应T细胞中高表达,在初始T细胞中几乎不表达。结论DFU患者外周血T细胞亚群发生变化,其分泌的炎症因子影响了T细胞的免疫功能发挥。     

抗病毒治疗对HIV/AIDS患者自然杀伤细胞和γδT细胞的重建作用研究

目的 研究高效联合抗逆转录病毒治疗(HAART)对HIV/AIDS患者NK细胞和γδT细胞的重建作用,比较HAART对获得性免疫和固有免疫重建规律的异同.方法 对59例接受规律HAART的HIV/AIDS患者于治疗前、治疗后1、3、6、9、12个月末进行随访,采用分支DNA(bDNA)法检测血浆病毒载量,经流式细胞仪检测患者外周血淋巴细胞亚群.以56例健康献血员作为正常对照.结果 基线时HIV/AIDS患者CD4+T细胞中位数为45(164,13)个/μl,NK细胞和γδT细胞中位数分别为96(135,56)个/μl和30(45,19)个/μl,与正常对照组相比均显著减低(P<0.001).HAART开始后1个月,血浆病毒载量降低了2.33 lg拷贝/ml(P<0.001),CD4+T细胞数增长了111个/μl(P<0.001),主要以记忆CD4+T细胞的快速增长为主,而NK细胞和γδT细胞与基线相比无显著变化.在HAART后3个月NK细胞和.γδT细胞数量出现增长,分别较基线增加26个/μl(P=0.007)和15个/μl(P<0.001).治疗12个月,CD4+T细胞、NK细胞及γδT细胞计数分别达到271(365,134)个/μl、166(281,108)个/μl和46(66,34)个/μl,但仍低于正常对照.结论 HAART可以重建HIV/AIDS患者固有免疫,但NK细胞和γδT细胞数量的增加晚于CD4+ T细胞,HAART对固有免疫的重建作用机制有待进一步研究.     

Pathogenesis of carcinoma of the papilla of Vater

Most adenomas and carcinomas of the small intestine and extrahepatic bile ducts arise in the region of the papilla of Vater. In familial adenomatous polyposis (FAP) it is the main location for carcinomas after proctocolectomy. In many cases symptoms due to stenosis lead to diagnosis at an early tumor stage. In about 80%, curative intended resection is possible. Operability is the most relevant prognostic factor. Most ampullary carcinomas resp. carcinomas of the papilla of Vater develop from adenomatous or flat dysplastic precursor lesions. They can be sited in the ampulloduodenal part of the papilla of Vater, which is lined by intestinal mucosa. They also can develop in deeper parts of the ampulla, which are lined by pancreaticobiliary duct mucosa. Intestinal-type adenocarcinoma and pancreaticobiliary-type adenocarcinoma represent the main histological types of ampullary carcinoma. Furthermore, there exist unusual types and undifferentiated carcinomas. Many carcinomas of intestinal type express the immunohistochemical marker profile of intestinal mucosa (keratin 7?, keratin 20+, MUC2+). Carcinomas of pancreaticobiliary type usually show the immunohistochemical profile of pancreaticobiliary duct mucosa (keratin 7+, keratin 20?, MUC2?). Even poorly differentiated carcinomas, as well as unusual histological types, may conserve the marker profile of the mucosa they developed from. These findings underline the concept of histogenetically different carcinomas of the papilla of Vater which develop either from intestinal- or from pancreaticobiliary-type mucosa of the papilla of Vater. Molecular alterations in ampullary carcinomas are similar to those of colorectal as well as pancreatic carcinomas, although they appear at different frequencies. In future studies, molecular alterations in ampullary carcinomas should be correlated closely with the different histologic tumor types. Consequently, the histologic classification should reflect the histogenesis of ampullary tumors from the two different types of papillary mucosa.     

Demonstration of the mechanism of action of biguanides

Summary Palmitic acid oxidation in rat diaphragm homogenate is depressed by biguanide concentrations that are still incapable of inhibiting oxidative phosphorylation. Glucose oxidation is not directly effected by the same biguanide concentrations: however, the inhibitory effect of palmitic acid on glucose oxidation is partly removed by biguanides. Inhibition of fatty acid oxidation, which accounts for most of the metabolic effects caused by these drugs, can be regarded as the fundamental mechanism of action of biguanides. There is some evidence suggesting that these drugs might interact with carnitine, thus preventing long-chain fatty acids from being transported across the mitochondrial membrane to the site of oxidation. Traduzione a cura degli AA.     

胰岛素瘤的解剖分布特点分析

目的胰岛素瘤是最常见的胰腺神经内分泌肿瘤，因其临床表现多样，导致诊断困难。影像学诊断尤其是超声内镜(EUS)在胰岛素瘤的诊断中起着重要作用，拥有较高的敏感性和特异性。本研究拟通过明确胰岛素瘤的解剖分布特点，以期有助于提高影像学的诊断准确率和降低漏诊率，尤其是在教育和培训实践中对于EUS的学习者更具有指导价值。 方法回顾性分析解放军总医院第一医学中心病案资料数据库1993年1月至2019年11月经外科手术、病理确诊为胰岛素瘤的患者的临床资料，检索方法采取搜索术后病理诊断为"胰岛素瘤"的病例，通过查阅病例的方法，提取出胰岛素瘤的大小和解剖分布等数据，进一步分析其特点。 结果共检索到确诊为胰岛素瘤的患者116例，其中，男45例、女71例，年龄13～76岁，平均年龄(44.4±14.85)岁。胰岛素瘤单发110例(94.8%)、多发6例(5.2%)。位置分布：头颈部46例(39.7%)，单发45例、多发1例；体尾部68例(58.6%)，单发65例、多发3例；全胰腺多发2例(1.7%)。病变大小特点：最大径0.4～3.4 cm，平均大小(1.53±0.58)cm。≤1 cm 29例、>1 cm而≤1.5 cm41例、>1.5 cm而≤2.0 cm28例，≤3 cm 15例，>3 cm 3例。年龄与肿瘤的大小相关，≤44岁患者肿瘤平均大小为(1.36±0.51)cm、>44岁患者肿瘤平均大小为(1.70±0.60)cm，P<0.05。头颈部的肿瘤大于体尾部的肿瘤，头颈部肿瘤平均大小(1.66±0.63)cm，体尾部(1.42±0.52)cm，P<0.05。 结论胰岛素瘤在胰腺体尾部较头颈部更好发；绝大多数单发，但可以全胰腺多发；多数小于1.5 cm，肿瘤的大小与患者年龄和肿瘤的解剖分布相关。     

氯硝柳胺悬浮剂的毒性评价

目的评价氯硝柳胺悬浮剂的毒性，为现场大规模应用灭螺提供依据。方法按照中华人民共和国国家标准GB 15670-1995《农药登记毒理学试验方法》和鱼类毒性试验方法进行。结果经口、经皮肤的LDso雌、雄性大鼠均>5 000 mg/kg，经呼吸道的LCso雌、雄性大鼠均>5 000mg/m3，该药经口、经皮肤、经呼吸道毒性均属微毒类药物；兔眼用药后，观察期内无不良反应，对眼无刺激性；皮肤用药后对皮肤无刺激性。与氯硝柳胺原药、氯硝柳胺乙醇胺盐原药和氯硝柳胺乙醇胺盐可湿性粉剂相比，氯硝柳胺悬浮剂对鱼急性毒性最低。结论氯硝柳胺悬浮剂属微毒类药物，对鱼的毒性低于其乙醇胺盐可湿性粉剂，适合于现场应用。     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.     

血吸虫童虫生长发育及其机制的研究进展

血吸虫童虫是宿主免疫系统攻击的重要靶标,包括皮肤型、肺型和肝门型童虫。宿主分子对童虫生长发育具有重要作用。童虫生长发育机制包括免疫调节、信号转导、性别发育及凋亡等。肌动蛋白、组织蛋白酶、烯醇化酶和葡萄糖基转移酶等分子为血吸虫童虫生长发育的重要分子。本文对血吸虫童虫生长发育及其机制的研究进展做一综述。     

124例耐多药结核分枝杆菌基因突变特征分析

目的对临床分离的耐多药结核分枝杆菌相关基因的突变特征进行分析。方法对124例耐多药结核分枝杆菌以及50株敏感株的耐药相关基因(包括异烟肼inh A、kat G、oxyR-ahp C间隔区以及利福平rpo B)进行序列测定,分析其基因突变情况。结果异烟肼耐药inh A基因突变率为14.5%;kat G基因突变率为70.2%(87/124),主要位于315位;oxyR-ahp C间隔区突变率为15.3%;inh A、kat G两种基因同时突变率75.0%,三种基因同时突变率为89.5%。利福平rpo B基因突变的检出率高达95.2%,突变主要发生在531、526、516位点。结论我省耐多药菌异烟肼耐药相关基因最常见突变为kat G 315、inh A C-T(-15)、axyR-ahp C间隔区(-10)C-T,利福平为rpo B531、526、516。结合MDR-TB耐药相关基因的特征分析,可以建立一种快速、准确、特异的适合于我省的检测结核菌耐多药性的新方法。     

Assessment of quality of life of parents of children with juvenile chronic arthritis

The aim of the study was to assess the quality of life (QOL) and the psychological status of parents of children with juvenile chronic arthritis (JCA). The QOL, anxiety and depression of the parents of 28 children with JCA were evaluated and compared to those of the parents of 28 healthy children. Mothers of JCA children and mothers of healthy children reported similar QOL. The reported anxiety and depression levels were similar for mothers and fathers in both groups. The parents of children with pauciarticular-type JCA reported lower QOL and higher levels of anxiety and depression than the parents of children with other types, namely polyarticular and systemic JCA. These findings may be explained by the fact that the pauciarticular patients had shorter disease duration and were less frequently seen in the outpatient clinic. The QOL of mothers of children with JCA was found to be slightly impaired in the group of children with pauciarticular JCA. Future larger studies are needed to confirm these results, as the number of subjects in the three groups was rather low. Received: 26 September 2001 / Accepted: 8 February 2002     

CagA-Hp抗体IgG与胃炎的组织学分析

研究幽门螺杆菌(Hp)感染与胃炎的关系。方法对204例慢性胃炎患者胃粘膜进行观察分析,并测定其中137例Hp阳性患者血清CagA-Hp抗体IgG水平,与组织学对照。结果慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生患者血清CagA抗体IgG明显高于对照组(P＜0.01);其他类型胃炎患者血清CagA抗体IgG水平无明显增高(P＞0.05)。结论CagA-Hp可能是导致慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生的因素之一,对这类患者应密切随访观察。     

慢阻肺急性加重期患者预后的影响因素分析

目的探讨慢性阻塞性肺病急性加重期(AECOPD)患者预后的相关危险因素。方法回顾性调查、收集58例AECOPD患者可能影响其预后的相关因素,并对其分别进行单因素分析。并进行Logistic多元逐步回归进行多因素分析,筛选影响AECOPD患者预后的独立危险因素。结果单因素分析后将结果 P0.1的因素纳入多因素Logistic回归,分析发现是否合并呼吸衰竭、气促程度、白细胞计数、APACHEⅡ、应用抗氧化剂、慢阻肺治疗依从性为影响AECOPD患者预后不佳的独立因素(P0.05)。结论根据AECOPD患者预后的独立危险因素,及早判断,选择合适的后续治疗方案,对提高其生存率及生存质量具有重要意义。