膜结合型巨噬细胞集落刺激因子对巨噬细胞功能性极化影响的探索

 目的　探讨高表达膜结合型巨噬细胞集落刺激因子（mM-CSF）的血液肿瘤细胞对巨噬细胞的异常活化作用。方法　采用稳定表达mM-CSF的淋巴瘤细胞系Namalwa-M和巨噬细胞系RAW264.7体外共培养体系,以转入空载体的Namalwa-V细胞系共培养体系为对照组。流式细胞术检测RAW264.7的CD206（选择性活化巨噬细胞高表达的表面分子）和细胞内白细胞介素（IL）-6、IL-10、IL-12及TNF-α的表达水平;墨汁吞噬实验检测共培养RAW264.7细胞的功能变化。 结果　与Namalwa-M共培养的RAW264.7 的CD206表达水平明显升高平均均荧光强度为55.12±3.77,提示其巨噬细胞活性增强;IL-10、TNF-α表达上调（201±6）%、（136±6）%;IL-12、IL-6表达下调（990±528）%、（60±26）%;吞噬能力明显提高。结论　高表达mM-CSF的血液肿瘤细胞可异常活化巨噬细胞成为高表达IL-10、TNF-α,低表达IL-12、IL-6的异常活化巨噬细胞。     

胃癌细胞外泌体lncRNA LOXL1-AS1诱导M2型巨噬细胞极化功能及机制研究

目的:探究胃癌细胞外泌体lncRNA LOXL1-AS1对巨噬细胞分化的影响及机制。方法:差速离心法提取胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901、MKN-45和人胃黏膜细胞GES-1所分泌的外泌体（分别记为MGC-803 exo、SGC-7901 exo、MKN-45 exo和GES-1 exo）,人单核细胞系TH-1加入PMA诱导其分化为M0型巨噬细胞,将10 μg/mL 的GES-1 exo、MGC-803 exo、SGC-7901 exo、MKN-45 exo以及等体积的PBS分别与M0型巨噬细胞共孵育48 h后,qRT-PCR检测各组细胞中TNF-α、CCR7、Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达,流式细胞术检测各组细胞CD206和CD14表达,Western blot检测各组细胞ERK和STAT3磷酸化水平。在MKN-45细胞中分别转染lncRNA LOXL1-AS1过表达质粒（lncRNA LOXL1-AS1）和空白质粒（Vector）后提取各组细胞分泌的外泌体（记为lncRNA LOXL1-AS1 exo和Vector exo）,将10 μg/mL的lncRNA LOXL1-AS1 exo和Vector exo分别与M0型巨噬细胞共孵育,检测孵育后各组细胞TNF-α、CCR7、Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达以及ERK和STAT3磷酸化水平。结果:本文所提取的外泌体符合其结构和生物学特征。相比于PBS组,MGC-803 exo、SGC-7901 exo、MKN-45 exo组细胞TNF-α、CCR7表达显著下调（P＜0.01）,Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达均显著上调（P＜0.01）,CD206+CD14+细胞所占比例显著增加（P＜0.001）,ERK和STAT3磷酸化水平显著增加（P＜0.001）。相比于Vector exo组,lncRNA LOXL1-AS1 exo组中lncRNA LOXL1-AS1表达显著上调（P＜0.001）。相比于Vector exo组细胞,lncRNA LOXL1-AS1 exo组巨噬细胞中Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达均显著上调（P＜0.001）,CD206+CD14+细胞所占比例显著增加（P＜0.001）,ERK和STAT3磷酸化水平显著增加（P＜0.001）。结论:胃癌细胞外泌体中lncRNA LOXL1-AS1可显著促进巨噬细胞的M2型极化,其机制可能与激活ERK/STAT3信号通路相关。     

虫草素抑制JAK2/STAT3通路减轻肺癌大鼠放射性免疫功能损伤

目的 探讨虫草素通过JAK2/STAT3信号通路对肺癌大鼠放射性治疗免疫功能损伤的抑制作用。方法 50只大鼠建立荷瘤模型,另设正常组（10只）。建模成功大鼠随机分为模型组、放疗组、虫草素组、激动剂组和激动剂+虫草素组,每组10只。比较各组大鼠瘤重、肿瘤体积、抑瘤率、IL-6、TNF-α、脾指数、胸腺指数、T淋巴细胞亚群数量、JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组IL-6、TNF-α、CD8+、p-JAK2、p-STAT3升高,脾指数、胸腺指数、CD4+、CD4+/CD8+降低（P<0.05）;与模型组比较,放疗组瘤重、肿瘤体积、脾指数、胸腺指数、CD4+、CD4+/CD8+降低,IL-6、TNF-α、CD8+、p-JAK2和p-STAT3升高（P<0.05）;与放疗组比较,虫草素组瘤重、肿瘤体积、IL-6、TNF-α、CD8+、p-JAK2、p-STAT3降低,抑瘤率、脾指数、胸腺指数、CD4+、CD4+/CD8+升高,激动剂组瘤重、肿瘤体积、IL-6、TNF-α、CD8+、p-JAK2、p-STAT3升高,抑瘤率、脾指数、胸腺指数、CD4+、CD4+/CD8 +降低（P<0.05）;与激动剂+虫草素组比较,虫草素组瘤重、肿瘤体积、IL-6、TNF-α、CD8+、p-JAK2、p-STAT3降低,抑瘤率、脾指数、胸腺指数、CD4+、CD4+/CD8+升高,激动剂组瘤重、肿瘤体积、IL-6、TNF-α、CD8+、p-JAK2、p-STAT3升高,抑瘤率、脾指数、胸腺指数、CD4+、CD4+/CD8+降低（P<0.05）。结论 虫草素可有效抑制肺癌大鼠放射性治疗免疫功能损伤,其机制可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路蛋白表达发挥调控作用。     

M2型肿瘤相关巨噬细胞通过调控肺癌细胞能量代谢重编程促进癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的:研究M2型肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages, TAM)对肺癌细胞增殖、侵袭、迁移及能量代谢重编程的影响。方法:利用终浓度为320 ng/mL佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA)刺激THP-1细胞为巨噬细胞(M0)后,利用100 ng/mL PMA+IL-4(20 ng/mL)+IL-13(20 ng/mL)刺激48 h诱导成M2型巨噬细胞,qRT-PCR检测iNOS、 IL-1β、TNF-α、 Arg-1、CCL-18、IL-10的表达,免疫荧光检测CD206、CD86的表达。收集M0型(M0-CM)及M2型巨噬细胞条件培养基(M2-CM),利用M0-CM、M2-CM分别作用肺癌细胞(A549、H1299)48 h后,EdU检测细胞增殖能力变化;Annexin V-FITC/PI双染检测肺癌细胞凋亡;Transwell检测细胞侵袭及迁移能力;LC-MS/MS检测肺癌细胞能量代谢变化。结果:与M0巨噬细胞比较,M2型巨噬细胞中iNOS(P<0.01)、IL-1β(P<0.01)、TN...     

不同活化表型的巨噬细胞对小鼠肺癌移植瘤生长、淋巴管生成和淋巴结转移的影响

目的:探讨不同活化表型的巨噬细胞对小鼠Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)移植瘤生长、淋巴管生成和淋巴结转移的影响.方法:将活化的巨噬细胞与LLC细胞混合后注射至小鼠颈部背侧皮下,建立移植瘤模型,分为4组:空白对照组,经典活化的巨噬细胞(classically activated macrophages,caMphi)组,替代性活化的巨噬细胞(alternatively activated macro-phages,aaMphi)组和RAW264.7巨噬细胞组.每组10只小鼠,观察移植瘤生长情况.d 28时杀死小鼠,HE染色检测淋巴结和远处器官转移情况,免疫组织化学法检测并计数移植瘤淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(lymphatic vessel endothelial hyaluro-nan receptor-1,LYVE-1)阳性淋巴管密度(lymphatic vessel density,LVD).同时另取40只小鼠随机分为上述4组,观察其生存时间并计算生存率.结果:与空白对照组比较,aaMphi组和RAW264.7组移植瘤生长速度较快,淋巴结转移数和双肺转移结节数较多(P<0.01),LVD增高,荷瘤小鼠生存率降低(P<0.05).aaMphi组淋巴结转移数和LVD明显高于RAW264.7组(P<0.05),但移植瘤生长、肺转移结节数和荷瘤小鼠生存率之间差异无统计学意义(P>0.05).结论:aaMphi能够促进LLC移植瘤生长、淋巴管生成、淋巴结和肺转移,并降低荷瘤小鼠生存率.在与LLC一起形成移植瘤的过程中,未经处理的巨噬细胞可以朝着aaMphi的方向极化.     

T4噬菌体诱导肿瘤相关巨噬细胞向M1型再极化

观察T4噬菌体对M2型巨噬细胞向M1型再极化的诱导作用,并检测再极化的M1型巨噬细胞诱导小鼠Lewis肺癌细胞凋亡和抑制其侵袭的作用效果。方法：小鼠巨噬细胞RAW264.7经白细胞介素-4（IL-4）诱导为替代性活化巨噬细胞（M2型）,以T4噬菌体对M2型巨噬细胞再极化诱导;Real-time PCR检测IL-4诱导极化及T4噬菌体再极化后巨噬细胞中〖STBX〗IL-12、TNF-α、Arg-1、TGF-β、IL-10和iNOS〖STBZ〗基因mRNA的变化,Western blotting检测巨噬细胞内iNOS和Arg-1蛋白表达变化,ELISA法检测巨噬细胞培养上清中IL-10和IL-12的含量;流式细胞术和Transwell法分别检测T4噬菌体再极化巨噬细胞诱导小鼠Lewis肺癌细胞凋亡和抑制其侵袭的作用效果。结果：RAW264.7细胞经IL-4处理后被诱导成为M2型巨噬细胞,其〖STBX〗iNOS和IL-12〖STBZ〗 mRNA表达分别下降为对照组的1/2.5和1/6.2,而〖STBX〗Arg-1和IL-10〖STBZ〗 mRNA表达分别增加了161.2和120.3倍。M2型巨噬细胞经野生型和突变型T4噬菌体处理后,〖STBX〗IL-12、TNF-α、iNOS〖STBZ〗在mRNA和蛋白水平均明显逆转上调,〖STBX〗IL-10、TGF-β、Arg-1〖STBZ〗则明显逆转下调,呈现M1型特征;其中突变型T4噬菌体的诱导作用显著强于野生型。野生型和突变型T4噬菌体诱导M1再极化的巨噬细胞致小鼠Lewis肺癌细胞的凋亡率较M2型巨噬细胞显著增高[（35.3±2.44）%、（39.1±208）% vs （4.68±0.56）%;均P<0.01）],同时,显著抑制了肺癌细胞的侵袭能力[侵袭细胞数：（43.8±7.51）、（23.2±4.33）个 vs （1775±12.33）个;均P<0.01]。结论：T4噬菌体能够诱导M2型巨噬细胞向M1型再极化,并增强巨噬细胞诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞侵袭的能力。     

二苯乙烯苷抗氧化和抗炎作用的机制研究

目的： 以小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞为研究对象，探讨二苯乙烯苷（TSG）介导的抗氧化和抗炎作用及其调控机制。方法： 30、60和120 μmol/L的二苯乙烯苷预处理4 h，然后以1 μg/mL的脂多糖（LPS）刺激小鼠巨噬细胞（RAW264.7）12 h，并设置空白对照组、地塞米松（100 nmol/L）阳性对照和Nrf2抑制剂寒鸦子酸（brusato，50 μmol/L）干预组，其中地塞米松和brusatol预处理RAW264.7细胞4 h。观察光镜下RAW264.7细胞形态学的改变并统计其被激活比例；ELISA法检测培养液中TNF-α和IL-6的水平；通过DCFH-DA和Mito-SOX^TM荧光探针染色，流式细胞仪检测细胞内和线粒体内的ROS水平变化；免疫荧光法检测Nrf2的表达水平变化；Western blot检测核内Nrf2蛋白水平变化；Real-time PCR测定Nrf2下游抗氧化酶HO-1、SOD₂、SOD₁、CAT和GPX-1表达。结果： 与空白对照组细胞相比，LPS处理后RAW264.7细胞活化，胞体增大，形成大量伪足，培养基中TNF-α和IL-6增多。二苯乙烯苷可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞激活，降低培养基中TNF-α和IL-6，且效果优于阳性对照药物地塞米松。同时，二苯乙烯苷可促进Nrf2核转位，并促进下游抗氧化酶HO-1、SOD₂和CAT表达，减轻细胞内ROS生成。而brusatol可通过阻断Nrf2活性抑制二苯乙烯苷的抗炎作用。结论： 二苯乙烯苷可激活Nrf2及其下游抗氧化酶的表达，具有良好的抗炎和抗氧化作用，是一种炎症相关疾病的候选药物。     

M1、M2型肿瘤相关巨噬细胞与胃癌淋巴结转移的关系

摘 要：［目的］ 分析 M1、M2型巨噬细胞与胃癌淋巴结转移的关系。［方法］ 随机选取行胃癌D2根治术的病例50例,A组30例为有淋巴结转移组,B组20例为无淋巴结转移组。检测50例胃癌患者癌组织中CD68、CD163的表达情况。另外从50例标本中,选取20例淋巴结有癌转移组中的无癌转移淋巴结,每例随机选取1枚未转移淋巴结,共20枚（C组）;淋巴结无癌转移组中,每例随机选取1枚淋巴结,共20枚（D组）。检测C、D两组淋巴结中CD68、CD163的表达情况。［结果］ A、B两组胃癌组织中M1型巨噬细胞均数分别为20.12±2.90和20.09±2.44,差异无统计学意义（P=0.970）;M2型巨噬细胞均数分别为20.41±2.36和14.68±2.69,差异有统计学意义（P<0.001）。C、D组淋巴结中,M2型巨噬细胞均数分别为11.10±1.04和7.70±1.93,差异有统计学意义（P<0.001）。［结论］ M2型巨噬细胞可能参与并促进胃癌的局部淋巴结转移。已有局部淋巴结癌转移的患者更易发生其它淋巴结癌转移,并且M2型巨噬细胞可能参与其中。     

二苯乙烯苷抗氧化和抗炎作用的机制研究

目的： 以小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞为研究对象，探讨二苯乙烯苷（TSG）介导的抗氧化和抗炎作用及其调控机制。方法： 30、60和120 μmol/L的二苯乙烯苷预处理4 h，然后以1 μg/mL的脂多糖（LPS）刺激小鼠巨噬细胞（RAW264.7）12 h，并设置空白对照组、地塞米松（100 nmol/L）阳性对照和Nrf2抑制剂寒鸦子酸（brusato，50 μmol/L）干预组，其中地塞米松和brusatol预处理RAW264.7细胞4 h。观察光镜下RAW264.7细胞形态学的改变并统计其被激活比例；ELISA法检测培养液中TNF-α和IL-6的水平；通过DCFH-DA和Mito-SOX^TM荧光探针染色，流式细胞仪检测细胞内和线粒体内的ROS水平变化；免疫荧光法检测Nrf2的表达水平变化；Western blot检测核内Nrf2蛋白水平变化；Real-time PCR测定Nrf2下游抗氧化酶HO-1、SOD₂、SOD₁、CAT和GPX-1表达。结果： 与空白对照组细胞相比，LPS处理后RAW264.7细胞活化，胞体增大，形成大量伪足，培养基中TNF-α和IL-6增多。二苯乙烯苷可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞激活，降低培养基中TNF-α和IL-6，且效果优于阳性对照药物地塞米松。同时，二苯乙烯苷可促进Nrf2核转位，并促进下游抗氧化酶HO-1、SOD₂和CAT表达，减轻细胞内ROS生成。而brusatol可通过阻断Nrf2活性抑制二苯乙烯苷的抗炎作用。结论： 二苯乙烯苷可激活Nrf2及其下游抗氧化酶的表达，具有良好的抗炎和抗氧化作用，是一种炎症相关疾病的候选药物。     

温阳散结汤含药血清通过NF-κB通路调控肿瘤相关巨噬细胞极化对Lewis肺癌的影响

目的:观察温阳散结汤对 Lewis 肺癌小鼠肿瘤生长及瘤组织中巨噬细胞M2型极化的影响,并探索其调控NF-κB信号通路抑制肿瘤相关巨噬细胞M2型极化,对Lewis肺癌细胞侵袭、迁移能力的影响。方法:建立C57BL/6小鼠 Lewis 肺癌移植瘤模型,温阳散结汤干预14 d 后观察小鼠瘤重和肺转移灶,计算肺转移抑瘤率,免疫组化染色检测小鼠瘤组织中巨噬细胞M2型表面标志物 CD206 的表达;温阳散结汤灌胃SD大鼠制备含药血清,采用IL-13干预RAW264.7小鼠巨噬细胞建立巨噬细胞M2型极化模型,CCK-8法检测温阳散结汤含药血清对巨噬细胞增殖的影响,流式细胞术和Western-blot检测 CD206的表达,RT-PCR检测巨噬细胞M2型标志基因的mRNA表达,ELISA法检测细胞上清中IL-1β、IL-10、TGF-β 和TNF-α 的水平变化,Western-blot检测氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、核因子-κB p65(NF-κB p65)和磷酸化核因子-κB p65（pNF-κB p65）的蛋白表达;收集温阳散结汤含药血清处理的M2型巨噬细胞条件培养基,将其作用于Lewis肺癌细胞,通过Transwell侵袭迁移实验检测Lewis 肺癌细胞的侵袭和运动迁移能力。结果:温阳散结汤干预后,明显减少了小鼠瘤重和肺转移灶数,并抑制了瘤组织CD206的阳性表达（P<0.05）;温阳散结汤含药血清干预后,IL-13诱导的M2型巨噬细胞中F4/80+CD206+的细胞比例和CD206蛋白表达明显减少,MRC1、Arg1、Ym1的mRNA表达水平显著降低,细胞中TNF-α、IL-1β的含量明显升高,IL-10、TGF-β的含量明显降低,同时明显下调了细胞PPARγ、NF-κB p65、pNF-κB p65的蛋白表达及pNF-κB p65/NF-κB p65比值（均P<0.05）;温阳散结汤含药血清处理的M2型巨噬细胞条件培养基干预后,Lewis肺癌细胞迁移和侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。结论:温阳散结汤具有抑制肺癌肿瘤生长和转移的作用,其作用机制可能与调节NF-κB通路,抑制IL-13诱导的RAW264.7细胞M2型极化,从而抑制Lewis肺癌细胞侵袭和迁移能力相关。     

Effects of Glioma Cells on Maturation of Dendritic Cells

We investigated whether glioma cells affected the maturation of dendritic cells (DCs). First, DCs phenotypes were analyzed using FACScan. Incubation of both human and mouse immature DCs with glioma cells altered their expression of cell surface molecules, whereas expression of cell surface molecules by mature mouse and human DCs was not affected by exposure to glioma cells. Subsequently, phagositosis was assessed by uptake of FITC-dextran. Coculture with glioma cells did not inhibit phagositosis of either mature or immature DCs relative to the controls. We also analyzed the concentration of IL-12 secreted by mature DCs using enzyme-linked immunoabsorbent assay (ELISA). IL-12 production by DCs was inhibited by coculture with glioma cells. However, stimulation with lipopolysaccharide restored the production of IL-12 by both human and mouse DCs. These data suggest that glioma cells suppress the maturation of DCs.     

抗原致敏DC联合CIK细胞对肺癌细胞杀伤作用的研究

[ 目的]研究肿瘤抗原致敏的树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对肺腺癌原代细胞的杀伤作用，及肺癌细胞杀伤作用中细胞因子水平。[方法]取健康人外周血单个核细胞（PBMNC），常规诱导出DC、CIK、LAK细胞；用肺癌A549细胞提取的肿瘤抗原冲击DC，倒置显微镜下观察DC形态，流式细胞仪检测DC经抗原冲击和未经抗原冲击后其表型变化：把CIK细胞、DC-CIK细胞、LAK细胞和DC-LAK细胞作为效应细胞，肺腺癌原代细胞作为靶细胞，共分为4组，在10：1、20：1、50：1的效靶比时，进行杀伤试验，使用LDH释放法测定杀伤活性；ELISA法检测杀伤试验中细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ的分泌水平。[结果]DC经肿瘤抗原冲击后在镜下呈典型成熟形态；DC—CIK细胞对肺腺癌原代细胞的杀伤活性高于CIK细胞、LAK细胞和DC—LAK细胞（P〈0．05），随着效靶比的升高，DC—CIK细胞对肺癌细胞的杀伤效应随之增强（P〈0．05）；细胞杀伤试验中DC—CIK细胞组中IFN-γ、IL-12的分泌量明显高于其它3组（P〈0．05）：而IL2的分泌量以DC-LAK细胞组为最高，DC—LAK和LAK细胞组明显高于其他2组（P〈0．05）。[结论]肿瘤抗原致敏的DC可诱导特异性CIK细胞，显著提高CIK细胞对肺腺癌原代细胞的杀伤作用，其杀伤作用可能与IFN-γ、IL12的分泌量有关。     

干细胞、癌症与癌症干细胞

干细胞被认为是一种未分化的细胞,具有永远增殖和自我更新能力.大量研究证明,癌症中存在对化疗更具抵抗性的癌症干细胞.识别癌症干细胞和普通癌症细胞之间的差异,可以发展更有效的癌症分类、诊断和治疗方法.     

DC与CIK共培养后对白血病细胞杀伤活性的研究

目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与同源树突状细胞(DC)共培养后CIK细胞的增殖活性、表型的变化,及其对K562、HL-60白血病细胞细胞毒作用的影响。方法采集健康供者的外周血单个核细胞(MNC),置于37℃,5%CO2培养箱培养2 h,收集非贴壁细胞用于诱导培养CIK细胞,贴壁细胞诱导分化出成熟DC,将成熟DC和CIK细胞按1 5的比例混合培养3天,用MTT法检测DC-CIK共培养细胞杀伤K562和HL-60白血病细胞株的活性。结果DC-CIK共培养后增殖速度明显快于单纯CIK细胞组(P<0.05);培养第14天,CIK中CD3+CD8+、CD3+CD56+双阳性细胞的比率分别为58.6%±7.3和26.5%±6.2,DC-CIK的CD3+CD8+、CD3+CD56+的比率分别为72.5%±4.2和38.4%±6.1,表达差异显著(P<0.05);在2.5∶1~20∶1的效靶比范围内,DC-CIK对K562、HL-60细胞的杀伤活性较单纯CIK细胞组的杀伤活性要高(P<0.05)。结论DC与CIK共培养细胞是增殖活性和细胞毒活性均高于CIK细胞的免疫活性细胞。     

CD3AK细胞与LAK细胞的比较

抗ＣＤ３单抗和ｒＩＬ－２共刺激法诱生扩增的ＣＤ３ＡＫ与用等量ｒＩＬ－２诱生扩增的ＬＡＫ间有明显差异：１）扩增倍数和细胞毒活性强度及其动态学不同：在诱生初期，ＣＤ３ＡＫ细胞数下降，细胞扩增倍数低于ＬＡＫ；对Ｋ５６２的细胞毒不知 性低于ＬＡＫ，诱生８天后ＣＤ３ＡＫ的扩增倍数和     

癌症患者群体LAK细胞的体外抗肿瘤的细胞毒活性

本研究应用~(125)I-UdR释放实验,测定了大量随机取样于111位癌症患者的外周血淋巴细胞以及从它们中诱导出的处于不同培养期的淋巴因子激活的杀伤细胞对K562和Raji肿瘤细胞的体外细胞毒活性.对560个有效数据的统计分析,获得以下结果:1.经过培养系统的作用,对K562细胞的细胞毒活性,从培养前的34.78±25%上升到8～13天培养期的68.04±17.3%之后基本稳定于近70%的水平,直至23～27天的培养期.此细胞毒活性的构成比模式表明,在培养之前,样品分布于很广的活性区域(10～90%);培养 8～13天和以后的培养期,约85%的样品集中到高活性区域(50～95%).2.对 Raji细胞的细胞毒活性,从培养前的8.9±8%上升到8～13天培养期的42.1±22%之后,在随后的培养期中,维持于约35%的水平.对Raji的细胞毒活性的构成比显示,在培养前,全部样品处于低活性区域(<25%);在培养过程中,部分样品(约30%)向高活性区域发生明显的扩展(50～90%),但另一部份样品(约40%)一直位于低活性区域(<35%).这样形成高低两个分布区域.这种现象的机理值得进一步探讨.     

侧群细胞与肺癌肿瘤干细胞

侧群(side population,SP)细胞是一小群能够将染料Hoechst 33342排出从而在流式细胞图上呈现Hoechst 33342低染的细胞,研究者已在多种肿瘤组织和细胞系中检测出了SP细胞并验证这些SP细胞具有强干细胞活性。现有试验结果证实多种肺癌组织和肺癌肿瘤细胞系中也存在具有类干细胞特性的SP细胞,这些SP细胞的鉴别与分离对于肺癌肿瘤干细胞的研究有何意义?本文将整合现有研究资料就这一问题进行阶段性综述。     

CAR-T Cells

The recent approval of two autologous CAR-T cell products for the treatment of relapsed/refractory diffuse large B cell lymphoma (DLBCL) and similar histologies has provided a new treatment paradigm for patients who were not cured by current combination chemoimmunotherapy and in some cases by high dose therapy and autologous hematopoietic transplantation (HCT). The two commercial agents tisagenlecleucel (Novartis) and axicabtagene ciloleucel (Kite/Gilead) are both directed against the pan B     

Interaction between Colon Cancer Cells and Human Liver Sinusoidal Endothelial Cells Promotes Liver Metastasis of Tumor Cells

OBJECTIVE To investigate the effect of co-culture between colon cancer cells(SW1116)and human liver sinusoidal endothelial cells (HLSECs)on cancer cell metastasis, and to provide a novel model for studying the mechanism of colon cancer liver metastasis.METHODS HLSECs and SW1116 were co-cultured for 21 rounds in vitro. Transwell migration,gelatin-zymography,CCK-8 proliferation and colony formation assays were used to examine the invasion, proliferation, and colony forming ability of cancer cells.Assays were carried out to examine tumor growth ability and liver metastasis. The associated molecular change was examined by western blotting.RESULTS After 21 selection rounds, colon cancer cells SW1116P21 displayed a clear boundary. Compared with the SW1116 cells,SW1116P21 cells had a greater invasive ability, cell proliferation and colony formation in soft agar.A gelatin-zymography assay showed that the ability of SW1116P21 cells to secrete matrixmetaIloproteinase-2/9 was significantly greater than that ofSW1116 cells. Additionally, the capacity for subcutaneous tumorformation of SW1116P21 was significantly increased. It was found that mice injected with SW1116P21 cells developed significantly morevisually observable liver nodules than mice injected with SW1116cells.Western blotting showed increased vimentin expression anddecreased E-cadherin expression in the SW1116P21 cells, comparedwith the SW1116 cells.CONCLUSION The interaction between SW1116 and HLSECs maypromote tumor cell invasion, proliferation and colony formation in vitro, and tumor formation and liver metastasis in vivo. Anepithelial-mesenchymal transition occurs in SW1116P21 cells, whichcontributes to the change in the characteristics of tumor cells.     

Effects of Gastric Cancer Cells on the Differentiation of Treg Cells

The aim of this study was evaluated the prevalence of Treg cells in peripheral blood in patients with gastriccancer, and investigate the effect of gastric cancer cells on their differentiation. ELISA was employed to assessthe concentrations of TGF-β and IL-10 in gastric cancer patients’ serum. Then, mouse gastric cancer cells wereco-cultured with T lymphocytes or T lymphocytes + anti-TGF-β. Flow cytometric analysis and RT-PCR werethen performed to detect Treg cells and TGF-β and IL-10 expression in gastric cancer cells. Our data showedthat the expression of TGF-β and IL-10 in the patients with gastric cancer was increased compared to the casewith healthy donors. The population of Treg cells and the expression levels of TGF-β and IL-10 in the co-culturegroup were much higher than in the control group (18.6% vs 9.5%) (P<0.05). Moreover, the population of Tregcells and the expression levels of TGF-β and IL-10 in the co-culture systerm were clearly decreased after additionof anti-TGF-β (7.7% vs 19.6%) (P<0.01). In conclusion, gastric cancer cells may induce Treg cell differentiationthrough TGF-β, and further promote immunosuppression.