蛋白酶激活受体-1促进肺癌细胞侵袭和转移功能的研究

目的研究蛋白酶激活受体1（PAR-1）对人类肺癌细胞侵袭和转移功能的影响。方法采用阳离子脂质体介导法,将正义和反义PAR-1重组质粒“pC／PARls”和“pC／PARlas”分别转染至人肺巨细胞癌低转移株（PLA801C）和高转移株（PLA801D）细胞中;采用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）和Western印迹检测转染后PAR-1基因和蛋白表达水平变化;通过MTT、软琼脂集落形成、流式细胞仪、细胞-基质黏附和Transwell细胞侵袭实验检测PAR-1对肺癌细胞转移相关功能的影响。结果转染正义和反义PAR-1分别明显上调和下调了PLA801C和PLA801D的PAR-1 mRNA和蛋白表达水平。转染正义PAR-1对细胞的生长和克隆形成具有促进作用;并可明显增强细胞对细胞外基质的黏附和侵袭能力（与空载体对照组比较均P〈0．01）。相反,转染反义PAR-1对细胞模型的生长和克隆形成具有抑制作用;能明显降低细胞的S期和G2／M期（与空载体对照组比较分别为P〈0．05、0．01）、升高G0／G1期所占比例（P〈0．01）;还可使细胞对细胞外基质的黏附力（P〈0．05）和侵袭力明显降低（P〈0．01）。结论正义和反义PAR-1基因能够分别上调和下调PAR-1的表达水平;PAR-1能够影响肺癌细胞的生长和增殖、黏附和侵袭特性。抑制PAR-1的表达可能是一种治疗肺癌的途径。     

PAR-1对动员肺巨细胞癌PLA801D/PLA801C细胞内Ca~(2+)的作用

目的 通过研究PAR-1对肺巨细胞癌细胞高、低转移细胞株PLA801D和PLA801C[Ca~(2+)]I的影响,探讨PAR-1参与调节肺癌细胞转移相关功能的分子机制.方法 激光共聚焦显微镜检测PLA801D和PLA801C细胞[Ca~(2+)]I;将反义和正义PAR-1分别转染至PLA801D(D-)和PLA801C(C+)中;用thrombin和TRAP激活PAR-1,观察PAR-1对D-和C+的[Ca~(2+)]I影响.结果 PLA801D(荧光强度59.55,下同)和PLA801C(35.46)细胞之间的平均[Ca~(2+)]I差异有统计学意义(P<0.01).C+的[Ca~(2+)]I(45.77)明显高于其对照组CV(35.46,P<0.05),D-的[Ca~(2+)]I(48.42)明显低于对照组DV(59.55,P<0.05).C+和CV的[Ca~(2+)]I分别在加入thrombin 80 s和100 s后荧光强度分别达峰值48.19±9.84和45.64±9.87(P<0.05);二者均在加入TRAP60 s后达峰值,分别为111.31±25.00和52.93±11.21(P<0.05).D-和DV的[Ca~(2+)]I在加入thrombin 60 s后达峰值,分别为40.71±5.89和61.07±21.36(P<0.05),二者均在加入TRAP 40 s后达峰值,分别为84.98±11.23和102.58±21.48(P<0.05).结论 PLA801D和PLA801C的转移潜能可能与其细胞的[Ca~(2+)]I有关.激活PAR-1能够上调PLA801D和PLA801C的细胞内Ca~(2+)信号.PAR-1促进肺巨细胞癌转移的机制与上调细胞内Ca~(2+)有关.     

不同组织学类型人肺癌细胞系的维甲酸受体表达

目的：观察来源于不同组织学类型的人肺癌细胞系（肺巨细胞癌细胞系PLA－801，肺鳞状上皮细胞癌细胞系C－57，个旧肺腺癌细胞系GLC－82和肺腺癌细胞系PC－84045）的维甲酸受体的含量和分布特征。方法：用ELISA和免疫组化显色计算机图像分析方法，对4株具有不同侵袭潜能、不同组织学类型的肺癌细胞系的维甲酸受体（RARs、RARβ和RXRs)进行检测。结果：4株细胞系的RARβ表达极少，甚至缺如；RARs主要分布在癌细胞质中，但RXRs主要位于细胞核内，表达水平较高；RARs和RXRs在PLA－801细胞中表达最低。结论：肺癌中普遍存在着RARβ的缺失与RARs的表达分布异常，这些改变可能与肺癌的异常分化有关，也可能是肺癌细胞对维甲酸诱导分化不敏感的重要原因。RXRs较高水平的表达主要位于核内，提示用9－顺式维甲酸来诱导肺癌的分化效果可能会较好。     

人巨细胞肺癌裸鼠移植瘤中mts1和nm23-H1表达及其与肺癌淋巴结转移关系

目的 探讨肿瘤转移相关基因mts1和nm23-H1在人巨细胞肺癌裸鼠移植瘤中的表达及其与啼癌淋巴结转移的关系。方法 用高转移的人巨细胞肺癌瘤株PLA-801—D和低转移的人巨细胞肺癌瘤株PLA-801—C在裸鼠中建立转移模型,观察瘤细胞在裸鼠淋巴结及肺中的转移情况;原位杂交检测mts1和nm23-H1mRNA在移植瘤中的表达。结果 PLA-801—D在12只移植裸鼠中均有淋巴结转移,转移率100%,2只裸鼠中有肺转移,转移率17％;PLA-801—C在12只移植的裸鼠中均无淋巴结及肺转移。mts1mRNA在PLA-801—D、PLA-801-C裸鼠移植瘤中阳性表达分别为12例、2例;nm23-H1mRNA在PLA-801—D、PLA-801—C裸鼠移植瘤中阳性表达分别为12例、11例。结论 mts1 mRNA表达与人巨细胞啼癌裸鼠移植瘤淋巴结转移呈正相关,nm23-H1 mRNA表达与人巨细胞肺癌裸鼠移植瘤淋巴结转移不相关。     

食管癌及其淋巴结转移的Fasl表达

背景　食管腺癌中Fas表达明显减少或不存在,但在食管癌,尤其是腺癌中,Fasl表达情况尚不清楚。方法　用免疫组化技术,作者研究了用甲醛固定,石蜡包埋的13例食管腺癌15例鳞癌及其中7例腺癌,4例鳞癌的转移淋巴结组织。记录每个肿瘤中Fasl阳性细胞的百分数。比较腺癌与鳞癌及他们的转移淋巴结情况。用Fisher精确检验作统计分析。结果　腺癌未见到独特的染色类型,而鳞癌中,Fasl表达通常位于癌巢周边细胞,所有腺癌中超过25%癌细胞均显示Fasl表达,均有淋巴结转移。53%鳞癌超过25%癌细胞显示Fasl表达,33%有淋巴结转移。当有Fasl表达的癌细胞数超…     

白细胞介素18在肺癌细胞的表达及其在肿瘤转移中功能的初步探讨

目的 检测白细胞介素18(IL-18)在肺巨细胞癌高、低转移株的差异表达，探讨IL-18在肺巨细胞癌转移中介导的作用。方法 采用半定量RT-PCR或Western blot技术，检测IL-18在肺巨细胞癌高、低转移株的差异表达；构建IL-18 cDNA的重组质粒，测序分析其序列同源性；同时把IL-18基因导入肺巨细胞癌低转移株，观察IL-18对肿瘤细胞体外转移能力和转移表型的影响。结果 同肺巨细胞癌低转移株相比，IL-18 mRNA和蛋白均只能在肺巨细胞癌高转移株检测到；从肺巨细胞癌高转移株扩增出的IL-18 cDNA序列与文献报道^[1]完全一致；此外，将IL-18基因导入肺巨细胞癌低转移株后，稳定转染株细胞可正确表达IL-18融合蛋白，且转染细胞的体外迁移能力显著上调，为空对照组的3倍左右，而上皮细胞间黏附分子E-cadherin蛋白表达显著下调，为空对照组的50％左右。结论 肺巨细胞癌高转移株可组成性表达IL-18，且IL-18可能通过下调E-cadherin表达促进肺巨细胞癌细胞的转移。     

凝血酶受体-1在肺癌组织中的表达及其与转移的关系

目的研究凝血酶受体（PAR）-1在肺癌组织中的表达及其与肺癌侵袭、转移的关系。方法免疫组织化学sP法、形态学计量及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺癌原发灶和转移灶组织（36例液氮冻存肺癌组织、80例石蜡包埋肺癌组织）中PAR-1的表达。结果具有侵袭和转移部位的癌巢、脉管内癌栓、癌周围的肺泡上皮不典型增生灶及支气管腺导管上皮不典型增生灶均呈现较强的阳性反应。肺癌组织PAR-1蛋白表达阳性率为73．8％（59／80例）;转移组85．7％（48／56）与非转移组45,8％（11／24）之间差异有统计学意义（P〈0．05）。转移和非转移（P〈0．05）、原发灶和转移灶（P〈0．05）、肿瘤组织和肺组织（P〈0．01）各组之间PAR．1蛋白含量差异有统计学意义;而肿瘤大小、组织学类型和组织学分化各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。肺癌组织PAR．1mRNA表达阳性率63．9％（23／36例）;转移组78．3％（18／23例）与非转移组38．5％（5／13）之间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PAR-1过度表达与肺癌的转移表型、组织发生及恶性表型有关;PAR-1可能是肺癌转移过程中发挥重要作用的因素之一。     

KISS1在肺腺癌中的表达及意义

目的检测KISS1在人肺腺癌组织、癌旁组织中的表达情况,分析两者表达差异,探讨KISS1在人肺腺癌发生中的作用。方法利用免疫组织化学染色、免疫印迹法(Western blot)及实时定量PCR(real-time PCR)检测28例人肺腺癌组织及对应癌旁组织中KISS1蛋白及m RNA的表达,应用卡方检验对结果进行分析。结果免疫组化及Western blot结果显示KISS1蛋白在癌组织中表达水平显著低于癌旁组织。RT-PCR结果显示在肿瘤组织中KISS1m RNA表达的平均倍数显著低于癌旁组织(0.26±0.10 vs 1.02±0.13,0.01)。结论 KISS1在肺腺癌表达水平低于癌旁正常组织。     

PAR-2在人胰腺肿瘤细胞中的表达及其相关机制的研究

目的:通过对蛋白酶激活受体-2(PAR-2)在人胰腺癌细胞及癌旁组织中表达态势的研究,以期明确PAR-2在胰腺癌中表达特点,并探索其相关机制。方法:收集胰腺癌标本,采用免疫组织化学(SP法)检测胰腺癌PAR-2基因的表达;培养胰腺癌细胞,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测胰腺癌PAR-2基因的表达。结果:胰腺癌组PAR-2 mR-NA的表达高于对照组(P<0.01)。PAR-2在胰腺癌中的表达与患者年龄、性别无关(P>0.05),但癌细胞远处转移者显著高于无转移者(P<0.01)。结论:胰腺癌的发生与发展与PAR-2正相关。PAR-2在胰腺癌中的表达与患者年龄、性别无关;但与淋巴结转移正相关。     

p21活化激酶4在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨p21活化激酶4(PAK4)在人非小细胞肺癌细胞系及人非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用Western blot及实时荧光定量PCR检测人支气管上皮(HBE)细胞、非小细胞肺癌细胞(A549、NCI-H520、NCI-H460和NCI-H596细胞)、20例新鲜非小细胞肺癌组织及相应的癌旁组织中PAK4的表达情况;采用免疫组化检测210例非小细胞肺癌组织PAK4的表达情况;采用Kaplan-Meier法评估非小细胞肺癌患者术后5年生存率;用Cox比例风险模型分析PAK4对患者预后的影响。结果:非小细胞肺癌细胞(A549、NCI-H520、NCI-H460和NCI-H596细胞)PAK4蛋白及mRNA表达均显著高于HBE细胞(P0.05);20例非小细胞肺癌组织中PAK4蛋白及mRNA表达高于癌旁组织PAK4蛋白及mRNA表达(P0.05);10例转移性非小细胞肺癌组织PAK4 mRNA表达显著高于10例原发性非小细胞肺癌组织(P0.05);免疫组化染色结果示210例非小细胞肺癌PAK4评分显著高于对应的癌旁组织。临床资料分析显示PAK4蛋白表达与非小细胞肺癌的分化程度、淋巴结转移、远处转移及临床分期有关(P0.05);PAK4高表达组患者5年生存率显著低于PAK4蛋白低表达组患者(logrank检验,P0.05),PAK4蛋白表达是非小细胞肺癌患者的独立预后因素。结论:PAK4蛋白高表达是非小细胞肺癌患者死亡的独立危险因素。     

血小板因子4基因转染对肺癌细胞中血管生成因子基因表达的影响

目的：进一步探讨人血小板因子4（hPF4）抑制血管生成的作用机制,方法：构建含全长hPF4cDNA重组真核表达载体pcDNA3-hPF4,北朝鲜其转染到有肺巨细胞癌细胞系PLA801D细胞内,应用RT-PCR及免疫组化法观察肿瘤细胞自分泌的血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)、白细胞介素8（IL-8）等的mRNA和蛋白表达水平的变化,结果：导入pcDNA3-hPF4,PLA801D细胞能稳定表达hPF4mRNA,其VEGF、bFGF、IL-8的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,hPF4可直接调控VEGF、bFGF、IL-8等基因转录,影响其蛋白质生物合成,结论：提示hPF4可直接下调肿瘤细胞自分泌的VEGF、bFGF及IL-8等血管生成因子基因转录,抑制肿瘤细胞释放肿瘤血管生成因子,是hPF4抗血管生成抑制肿瘤细胞生长的机制之一。     

应用RAPD技术检测肺巨细胞癌转移细胞株的遗传学改变

目的：用ＲＡＰＤ技术检测人肺巨细胞癌高低转移细胞株的遗传改变。方法：人肺巨细胞癌细胞系高转移细胞株ＰＬＡ－８０１Ｄ和低转移株ＰＬＡ－８０１Ｃ,用１００条各１０个碱基的随机引物经ＰＣＲ扩增,扩增产物在含溴化乙锭的１．５％琼脂糖凝胶中电泳,紫餐透射仪上观察照相。结果：１００条引物绝大多数能扩增出明显的条带,多数引物产生的条带在高低转移株之间无差异,表现为单态性;其中１７条引物产生多态性,表现为带的有无     

Differential expression of RAB5A in human lung adenocarcinoma cells with different metastasis potential

For the sake of better understanding the molecular mechanism of neoplasia, we have used the mRNA differential display technique to analyze two human lung adenocarcinoma cell lines, AGZY83-a and Anip973. Anip973 was isolated from AGZY83-a, but manifested much higher metastatic potential than the parent line. We found that a significant differential cDNA fragment in Anip973 was over-expressed, then over-expressed cDNA fragment was cloned and sequenced. It showed that the over-expressed cDNA in Anip973 was RAB5A cDNA. And the RAB5A cDNA sequence was corresponding between the two cells. To determine whether RAB5A may be differentially expressed in the two human lung adenocarcinoma cells at protein level, we further detected RAB5A protein in the two cells by using immunofluorescent method. RAB5A protein was upregulated in highly metastatic Anip973. We also detected the difference in RAB5A gene expression at RNA level in human non-small cell lung carcinoma by RT-PCR. Using immunohistochemical staining, we also examined RAB5A change at protein level in 45 cases human non-small cell lung carcinoma paraffin sections. The results proved the evidence of upregulation of RAB5A in malignant tumor, indicated over-expression of RAB5A gene was correlated with the malignant degree and metastatic potential of lung cancer(² test, p <0.01). The RAB5A gene is a member of RAS superfamily, which can transcribe GTP-binding protein that plays an important role in signal transduction of protein trafficking at the cell surface and GDP/GTP cycle in the regulation of endocytotic membrane traffic. Thus our results indicated that over-expression of the RAB5A gene was involved in the process of transformation from AGZY83-a to the higher metastatic cell line Anip973. The result may be a powerful experimental evidence that over-expression of RAB5A gene associated with neoplasia metastasis.     

Dihydroartemisinin inhibits cell proliferation via AKT/GSK3β/cyclinD1 pathway and induces apoptosis in A549 lung cancer cells

Lung cancer is the most common cause of cancer-related death in the world. The main types of lung cancer are small cell lung carcinoma (SCLC) and non-small-cell lung carcinoma (NSCLC); non small cell lung carcinoma (NSCLC) includes squamous cell carcinoma (SCC), adenocarcinoma and large cell carcinoma, Non small cell lung carcinoma accounts for about 80% of the total lung cancer cases. Dihydroartemisinin (DHA) inhibits cell proliferation and induces apoptosis in several cancer cell lines. The effects of DHA on cell growth and proliferation in lung cancer cells remain to be elucidated. Here, we demonstrate that DHA inhibited cell proliferation in the A549 lung cancer cell line through suppression of the AKT/Gsk-3β/cyclin D1 signaling pathway. DHA significantly inhibited cell proliferation of A549 cells in a concentration and time dependent manner as determined by MTS assay. Flow cytometry analysis demonstrated that DHA treatment of A549 cells resulted in cell cycle arrest at the G1 phase, which correlated with apparent downregulation of both mRNA and protein levels of both PCNA and cyclin D1. These results suggest that DHA is a potential natural product for the treatment of lung cancer.     

高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ在不同分化胃癌细胞和组织中的差异表达及意义

目的: 分析高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(GMⅡ)在不同分化人胃癌细胞系和胃癌组织中的差异表达,以探讨GMⅡ在胃癌发生发展中的作用。方法: 收集38例胃腺癌及30例癌旁正常胃黏膜组织,体外培养3株不同分化胃癌细胞系(高分化MKN-28、中分化SGC-7901、低分化BGC-823)和永生化正常胃黏膜上皮细胞系(GES-1),分别应用RT-PCR、免疫组化和Western Blotting检测GMⅡmRNA和蛋白的表达。结果: GMⅡ阳性表达定位于胞浆,其在正常胃粘膜组织及高、中、低分化胃癌组织中的阳性表达率分别为53% (16/30)、 63%(5/8)、83%(15/18)和100%(12/12),各组间差异显著(P<0.05)。细胞爬片显示GMⅡ在正常胃黏膜上皮细胞系和高、中、低分化胃癌细胞系中的表达逐渐增强。与正常胃黏膜上皮细胞系GES-1相比,3种胃癌细胞系MKN-28、SGC-7901、BGC-823中GMⅡmRNA及蛋白表达水平显著增加(P<0.05),且GMⅡ在低分化胃癌细胞系BGC-823中表达最高,而在高分化胃癌细胞系MKN-28中表达最低。与正常胃黏膜组织相比,高、中、低分化胃癌组织中GMⅡmRNA及蛋白表达水平亦显著增加(P<0.05),且GMⅡ表达水平在高分化胃癌组织中最低,而在低分化胃癌组织中最高。结论: GMⅡ参与了胃癌的发生和发展, 其表达水平与胃癌低分化程度更密切相关。     

BRI基因的表达与非小细胞肺癌发生及转移潜能的关系

目的 探讨BRI基因在人非小细胞肺癌中的差异表达情况及其与肺癌发生及转移能力形成的相关性。方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Northern印迹杂交方法分析BRI基因在一对遗传背景相同、转移能力不同的人肺腺癌细胞系AGZY83-a和Anip-073中的差异表达,并进一步检测BRI基因在另外6个非小细胞肺癌细胞系(SPC-A-1,A549,95D,TKB-18,GLC-82,PAa)及30例临床肺癌标本中的表达情况。结果 BRI基因在2细胞系中存在明显的差异表达,在具有高转移潜能的Anip973中高表达。在其他6个细胞系中BRI的表达与肺癌转移潜能可能有关。同时发现与同一病例的正常肺组织相比,BRI基因在肺癌组织中高表达,其过表达在有淋巴结转移的肺癌为6／8,无转移者为45．5％(10／22),并且BRI基因在肺癌与正常肺组织之间存在转录本的差异。结论 BRI基因在肺癌中表达上调,其1．6kb转录本表达的增加可能与肺癌的发生和转移能力的形成有关。