依据免疫球蛋白基因重排构建的实时定量聚合酶链反应体系在B淋巴细胞白血病微小残留病监测中的应用

目的 依据B淋巴细胞白血病存在的特异免疫球蛋白(Ig)轻、重链基因重排构建白血病细胞的特异定量检测方法,并将其用于B淋巴细胞白血病微小残留病的监测.方法 利用欧洲BIOMED-2体系和方法分析15例B淋巴细胞白血病患者的Ig轻、重链基因的重排序列,并据此为患者分别设计白血病细胞特异性引物,建立个体化实时定量聚合酶链反应(qPCR)体系,用于监测患者治疗后白血病微小残留病.结果 15例患者中,14例检测出个体及白血病细胞特异的Ig轻、重链基因重排序列,其中10例患者构建的Ig-qPCR反应体系具有高度特异性,检测敏感度达到10-5水平,符合国际标准,满足临床需要.该方法与其他临床常用检测白血病微小残留病的方法结果相似.结论 依据Ig基因重排设计的白血病负荷检测方法对大多数B淋巴细胞白血病患者敏感、特异、准确,能为治疗的选择提供可靠依据.     

抗人小细胞肺癌单抗4B3重、轻链可变区基因的体外扩增、克隆和序列分析

目的　获得抗人小细胞肺癌单抗 4B3的重 ,轻链可变区基因。方法　根据小鼠免疫球蛋白可变区骨架区的保守序列分别设计了 4B3单抗重 ,轻链的可变区基因体外扩增的两对引物 ,从体外培养的 4B3杂交瘤细胞中提取总RNA ,反转录成cD NA ,以cDNA为模板 ,分别用设计的两对引物进行PCR扩增 ,扩增出的重 ,轻链基因片段 ,分别插入载体 pT Adv中 ,筛选出阳性克隆 ,并测序、分析。结果　重链可变区基因全长 345bp ,编码 115个氨基酸 ,轻链可变区基因全长 315bp ,编码 10 5个氨基酸。结论　上述研究为 4B3单抗的进一步改造和利用提供了实验基础。     

恶性淋巴瘤相关基因的研究

恶性淋巴瘤 (ML)的病因复杂 ,临床表现和病理形态多种多样 ,目前已成为人们研究的热点。近年来 ,随着分子生物学的迅速崛起 ,人们逐渐认识到ML的发生是一个涉及多重基因事件的复杂过程。基因控制着细胞的各种生物学性状 ,对于细胞的生长、分化起着重要的作用。涉及 ML的基因有多种 ,现将这些相关基因近年来的研究进展综述如下。1　Ig H和 Tc RML是来自 B或 T细胞的肿瘤 ,B细胞表达表面免疫球蛋白 ,T细胞表达 T细胞受体。在正常情况下 ,B细胞分化的最早阶段 Ig重链基因 (Ig H)重排 ,接着是 Ig轻链基因 (Ig L)重排。在 T细胞中 ,TC…     

Burkitt淋巴瘤细胞的c—myc致癌基因在两侧都可发生染色体易位

许多Burkitt 淋巴瘤(BL)细胞的染色体易位都是将c-myc 致癌基因为免疫球蛋白基因相连接.人BL 易位有三种情况,最多的一种是t(8:14),其他还有t(2:8)和t(8:22).带有t(8:14)易位的BL 细胞其c-myc 从染色体8易位至染色体14(14q~+)的Ig 重链恒定区(IgHCμ),同时重链可     

石蜡包埋B细胞性恶性淋巴瘤组织克隆性免疫球蛋白重链基因重排检测研究

[目的]探讨克隆性免疫球蛋白重链(IgH)基因重排在B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)诊断中的价值.[方法]采用半巢式PCR方法,对81例B-NHL病例,36例反应性增生及12例非淋巴瘤组织样本进行克隆性免疫球蛋白重链基因重排检测,以上病例均为经福尔马林固定的石蜡包埋组织.[结果]81例B-NHL中68例IgH阳性(阳性率为83.95%),36例反应性增生均为多克隆性,12例非淋巴瘤组织样本结果IgH均为阴性.[结论]克隆性免疫球蛋白重链基因重排检测可以作为诊断恶性B细胞性非霍奇金淋巴瘤的有效分子标志.     

免疫球蛋白在结肠癌HT-29细胞中的表达及其生物学活性探讨

目的明确免疫球蛋白（Ig）在人大肠癌传代细胞系HT-29细胞中的表达情况,并探讨其对肿瘤细胞生物学活性的影响。方法用RT-PCR方法检测Ig重链可变区转录本在HT-29细胞中的表达,并构建含有HT-29特异的CDR3片段的反义重组载体,电穿孔法将其转染入HT-29细胞,观察其对HT-29细胞生长增殖及凋亡等基本生命活动的影响。结果在HT-29细胞内检测到人Ig重链转录本,且测序显示为单一性克隆;含有HT-29特异的CDR3片段的反义重组载体能够有效地抑制HT-29细胞Ig分子的表达,且能够有效的诱导细胞的凋亡（P〈0．01）和生长抑制（P〈0．05）。结论肿瘤细胞来源的Ig可促进肿瘤细胞的生存和生长。     

免疫球蛋白轻链Igκ和Igλ在大肠癌细胞中同时表达

目的研究免疫球蛋白(Ig)轻链kappa(Igκ)和lambda(Igλ)在大肠癌细胞中的表达状况,以及Igκ和Igλ在大肠癌细胞中表达的一致性。方法运用免疫组织化学方法对30例石蜡包埋人大肠癌组织标本Igκ和Igλ进行检测。结果在30例大肠癌组织中,大肠癌细胞内Igκ和Igλ均阳性者17例,占56.7%,仅Igλ阳性者6例,占20.0%,两者均阴性者7例,占23.3%,结果显示大肠癌细胞内Igκ和Igλ两者的表达关系密切(χ2=11.9398,P<0.001)。结论大肠癌细胞中同时有两种类型免疫球蛋白轻链(Igκ和Igλ)表达,提示其可能有不同于B淋巴细胞的Ig基因活化机制。     

非B细胞来源的免疫球蛋白促进肿瘤的发生和发展

免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)是一类最重要的免疫分子,是B淋巴细胞的特有产物,分泌型Ig通过不同的机制发挥着重要的免疫防御作用,即抗体活性;膜结合型Ig是B细胞识别抗原受体(B cell antigen receptor,BCR),这是目前仍然写在国内外免疫学教材的经典概念。然而,近年来越来越多的研究证据表明,机体内还存在一类迄今未被关注的、非B细胞来源的Ig分子(non B-Ig),它们在可变区重排模式、表达调控及功能等方面有别于经典的Ig分子。non B-Ig的突出特点是在恶性转化的细胞中高水平表达,其表达水平与肿瘤的不良分化及不良预后密切相关;功能研究显示,non B-Ig促进肿瘤细胞的生长及生存,并参与肿瘤的发生及发展。研究提示,non B-Ig具有原癌基因的潜质,有可能成为多种肿瘤新的治疗靶点。     

胃癌细胞中免疫球蛋白轻链Igκ和Igλ的共同表达

目的　研究免疫球蛋白 (Ig)轻链kappa(Igκ)和lambda(Igλ)在胃癌细胞中的表达状况 ,以及Igκ和Igλ在胃癌细胞中表达的一致性。方法　运用免疫组织化学技术LSAB法对 2 2例石蜡包埋人胃癌组织标本Igκ和Igλ进行检测。结果　在 2 2例胃癌组织中 ,胃癌细胞内Igκ和Igλ均阳性者 17例 ,占 77.3% ;仅Igκ阳性者 2例 ,占 9.1% ;仅Igλ阳性者 1例 ,占 4 .5 % ;两者均阴性者 2例 ,占 9.1%。结果显示 ,胃癌细胞内Igκ和Igλ两者的表达关系密切 (χ2 =5 .4 898,P <0 .0 5 )。结论　胃癌细胞中同时有两种类型免疫球蛋白轻链 (Igκ和Igλ)表达 ,提示其可能有不同于B淋巴细胞的Ig基因活化机制     

非B细胞来源免疫球蛋白的发现及研究进展

经典免疫学认为，免疫球蛋白（Ig）由B淋巴细胞产生和分泌，分为膜型和分泌型，在细胞基本生命活动和体液免疫中发挥重要作用。然而，近些年研究发现，其他谱系来源的组织细胞也可进行Ig转录和表达，而且这种非B细胞来源的Ig分子在结构和功能上与经典Ig不同，其可变区呈现保守的重排模式，并且可能与肿瘤的发生发展密切相关。因此，非B细胞来源Ig分子的探索和研究具有重要的临床研究意义。     

小B细胞淋巴瘤中IgVH基因特点的研究进展

众所周知，免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）是B细胞中一种重要的分子，在正常B细胞发育成熟过程中免疫球蛋白重链（immunoglobulin heavy chain，IgH）发生重排，并在抗原驱动下经历体细胞超突变（somatichypermutation，SHM）生成特异性抗体，介导免疫反应。目前认为根据免疫球蛋白重链可变区（immunoglobulin heavy chain variable region，IgVH）序列的SHM状态可将B细胞归为3类：（1）生发中心（germinal center，GC）前来源，未发生SHM的B细胞；（2）GC来源，有SHM且突变持续进行的B细胞；（3）GC后来源，含稳定SHM的B细胞。上述三个阶段B细胞发生恶变时也产生具备各自特征的B细胞肿瘤。近年来人们还逐渐认识到，IgVn的SHM状态可成为识别淋巴瘤来源的标志。研究还发现不同的淋巴瘤所使用的VH基因家族存在着差别，有的淋巴瘤对特定的Vn基因家族有着特殊的偏好，即所谓Vn基因偏向性使用，这一分子遗传学上特征在淋巴瘤发病中的意义也值得深入研究。     

荧光定量PCR分析弥漫大B细胞淋巴瘤免疫球蛋白重链基因重排表达

背景与目的：大多数B细胞淋巴瘤患者综合治疗后可以达到完全缓解,但是一半以上的患者终究要复发.复发来源于体内残留的耐药淋巴瘤细胞,即微小残留病变.但临床上发现IgH基因重排阳性患者并非都出现复发或远处浸润.因此,推测阳性患者是否复发,可能与IgH基因重排的表达量有关.本研究探讨荧光染料标记的即时定量PCR方法检测弥漫大B细胞淋巴瘤免疫球蛋白重链基因（IgH）重排的可行性及临床意义.方法：44例DLBCL患者的57份新鲜骨髓标本用于检测IgH基因重排, Namalwa细胞系作阳性对照,U-937细胞系作阴性对照.β-actin 作内参照,SYBR Green荧光染料标记的实时荧光定量PCR方法分别检测IgH基因重排CDR III.结果：分析融解曲线可以确定IgH基因重排产物的特异性.荧光定量PCR检测IgH基因重排的阳性率63.2%.IgH/β-actin阳性表达量在0.01～4131.69,中位数0.42.Ⅰ/Ⅱ期患者IgH基因重排表达量中位数为0,Ⅲ、Ⅳ期患者IgH基因重排表达量中位数为0.35,经统计学检验,两组患者之间差异有显著性（P＝0.018）.LDH值高于正常组,IgH基因重排表达量为0.39,LDH值低于正常组,IgH基因重排表达量为0.01,经非参数检验,两组患者之间差异有显著性（P＝0.046）.结论：荧光染料标记的定量PCR方法可用于弥漫大B细胞淋巴瘤的骨髓微小残留病变的检测.检测骨髓IgH基因重排,可以协助分期.     

淋巴细胞白血病免疫表型与基因重排研究

采用系列单克隆抗体(McAbs)和聚合酶链反应(PCR)技术研究35例淋巴细胞白血病免疫表型与免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体(TCR)γ、δ基因重排。结果表明,20例表达不同分化阶段B细胞表面标记,其中18例发生IgH基因重排,8例TCRγ基因重排.2例TCR_δ基因缺失。8例表达不同分化阶段T细胞表面标记,均检测到TCRγ和、或TCR_δ基因重排,无IgH基因重排。3例同时表达T、B细胞表面抗原者均发生IgH和TCRγ基因双重重排。4例缺乏表面抗原表达者中3例发生TCRδ或TCRγ基因重排。2例完全缓解病例经PCR扩增证明存在残留白血病细胞。     

B细胞淋巴瘤的抗独特型免疫治疗

 引言随着对肿瘤免疫机制的不断了解 ,肿瘤的免疫治疗逐渐成为人们研究的热点。寻找能够有效激发机体免疫反应的肿瘤特异性抗原是进行免疫治疗的关键。B细胞淋巴瘤在此方面有着特殊的优势 ,表达于B细胞表面的免疫球蛋白 (Ig)可变区的独特型(idiotype ,Id)可作为肿瘤特异性抗原 ,诱导产生抗独特型抗体和 /或激活T细胞介导的细胞免疫 ,从而用于免疫治疗。本文将对B淋巴瘤的抗独特型免疫治疗作一简要综述。1　B细胞淋巴瘤的免疫学特点大多数B细胞肿瘤都是单个克隆的B细胞恶性扩张所致。肿瘤细胞表面表达的Ig分子的可变区具有其独特的构象 ,称为独特型 ,他们既可作为抗原识别受体 ,同时也可作为抗原被其特异性抗体识别。Ig编码基因的重排和体细胞突变决定了Ig具有多样性 ,使其成为每个B细胞克隆特有的标志。因此当发生某个B细胞克隆恶变后异常增生 ,其独特型就可作为肿瘤特异性抗原 ,通过诱导产生抗独特型的抗体和 /或激活T细胞介导的细胞免疫有可能达到治疗效果。以往对独特型的研究重点主要在其互补决定区 (complementaritydeterminingre gions ,CDR区 ) ,近年来 ,许多研究表明框架区(f...     

蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因转染对小鼠黑色素瘤B16F1细胞基因表达谱的影响

背景与目的:本实验室已证明蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(snake venom cystatin, sv-cystatin)具有抗肿瘤侵袭转移作用.为了进一步阐明其分子机制,本研究利用高通量的基因芯片技术探讨sv-cystatin基因转染对小鼠黑色素瘤细胞(B16F1)基因表达谱的影响.方法:分别将pcrDNA3.1/sv-cystatin及空载体pcDNA3.1转染B16Fl细胞,建立稳定转染的B16Fl/sv-cystatin及B16F1/pcDNA3.1细胞株,提取总mRNA.应用高通量的基因芯片技术检测差异表达基因,半定量RT-PCR法分别验证5个上调和5个下调的差异表达基因.结果:B16F1细胞经转染sv-cystatin后.共检测了1218个基因,其中有45个差异表达基因,21个基因表达上调(Ratio>3),24个基因表达下调(Ratio<0.5),这些基因的功能涉及细胞粘附迁移、细胞免疫调节、增殖分化与凋亡、基因转录和细胞内信号转导等方面.10个差异表达基因的RT-PCR验证结果与基因芯片分析结果相符.结论:Sv-cystatin不仅具有抑制细胞外基质的作用,而且还具有细胞免疫调节、增殖分化与凋亡、基因转录和细胞内信号转导等多种生物学功能.     

恶性淋巴瘤中易位的致癌基因之转录活性

恶性淋巴瘤(Burkitl lymphoma)有特异的染色体易位(t8;14,t8;22 t2;8),编码Ig 重链的基因位于14q 上,断裂点在恒定区与可变区之间.C-myc 基因位于8q 上.作者发现有些伯基特淋巴瘤细胞C-myc 基因从第8号染色体断裂与第14号染色体     

原发性胸腺结外边缘区黏膜相关B细胞淋巴瘤的临床病理分析

[目的]探讨原发性胸腺结外边缘区黏膜相关B细胞淋巴瘤的临床病理学特征、诊断及鉴别诊断.[方法]分析5例胸腺黏膜相关淋巴瘤的临床表现,对手术切除标本进行病理学和免疫组织化学(EnVision法)染色观察,并用PCR检测其中3例患者的免疫球蛋白重链(IgH)基因重排情况.[结果]5例均发生于成年女性,平均年龄50.4岁.其中3例既往有类风湿性关节炎病史,2例有干燥综合征病史.5例病例均行纵隔肿块切除,其中例4术后进行了化疗,目前所有病例随访均存活.大体均为囊实性肿块,光镜下胸腺正常结构消失,中心细胞样淋巴细胞弥漫浸润,并可见反应性淋巴滤泡形成.肿瘤内可见多个内衬上皮的囊腔形成,腔内可见大量红染无结构物质及胆固醇结晶.肿瘤性淋巴细胞浸润囊肿内衬上皮,形成明显的淋巴上皮病变.免疫组织化学检测显示,瘤细胞阳性表达CD20、CD79a、Bcl-2.而CK、CD3、CD5、CD23、CD10、Bcl-6、cyclinD1及TdT等标记均为阴性.3例PCR均检测出免疫球蛋白重链(IgH)基因克隆性重排.[结论]原发性胸腺结外边缘区黏膜相关B细胞淋巴瘤是一种非常少见的肿瘤,常发生在伴有自身免疫性疾病的成年女性中,大体上常呈囊实性,应与多房胸腺囊肿、胸腺淋巴组织增生及胸腺瘤等鉴别.     

慢性淋巴细胞白血病伴多发性骨髓瘤:共同克隆起源的证明

研究一例慢性 B 淋巴细胞白血病(CLL)伴多发性骨髓瘤(MM)的患者。用 FACS 预先分离 CLL 和 MM 的细胞。免疫球蛋白的重链基因的免疫球蛋白的决定互补区Ⅲ(CDRⅢ)DNA 序列分析显示在 CLL 和 MM 细胞群有相同的基因重排。本研究证明 CLL和 MM 均有共同的克隆起源。     

抗CEA人鼠嵌合F(ah’)_2在昆虫细胞中的表达

癌胚抗原(CEA)是一种非特异性肿瘤标记(TW).在结肠癌,胃癌,肺癌,乳腺癌,宫颈癌等许多恶性肿瘤中均有较高表达.利用抗CEA单克隆抗体进行放免显像研究近年来发展较快,但都存在着放射性本底较高的问题,影响了显像结果.F(ab’)_2.由于分子量小,没有Fc段,从血液中清除较快,可减少非特异结合,而因显像效果较好,但仍然受HAMA反应的影响.为此,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统在SF9细胞中表达了抗CEA人鼠嵌合F(ah’)_2,以利于临床肿瘤的放免显像.提取一株表达完整抗CEA嵌合抗体的CHO细胞的总RNA,分别用与人轻链k恒区基因及α1重链CH2基因互补的3’引物进行反转录,再以CDNA为模板,5’引物相同,都与鼠重链前导肽互补,3’引物与反转录相同分别进行PCR扩增,得到含有鼠重链前导肽,轻链可变区,完整的k恒区的680bp的轻链基因和含有鼠重链前导肽,重链可变区,     

Rb基因导入对膀胱癌细胞生长的抑制作用

由于免疫原性,鼠源性单克隆抗体在人体疾病治疗方面受到限制,运用基因重组技术,将抗体轻链、重链可变区基因连接,构建单链Fv(ScFv)基因.表达制备ScFv片段,由于其分子小,免疫原性弱,有潜在应用前景.本实验将获得的抗人肺癌单克隆抗体轻重链可变区基因,通过Linker基因序列连接并克隆至pIg20表达载体,表达制备抗人肺癌scFv融合蛋白.现报道如下.l 材料与方法1.1 抗人肺癌单克隆抗体3D_3(McAb3D_3)重链可变区基因(VH)克隆至表达载体pIg20,以SmaⅠ,XbaⅠ分别双酶切VH及pIg20质粒,以粘末端方式,将SmaⅠ-VH-Xba片段连接到pIg20载体,连接产物电穿孔法转染BL21菌,筛选鉴定.阳性子命名为pIgVH.1.2 将McAb3D_3轻链可变区基因(VL)克隆至pIgVH,以BgLⅡ、NcoⅠ分别消化中pIgVH及VL,以粘