TPX2基因在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖凋亡的影响和机制研究

目的探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)基因在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖凋亡的影响和机制。方法 RT-PCR及Western blotting检测胃癌组织及癌旁组织中TPX2 mRNA和蛋白表达;将NC-siRNA、TPX2-siRNA1、TPX2-siRNA2、TPX2-siRNA3转染人胃癌SGC-7901细胞,未转染任何siRNA作为对照组,Western blotting检测转染后各组细胞中TPX2蛋白表达;CCK8实验检测人胃癌SGC-7901细胞转染12、24、48 h后细胞增殖情况;细胞转染48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blotting检测PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。结果胃癌组织中TPX2 mRNA和蛋白表达均显著高于癌旁组织(P0.01);NC-siRNA组TPX2蛋白表达与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);TPX2-siRNA1、TPX2-siRNA2、TPX2-siRNA3组的TPX2蛋白表达均显著低于对照组(P0.01),TPX2-siRNA3组的抑制效果更明显,选择作为后续研究;NC-siRNA组在12、24、48 h后的细胞存活率与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),TPX2-siRNA组在12、24、48 h后的细胞存活率均显著低于对照组,且随着时间延长细胞存活率降低(P0.01);NC-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),TPX2-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达均显著高于对照组,PI3K、p-AKT蛋白表达显著低于对照组(P0.01)。结论 TPX2在胃癌中高表达,沉默TPX2的表达能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖和促进细胞凋亡,其机制可能与PT3K/AKT信号通路的调控有关。     

DEK基因在肝癌中的表达及靶向抑制其表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨DEK基因在肝癌中的表达及RNA干扰抑制其表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法以人正常肝细胞HL-7702作为对照,RT-PCR检测人肝癌HepG2、Huh-7、SMMC-7721、SNU-475细胞中DEK mRNA表达;DEK-siRNA转染HepG2细胞,同时转染阴性对照和空白对照,转染48 h后Western blotting检测各组细胞中DEK、Cleaved caspase 3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况。结果各个肝癌细胞中DEK mRNA表达均显著高于正常细胞,差异有统计学意义(P0.01);DEK基因在HepG2细胞中表达最高,选择作为后续研究对象;转染DEK-siRNA后DEK蛋白表达显著降低;DEK-siRNA组细胞存活率及β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于空白对照组和阴性对照组,细胞凋亡率和Cleaved caspase 3蛋白表达显著高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P0.01)。结论抑制肝癌HepG2细胞中DEK基因可降低癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的调控有关。     

靶向抑制胃癌细胞中TROP2基因的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨RNA干扰肿瘤相关钙信号传导因子2(TROP2)基因的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法以人胃黏膜正常细胞GES-1作为对照,RT-PCR检测人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞中TROP2 mRNA表达;TROP2 siRNA、Control siRNA转染SGC-7901细胞,不作任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后Western blotting检测TROP2、Ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况。结果 TROP2 mRNA在人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞表达均显著高于GES-1细胞(P0.01),TROP2基因在SGC-7901细胞中的表达最高,选择作为后续的研究对象;转染TROP2 siRNA后TROP2蛋白表达显著降低(P0.01);与对照组及Control-siRNA组比较,TROP2-siRNA组细胞存活率及Ki67、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P0.01)。结论RNA干扰抑制TROP2基因的表达可降低胃癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制是下调Wnt/β-catenin信号通路。     

干扰IGF-1R的表达对口腔鳞状细胞癌增殖、分化及凋亡的影响研究

目的探讨干扰IGF-1R的表达对口腔鳞状细胞癌增殖、分化及凋亡的影响。方法 Western blot检测IGF-1R在口腔鳞状细胞癌中的表达;将NC-siRNA、IGF-1R-siRNA转染口腔鳞状细胞癌CAL27细胞,未转染任何siRNA作为对照组,细胞转染48 h后,Western blot检测IGF-1R、Id-1、c-myc、Cleaved caspase3、p-AKT、p-m TOR蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 IGF-1R在口腔鳞状细胞癌中的表达显著高于癌旁组织(P0.01);IGF-1R-siRNA组细胞中IGF-1R蛋白表达显著低于对照组(P0.01);NC-siRNA组细胞存活率、细胞凋亡率及Id-1、c-myc、Cleaved caspase3、p-AKT、p-m TOR蛋白表达与对照组差异不显著(P0.05),IGF-1R-siRNA组细胞存活率及Id-1、c-myc、p-AKT、p-m TOR蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P0.01)。结论 IGF-1R在口腔鳞状细胞癌中高表达,抑制IGF-1R的表达能显著降低细胞增殖及分化,并促进细胞凋亡,其机制与AKT/m TOR信号通路调控有关。     

Wnt信号通路介导CIP2A沉默诱导肺癌细胞凋亡

目的探讨Wnt信号通路在沉默蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(CIP2A)对肺癌细胞凋亡影响中的作用。方法以H1299细胞为探讨对象,用CIP2A shRNA慢病毒感染后,Realtime PCR和Western印迹检测沉默效果。以Western印迹检测沉默CIP2A后的肺癌细胞中β-catenin、c-myc蛋白表达水平。用Wnt信号通路激活剂处理沉默CIP2A后的肺癌细胞,噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Cleaved Caspase-9、β-catenin、c-myc蛋白水平。结论 CIP2A shRNA慢病毒感染显著降低肺癌细胞中CIP2A表达水平。沉默CIP2A后的肺癌细胞增殖活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平显著升高,β-catenin、c-myc蛋白水平显著降低(P0.05)。Wnt信号通路激活剂可以逆转沉默CIP2A对肺癌细胞增殖抑制、凋亡促进作用,降低细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平,升高细胞中β-catenin、c-myc蛋白水平。结论 Wnt信号通路参与介导沉默CIP2A对肺癌细胞凋亡诱导作用。     

LATS2基因通过Wnt信号通路对H9C2心肌细胞保护的作用机制研究

目的探讨大肿瘤抑制因子2(LATS2)基因对缺氧复氧(H/R)诱导的H9C2心肌细胞凋亡及Wnt信号通路的影响。方法 LATS2 siRNA或LATS2过表达质粒转染H9C2心肌细胞,并分别转染阴性对照siRNA及空载体(vector),转染48 h后,通过Western blotting检测转染后的各组细胞中LATS2的蛋白表达;建立H/R模型,细胞分为正常对照组(Control组)、单纯缺氧复氧组(H/R组)、H/R+LATS2-siRNA组和H/R+pcDNA3.1-LATS2组,流式细胞术检测各组细胞凋亡率及活性氧(ROS)含量;Western blotting检测凋亡蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)及Wnt信号通路β-连环蛋白(β-catenin)和c-myc的蛋白表达。结果 siRNA组和PcDNA3.1组的LATS2蛋白表达与Control组差异无统计学意义(P0.05),而LATS2-siRNA组LATS2的蛋白表达显著低于Control组(P0.05),pcDNA3.1-LATS2组LATS2的蛋白表达显著高于Control组(P0.05);与Control组比较,H/R组细胞凋亡率、ROS含量及cleaved caspase3、β-catenin和c-myc的蛋白表达均显著升高(P0.05),与H/R组比较,H/R+LATS2-siRNA组细胞凋亡率、ROS含量及cleaved caspase3、β-catenin和c-myc的蛋白表达均显著升高,H/R+pcDNA3.1-LATS2组细胞凋亡率、ROS含量及cleaved caspase3、β-catenin和c-myc的蛋白表达均显著降低(P0.05)。结论抑制LATS2基因表达可诱导心肌细胞凋亡及上调Wnt信号通路,而抑制LATS2基因表达反之。     

沉默转化生长因子β1表达与抑制肾小管上皮细胞(HK-2)Notch信号通路的相关性研究

目的探讨沉默转化生长因子β1(TGF-β1)表达与抑制肾小管上皮(HK-2)细胞Notch信号通路的相关性。方法检测TGF-β1在DN的表达;TGF-β1小干扰RNA(TGF-β1-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染HK-2,空脂质体转染细胞为对照,检测各组TGF-β1;将HK-2分为低糖、高糖、siRNA-NC+高糖和TGF-β1-siRNA组+高糖组,检测细胞存活,凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达。结果 TGF-β1在DN表达高于正常肾组织(P0.05);TGF-β1-siRNA组TGF-β1表达低于对照组(P0.05);高糖组细胞存活低于低糖组,凋亡率、Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1高于低糖组(P0.05),siRNA-NC+高糖组细胞存活、凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达与高糖组相当(P0.05);TGF-β1-siRNA+高糖组细胞存活高于高糖组,凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1低于高糖组(P0.05)。加入GSI细胞存活、凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达与沉默TGF-β1一致。结论 TGF-β1在DN高表达,高糖能抑制HK-2的存活,促进凋亡,沉默TGF-β1能减弱这种效果,可能与Notch信号通路调控有关。     

白细胞介素-8基因在鼻息肉组织中的表达及对鼻黏膜上皮细胞凋亡的影响

目的探讨白细胞介素(IL)-8基因在鼻息肉组织中的表达及对鼻黏膜上皮细胞凋亡的影响。方法 Western印迹检测IL-8在鼻息肉组织及下鼻甲组织中的表达;从鼻息肉组织中分离培养人鼻黏膜上皮细胞(HNEC),将IL-8小干扰RNA(IL-8-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染细胞,以空脂质体转染的细胞作为对照组,Western印迹检测转染效果;各组转染细胞培养48 h后,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Western印迹检测酶切caspase3蛋白表达。结果 IL-8在鼻息肉组织中的表达显著高于下鼻甲组织(P<0.01);siRNA-NC组与对照组差异无统计学意义(P>0.05),IL-8-siRNA组显著低于对照组(P<0.01);siRNA-NC组细胞凋亡率及酶切caspase3蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),IL-8-siRNA组均显著高于对照组(P<0.01)。结论 IL-8在鼻息肉组织中高表达,沉默IL-8的表达能通过上调酶切caspase3蛋白表达促进HNEC凋亡。     

维生素K2调控Wnt/β-catenin信号对肝癌细胞侵袭、凋亡的影响及机制研究

目的探讨维生素K2调控Wnt/β-catenin信号对肝癌细胞侵袭、凋亡的影响及机制。方法 5、10、20、40、80μmol/L的维生素K2处理人肝癌SMMC-7721细胞24、48、72 h后,CCK8实验检测细胞的增殖情况;22μmol/L的维生素K2处理细胞48 h后,Transwell小室检测细胞的侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blotting检测MMP-2、MMP-9、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达。结果 10、20、40、80μmol/L的维生素K2处理肝癌细胞不同时间均可显著抑制癌细胞的增殖,具有浓度依赖性和时间依赖性(P0.01)。根据IC50值选择22μmol/L的维生素K2为研究对象,维生素K2组细胞的凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达均显著高于对照组,细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达均显著低于对照组(P0.01)。结论维生素K2可通过下调Wnt/β-catenin信号抑制肝癌细胞的增殖及侵袭能力,诱导细胞凋亡。     

Six1基因在肺癌组织表达水平及RNA干扰抑制其表达后对肺癌细胞生物学特性的影响

目的探讨Six1基因在肺癌组织表达及抑制其表达后对肺癌细胞增殖凋亡的影响。方法提取肺癌及癌旁组织蛋白,Western印迹检测Six1的表达; Six1-siRNA转染人肺癌A549细胞,分为空白组和阴性对照组(NC组)、Six1-siRNA组,转染48 h后通过Western印迹检测各组细胞Six1的表达; CCK8检测Six1-siRNA转染A549细胞24～72 h的细胞增殖;流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡率; Western印迹检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)家族Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Notch1信号通路Notch1和Hes1的蛋白表达。结果 Six1在肺癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0. 05); Six1-siRNA转染能明显降低A549细胞Six1的表达;与空白组比较,Six1-siRNA组细胞24～72 h的细胞增殖均显著降低,在48 h的细胞凋亡率显著升高,PCNA、Notch1和Hes1蛋白表达均显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P<0. 05)。结论 Six1在肺癌组织中高表达,通过RNA干扰抑制其表达可通过下调Notch1信号通路降低肺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,对细胞增殖凋亡的影响方式是下调PCNA和上调Bax蛋白表达。     

prohibitin基因在胃癌中的表达及诱导胃癌细胞凋亡的机制研究

[目的]探讨siRNA介导抗增殖蛋白prohibitin(PHB)基因沉默对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制。[方法]Western blot法检测胃癌组织及相应的癌旁组织中prohibitin的蛋白表达;NC-siRNA和prohibitin-siRNA转染人胃癌SGC-7901细胞,未转染任何的siRNA作为空白对照组,48h后检测各组细胞中prohibitin的蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Ki67、PCNA、Cleaved caspase3、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。[结果]prohibitin在胃癌组织中的蛋白表达显著高于癌旁组织(P0.01),转染prohibitin-siRNA后能显著降低prohibitin的蛋白表达;与对照组及NC-siRNA组比较,prohibitin-siRNA组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase3蛋白表达显著上调,ki67、PCNA、PI3K、p-AKT蛋白表达显著下调(P0.01)。[结论]靶向prohibitin-siRNA干扰可有效的降低胃癌SGC-7901细胞中prohibitin的表达,抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制与PI3K/AKT信号通路的调控有关。     

Fgl2基因对H9C2心肌细胞凋亡的影响

目的探讨纤维蛋白原样蛋白(Fgl)2基因对H9C2心肌细胞凋亡的影响及机制。方法空白试剂、阴性病毒和Fgl2 siRNA慢病毒感染H9C2心肌细胞,分别为空白对照组、阴性对照组、Fgl2-siRNA组,48 h后收集细胞,Western印迹检测各组细胞中Fgl2的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western印迹检测酶切caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达。结果空白对照组和阴性对照组Fgl2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),Fgl2-siRNA组Fgl2蛋白表达显著低于空白对照组(P<0.01);与空白对照组及阴性对照组比较,Fgl2-siRNA组H9C2细胞凋亡明显降低,酶切caspase3蛋白表达显著下调,Notch1、Hes1蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论沉默Fgl2基因的表达可有效抑制H9C2心肌细胞凋亡,其机制与下调酶切caspase3蛋白表达、激活Notch1信号通路有关。     

ATF5基因siRNA对肺癌细胞凋亡及化疗增敏的机制

目的探讨转录激活因子(ATF5)基因siRNA对肺癌细胞活力、凋亡及化疗敏感性的影响。方法将ATF5的特异性siRNA(ATF5-siRNA组)转染人肺癌A549细胞,同时转染阴性对照siRNA(阴性组),并设置空白组。采用Western印迹检测ATF5表达沉默效果。噻唑蓝(MTT)、流式细胞术、Western印迹分别检测沉默ATF5表达后的细胞活力、凋亡率、紫杉醇敏感性及相关蛋白表达。结果 ATF5-siRNA组ATF5表达显著低于空白组(P0.05)。ATF5-siRNA组A549细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达明显降低,Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved caspase)3蛋白表达显著升高,细胞对紫杉醇敏感性显著升高,多药耐受相关蛋白基因(MRP)1蛋白表达明显降低,与空白组比较差异均具有统计学意义(P0.05)。结论利用siRNA沉默ATF5基因表达可抑制A549细胞活力,诱导细胞凋亡,增强紫杉醇敏感性,机制可能与下调PCNA和MRP1表达,上调Bax和cleaved caspase3表达有关。     

FABP3基因对心肌细胞凋亡的影响

目的脂肪酸结合蛋白(FABP)3基因对心肌细胞凋亡的影响及机制。方法将H9C2心肌细胞分为空白对照组、阴性对照组、FABP3沉默组、FABP3沉默+空质粒组及FABP3沉默+过表达人FABP3组,转染72 h后Western印迹检测各组细胞中FABP3的蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western印迹检测Cleaved caspase3、Bcl-2蛋白表达。结果空白对照组与阴性对照组及FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组之间FABP3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组FABP3的蛋白表达显著低于空白对照组与阴性对照组,FABP3沉默+过表达人FABP3组FABP3的蛋白表达显著高于FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组(P<0.01);FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于空白对照组与阴性对照组,Bcl-2蛋白表达显著低于空白对照组与阴性对照组FABP3(P<0.01);沉默+过表达人FABP3组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著低于FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组,Bcl-2蛋白表达显著高于FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组(P<0.01)。结论沉默FABP3的表达可促进H9C2心肌细胞凋亡,过表达则抑制细胞凋亡,其机制与调节Cleaved caspase3及Bcl-2蛋白表达有关。     

miR-136调控FDZ4通过WNT信号通路抑制非小细胞肺癌的增殖和诱导凋亡

目的探讨微小RNA-136(miR-136)是否靶向调控FDZ4及其是否通过调控WNT信号通路进而抑制非小细胞肺癌的增殖及促进细胞凋亡。方法运用qRT-PCR与Western印迹分别检测miR-136和FDZ4在不同非小细胞肺癌细胞株及正常肺上皮细胞中的表达;将miR-136 mimic、miR-con分别转染SPC-A-1细胞,分别将pcDNA-FDZ4、pcDNA与miR-136 mimic共转染于SPC-A-1细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)与流式细胞仪分别检测SPC-A-1细胞的增殖与凋亡。双荧光素酶报告基因检测miR-136与FDZ4的相互作用。采用Western印迹法检测SPC-A-1细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-9、Bax、Bcl-2及WNT信号通路相关蛋白表达。结果 qRT-PCR结果显示,miR-136在非小细胞肺癌细胞中的表达均明显低于正常肺上皮细胞,而FDZ4 mRNA表达显著上调,其中以SPC-A-1细胞变化最为明显(均P0.05);MTT结果显示,转染miR-136 mimic后SPC-A-1细胞OD值与miR-con组比较明显减小,而共转染pcDNA-FDZ4后SPC-A-1细胞OD值明显增加(均P0.05);流式细胞仪检测结果显示,转染miR-136 mimic后SPC-A-1细胞凋亡率显著高于miR-con组,而共转染pcDNA-FDZ4后细胞凋亡率显著降低(均P0.05);miR-136能与FDZ4的3′UTR特异性结合,并可调控FDZ4的表达活性;Western印迹结果显示,不同非小细胞肺癌细胞中FDZ4表达均明显高于正常肺上皮细胞,miR-136过表达后CDK4、Cyclin D1、Bcl-2、β-catenin、c-Myc表达明显下调,而Caspase-9、Bax、GSK-3β表达明显上调(均P0.05),共转染pcDNA-FDZ4后促进CDK4、Cyclin D1、Bcl-2、β-catenin、c-Myc表达,抑制Caspase-9、Bax、GSK-3β表达。结论 miR-136可调控FDZ4并可能通过抑制WNT信号通路活化进而抑制非小细胞肺癌细胞增殖与诱导细胞凋亡。     

TP63对非小细胞肺癌细胞吉非替尼耐药性及DSC3/DSG3基因表达的影响

目的 探讨肿瘤蛋白(TP)63对非小细胞肺癌细胞吉非替尼耐药性及桥粒芯胶蛋白(DSC)3/桥粒芯糖蛋白(DSG)3的影响。方法 体外培养人非小细胞肺癌吉非替尼敏感细胞株PC9、吉非替尼耐药细胞株PC9/GR,将PC9/GR细胞随机分为对照组、TP63-siRNA组(转染TP63-siRNA)和NC-siRNA组(转染NC-siRNA),用细胞计数试剂盒(CCK)-8法检测转染后细胞吉非替尼半数抑制浓度(IC50)和细胞增殖情况；流式细胞术检测PC9/GR细胞凋亡情况；划痕实验检测细胞迁移；Transwell小室法检测细胞侵袭；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞TP63、DSG3、DSC3 mRNA表达；蛋白印迹分析法检测各组细胞TP63、DSG3、DSC3蛋白表达。结果 与PC9细胞相比，耐药细胞PC9/GR中TP63 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与对照组和NC-siRNA组相比，TP63-siRNA组PC9/GR细胞IC50值，细胞增殖、迁移、侵袭能力，TP63、DSG3、DSC3 mRNA及蛋白表达显著下降，细胞凋亡率显著升高(P<0...     

RNA干扰TAGLN2基因对TGF-β1诱导心肌细胞凋亡的影响

目的探讨RNA干扰TAGLN2基因对转化生长因子(TGF)-β1诱导心肌细胞凋亡的影响及机制。方法 H9c2心肌细胞分为空白对照组、NC组、TGF-β1组和TGF-β1+si-TAGLN2组,其中siRNA的转染参照Lipofectamine~(TM)2000说明,Western印迹检测TAGLN2、p53、裂解的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved caspase)3、B细胞淋巴瘤因子(Bcl)-2、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、核因子(NF)-κB p65和IκB-α的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)水平。结果转染si-TAGLN2的H9c2心肌细胞TAGLN2蛋白表达显著低于空白对照组(P0.05)。与NC组比较,TGF-β1组细胞凋亡率、ROS水平及p53、 Cleaved caspase3和NF-κB p65蛋白表达均显著升高,Bcl-2、PI3K、 p-AKT、和IκB-α蛋白表达均显著降低(P0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1+si-TAGLN2组细胞凋亡率、ROS水平及p53、 Cleaved caspase3和NF-κB p65蛋白表达均显著降低,Bcl-2、PI3K、 p-AKT、和IκB-α的蛋白表达均显著升高(P0.05)。结论 TAGLN2基因表达抑制可降低由TGF-β1诱导的心肌细胞凋亡,机制可能与降低细胞内ROS水平、激活PI3K/AKT信号和抑制NF-κB信号有关。     

干预Bcl-2基因表达对骨肉瘤细胞侵袭、迁移能力的影响

目的探究干扰B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2基因表达对骨肉瘤细胞侵袭、迁移的影响及可能的作用机制。方法采用siRNA特异性下调Bcl-2基因表达,实验分为空白组、MG-63-NC组(转染siRNA-NC)和MG-63-siRNA组(转染siRNA-Bcl-2)。Transwell法检测细胞迁移、侵袭能力,Western印迹检测细胞中Bcl-2、β-连环蛋白(catenin)、c-Myc蛋白的表达量。结果 MG-63-siRNA组Bcl-2蛋白表达量显著低于空白组(P0.05);MG-63-siRNA组细胞侵袭、迁移能力显著抑制(P0.05);与空白组相比,MG-63-siRNA组细胞中β-catenin、c-Myc蛋白表达显著下调(P0.05)。结论干扰Bcl-2抑制骨肉瘤MG-63细胞的迁移和侵袭,可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路介导的下游靶蛋白c-Myc的表达。     

下调Jagged1表达对骨髓瘤细胞增殖的抑制作用

目的探讨下调Jagged1表达对骨髓瘤细胞增殖的抑制作用及其机制。方法将培养的RPMI8226细胞随机分为对照组(不做转染)、siRNA control组(转染negative control)和siRNA Jagged1组(转染Jagged1-siRNA),以RT-PCR检测各组细胞中Jagged1 mRNA表达水平,CCK-8法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪检测细胞的周期分布和凋亡率;Western印迹检测细胞中Jagged1、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2和酶切半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3蛋白的表达情况。结果与对照组比较,siRNA Jagged1组细胞中Jagged1 mRNA和蛋白表达水平、细胞增殖能力、S期细胞比例、Cyclin D1蛋白和Bcl-2蛋白表达水平显著降低,G0/G1期细胞比例、凋亡率和酶切caspase-3蛋白表达显著升高(P0.05);而siRNA control组细胞中各指标变化差异无统计学意义(P0.05)。结论下调Jagged1表达可抑制骨髓瘤RPMI8226细胞增殖,阻滞细胞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与下调Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达及上调酶切caspase-3蛋白表达有关。     

上调FBP1表达对胃癌细胞生长的抑制作用

目的探讨上调果糖-1,6-二磷酸酶1(fructose-1,6-bisphosphatase 1,FBP1)表达对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法以实时定量PCR和Western blotting检测胃癌BGC-823、SGC-7901细胞中FBP1 mRNA和蛋白的表达;将培养的BGC-823细胞随机分为对照组(未转染)、阴性组(转染pc DNA3.1质粒)和实验组(转染pc DNA3.1-Flag-FBP1质粒),以实时定量PCR检测FBP1 mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blotting检测FBP1、Cyclin D1、c-Myc和Cleaved caspase-3蛋白表达。结果与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比,胃癌BGC-823、SGC-7901细胞中FBP1蛋白及mRNA的相对表达水平均显著降低,且BGC-823细胞较SGC-7901细胞下降更为明显;转染后,与对照组相比,实验组细胞中FBP1蛋白及mRNA、细胞的增殖能力和Cyclin D1、c-Myc蛋白表达水平均显著降低,细胞凋亡能力和Cleaved caspase-3蛋白表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P0.05);阴性组与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 FBP1在胃癌细胞中低表达,上调其表达能够抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与上调Cleaved caspase-3蛋白和下调Cyclin D1、c-Myc蛋白表达有关。