PAX-5在Barrett食管、食管腺癌中的表达及其对食管腺癌细胞侵袭和转移的影响

目的检测配对盒基因-5(paired box,PAX-5)在Barrett食管、食管腺癌组织和食管腺癌细胞系中的相对表达,及其对食管腺癌细胞转移的作用和机制。方法以食管腺癌细胞、正常食管组织、Barrett食管和食管腺癌组织为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PAX-5 mRNA在食管腺癌细胞系中表达;qRT-PCR和免疫蛋白印迹实验验证PAX-5 mRNA和蛋白在组织中的相对表达。采用表达最低的OE33为研究对象,分别转染pcDNA3.1(+)-Flag-PAX-5质粒(实验组)和pcDNA3.1(+)-Flag-Vector质粒(对照组)至OE33细胞系,利用Transwell迁移和侵袭实验检测PAX-5的迁移和侵袭的影响,并用qRT-PCR和免疫蛋白印迹验证PAX-5基因迁移和侵袭的分子机制。结果食管腺癌中PAX-5 mRNA和蛋白的表达显著低于Barrett食管和正常食管组织(P0.001),PAX-5 mRNA在食管腺癌细胞系中表达下调(P0.001);Transwell实验研究显示:与对照组相比,实验组迁移和侵袭能力明显受到抑制;过表达PAX-5抑制上皮-间质转化(EMT)相关基因的表达(P0.001)。结论 PAX-5在食管腺癌中表达下调,可能作为潜在的抑癌基因参与食管腺癌的进程。     

干扰Wnt1基因表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响

目的探讨干扰Wnt1基因表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移的影响及可能的作用机制。方法采用RNA干扰技术下调Wnt1基因表达,实验分为对照组(未做处理的细胞)、shRNA NC组(转染siRNA-NC)、shRNA Wnt1组(转染siRNA-Wnt1)。细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell法检测细胞的侵袭能力,免疫印迹实验(Western印迹)观察细胞中Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素(cyclin)-D1蛋白的表达量。结果转染siRNA-Wnt1到MCF-7细胞后,Wnt1蛋白的表达量受到显著抑制(P0.05);细胞的侵袭、迁移能力受到显著抑制(P0.05);β-catenin、cyclin-D1蛋白的表达下调(P0.05)。结论干扰Wnt1基因表达可以抑制MCF-7细胞的迁移和侵袭,其机制可能与Wnt1/β-catenin信号通路及其下游靶基因cyclin-D1蛋白表达下调有关。     

siRNA介导COX-2基因沉默对大肠癌LoVo细胞侵袭及上皮间质转化的影响

目的探讨靶向沉默环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达对大肠癌LoVo细胞侵袭能力及上皮间质转化的影响。方法在体外COX-2 siRNA转染大肠癌LoVo细胞,RT-PCR及免疫印迹法验证转染后COX-2 mRNA及蛋白表达,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的改变;免疫印迹法检测EMT标志物(E-cadherin、Vimentin、Fibronectin)、ERK/MAPK和PI3K/Akt通路相关蛋白(Akt、p-Akt、p-GSK-3β、ERK、p-ERK)及MMP-9表达的变化情况。结果 COX-2 siRNA转染大肠癌LoVo细胞后,COX-2 mRNA及蛋白表达下调,同时细胞侵袭能力降低;上皮标记物E-cadherin表达上调,同时间叶标记物Vimentin和Fibronectin表达下调;细胞总的ERK、Akt蛋白表达水平无明显改变,而p-ERK、p-Akt表达降低,同时,Akt下游效应蛋白p-GSK-3β表达也下调; MMP-9表达下调。结论 COX-2 siRNA转染有效抑制了大肠癌LoVo细胞COX-2表达,并可能通过阻滞细胞ERK/MAPK和PI3K/Akt通路,进而抑制EMT,下调MMP-9表达,降低细胞侵袭能力。     

胃泌素对胃癌细胞EMT和Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响

目的探讨高表达胃泌素(gastrin)对胃癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响及可能机制。方法用gastrin过表达质粒pcDNA3-gastrin及空载体pcDNA3.1转染胃癌细胞SGC-7901、MKN45,48 h后收集细胞蛋白,Western印迹检测鉴定gastrin表达,检测EMT相关标志物E-钙黏蛋白(cadherin)、N-cadherin、Snail及wnt/β-连环蛋白(catenin)信号通路相关基因wnt3α、β-catenin、c-myc的蛋白表达变化。结果在SGC-7901、MKN45细胞中成功过表达gastrin。与pcDNA3.1空载体转染组相比,pcDNA3.1-gastrin转染SGC-7901、MKN45细胞中上皮标志蛋白E-cadherin表达下调,间质标志蛋白N-cadherin、Snail表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);同时Wnt/β-catenin通路蛋白相关蛋白wnt3α、β-catenin及其下游基因c-myc的表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达gastrin能够激活Wnt/β-catenin信号通路和促进胃癌细胞SGC-7901和MKN45发生EMT。     

下调GPC-3基因转录对肝癌细胞侵袭及血管新生的抑制作用

目的:观察以短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)下调磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(glypican-3,GPC-3)基因转录,对抑制肝癌MHCC-97H细胞侵袭和血管新生的作用与机制.方法:将对GPC-3特异性shRNA转染肝癌MHCC-97H细胞,以荧光定量PCR和Western blot分析GPC-3 mRNA及蛋白表达;以5-ethynyl-2'-deoxyuridine(EdU)和Transwell法等评估细胞增殖、迁移和侵袭能力.结果:shRNA1转染MHCC-97H细胞,GPC-3在mRNA水平下降75.6%(t=15.473,P0.001),蛋白表达同步下调;干预GPC-3基因转录,可抑制肝癌细胞增殖,细胞迁移与侵袭能力减低,与抗癌药物具协同作用;Wnt/β-catenin中β-catenin表达下调67.7%;Hedgehogs通路中脑胶质瘤相关癌基因1(glioma-associated oncogene 1,Gli1)表达上调53.3%;shRNA1转染72 h细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达下调54.2%(t=46.746,P0.001).结论:shRNA下调GPC-3转录,经Wnt/β-catenin和Hh信号通路抑制癌细胞迁移、侵袭和血管新生,为肝癌基因治疗潜在的分子靶目标.     

紫花牡荆素对宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化、侵袭和迁移作用的影响

目的 探讨紫花牡荆素(CAS)对宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移作用的影响及其可能机制.方法 将体外培养的HeLa细胞用不同浓度的人转化生长因子β1处理,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;用HE染色法观察不同浓度CAS对间质转化的HeLa细胞形态学的影响;用Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力;用Westem blot分析细胞E-cadherin、N-cadherin和Twist蛋白表达情况.结果 CAS能抑制HeLa细胞向间质细胞形态转化,并下调N-cadherin蛋白的表达及上调E-cadherin蛋白的表达;与对照组相比,CAS作用72 h后能抑制宫颈癌HeLa细胞的侵袭和迁移能力,并下调Twist蛋白的表达.结论 CAS能抑制宫颈癌HeLa细胞EMT、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与其下调Twist蛋白表达相关.     

以MNNG刺激GES-1细胞构建上皮间充质化细胞模型

[目的]探究N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基(N-methy-N’-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)刺激胃黏膜上皮细胞GES-1构建上皮间充质化(EMT)细胞模型及其机制。[方法]用MNNG不同的浓度梯度处理GES-1细胞,光学显微镜观察细胞形态变化;CCK8检测MNNG体外处理GES-1后MNNG对GES-1细胞增殖的影响;Transwell检测细胞的迁移和侵袭能力;实时荧光定量PCR法和Western印迹法检测MNNG刺激GES-1细胞前后与EMT相关的钙粘蛋白(N-cadherin)和转录因子(Snail,Twist)的mRNA及蛋白水平的表达。RT-PCR检测STAT3抑制剂WP1066组与MNNG处理组N-cadherin及Twist的mRNA的变化,同时用Western印迹法检测STAT3/Snail信号通路中p-STAT3、STAT3及Snail的蛋白水平的变化。[结果]MNNG刺激胃黏膜上皮细胞GES-1的EMT化的最佳浓度为0.4μmol/L;刺激后的GES-1细胞变形,边界模糊,并呈岛样生长;最佳浓度的MNNG能明显促进GES-1细胞的增殖、迁移和侵袭;细胞内N-cadherin、Snail、Twist的mRNA表达及蛋白表达明显上调(P0.05),STAT3和P-STAT3的蛋白表达亦上调;STAT3抑制剂WP1066处理后P-STAT3及Snail蛋白表达均下调,N-cadherin及Twist的mRNA水平亦明显下调(P0.05)。[结论]MNNG可能通过STAT3/Snail信号通路刺激GES-1细胞,增加与EMT相关蛋白(N-cadherin)及转录因子(Snail,Twist)mRNA和蛋白的表达,成功构建了体外人胃黏膜细胞上皮间充质化模型。     

下调KDM1A基因对结直肠癌细胞增殖、侵袭及AKT信号通路的影响

目的探讨赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(KDM1A)对结直肠癌细胞增殖侵袭及AKT信号通路的影响。方法采用LipofectamineTM2000转染试剂将si-KDM1A转染至结直肠癌HCT15细胞中,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞的周期变化,Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力,RT-PCR检测细胞中KDM1A mRNA的表达,Western blotting检测KDM1A蛋白和AKT信号通路相关蛋白p21、Cyclin D1、MMP-2和p-AKT的表达。结果转染si-KDM1A后,HCT15细胞中KDM1A mRNA、KDM1A、Cyclin D1、MMP-2和p-AKT蛋白表达均显著降低,而p21蛋白表达显著升高;细胞的增殖能力和侵袭能力明显减弱;细胞在G1期所占比例明显增加,而在S期和G2期明显减少。结论下调KDM1A基因可抑制结直肠癌HCT15细胞的增殖、侵袭能力,其分子机制可能与抑制AKT信号通路的活化有关。     

miR-378c靶向AKT1调控骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的机制

目的探讨miR-378c靶向AKT1对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹法检测正常软骨组织和骨关节炎软骨组织中miR-378c和磷酸化(p)-蛋白激酶B(AKT)1蛋白的表达。构建抑制miR-378c表达的HC-OA细胞株,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测p-AKT1、细胞周期素(Cyclin)D1、P21、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。采用双荧光素酶报告基因法和Western印迹验证miR-378c和AKT1的靶向关系。结果 miR-378c在骨关节炎软骨组织中呈高表达,而p-AKT1呈低表达。在抑制miR-378c表达的软骨细胞中,p-AKT1、CyclinD1和Bcl-2蛋白的表达明显上调,P21和Bax蛋白的表达明显下调,细胞的增殖活力增强,凋亡率降低。干扰AKT1的表达可逆转抑制miR-378c表达对HC-OA细胞增殖促进和凋亡抑制作用。结论 miR-378c可通过靶向下调AKT1表达抑制骨关节炎软骨细胞增殖,促进细胞凋亡。     

下调转化生长因子β激活激酶1抑制胰腺神经内分泌肿瘤转移和侵袭

目的探究转化生长因子β激活激酶1(TAK1)在胰腺神经内分泌肿瘤(p-NENs)进展中的作用与影响。方法采用实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法(Western blotting)检测p-NENs细胞株(BON-1)、人正常胰腺导管上皮细胞系(hTERT-HPNE)和人胰腺导管腺癌细胞系(CFPAC-1)中TAK1表达情况。采用靶向TAK1的短发夹RNA(shRNA),以慢病毒为载体对BON-1进行基因敲降。通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和EdU实验观察细胞增殖活力,Transwell实验观察细胞侵袭与迁移能力变化,Western blotting检测上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关标志性蛋白表达。结果 BON-1中TAK1 mRNA和蛋白质水平的表达相较于hTERT-HPNE和CFPAC-1明显升高(P0.05),抑制BON-1中TAK1的表达后,细胞的增殖能力无明显变化,但细胞的迁移和侵袭能力明显减弱(P0.05)。与对照组相比,敲降组的EMT相关蛋白中,上皮细胞标志性蛋白E-cadherin表达升高,间质细胞标志性蛋白Vimentin和N-cadherin表达明显降低(P0.05)。结论在BON-1中,抑制TAK1的表达能够抑制肿瘤细胞的EMT过程,降低细胞的迁移和侵袭能力,从而抑制p-NENs的进展。     

小干扰RNA沉默甲胎蛋白基因对HepG2细胞迁移及侵袭的影响

目的研究甲胎蛋白(AFP)对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法应用合成的靶向沉默AFP小干扰RNA(siRNA)转染肝癌HepG2细胞,分为空白对照、阴性对照组及AFP siRNA组,各组细胞干预48 h后,采用实时定量PCR(qRT-PCR)和ELISA法检测细胞转染后的沉默效率,Transwell小室实验检测沉默AFP基因后HepG2细胞的侵袭、迁移能力,用Western blotting法观察沉默AFP基因的表达对上皮-间质转化(EMT)相关蛋白(N-cadherin、Vimentin和E-cadherin)、AKT和p-AKT蛋白表达的影响。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果转染沉默后,与空白对照组相比,AFP siRNA组中AFP mRNA的相对表达量明显降低(P 0.01),抑制率达86.440%,同时AFP siR NA组细胞上清液中AFP蛋白表达水平同样明显降低(P 0.01)。与空白对照组相比,AFP siRNA组的迁移细胞数和侵袭细胞数显著下降,差异具有统计学意义(P值均0.01)。沉默HepG2细胞中AFP基因的表达后,与空白对照组比较,AFP siRNA组EMT相关蛋白E-cadherin蛋白的表达水平升高(P 0.01),而N-cadherin及Vimentin表达水平均明显降低(P值均0.05),且PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT的表达水平明显降低(P 0.01)。结论沉默AFP可抑制肝癌细胞转移,基于HepG2细胞株的机制研究可能与阻断PI3K/Akt通路抑制EMT相关。     

干预Bcl-2基因表达对骨肉瘤细胞侵袭、迁移能力的影响

目的探究干扰B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2基因表达对骨肉瘤细胞侵袭、迁移的影响及可能的作用机制。方法采用siRNA特异性下调Bcl-2基因表达,实验分为空白组、MG-63-NC组(转染siRNA-NC)和MG-63-siRNA组(转染siRNA-Bcl-2)。Transwell法检测细胞迁移、侵袭能力,Western印迹检测细胞中Bcl-2、β-连环蛋白(catenin)、c-Myc蛋白的表达量。结果 MG-63-siRNA组Bcl-2蛋白表达量显著低于空白组(P0.05);MG-63-siRNA组细胞侵袭、迁移能力显著抑制(P0.05);与空白组相比,MG-63-siRNA组细胞中β-catenin、c-Myc蛋白表达显著下调(P0.05)。结论干扰Bcl-2抑制骨肉瘤MG-63细胞的迁移和侵袭,可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路介导的下游靶蛋白c-Myc的表达。     

Sox4在女性肺癌细胞上皮-间质转化中的作用及其机制

目的探讨Sox4在女性肺癌细胞上皮-间质转化(EMT)中的作用及其机制。方法 76例行肺癌根治术的女性肺癌组织标本为观察组,49例癌旁肺组织标本为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)和Western印迹法检测Sox4的表达水平;采用RNA干扰技术下调Sox4表达,利用脂质体2000向肺癌细胞系XWLC-05转染Sox4-si RNA,同时以未转染XWLC-05为对照,采用q PCR和Western印迹方法检测两组Sox4表达水平及内镜下黏膜切除术(EMR)上皮标记β-catenin、E-cadherin,间质标记Fibronectin、vimentin、N-cadherin的表达情况,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氯唑溴盐(MTT)、Transwell及细胞划痕实验检测转染组与未转染组细胞增殖、侵袭、迁移能力。结果观察组Sox4 m RNA水平及蛋白水平表达均明显高于对照组(P<0.05);转染组Sox4 m RNA水平及蛋白水平表达均明显低于未转染组(P<0.05);q PCR结果显示,转染组β-catenin、E-cadherin水平明显高于未转染组(P<0.05),转染组Fibronectin、vimentin、N-cadherin水平明显低于未转染组(P<0.05),Western印迹结果与q PCR检测结果相一致;MTT实验结果显示,转染Sox4-si RNA细胞后,XWLC-05细胞增殖能力与未转染组无明显差异(P>0.05),Transwell实验结果显示,转染Sox4-si RNA细胞后,XWLC-05细胞侵袭、迁移能力较未转染组明显降低。结论 Sox4可能是通过下调β-catenin、E-cadherin表达及上调Fibronectin、vimentin、N-cadherin表达促进EMT发生,诱导人肺癌细胞发生侵袭转移。     

AnnexinA2-siRNA对甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭和转移的作用及机制

目的观察siRNA靶向干扰膜联蛋白(Annexin)A2对甲状腺乳头状癌(PTC)K1细胞侵袭、迁移能力的影响,并探讨其可能的相关机制。方法首先利用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PTC、甲状腺良性肿瘤和正常组织中AnnexinA2 mRNA的表达;采用Western印迹检测细胞中AnnexinA2蛋白的表达水平。实验分为:空白对照组、siRNA-NC组和siRNA-AnnexinA2组;利用脂质体lipofectamine^TM 2000瞬时转染的方法沉默PTCK1细胞中AnnexinA2的表达,采用qRT-PCR和Western印迹验证K1细胞转染的干扰效果;采用噻唑蓝(MTT)比色法、Transwell小室法分别检测K1细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力的变化,进一步采用qRT-PCR和Western印迹分别检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin和下游因子c-myc、细胞周期蛋白(cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白和mRNA的表达变化。结果小干扰RNA转染成功沉默了K1细胞中AnnexinA2基因的表达;转染成功后,与空白对照组和siRNA-NC组相比,siRNA-AnnexinA2组细胞的增殖活性明显受到抑制(P<0.05);siRNA-AnnexinA2组中细胞的迁移和侵袭能力显著受到抑制(均P<0.05);沉默AnnexinA2基因后明显抑制了β-catenin、c-myc、cyclinD1、MMP-2、MMP-9的表达水平(均P<0.05)。结论AnnexinA2基因的沉默抑制K1细胞的侵袭、转移能力,其机制可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路的活性来实现的,从而为PTC分子生物治疗提供新的靶标。     

miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力的实验研究

目的探讨miR-302a对胃癌BGC-823细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移能力的影响和机制。方法在胃癌BGC-823细胞中转染miR-302a mimics,CCK-8测定细胞增殖变化,Transwell小室测定迁移和侵袭,Western blotting检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白表达。靶基因预测软件预测E2F1可能为miR-302a的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在胃癌BGC-823细胞中共转染pcDNA 3.1-E2F1和miR-302a mimics,按照上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移和E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、E2F1蛋白表达水平。结果miR-302a mimics降低胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭和迁移能力,下调细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平,促进细胞中E-cadherin蛋白表达。miR-302a靶向负调控E2F1表达。pcDNA 3.1-E2F1能够提高miR-302a mimics条件下胃癌BGC-823细胞中E2F1蛋白表达水平,促进细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达,减少细胞中E-cadherin蛋白表达。结论miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力。     

桂皮醛通过TGF-beta信号通路调控结直肠癌细胞侵袭和转移研究

目的研究桂皮醛通过转化生长因子-β(TGF-β)信号通路调控结直肠癌细胞侵袭和转移的机制。方法用不同浓度桂皮醛处理人结肠癌SW480细胞,观察SW480细胞增殖活性、细胞凋亡、侵袭、转移能力及凋亡、上皮间质转化(EMT)、TGF-β/Smad3信号途径关键蛋白表达情况;用10 ng/m L的TGF-β1处理诱导SW480细胞EMT,并用80 mg/L的桂皮醇进行干预,观察SW480细胞中EMT、TGF-β/Smad3信号途径关键蛋白表达。结果桂皮醛处理后SW480细胞Bcl-2/Bax比率、细胞侵袭率、划痕愈合率、波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、TGF-β、Smad3、Snail蛋白表达降低,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、E-cadherin蛋白表达升高,差异有统计学意义(P 0. 05);桂皮醛干预后能够缓解TGF-β1处理后诱导的Vimentin、N-cadherin、MMP-9、Smad3、Snail蛋白表达升高,E-cadherin蛋白表达降低,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论桂皮醛可能通过抑制人结肠癌细胞系SW480中TGF-beta/Smad3信号途径来抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,并抑制EMT,降低其侵袭转移能力。     

Kruppel样因子8通过转化生长因子-β1介导的上皮间质转化促进胃癌细胞的侵袭转移

目的探讨在人胃癌细胞中Kruppel样因子(KLF)8是否参与了转化生长因子(TGF)-β1介导的上皮间质转化(EMT)作用促进胃癌细胞侵袭转移。方法 TGF-β1处理胃癌细胞SGC7901和MKN45后,采用Western印迹和实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测细胞中KLF8、上皮标志蛋白——钙黏附蛋白E(E-cadherin)和间质标志蛋白——波形蛋白(Vimentin)表达水平;采用小干扰RNA(siRNA)技术降低胃癌细胞MKN45中KLF8的表达水平,细胞侵袭试验和划痕试验检测细胞的体外侵袭和迁移能力,并且采用高内涵细胞分析试验检测细胞的运动速度。结果在胃癌细胞株中,TGF-β1刺激后,能够下调E-cadherin和上调Vimentin的表达,进而促进细胞发生EMT;进一步研究发现,在胃癌细胞MKN45中,TGF-β1能够增加KLF8 mRNA和蛋白表达水平(P0.05);Western印迹和qRT-PCR实验发现,siRNA干扰KLF8表达后,能够阻断TGF-β1诱导的EMT,进而部分逆转了E-cadherin的降低和Vimentin的升高;同时,抑制KLF8后,能够降低TGF-β1促进的细胞侵袭、迁移和运动能力。结论在胃癌细胞中,KLF8参与了TGF-β1诱导EMT过程,并且有可能成为胃癌治疗中的新治疗靶标。     

叉头框蛋白E1对肝癌细胞侵袭及迁移能力的影响

目的研究叉头框蛋白(FOX)E1对肝癌细胞侵袭及迁移能力的影响。方法分别用qRT-PCR和Western印迹法测定肝癌细胞SMCC7721、Hep G2、HCCLM3和正常肝细胞HL7702中FOXE1 mRNA和蛋白水平。在HCCLM3细胞中转染FOXE1真核表达载体和对照空载体记为FOXE1组和Vector组,以不做处理的HCCLM3细胞为WT组。细胞划痕实验测定细胞迁移,Transwell小室测定细胞侵袭,Western印迹测定细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2、神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏附素(E-cadherin)蛋白水平。结果肝癌细胞SMCC7721、Hep G2、HCCLM3中FOXE1 mRNA和蛋白水平均明显低于正常肝细胞HL7702(P0.05)。HCCLM3细胞中FOXE1 mRNA和蛋白水平显著低于SMCC7721、Hep G2(P0.05)。Vector组细胞侵袭、迁移及细胞中MMP-2、N-cadherin、Vimentin、E-cadherin蛋白与WT组相比差异无统计学意义(P0.05)。FOXE1组细胞侵袭、迁移及细胞中MMP-2、N-cadherin、Vimentin水平均明显低于WT组,而E-cadherin水平明显高于WT组,差异有统计学意义(P0.05)。结论FOXE1在肝癌细胞中低表达,FOXE1降低肝癌细胞侵袭和迁移能力,下调细胞中MMP-2、N-cadherin、Vimentin水平,促进细胞中E-cadherin表达。     

下调BAP31基因表达抑制结直肠癌细胞增殖侵袭及Wnt/β-catenin信号

目的探讨下调B细胞受体相关蛋白(BAP)31基因表达对结直肠癌细胞增殖侵袭及Wnt/β-catenin信号的影响。方法以正常结肠上皮细胞NCM460为对照细胞,Western印迹检测结直肠癌DLD-1,HT29,SW620和HCT116细胞中BAP31的蛋白表达。设计合成BAP31的特异性siRNA及阴性对照siRNA,分别命名为si-BAP31组和NC组,参照LipofectamineTM 2000说明转染HCT116细胞,仅加入脂质体的为空白对照组,Western印迹检测BAP31、β-catenin、增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶(MMP)-2的蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK)8检测细胞活力;Transwell小室检测穿膜细胞数。结果结直肠癌DLD-1,HT29,SW620和HCT116细胞中BAP31的表达均显著高于在NCM460细胞表达(P0.05)。转染si-BAP31的HCT116细胞BAP31表达明显受到抑制,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。与NC组比较,si-BAP31组在24、48和72 h的细胞活力显著降低,在48 h的细胞侵袭能力及β-catenin、PCNA和MMP-2的蛋白表达均显著降低(P0.05)。结论下调BAP31基因表达可抑制结直肠癌细胞增殖侵袭能力,机制可能与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

沉默HIF-1α调控MAPK/ERK信号通路抑制NSCLC转移的分析

目的探讨HIF-1α在体内及体外对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞转移的影响及其作用机制。 方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HIF-1α在癌旁正常组织、肺鳞癌组织(LUSC)、肺腺癌组织(LUAD)、A549细胞和HEB细胞中的表达量。上调HIF-1α表达后,通过MTT、细胞侵袭和Western blot实验检测过表达HIF-1α对A549细胞增殖、侵袭和EMT的影响。下调HIF-1α表达后,Western blot检测A549细胞ERK和p-ERK蛋白的表达量。THBQ激活MAPK/ERK通路后,分析A549细胞增殖、侵袭和EMT能力。将细胞株植入裸鼠体内,构建移植瘤模型,最后测量裸鼠移植瘤的体积和重量。 结果HIF-1α在NSCLC组织的表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。A549细胞中HIF-1α表达水平明显高于HEB细胞(P<0.01),过能够促进A549细胞的增殖和侵袭,N-cadherin蛋白表达量明显上升,E-cadherin蛋白表达量明显下降。下调HIF-1α能够抑制A549细胞内MAPK/ERK通路,且抑制了A549细胞的增殖、侵袭和EMT。下调HIF-1α使裸鼠移植瘤的重量和体积明显减小。 结论沉默HIF-1α通过MAPK/ERK信号通路在体内及体外抑制NSCLC转移。