miR-372抑制卵巢癌细胞EMT、侵袭迁徙及可能机制

目的探讨miR-372在卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭迁徙中的作用及相关的机制。方法利用Lipofectamine2000瞬时转染miR-372 mimics于OVCAR3和A2780细胞中,并通过RT-PCR法检测在转染前后OVCAR3和A2780细胞中miR-372的表达,Transwell及细胞划痕实验检测OVCAR3和A2780细胞的侵袭迁徙能力,蛋白印迹法检测EMT相关蛋白N-钙黏蛋白和a-SMA蛋白的表达水平。结果转染miR-372 mimics后OVCAR3和A2780细胞的miR-372相对表达量显著升高(P0.05),细胞的侵袭迁徙能力显著降低(P0.05);Western Blotting结果表明转染miR-372 mimics后OVCAR3和A2780细胞的EMT相关间质蛋白N-钙黏蛋白和a-SMA蛋白的表达水平显著降低。结论miR-372过表达抑制卵巢癌细胞的体外侵袭及迁徙,并通过抑制N-钙黏蛋白和a-SMA蛋白水平的表达来抑制卵巢癌细胞的EMT过程。     

髓源性抑制细胞通过诱导上皮-间质转化促进鼻咽癌细胞的侵袭转移

目的研究髓源性抑制细胞(myeloid derived suppressor cells,MDSC)与鼻咽癌细胞上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)的关系及对鼻咽癌细胞侵袭转移的影响。方法用流式细胞技术检测16例鼻咽癌患者以及9例健康对照者骨髓中MDSC所占比例,并分离鼻咽癌组织中MDSC;将MDSC与鼻咽癌细胞株CNE-2共培养,观察CNE-2细胞形态学的改变;应用q RT-PCR技术从RNA水平检测共培养前后CNE-2细胞上皮-间质转化相关基因(E-cadherin,N-cadherin,Vimentin,Snail)的改变;进一步采用Western blot技术从蛋白水平检测其表达变化;继而通过transwell小室及划痕实验检测MDSC对CNE-2细胞侵袭转移能力的影响。结果鼻咽癌患者骨髓中MDSC所占比例(10.37%)明显高于健康对照者(1.65%);MDSC与CNE-2细胞共培养后,CNE-2细胞在形态学上发生EMT;q RT-PCR和Western blot分别从RNA和蛋白水平证实CNE-2细胞上皮表型的相关基因(E-cadherin)表达下调,间质表型的相关基因(N-cadherin,Vimentin,Snail)表达上调;transwell小室侵袭实验证实共培养后CNE-2细胞的侵袭能力增强;划痕实验证实共培养后CNE-2细胞的迁移能力增强。结论 MDSC通过诱导EMT促进鼻咽癌细胞的侵袭转移能力。     

p53依赖的X-连锁凋亡抑制蛋白调节与卵巢癌顺铂耐药的关系

目的本研究旨在探讨X-连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）在卵巢癌顺铂耐药中的作用。方法应用RT—PCR、Western Blot、流式细胞仪等检测卵巢癌顺铂敏感细胞株0V2008、A2780s和耐药株C13＊、A2780cp中XIAP表达和卵巢癌细胞的凋亡率,并将反义XIAP寡核苷酸（XIAPAs—ODN）、正义XIAP寡核苷酸（XIAPs—ODN）和随机对照链导入顺铂耐药细胞C13＊（p53野生型）和A2780cp（p53突变型）中,比较转染前、后耐药细胞Caspase-3活性和顺铂耐药性的改变。结果卵巢癌顺铂敏感细胞和耐药细胞中XIAP在mRNA水平的表达无明显差异（P〉0．05）。顺铂可以引起OV2008和A2780s中XIAP蛋白表达明显下降（P〈0．05）,而对C13＊和A2780cp的XIAP蛋白含量无明显影响（P〉0．05）。转染XIAPAs—ODN可降调p53野生型耐药细胞C13＊中XIAP的表达,并显著增加Caspase-3活性和对顺铂敏感性（P〈0．05）,而XIAP As—ODN对p53突变型耐药细胞A2780cp无此作用。结论卵巢癌细胞对顺铂产生耐药可能与XIAP蛋白相对高表达有关,反义XIAP可在一定程度上逆转卵巢癌顺铂耐药,该作用与卵巢癌细胞的p53表型有关。     

HAS-2沉默抑制大肠癌细胞上皮间质转化

目的本研究主要探讨HAS-2沉默前后对大肠癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法分别用Realtime PCR及Western blot方法检测HAS-2 siRNA转染前后E-cadherin、Vimentin、Slug、Snail mRNA、蛋白表达水平变化,用免疫荧光法观察HAS-2 siRNA转染前后E-Cadherin、Vimentin表达的变化。结果 E-Cadherin蛋白和mRNA在大肠癌细胞的表达水平在HAS-2 siRNA转染组比阴性对照组明显上调(0.05),而Vimentin蛋白和mRNA,Snail mRNA and Slug蛋白在大肠癌细胞的表达水平在HAS-2 siRNA转染组表达水平比阴性对照组明显下调(0.05)。结论 HAS-2沉默对大肠癌细胞EMT有抑制作用。     

下调Snail基因对子宫内膜癌增殖和侵袭的影响

目的探讨下调Snail基因对子宫内膜癌增殖和侵袭的影响及其机制。方法培养子宫内膜癌细胞株,构建Snail-shRNA表达载体,建立下调Snail基因表达的子宫内膜癌细胞株;用CCK-8法检测子宫内膜癌细胞株(Ishikawa)的增殖能力。用Transwell小室结合基质胶(Matrigel)法比较子宫内膜癌细胞株与相应的瞬时转染细胞株在细胞迁移能力及侵袭能力的差异。结果通过下调Snail基因在细胞内的表达,体外观察子宫内膜癌细胞增殖能力空白对照组高于细胞转染组;迁移与侵袭能力空白对照组高于细胞转染组。结论 Snail基因在子宫内膜癌中表达下调;与抑制子宫内膜癌的增殖和侵袭转移相关,其可能机制与逆转肿瘤的上皮细胞-间质转化过程和共同抑制下游转移靶基因相关。     

基质金属蛋白酶抑制剂RECK基因在卵巢癌细胞株中的表达及意义

目的检测RECK基因(reversion-inducing-cysteine-rich protein with Kazal motifs)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在不同卵巢癌细胞株SKOV-3、A2780、HO-8910及正常卵巢上皮细胞中的表达,并探讨其表达差异及其意义。方法应用RT-PCR检测卵巢癌细胞株SKOV-3、A2780、HO-8910及正常卵巢上皮细胞中RECK及MMP-2 m RNA的表达;应用Western blot方法检测不同卵巢细胞株中RECK蛋白的表达。结果卵巢癌细胞株SKOV-3、A2780、HO-8910中RECK m RNA的表达较正常卵巢上皮细胞中明显降低(P0.01),MMP-2 m RNA表达则明显升高(P0.01),但三种卵巢癌细胞株中RECK m RNA的表达没有差异(P0.05);SKOV-3、A2780、HO-8910细胞株中RECK蛋白的表达量较正常卵巢上皮细胞明显降低(P0.01)。结论 RECK基因在卵巢癌中的表达量明显下降,而MMP-2的表达量明显升高,RECK基因可能通过抑制MMP-2的表达起到抑癌基因的作用。     

WWC3下调Snail和N-cadherin,上调E-cadherin抑制非小细胞肺癌侵袭和转移

目的研究WWCs(WW and C2 Domain containing protein family)及其各亚型(WWC1,WWC2,WWC3)在人类肺癌中的表达是否存在差异、与临床病理因素的关系及其发挥生物学作用的相关机制。方法应用免疫组化方法检测了159例非小细胞肺癌组织标本中WWCs蛋白表达和亚细胞定位,并对比分析与上皮间质转化相关蛋白E-cadherin、N-cadherin表达的关系。利用集落形成实验和transwell实验,检测WWC3对肺癌细胞增殖及侵袭能力的影响。转染或干扰WWC3的表达后,通过Western blot检测双向调控WWC3对E-cadherin、N-cadherin及Snail表达水平的影响。结果 WWC3在正常支气管上皮细胞浆中高表达(31/40,77.5%),而在非小细胞肺癌中低表达(70/159,44%),明显低于正常支气管上皮的阳性表达率(P0.001),且其低表达与非小细胞肺癌的低分化(P=0.010)、高TNM分期(P=0.016)、淋巴结转移(P=0.002)相关。WWC3的低表达与上皮间质转化相关蛋白E-cadherin的高表达(P=0.032)、N-cadherin的低表达(P=0.007)相关。在H1299细胞中转染WWC3表达质粒,抑制肺癌细胞的增殖与侵袭能力,下调Snail和N-cadherin,上调E-cadherin的表达。在A549细胞中转染WWC3-si RNA能够明显促进肺癌细胞的增殖和侵袭能力,上调Snail和N-cadherin的表达,而下调E-cadherin的表达。结论 WWC3抑制肺癌细胞侵袭和转移可能与下调Snail和N-cadherin,上调E-cadherin的表达相关。     

鼻咽癌中上皮间充质改变现象观察

目的观察鼻咽癌中上皮间充质改变（EMT）现象，初步探讨上皮间充质改变在鼻咽癌侵袭转移中的作用。方法对58例鼻咽癌和29例鼻咽黏膜慢性炎免疫组化SP法检测Vimentin抗体，根据结果．Vimentin阳性病例再用相同的方法分别检测E-cadhefin、β-catenin和Snail的表达。结果58例鼻咽癌中8例边缘部位癌细胞Vimentin阳性表达，29例慢性炎上皮细胞均为阴性（P=0．037）。在8例阳性病例中，Vimentin阳性的区域癌细胞E-cadherin染色明显弱于Vimentin阴性部位，甚至呈阴性；Snail在肿瘤周边区的阳性细胞数量明显多于中央区，阳性强度也强于中央区；β-catenin在肿瘤中央区为细胞间连接部位膜阳性，周边区部分细胞，尤其是散在于间质中单个癌细胞呈现阳性表达向胞质胞核内移现象。结论鼻咽癌在侵袭和转移过程中存在EMT现象．EMT现象的发现为研究鼻咽癌转移机制提供了新的理论基础，为鼻咽癌的治疗提供了新途径。     

p21 蛋白激活激酶4 在乳腺癌上皮间质转化中的作用研究

目的:探讨p21 蛋白激活激酶4(PAK4)在乳腺癌细胞上皮间质转化中的作用。方法:在乳腺癌MCF7 细胞中超表达PAK4,而在乳腺癌MDA-MB-231 细胞中干扰PAK4 表达,通过迁移和侵袭实验检测其对乳腺癌细胞迁移侵袭的影响,荧光定量法和免疫印迹分析检测PAK4、E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin mRNA 和蛋白质表达量变化,免疫印迹法检测EMT 相关转录激活因子Snail、Slug 表达量变化。结果:MCF7 细胞超表达PAK4 后,细胞的迁移侵袭能力显著增加,并且上皮标志分子E-Cadherin 蛋白表达下调,而间质标志分子N-Cadherin 和Vimentin 蛋白则表达上调,EMT 相关转录激活因子Slug 表达量增加;MDA鄄MB鄄231 细胞中,抑制内源PAK4 表达能显著降低细胞的迁移侵袭能力,上调E-Cadherin 蛋白表达,下调N-Cadherin、Vimentin 和Slug 蛋白的表达。结论:PAK4 通过上调Slug 促进乳腺癌发生上皮间质转化,可作为抑制乳腺癌转移的分子靶点。     

HOTAIR 促进卵巢癌恶性生物学行为

目的:研究沉默HOTAIR后对上皮性卵巢癌恶性生物学行为的影响。方法:实时荧光定量聚合酶链反应检测HOTAIR在卵巢癌细胞株SKOV3、OVCAR3和A2780的表达情况。沉默HOTAIR后,划痕实验检测卵巢癌细胞转移能力,侵袭实验检测卵巢癌细胞侵袭能力,胸腺嘧啶核苷类似物检测卵巢癌细胞增殖能力。结果:HOTAIR在SKOV3和OVCAR3细胞中表达高于A2780细胞;沉默HOTAIR后,卵巢癌SKOV3细胞转移、侵袭和增殖能力降低;结论:沉默HOTAIR可以抑制卵巢癌SKOV3细胞恶性生物学行为。     

Mesenchymal-to-epithelial transition determinants as characteristics of ovarian carcinoma effusions

The present study investigated the intracellular regulation of E-cadherin in ovarian carcinoma. E-cadherin expression and regulation by Snail and Pak1 were studied in ES-2 and OVCAR-3 ovarian cancer cells in vitro. Twist1, Zeb1 and Vimentin mRNA expression and HIF-1α protein expression were analyzed in 80 and 189 clinical specimens, respectively. OVCAR-3 cells incubated with an anti-E-cadherin antibody formed smaller and looser spheroids compared to controls. Snail silencing using Small Hairpin RNA in ES-2 cells reduced invasion and MMP-2 activity, with unaltered cellular morphology. Using dominant negative (DN) and constitutively active (CA) Pak1 constructs, we found that DN Pak1 ES-2 and OVCAR-3 clones had reduced attachment to matrix proteins, invasion and MMP-2 activity compared to CA and wild-type cells. DN Pak1 ES-2 cells also bound less to LP9 mesothelial cells. DN Pak1 OVCAR-3 cells had lower Vimentin levels. Snail expression was lower in cultured effusions compared to primary carcinomas, and was cytoplasmic rather than nuclear. Twist1 (P < 0.001), Zeb1 (P = 0.003) and Vimentin (P = 0.03) mRNA expression was significantly higher in solid metastases compared to primary carcinomas and effusions. HIF-1α protein expression was lower in effusions compared to primary carcinomas and solid metastases (P = 0.033). Our data suggest that the previously reported E-cadherin re-expression in ovarian carcinoma effusions is regulated by Pak1. The transient nature of E-cadherin expression during ovarian carcinoma progression is probably the result of partial epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) and the reverse process of mesenchymal-to-epithelial-like transition (MET). Expression of the EMT-related molecules Twist, Zeb1, Vimentin and HIF-1α is anatomic site-dependent in ovarian carcinoma.     

miR-34a 通过Snail 诱导肺癌EMT 及促进其转移的分子机制

目的:探讨miR-34a 在肺癌组织中的表达情况以及miR-34a 在肺癌细胞侵袭和迁移过程中的作用及其机制。方法:qPCR 检测肺癌和正常肺组织中miR-34a 的表达情况;使用miR-34a-mimic 和miR-34a-inhibitor 过表达和沉默miR-34a,qPCR 检测沉默和过表达效果;Western blot 检测沉默和过表达miR-34a 后Snail 蛋白的表达情况;荧光素酶报告基因检测miR-34a 与Snail 的相互作用;Transwell 侵袭实验检测miR-34a 的表达对肺癌细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测miR-34a 的表达对肺癌细胞迁移能力的影响;Western blot 检测E-Cadherin、Vimentin 和Twist 蛋白的表达情况。结果:与正常肺组织相比,肺癌组织中miR-34a 表达明显降低;且晚期、低分化和有淋巴结转移的肺癌组织miR-34a 表达明显较早期、高分化和无淋巴结转移的肺癌组织低;miR-34a-mimic miR-34a-inhibitor 可以有效抑制和过表达miR-34a 的表达;miR-34a 能与Snail 的3忆UTR 特异性结合;miR-34a 可以调控肺癌H1650 细胞的侵袭迁移能力;过表达miR-34a 上调E-Cadherin,同时下调Vimentin 和Twist 蛋白的表达,沉默miR-34a 则相反。结论:miR-34a 在肺癌中表达明显降低,且跟肺癌分期分级以及淋巴结转移与否密切相关,同时miR-34a 可以通过上皮间质转化调节肺癌细胞侵袭和迁移能力。     

地高辛对缺氧诱导的乳腺癌细胞上皮间质转化和侵袭的影响

 目的:本研究旨在探究地高辛对缺氧诱导乳腺癌细胞上皮间质转化、迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。方法:选取人乳腺癌MCF-7细胞作为研究对象,采用CoCl₂模拟化学缺氧条件,采用细胞划痕实验测量细胞迁移率,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力,采用Western blot方法检测人乳腺癌MCF-7细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Snail、E-cadherin和vimentin蛋白表达的变化。结果:缺氧使MCF-7细胞从多角形上皮形态转变成梭形间质细胞形态,细胞间隙增大,而在地高辛作用下缺氧的MCF-7细胞未发生明显的上皮间质转化。细胞划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,经CoCl₂处理的MCF-7细胞的迁移和侵袭能力均显著增强(P<0.01),地高辛可抑制CoCl₂诱导的细胞迁移和侵袭(P<0.01)。与control组相比,CoCl₂组细胞的HIF-1α、Snail和vimentin蛋白表达水平显著升高(P<0.01),E-cadherin的蛋白表达水平显著降低(P<0.01);CoCl₂+digoxin组细胞的HIF-1α、E-cadherin和vimentin蛋白表达水平与control组相比差异均无统计学显著性,Snail蛋白表达水平虽略高于control组(P<0.05),但与CoCl₂组细胞相比显著降低(P<0.01)。结论:地高辛可通过下调HIF-1α和Snail蛋白表达抑制缺氧诱导的MCF-7细胞上皮间质转化和侵袭。     

Sex Comb on Midleg Like-2 Accelerates Hepatocellular Carcinoma Cell Proliferation and Metastasis by Activating Wnt/β-Catenin/EMT Signaling

PurposeThe purpose of this study was to investigate the influences of sex comb on midleg like-2 (SCML2) on hepatocellular carcinoma (HCC) and potentially related mechanisms.Materials and MethodsSCML2 expression in tumor tissues and cells was analyzed using the TCGA database and/or qRT-PCR. The proliferation of HCC cells was detected by CCK-8, colony formation, and EdU assays. The migration and invasion of HCC cells were detected by transwell and wound healing assays. Apoptosis of HCC cells was determined by flow cytometry. Additionally, qRT-PCR and Western blot were used to detect the expression of SCML2 and Wnt/β-catenin/epithelial–mesenchymal transition (EMT) signaling. A xenograft model in mice was established to verify the in vitro findings.ResultsWe found that SCML2 was highly expressed in HCC tissues and cells and that high expression of SCML2 was correlated with poor prognosis in HCC patients. SCML2 overexpression promoted proliferation, invasion, and migration and repressed apoptosis of HCC cells. The reverse results were obtained in SCML2-silenced cells. Further, we found that SCML2 activated the Wnt/β-catenin/EMT pathway. SCML2 silencing reduced the protein levels of Wnt3a, β-catenin, N-cadherin, Vimentin, and Snail and enhanced E-cadherin protein expression both in vivo and in vitro.ConclusionSCML2 silencing inhibits the proliferation, migration, and invasion of HCC cells by regulating the Wnt/β-catenin/EMT pathway.     

EphA2调控结直肠癌细胞耐药的初步研究

目的:探究Eph受体A2(Eph A2)在结直肠癌细胞化疗耐药中的作用及相关机制。方法:Western blot及real-time PCR检测人结肠癌细胞株Lo Vo及结肠癌耐药细胞株Lo Vo/5-FU中Eph A2的表达情况。转染Eph A2 siRNA干扰结肠癌耐药细胞株Lo Vo/5-FU中Eph A2的表达,CCK-8法检测细胞对化疗药物的敏感性,划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力的变化,Western blot检测上皮-间充质转化(EMT)及相关信号通路分子的蛋白水平。结果:耐药细胞株Lo Vo/5-FU中Eph A2的mRNA及蛋白表达水平均明显高于亲本细胞株(P0.05);并且在亲本细胞株Lo Vo中,Eph A2的蛋白表达水平随着5-FU浓度的增加有升高趋势。沉默Eph A2可降低结肠癌耐药细胞株Lo Vo/5-FU的细胞活力,增加其对化疗药物的敏感性,并抑制细胞的侵袭迁移;同时上调细胞中上皮细胞标志物E-cadherin和β-catenin的表达并下调间充质细胞标志物N-cadherin和vimentin的表达,可抑制结肠癌耐药细胞株Lo Vo/5-FU的EMT进程。此外,干扰Eph A2的表达之后,Notch和Snail的表达也明显降低。结论:沉默Eph A2可部分恢复结肠癌耐药细胞株Lo Vo/5-FU对化疗药物的敏感性,其机制可能与抑制细胞侵袭和迁移、同时通过Notch/Snail信号通路影响细胞的EMT进程有关。     

Snail在乳腺癌中的表达及其与上皮-间质转化的关系

目的研究Snail蛋白在乳腺癌组织中的表达,并探讨Snail蛋白及其调控的上皮-间质转化(EMT)与乳腺癌恶性生物学行为的相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测20例正常乳腺组织、60例乳腺癌组织(非特殊性浸润性导管癌)及其中20例乳腺癌癌旁组织中Snail蛋白、上皮标记物E-cadherin蛋白、间质标记物Vimentin蛋白的表达;分析乳腺癌组织中3种蛋白表达强度的相关性,以及Snail蛋白表达与乳腺癌淋巴结转移的关系。结果①在正常乳腺组织、乳腺癌癌旁组织、乳腺癌组织中,Snail蛋白表达逐渐递增,其阳性率分别为0、30%、53.3%;Vimentin蛋白表达亦逐渐递增,其阳性率分别为0、40%、63.3%;E-cadherin蛋白表达则逐渐减少,其阳性率分别为100%、75%、56.7%;正常乳腺组织、乳腺癌癌旁组织与乳腺癌组织间3种蛋白的表达差异均具有统计学意义(均P0.05)。②Snail蛋白表达与Vimentin蛋白表达呈显著正相关(r=0.536、P=0.000);Snail蛋白表达与E-cadherin蛋白表达呈负相关(r=-0.413、P=0.001);3种组织中,E-cadherin和Vimentin蛋白两者的表达差异呈显著负相关(r=-0.526、P=0.000)。③Snail蛋白的表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移呈正相关,差异有统计学意义(r=0.600、P=0.000)。结论锌指转录因子Snail可能通过参与调控EMT过程从而在乳腺癌的发生和侵袭过程中发挥重要作用,并推动乳腺癌的远处淋巴结转移。     

上皮钙黏蛋白、波形蛋白和Snail蛋白表型在乳腺浸润性导管癌中表达的相关性及其与预后的关系

目的 检测上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Snail蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达情况与乳腺癌病理特征的关系及其与浸润性导管癌预后的关系.方法 采用Envision免疫组织化学方法对89例乳腺浸润性导管癌组织中的上E-cadhenn,Vimentin和Snail蛋白表达情况进行检测并分析表达程度与临床病理特征之间的关系;统计分析采用卡方检验、Fisher精确概率法检验Spearman等级相关检验、配对计数资料检验、Kaplan-Meier法进行单因素生存分析,Cox比例风险模型进行生存的多因素分析.结果 E-cadherin、Vimentin和Snail蛋白在浸润性导管癌组织中的阳性表达率分别为、47.1％、53.9％和55.0％,三者呈负相关,(P=0.003);E-cadherin、Vimentin和Snail蛋白的表达与临床TNM分期有关(P ＜0.005).浸润性导管癌中Snail蛋白、Vimentin表达明显增高,Snail蛋白与淋巴结转移有关(P =0.029);Vimentin与淋巴结转移、雌激素状态有关(P =0.006,P＜0.001);E-cadherin表达明显降低,与孕激素状态有关(P =0.030);分子分型结果显示,管腔A型、HER-2阳性型组的Vimentin、Snail蛋白阳性表达率低于基地细胞样型组(P =0.012),而E-cadherin表达率则高于基地细胞样型组(P =0.004).Cox分析发现,E-cadherin低表达和Vimentin的过度表达与患者总生存期(P =0.019、P=0.045)及患者无病生存期(P =0.032、P=0.024)显著相关,但Snail蛋白的表达与总生存期及无病生存期无相关性(P =0.879、P=0.835).结论 E-cadhern、Vimentin和Snail蛋白在乳腺浸润性导管癌的发生、发展、侵袭及转移中起重要作用,对认识乳腺癌的生物学特性以及对指导乳腺癌的诊疗及预后具有重要意义.     

Dickkopf-1沉默通过下调β-catenin水平抑制胃癌细胞侵袭及上皮-间充质转化

目的:探讨分泌蛋白Dickkopf-1(DKK1)在人胃癌细胞中的表达及其对胃癌细胞侵袭能力的影响。方法:以real-time PCR和Western blot法检测DKK1在人胃黏膜细胞(GES-1)和胃癌细胞(MKN-45和SGC-7901)中的表达水平;以RNA干扰法沉默DKK1,沉默效果以real-time PCR、Western blot及ELISA法验证;Transwell实验检测细胞侵袭能力,以丝裂霉素C抑制细胞增殖;real-time PCR及Western blot法检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及β-连环蛋白(β-catenin)水平。结果:DKK1在MKN-45和SGC-7901细胞中的表达明显高于GES-1细胞,表明DKK1在胃癌细胞中表达显著升高;DKK1在MKN-45和SGC-7901细胞中被成功沉默后,细胞侵袭能力显著下降,并具有时间依赖性,同时伴随E-cadherin表达增高及N-cadherin和vimentin表达下降,表明DKK1沉默能够显著抑制胃癌细胞侵袭和上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT);经外源性重组DKK1(r DKK1)转染肿瘤细胞后,进一步证实DKK1具有促胃癌细胞侵袭的作用,并可促进EMT进程;DKK1沉默通过下调β-catenin水平来实现其对胃癌细胞侵袭及EMT的抑制作用。结论:DKK1在人胃癌细胞中表达显著增高,且DKK1沉默能够通过下调β-catenin水平抑制胃癌细胞侵袭及EMT过程。     

IL-6通过诱导lncTCF7表达促进甲状腺乳头状癌TPC-1细胞上皮-间充质转化、迁移和侵袭

目的:探讨白细胞介素6(IL-6)通过诱导长链非编码RNA lnc TCF7表达对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞上皮-间充质转化(EMT)、迁移和侵袭能力的影响。方法:以0、5、10、20和50μg/L的IL-6作用于TPC-1细胞24 h或以50μg/L的IL-6作用于TPC-1细胞0、6、12和24 h后,RT-qPCR检测IL-6对TPC-1细胞中lnc TCF7表达的影响。以50μg/L的IL-6处理TPC-1细胞24 h后,Western blot检测IL-6对TPC-1细胞中E-cadherin和vim-entin蛋白表达的影响。建立lnc TCF7过表达的TPC-1细胞株,Western blot和Transwell小室实验检测过表达lnc TCF7对TPC-1细胞EMT、迁移和侵袭能力的影响。敲减lnc TCF7的表达并给予50μg/L的IL-6处理后,观察lnc TCF7对IL-6处理后的TPC-1细胞EMT、迁移和侵袭能力的影响。结果:IL-6可呈剂量和时间依赖性地诱导TPC-1细胞中lnc TCF7的表达(P 0.05)。过表达lnc TCF7可下调TPC-1细胞中E-cadherin表达,上调vimentin表达,增强细胞的迁移和侵袭能力(P 0.05)。IL-6可使TPC-1细胞中E-cadherin表达降低,vimentin、Snail和Slug表达升高,同时,增强细胞的迁移和侵袭能力,增大细胞间隙;敲减lnc TCF7表达能够明显抑制IL-6引起的上述变化。结论:IL-6可通过诱导lnc TCF7表达促进甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的EMT、迁移和侵袭。