非小细胞肺癌通过EPO/EPOR信号促进自身增殖的分子机制研究

目的 研究促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPOR)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况及其对NSCLC发生发展的影响.方法 qPCR、western blot检测EPO/EPOR在9种肺癌细胞系中的表达水平;MTT法检测rhEPO促细胞增殖的作用,流式细胞术检测rhEPO对细胞凋亡和周期的影响,Transwell检测细胞迁移;qPCR、western blot检测rhEP0对Cyclin D1和Cyclin A表达水平的影响.结果 EPO/EPOR在部分肺癌细胞中高表达,rhEP0促进高表达EPO/EPOR的肺癌细胞的增殖,而对肺癌细胞凋亡和迁移无影响,rhEP0诱导Cyclin D1表达,使用Jak2/Stat5抑制剂或干涉Jak2/Stat5后rhEP0作用消失.结论 高表达EPO/EPOR非小细胞肺癌通过Jak2/Stat5/Cyclin D1通路促进自身增殖.     

促红细胞生成素及其受体在卵巢癌细胞的表达及相关作用的实验研究

 目的　检测卵巢癌细胞中的促红细胞生成素（EPO）及其受体（EPOR）表达，以及重组人EPO（rhEPO）对卵巢癌细胞增生的影响，探讨rhEPO在癌性贫血治疗中的意义。方法　RT-PCR方法检测人类卵巢癌细胞株 HO-8910 EPOR mRNA的表达。用流式细胞仪检测rhEPO对卵巢癌细胞凋亡及增生影响。结果　卵巢癌细胞表面有EPOR的表达，rhEPO干预后卵巢癌细胞增生受到抑制（P＜0.01）。结论　EPOR在卵巢癌细胞株HO-8910有表达，rhEPO可抑制卵巢癌细胞的增生。rhEPO可用于卵巢癌伴发的贫血的治疗。     

促红细胞生成素及其受体在肿瘤发生发展中的作用

研究发现,促红细胞生成素(EPO)及EPO受体(EPOR)在多种恶性肿瘤组织中表达,且EPO能促进肿瘤微血管形成,刺激肿瘤细胞增殖,抑制凋亡,还调节肿瘤细胞对放化疔治疗的敏感性.另有研究表明,EPO的应用不利于肿瘤的控制和预后.EPO对肿瘤患者的疾病进展和生存期的影响仍需进一步研究.     

促红细胞生成素及受体在肿瘤中的研究进展

近年来，在多种非造血组织及肿瘤中发现了促红细胞生成素(EPO)及其受体。EPO对促红细胞生成的作用是已知的，然而，在肿瘤和非造血组织中，这种激素被认为可以刺激血管生成，促进细胞增殖，抑制细胞凋亡。本文主要阐述EPO在肿瘤中的作用及机制，总结EPO与肿瘤的相关性，为进一步研究EPO对肿瘤的影响提供理论依据。     

重组人血管内皮抑制素治疗晚期非小细胞肺癌的效果及对血清促红细胞生成素及其受体表达情况的影响

目的 探讨重组人血管内皮抑制素治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床效果及对血清促红细胞生成素(EPO)及其受体表达情况的影响.方法 采用随机数字表法将122例晚期NSCLC患者随机分为联合组与对照组,各61例.两组患者均采用多西他赛+铂类药物(DP)方案进行化疗,联合组患者在此基础上采用重组人血管内皮抑制素进行治疗.比较两组患者的近期化疗效果、血清EPO mRNA水平、促红细胞生成素受体(EP-OR)mRNA水平、不良反应发生情况及无进展生存情况.结果 两组患者的总有效率比较,差异无统计学意义(P﹥0.05).化疗后,两组患者的血清EPO mRNA、EPOR mRNA水平均较本组化疗前降低,且联合组患者的血清EPO mRNA、EPOR mRNA水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).化疗过程中,联合组患者恶心、呕吐的发生率均高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).随访12个月,无失访患者.联合组患者的中位无进展生存时间为10.0个月,长于对照组患者的7.0个月,差异有统计学意义(P﹤0.05).结论 与单纯一线化疗方案相比,一线化疗联合重组人血管内皮抑制素治疗虽然不能较大程度地改善晚期NSCLC患者的近期化疗效果,但在延长肿瘤无进展生存时间方面具有一定的临床应用价值.     

促红细胞生成素对肺腺癌A549细胞生长和凋亡作用的实验研究

背景与目的 促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对肿瘤细胞的具体作用存在争议.本研究旨在探讨细胞因子超家族成员EPO对肺腺癌AS49细胞株生物学行为的影响.方法 构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)-hEPO,并转染肺腺癌A549细胞株.采用酶联免疫吸附(ELISA)法检洲转染后目的基因的蛋白表达水平;MTT法和流式细胞仪检测转染后A549细胞生长、周期及凋亡率等生物学行为的变化;ELISA法检测转染后细胞VEGF表达水平的变化.结果 成功构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)-hEPO;转染后各检测时间点,EPO转染组细胞生长均明显受抑(P<0.01);流式细胞术分析表明,EPO转染组S期细胞比例明显高于对照组(P<0.05).且凋亡率也明显增高(P<0.01);EPO转染组VEGF表达量明显降低(P<0.01).结论 EPO基因转染A549后有抑制细胞生长、促进凋亡的作用,并且还可抑制细胞表达VEGF.     

促红细胞生成素对达卡巴嗪和顺铂抗小鼠黑色素瘤活性的调节作用

目的：研究促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）对荷黑色素瘤小鼠肿瘤生长的影响及其对达卡巴嗪（dacarbazine,DTIC）和顺铂（cisplatin,DDP）抗肿瘤活性的调节作用。方法：将荷黑色素瘤B16细胞的C57BL/6小鼠,分别用EPO、DTIC和DDP以及EPO分别联合DTIC、DDP药物处理,以盐水处理组为对照。观察肿瘤在小鼠体内的生长情况。部分小鼠于停药次日摘除眼球取血,分析血液中红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、红细胞压积（Hct）和白细胞（WBC）水平。并颈椎脱臼处死小鼠,剥离瘤体,分别称量瘤质量。其余小鼠用于生存期观察。结果：EPO处理组小鼠的肿瘤体积和质量与盐水处理组相比差异无统计学意义（P〉0.05）;DTIC联合EPO处理组小鼠的肿瘤体积和质量与DTIC处理组相比差异无统计学意义（P〉0.05）;DDP联合EPO处理组小鼠的肿瘤体积与DDP处理组相比明显缩小（P〈0.05）。应用EPO处理组的小鼠外周血RBC、Hb和Hct水平明显高于未应用EPO组（P〈0.05）。结论：EPO对黑色素瘤细胞在小鼠体内的生长没有明显影响;但EPO能调节黑色素瘤细胞对DTIC、DDP的敏感性,且该调节作用与化疗药的类型有关。     

非小细胞肺癌组织中促红细胞生成素及其受体mRNA的表达及意义

目的 探讨促红细胞生成素（EPO）及其受体（EPO-R）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及与临床病理参数的关系。方法 采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测31例NSCLC组织、相应的癌旁组织及21例肺良性病变组织中EPO和EPO-R的mRNA水平,并分析其水平与NSCLC临床病理参数的关系。结果 EPO-mRNA和EPO-R mRNA在NSCLC组织中的相对表达量分别为0.79±0.18和0.60±0.13,在癌旁组织中分别为0.23±0.09和0.17±0.09,在肺良性病变组织中分别为0.19±0.11和0.13±0.09。EPO mRNA和EPO-R mRNA 在NSCLC组织中的表达高于癌旁组织和肺良性病变组织,差异有统计学意义（P＜0.05）。EPO mRNA和EPO-R mRNA的表达与NSCLC的临床分期、病理分型及吸烟史均无关（P＞0.05）。结论 NSCLC中EPO／EPO-R mRNA 高表达,提示EPO／EPO-R可能参与肿瘤的发生过程,因此可将其表达水平作为NSCLC的辅助性诊断指标。     

Neuropilin1单克隆抗体对胶质瘤大鼠Bcl-2/Bax表达的影响

目的:研究Neuropilin1单克隆抗体对胶质瘤大鼠Bcl-2/Bax表达的影响。方法:将36只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组,每组12只;假手术组只行颅骨开窗手术,其余各组均建立胶质细胞瘤模型。模型组腹腔注射0.9%氯化钠,治疗组腹腔注射NRP-1 MAb,均每日1次。干预14天后取材。对肿瘤组织称重,免疫组化检测Bax和Bcl-2表达,Western blot检测NRP-1蛋白、Bax蛋白和Bcl-2蛋白表达量,qPCR检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA表达情况,TUNEL检测细胞凋亡情况。结果:假手术组无肿瘤,治疗组肿瘤组织重量显著小于模型组,差异具有统计学意义（P<0.05）。免疫组化显示:与假手术组比较,模型组和治疗组Bax表达显著下降,Bcl-2表达显著上升,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,治疗组Bax表达上升,Bcl-2表达下降,差异具有统计学意义（P<0.05）。Western blot检测显示:与假手术组比较,模型组和治疗组NRP-1蛋白和Bcl-2蛋白表达量显著上升,Bax蛋白表达量显著下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,治疗组NRP-1蛋白和Bcl-2蛋白表达量显著下降,Bax蛋白表达量显著上升,差异具有统计学意义（P<0.05）。qPCR检测显示:与假手术组比较,模型组和治疗组Bax mRNA表达显著下降,Bcl-2 mRNA表达显著上升,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,治疗组Bax mRNA表达上升,Bcl-2 mRNA表达下降,差异具有统计学意义（P<0.05）。TUNEL检测显示:与假手术组比较,模型组和治疗组的细胞凋亡率显著上升,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,治疗组的细胞凋亡率显著下降,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:NRP-1 MAb可通过抑制NRP-1表达而上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达促进胶质细胞瘤凋亡。     

赖氨匹林对黑色素瘤B16细胞的增殖抑制作用

[目的]探讨非甾体抗炎药赖氨匹林（Aspisol）对小鼠黑色素瘤细胞株B16的增殖抑制作用及其可能的机制。[方法]应用MTF比色法分析细胞生长抑制作用,流式细胞技术测定凋亡率,应用Western blot分别检测COX-2蛋白和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。[结果]2～8mmol／L赖氨匹林可抑制B16细胞的生长,且其作用具有剂量和时间依赖性（P〈0．01）。赖氨匹林（2、4、8mmol／L）作用24h后诱导B16细胞的凋亡率分别为5．05％±1．23％、9．25％±1．46％、14．80％±1．98％,并呈浓度依赖性;与对照组（0．18％±0．13％）比较差异有显著性（P〈0．01）。赖氨匹林抑制B16细胞COX-2蛋白的表达（P〈0．05）;赖氨匹林可促进Bax蛋白表达（P〈0．05）,但抑制Bcl-2的表达（P〈0．05）。[结论]赖氨匹林通过影响COX-2蛋白的表达,调节凋亡相关蛋白表达,抑制B16细胞增殖。     

RNA干扰RhoBTB1表达促进结肠癌HT29细胞增殖、抑制其凋亡的相关研究

目的:探究RNA干扰RhoBTB1基因表达对结肠癌HT29细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用Lipofectamine 2000将siRNA RhoBTB1或siRNA NC转入HT29细胞中，实验分为Control组、转染对照组和siRNA Rho组，噻唑蓝（MTT）和流式细胞术分别检测细胞的的活力和凋亡率，蛋白质印迹法（Western Blot）检测细胞中RhoBTB1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达量。结果:与对照组相比，HT29细胞转染siRNA RhoBTB1后，细胞中RhoBTB1蛋白的表达量显著低于对照组（P<0.05），细胞活力显著升高（P<0.05），凋亡率显著降低（P<0.05），Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平明显降低(P<0.05)，Bcl-2蛋白水平显著增加（P<0.05）。结论:RNA干扰RhoBTB1表达促进结肠癌HT29细胞增殖，抑制其凋亡，可能通过调节线粒体凋亡通路相关蛋白的表达量发挥作用。     

沉默HOXC10基因促进骨肉瘤MG-63细胞凋亡及其机制

目的:探讨沉默同源框C10（Homeobox C10,HOXC10）基因表达对骨肉瘤细胞MG-63细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨可能的作用机制。方法:采用脂质体转染法将特异性针对HOXC10基因的shRNA转入骨肉瘤MG-63细胞（HOXC10-shRNA组）,同时以转染Scramble-shRNA作为对照组（Scramble-shRNA组）,分别应用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测HOXC10 mRNA及蛋白的表达水平。转染处理后,分别采用CCK-8法及FCM法检测骨肉瘤MG-63细胞的增殖抑制率及凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测HOXC10、ATM和核因子-κB（nuclear factor kappa B,NF-κB)及凋亡相关蛋白Survivin和Caspase-3的表达水平。结果:HOXC10-shRNA转入MG-63细胞后,HOXC10 mRNA和蛋白的表达水平均明显下调（P均<0.05）。与Scramble-shRNA组细胞活力（0.95±0.12）%和凋亡率（4.35±0.52）%相比,HOXC10-shRNA组细胞活力（0.38±0.06）%明显下降,细胞凋亡率为（18.19±3.76）%明显升高（P均<0.05）;ATM/NF-κB信号通路中相关蛋白ATM、NF-κB及Survivin的表达水平均明显下调（P均<0.05）,而Caspase-3表达明显上调（P<0.05）。结论:沉默HOXC10基因表达后可抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与调控ATM/NF-κB信号通路的活化相关。     

siRNA干扰FLOT2基因表达对肾细胞癌细胞增殖的影响

目的:探讨FLOT2在肾细胞癌细胞株中的表达,并观察小干扰RNA沉默FLOT2基因对肾细胞癌786-O细胞增殖能力的影响。方法:将化学合成的FLOT2的小干扰siRNA用脂质体 Lipofectamine2000转染至肾细胞癌786-O细胞;分别用RT-PCR、Western blot方法检测细胞转染前后FLOT2以及细胞增殖相关因子CCND1的表达。CCK-8与克隆形成实验检测其增殖情况。结果:转染FLOT2-siRNA的肾细胞癌786-O细胞,RT-PCR、Western blot检测显示FLOT2在基因及蛋白水平明显下调（P<0.05）;与对照组比较786-O细胞增殖能力明显下降（P<0.05）,细胞增殖相关因子CCND1明显下调（P<0.05）。结论:FLOT2在肾细胞癌细胞系中高表达,采用特异性FLOT2-siRNA 能够显著降低FLOT2和CCND1表达。干扰FLOT2表达能显著抑制786-O细胞的增殖,FLOT2基因可能参与了肾细胞癌的生物学行为。     

芍药苷联合奥沙利铂对肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察芍药苷联合奥沙利铂对人结肠癌细胞SW480体外增殖及凋亡的影响,初步探讨其作用机制.方法：MTT法检测芍药苷、奥沙利铂单药及联合用药对结肠癌细胞SW480增殖抑制的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测Bcl-2蛋白表达,ELISA检测细胞核内NF-κB转录活性.结果：芍药苷及奥沙利铂呈浓度依赖性抑制SW480细胞生长,两药联合具有协同抑制作用（P＜0.05）;联合用药组细胞凋亡率为（34.2±1.43）％,明显高于芍药苷单药组（10.2±0.16）％及奥沙利铂单药组（22.3±0.22）％（P＜0.05）;Western blot法检测表明芍药苷能够显著抑制Bcl-2蛋白的表达（P＜0.05）;ELISA法检测表明,与对照组（2.013±0.04）比较,芍药苷单药组（1.17±0.17）及联合用药组（0.9±0.08）吸光值明显降低（P＜0.05）.结论：芍药苷能显著提高奥沙利铂的抗肿瘤作用,此协同作用主要是通过抑制NF-κB的转录活性,从而下调Bcl-2的蛋白表达,促进肿瘤细胞凋亡来实现的.     

EPO和EPOR在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 检测促红细胞生成素（EPO）和促红细胞生成素受体（EPOR）在肝细胞癌（HCC）中的表达情况,并分析二者预测HCC预后的意义。方法 采用免疫组化法检测EPO和EPOR在96例HCC组织和11例正常肝脏组织中的表达,分析EPO和EPOR在HCC中表达的相关性,及其与HCC临床病理特征及预后的关系。结果 HCC组织中EPO和EPOR高表达率分别为49.0％、46.9％,明显高于其在正常肝脏组织中的表达（0、0）。HCC组织中EPO与EPOR的表达呈正相关（r=0.207,P＜0.05）。EPO和EPOR表达均与Edmondson-Steiner病理分级密切相关（P＜0.05）。EPOR低表达组的1、3、5年无瘤生存率分别为76.2％、42.1％及16.5％,高表达组分别为55.6％、14.0％及7.8％,差异有统计学意义（P＜0.05）。EPOR低表达组的1、3、5年生存率分别为88.0％、76.0％及46.1％,高表达组分别为80.0％、43.6％及26.8％,差异有统计学意义（P＜0.05）。Cox多因素分析显示,卫星结节、EPOR表达是影响HCC患者术后无瘤生存的独立预后因素;卫星结节、血管侵犯和EPOR表达是影响HCC患者术后总生存的独立预后因素。结论 EPOR表达与HCC患者术后无瘤生存和总生存相关,可能是影响HCC预后的分子标志物。     

DCLK1 对结直肠癌细胞化疗敏感性的影响及机制

目的:探讨双肾上腺皮质激素样激酶1（DCLK1）对结直肠癌耐药细胞化疗敏感性的影响及机制。方法:采用实时定量PCR和Western blot方法检测人结直肠癌细胞系HT29、SW480及其奥沙利铂（OXA）耐药株HT29/OXA和SW480/OXA中DCLK1的表达。采用siRNA干扰HT29/OXA和SW480/OXA细胞中DCLK1的表达,并用不同浓度OXA干预细胞,CCK-8法检测细胞增殖及其对OXA的敏感性,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Caspase-3活性检测试剂盒检测细胞的Caspase-3活性,Western blot检测细胞中DCLK1、Bax、Bcl-2、多药耐药蛋白1（MDR1）、P-糖蛋白（P-gp）等蛋白的表达。结果:与亲本细胞系比较,DCLK1在HT29/OXA和SW480/OXA细胞中的mRNA和蛋白表达水平均显著上调（P<0.05）。转染DCLK1 siRNA（si-DCLK1）后,HT29/OXA和SW480/OXA细胞的增殖活性均显著降低（P<0.05）,且它们对OXA的敏感性显著增加（P<0.05）;转染si-DCLK1后,HT29/OXA和SW480/OXA细胞的凋亡显著增加（P<0.05）,伴随Caspase-3活性上调（P<0.05）,Bax蛋白表达上调（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达下调（P<0.05）;转染si-DCLK1后,HT29/OXA和SW480/OXA细胞中MDR1和P-gp的蛋白表达均显著下调（P<0.05）。结论:DCLK1可能通过调控Bax/Bcl-2以及MDR1和P-gp的表达影响结直肠癌细胞的化疗敏感性。     

CDX1对结直肠癌细胞增殖凋亡及p38MAPK磷酸化水平的影响

目的:探讨尾侧同源盒转录因子1（CDX1）对结直肠癌细胞增殖凋亡及p38MAPK磷酸化水平的影响。方法:用荧光定量PCR和Western blot检测正常肠上皮细胞FHC和结直肠癌细胞SW480、HCT116、Caco2中CDX1 mRNA和蛋白表达水平。在SW480细胞中转染pIRES-CDX1和pIRES记为CDX1组和载体组,以不做转染的细胞为对照组,荧光定量PCR和Western blot测定CDX1 mRNA和蛋白表达水平,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot测定细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3（p-STAT3）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、磷酸化的p38MAPK（p-p38MAPK）蛋白水平。结果:结直肠癌细胞SW480、HCT116、Caco2中CDX1 mRNA和蛋白表达水平均明显低于正常肠上皮细胞FHC（P<0.05）,SW480细胞中CDX1 mRNA和蛋白表达水平明显低于HCT116、Caco2（P<0.05）。CDX1组细胞中CDX1 mRNA和蛋白水平明显高于对照组（P<0.05）,载体组细胞中CDX1 mRNA和蛋白水平与对照组相比没有统计学差异（P>0.05）。CDX1组细胞存活率明显降低,细胞凋亡率明显升高,细胞中Cleaved Caspase-3、p-p38MAPK水平升高,细胞中Bcl-2、p-STAT3水平降低,与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。载体组细胞存活率、凋亡率及细胞中Cleaved Caspase-3、Bcl-2、STAT3、p-STAT3、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白水平与对照组相比没有明显变化（P>0.05）。结论:CDX1抑制结直肠癌细胞增殖,诱导Caspase-3介导的细胞凋亡,促进细胞中p38MAPK磷酸化,抑制细胞中STAT3磷酸化。     

沉默Y盒结合蛋白-1表达抑制SH-SY5Y细胞增殖促其凋亡的作用与机制

目的:观察短发夹RNA（shRNA）沉默Y盒结合蛋白-1（YB-1）对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖、凋亡的影响及其调控机制。方法:构建针对YB-1的短发夹RNA真核表达载体,利用LipofectamineTM2000脂质体转染SH-SY5Y细胞,检测蛋白表达水平,鉴别干扰效果;四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测干扰与否对SH-SY5Y细胞增殖的影响;流式细胞技术分析干扰与否对SH-SY5Y细胞凋亡的影响;Western blot法检测CyclinD1、Bcl-2及Bax在蛋白水平的变化。结果:Western blot结果显示转染组YB-1表达低于对照组和无效转染组,后两组无显著差异;MTT法检测显示转染组细胞增殖水平低于对照组,无效转染组细胞增殖水平接近对照组;流式细胞术检测结果显示转染组凋亡细胞数占总细胞数的（23.21±1.90）%,高于对照组（5.05±0.83）%（P<0.01）,无效转染组（6.24±1.05）%与对照组无显著性差异（P>0.05）;Western blot技术检测转染组CyclinD1、Bcl-2蛋白水平较对照组明显下降,Bax升高,无效转染组同对照组无明显差异。结论:shRNA介导的YB-1表达沉默可抑制SH-SY5Y细胞CyclinD1、Bcl-2表达,促进Bax表达,进而抑制细胞增殖、促进凋亡。