胃蛋白酶原Ⅰ时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的　采用时间分辨荧光免疫分析技术建立高灵敏的胃蛋白酶原Ⅰ的快速全自动检测方法。方法　以PGⅠ单克隆抗体 80 0 3#包被板 ,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3 及标记PGⅠ单克隆抗体 80 16 # ,发光增强系统为以 β 二酮体为主的增强液。采用平衡饱和法建立PGⅠ时间分辨荧光免疫分析 ,数据采用Log Logit法函数和四参数Logitc函数数据处理程序处理。结果　方法的批内和批间CV分别为 1.9%和 4 .7% ,平均回收率为 10 2 .6 5 % ,灵敏度为 0 .0 5 μg L ,可测范围为 3.5～ 32 8μg L ,ED2 0 、ED50 和ED80 分别为 11.34μg L、38.73μg L和 132 .3μg L。Eu3 标记抗体 2 0℃保存 8个月免疫反应性基本无损失 ,同批试剂连续 8个月应用分析结果稳定 ,临床结果与免疫放射分析法的结果相符。结论　胃蛋白酶原Ⅰ时间分辨荧光免疫分析法是目前胃蛋白酶原Ⅰ检测中最灵敏的方法 ,该分析法稳定性好 ,具有很好的应用前景。     

层粘连蛋白时间分辨免疫分析方法的建立

采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立高灵敏的层粘连蛋白(LN)的快速的全自动检测方法.以羊抗鼠IgG抗体包被板,采用抗人LN单克隆抗体(McAb)、Eu3 标记人LN和以β-二酮体为主的增强液建立竞争LN-TRFIA,数据采用双对数函数处理程序处理.结果表明LN的标记率为11.5 Eu3 /LN,方法的批内和批间CV分别为3.9%和6.7%,平均回收率为91.2%,灵敏度为5μg/L,可测范围为5～1000μg/L,ED20、ED50和ED80分别为723.1μg/L、183.4μg/L和56.95μg/L.临床结果与RIA结果相符.本文建立的LN-TRFIA灵敏、稳定,可全自动操作,有很好的应用前景.     

弓形虫IgG时间分辨免疫荧光分析法的建立

建立了高灵敏弓形虫-IgG的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)检测方法.样品或参考标准加入到由弓形虫抗原包被的96孔微孔板上,用Eu3+标记羊抗人IgG,建立间接弓形虫-IgG TRFIA检测法.本法检测范围为0.7～200 U/mL, 灵敏度为0.7U/mL;方法的平均批内和批间CV分别为4.5%和5.6%;标准曲线可测范围为0.7～14U/mL. 本文建立的弓形虫-IgG的TRFIA法灵敏度高、稳定性好,具有良好的应用前景.     

HBeAg时间分辨荧光免疫分析法的建立

采用平衡饱和法建立了乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)时间分辨荧光免疫分析法.以针对HBeAg的单克隆抗体G8包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3+及标记C4单抗,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液.数据采用Log-Logit法函数和四参数Logitc函数数据处理程序处理.结果表明方法的批内和批间CV分别为2.39%和5.28%,平均回收率为97.62%,灵敏度为0.58NCU/mL,可测范围为12.01-529.84NCU/mL,ED20、ED50和ED80分别为6.36NCU/mL、26.85NCU/mL和136.7NCU/mL.本方法与HBsAg有13.1%的交叉反应.Eu3+标记抗体-30℃保存6个月免疫反应性基本无损失,同批试剂连续5个月应用分析结果稳定.HBeAg时间分辨荧光免疫分析的质量参数优于EIA和IRMA.     

癌胚抗原的时间分辨免疫荧光分析及其诊断试剂的研制

目的利用时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)技术,建立一种人血清癌胚抗原(CEA)的快速全自动检测方法并研制其诊断试剂。方法采用双抗体夹心法(用1株抗CEA的mAb M86160M用于包被微孔板,另1株抗CEA的mAbM86110M用于标记铕)建立CEA-TRFIA,增强液采用β-二酮体为主的发光增强系统。结果CEA-TRFIA的线性测量范围为(1~560)μg/L,分析的灵敏度为0.28μg/L,批内和批间的变异系数(CV)分别为7.2%~8.6%和8.9%~13.2%。与AFP、CA12-5、CA19-9和白蛋白均无交叉反应,与CA15-3的交叉反应值为1.62μg/L。将1000份血清标本用本法与国外罗氏化学发光试剂盒同时检测,其相关系数(r)为0.946。结论CEA-TRFIA的各项指标均达到临床检测的要求,可替代国外同类检测试剂盒,用于临床血清CEA水平的测定。     

铁蛋白时间分辨荧光免疫分析法的建立

用夹心法建立铁蛋白(FER)时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA),测定血清FER的含量。以FER单克隆抗体(McAb)806#包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu^3 及标记FERMcAb 803#,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液。采用双对数函数数据处理程序,方法的批内和批间CV分别为2．2％和3．7％,平均回收率为118％,灵敏度为0．5μg／L,可测范围为0．5-1000μg／L。ED20、ED50和ED80分别为27．8μg／L、88．5μg／L和247μg／L。Eu^3 FER McAb于-30℃保存至少4个月,免疫反应性基本无损失,同批试剂连续分析4个月结果稳定。本法与PE公司的FER-TRFIA试剂盒所得样品的测定值的相关系数为0．98。本文建立的FER-TRFIA法,是一种适用于人群贫血普查和各种肝脏疾病及肿瘤的联合诊断的良好方法,分析范围、灵敏度和稳定性均较理想,值得推广应用。     

总PSA时间分辨免疫荧光分析法的建立

利用时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)技术建立人血清总PSA(前列腺特异性抗原)的快速全自动检测方法及其诊断试剂研制,该法采用双抗体夹心法建立tPSA-TRFIA,对该法和研制试剂的指标评价表明:方法的线性测量范围为0.50～250μg/L,灵敏度为0.06μg/L,批内批间的精密度分别为5.58%～9.71%,6.49%～12.12%。与CEA、CA12-5、CA15-3、CA19-9、AFP无交叉反应。353份血清标本用本试剂与国外其他试剂同时检测,其相关性达到94.4%,结果表明,试剂测定各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品。     

胃蛋白酶原Ⅰ、Ⅱ的酶免疫分析

本文建立了胃蛋白酶原Ⅰ、Ⅱ(PGⅠ、PGⅠ)的酶免疫分析(EIA)方法。将抗PGⅠ单抗PGA4或抗PGⅡ单抗PGC8包被在板条微孔内,制成固相抗体,用过碘酸钠方法将抗PGⅠ单抗PGA7或抗PGⅡ单抗PGC10与辣根过氧化物酶相联结,成为标记抗体,二者与不同量的PGⅠ、Ⅱ标准品在磷酸缓冲液中保温反应后,根据测量数据画出标准曲线。对于PGⅠ、PGⅡBmax/B0分别为72.0和61.5,非特异结合分别小于1.3%和小于1.6%,灵敏度均为0.5ng/mL,批内CV分别为5.5%和6.8%,批间CV分别为12.0%和13.5%,回收率分别为98.5%和97.9%。测定40例胃癌组及40名正常组血清PGⅠ和PGⅡ,结果显示,胃癌血清PGⅠ低于正常组(P<0.001),PGⅡ高于正常组(P<0.01),PGⅠ/PGⅡ比值低于正常组(P<0.001)。新建PGⅠ、ⅡEIA与现行PGⅠ、ⅡIRMA具有良好的相关性。     

赭曲霉毒素A时间分辨荧光免疫分析法的建立及其考核

采用稀土离子标记技术,应用多克隆抗体建立高灵敏的赭曲霉毒素A(OTA)时间分辨荧光免疫分析法(OTA-TRFIA).以OTA-KLH为免疫原制备抗OTA抗体;OTA与BSA的联结物(OTA-BSA)为固相抗原,与游离OTA共同竞争有限的兔抗OTA抗体;用Eu3 标记的羊抗兔抗体.该方法的灵敏度为0.02μg/L,测量范围为0.02μg/L～400μg/L,批内和批间CV分别为2.6%和5.2%,平均回收率为95.8%,与赭曲霉毒素B对OTA的检测有5.6%交叉反应,而黄曲霉毒素B1及BSA则没有交叉反应.不同时间进行的OTA-TRFIA的ED80、ED50、ED20效应点值分别为0.2μg/L、1.0μg/L和5.3μg/L.研究表明,OTA-TRFIA是目前OTA检测中最灵敏的方法之一,该分析方法稳定性好、可测范围宽,具有很好的应用前景.     

CA125时间分辨免疫荧光分析法及其临床应用

以 CA1 2 5单克隆抗体包被微孔板 ,用平衡饱和法与 CA1 2 5、Eu3+标记异硫氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸 -CA1 2 5单抗形成三层夹心 ,以β-二酮体为增强液 ,建立 CA1 2 5的时间分辩免疫荧光分析法 ( IFMA)。方法的批内和批间 CV分别为 2 .4 5%、2 .66% ,平均回收率 1 0 4 .2 9% ,灵敏度 3.2 7U/L,可测范围为 6.0 5-2 0 62 U/L。本法与 CEA无交叉 ,与 AFP有 6.77%的交叉 ,与β-HCG有 1 0 .89%的交叉。 84名健康女性血清 CA1 2 5浓度为 1 1 .4 2± 1 2 .2 0 U/L,34例卵巢癌患者血清 CA1 2 5浓度为 334 .33± 376.66U/L,与对照组比较有高度显著性差异 ( P<0 .0 1 )。血清样品测定结果与酶免疫分析 ( ELISA)和化学发光免疫分析 ( CLIA)测定结果呈相关 ,其相关系数 ( r)分别为 0 .888和 0 .899。诊断试验结果表明 ,CA1 2 5IFMA的敏感度、特异性、准确度和预测值等指标符合临床诊断要求     

β2微球蛋白时间分辨荧光免疫检测法的建立及初步应用

为了建立β2微球蛋白(β2-m)时间分辨荧光免疫分析。以羊抗兔抗体包被板条,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺五乙酸络合Eu3+及标记β2-m,发光增强系统为以β二酮体为主的增强液。采用竞争法建立β2-m时间分辨荧光免疫分析,数据采用双对数法函数和四参数logistic函数数据处理程序处理。结果此法的批内和批间CV分别为2.25%和2.91%,平均回收率为101.06%,灵敏度为0.06mg/L,可测范围为0.06～12mg/L。本方法与白蛋白、肌红蛋白均无交叉反应。溶血对本法无影响。临床初步应用所检测结果与放免法吻合。试验结果表明,β2-m-TRFIA法的敏感度、特异性、准确度等指标符合临床诊断要求。     

NSE时间分辨荧光免疫分析法的建立

采用夹心法建立神经元特异烯醇化酶（NSE）时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）来测定血清中NSE的含量。以NSE单克隆抗体E1包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3＋及标记NSE单克隆抗体E7,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液。采用平衡饱和法建立NSE-TRFIA,数据采用双对数函数数据处理程序处理。本方法的连续批内和批间CV分别为2.4%和4.8%,平均回收率为102.6%,灵敏度为0.31ng/mL,可测范围为0.31～320ng/mL,ED20、ED50和ED80分别为20.72ng/mL、57.23ng/mL和157.25ng/mL。本方法与AFP、CEA均无交叉反应。Eu3＋标记抗体-20℃保存8个月免疫反应基本无损失,同批试剂连续8个月应用分析结果稳定。临床应用检测结果与E170所测值高度相关。实验结果表明,本文所建立的NSE-TRFIA的灵敏度、特异性、准确度等均符合临床应用要求。     

TgAb时间分辨荧光免疫分析间接测定法的建立及临床应用

目的建立甲状腺球蛋白抗体(TgAb)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)间接检测法。方法用Tg抗原包板,用铕(Eu3+)标记兔抗人IgG做标记物,间接法TRFIA检测人血清中的TgAb。结果 TgAb-TRFIA的灵敏度为1.0 IU/ml;批内变异系数(CV)为3.1%～3.6%,批间CV为3.3%～3.6%;平均回收率为101.6%;热稳定性好;与电化学发光分析技术(ECLIA)比对,相关系数达0.8945;与临床结果高度相关。结论本法建立的TgAb-TRFIA是一个高灵敏和可靠的检测,有助于甲状腺疾病的临床诊断。     

CA19-9时间分辨荧光免疫分析方法的建立及应用

以CA19－9单抗192＃包被板条,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu^3 及标记241＃单抗,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液,采用平衡饱和法建立了CA19－9时间分辨荧光免疫分析。采用Log-Logit函数和四参数Logistic函数两种程序处理数据。结果表明方法的批内和批间CV分别显3．26％和5．74％,平均回收率为99．61％,灵敏度为1．66U/mL,可测范围为18．69－967U／mL,ED20、ED50t ED80分别为40．55U／mL、114．2U/mL和396．9U/mL。本方法与CEA有6％交叉反应,与CA125、CA153和AFP均无交叉反应,Eu^3 标记抗体于－30℃,保存六个月免疫反应性基本无损失,连续5个月应用同批试剂,分析结果稳定。78份血清样品的检测结果与化学发光吻合,本文提示,采用CA19－9时间分辨荧光免疫分析,可以高效灵敏地检测出血清中的CA19－9的含量,值得临床推广。     

促甲状腺素光激化学发光免疫测定法的建立和初步应用

采用光激化学发光免疫测定法(LICA)技术建立促甲状腺素(TSH)快速定量检测方法。采用两株针对TSH不同表位的单克隆抗体,一株单抗包被发光微粒,另一株为生物素化单抗,两者与链亲和素包被的感光微粒一起构建双抗体夹心LICA。数据处理采用双对数函数处理程序。方法的灵敏度为0.015mIU/L;批内CV为2.5%～3.6%,批间CV为2.6%～4.4%;平均回收率为100.60%。与时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)比对,相关系数达0.9681;与TRFIA临床测定值呈明显相关;正常值范围为0.33～3.09mIU/L。本文建立的TSH光激化学发光免疫测定法是目前TSH检测中最快速灵敏的方法之一,该方法稳定性好,具有很好的应用前景。     

β2-MG时间分辨荧光免疫试剂盒的研制及质量考核

为建立灵敏度好、特异性高的TRFIA检测β2-MG,以羊抗鼠IgG固相抗体,Eu3 标记的β2-MG与标本β2-MG共同竞争限量的抗β2-MG鼠单克隆抗体(mAb),以Log-Logit制作标准曲线.本法检测灵敏度为0.01 mg/L,检测范围为0.1～8.0 mg/L;试剂及包被板在37℃放置7天后,监测标准曲线的ED20、ED50、ED80未见明显偏移;批内CV,批间CV分别为4.1%和7.8%,与美国PE试剂盒所测结果的相关系数为0.9364,说明两者具有良好的相关性.本法检测β2-MG灵敏度高,特异性好,试剂盒存放时间长且无放射性污染,是一种有应用前景的检测方法.     

甲状腺过氧化物酶抗体TRFIA技术的建立及临床应用

目的:建立甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)竞争检测法。方法:用TPO抗原包板,用Eu3+标记羊抗鼠IgG做标记物,TRFIA检测人血清中的TPOAb。结果:TPOAb-TRFIA的灵敏度为1.0IU/ml;批内CV为3.2%～5.3%,批间CV为3.6%～5.6%;平均回收率为97.95%;热稳定性好;与电化学发光分析技术(ECLIA)比对,相关系数达0.9861;女性TPOAb测定值显著高于男性(P<0.01),且人群中TPOAb的阳性率女性也显著高于男性;TPOAb的正常值范围为≤32.6IU/ml。结论:本法建立的TPOAb-TRFIA是一个高灵敏和可靠的检测,有助于甲状腺疾病的临床诊断。     

改进的人Ⅲ型前胶原放射免疫分析法

本文建立了一种经改进能特异的、敏感的测定人Ⅲ型前胶原(hPCⅢ)含量的RIA法, 并用于诊断肝硬化的临床评价.从人工流产胎皮中分离、纯化hPCⅢ,免疫家兔获取高效价抗血清.hPCⅢ标记125I, 使用双抗体 PEG分离技术, 平衡法加样, 建立RIA.结果表明, 标准曲线测定范围为40-640μg/L.与hPCⅠ的交叉反应率为0.81%、与CⅣ、CⅢ、CⅠ无交叉反应.灵敏度为6μg/L.精确度: 批内CV为4.2%; 批间CV为8.2%.平均回收率为99.9%.血清hPCⅢ正常参考值为87.5±16.2μg/L, 正常上限值为120μg/L.本文建立的改良法操作更简便、快捷.     

氯霉素磁分离酶联免疫(MEIA)检测方法的建立

目的:采用磁分离酶联免疫分析法(MEIA)建立定量检测氯霉素(CAP)的一种高灵敏度方法.方法:采用免疫竞争法,用异硫氰酸荧光素(FITC )标记抗CAP抗体,碱性磷酸酶(AP)标记CAP,以羊抗FITC抗体包被的免疫磁珠作为固相分离载体,单磷酸酚酞做显色底物,建立检测CAP的MEIA法.结果:成功建立了检测CAP的MEIA法,检测时间为40 min,检测灵敏度为0.03μg/L,线性范围为0.1～8.1μg/L,批内变异系数(CV) 3.9%-5.3%,批间CV 4.8%-8.1%,回收率为97%～101.5%,与国标方法液相色谱一串联质谱法的检测结果对比,相关系数r=0.9817.结论:检测CAP的MEIA法的灵敏度及准确率高、检测时间短,为食品中氯霉素残留的监测提供了一种新的免疫分析方法.     

促甲状腺激素生物素-链亲和素TRFIA定量检测法的建立

用Eu3＋标记链亲和素（SA）,分别用两株识别人促甲状腺素（human thyroid stimulating hormone,hTSH）的单克隆抗体包被96微孔板并生物素化,建立了高灵敏的hTSH生物素-链亲和素（BAS）时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）检测法。本法的灵敏度为0.02mIU/L;批内CV为2.7%~3.5%,批间CV为3.2%~3.8%;平均回收率为100.26%;与电化学发光免疫分析技术（ECLIA）比对,相关系数达0.9544,线性方程为Y=1.3133X-32.297;与ECLIA临床测定值也呈明显相关;正常值范围为0.33~3.09mIU/L。本文建立的hTSH-BAS-TRFIA具有灵敏度高,特异性强,稳定性好,测定范围宽,检测时间短和非放射性等优点,具有良好的应用价值。