姜黄素通过激活Nrf2/Nox4通路调控压力负荷诱导的心力衰竭

目的 探讨姜黄素(CUR)对小鼠压力负荷性心力衰竭(HF)的保护作用及可能机制.方法 30只健康雄性C57BL/6小鼠随机分成假手术组(Sham)、心力衰竭组(HF)和姜黄素治疗组(HF+CUR).通过主动脉弓缩窄(TAC)建立小鼠压力负荷性心力衰竭模型.实验第4周,收集各组小鼠心肌组织,称取心脏重量,计算心脏重量指数;HE染色观察心脏组织病理学改变;Western blot检测MDA5,IRE-aⅠ、SOD-1、Nrf2和Nox4蛋白的表达.结果 HF组小鼠心脏重量和心脏重量指数显著增加,心肌间质出现明显的炎症细胞浸润,促氧化应激蛋白MDA5和IRE-aⅠ表达升高,而SOD-1蛋白表达降低.CUR处理显著降低小鼠心脏重量和心脏重量指数,减少心肌间质炎症细胞浸润,降低MDA5和IRE-aⅠ蛋白表达,提高SOD-1蛋白表达.此外,CUR处理还能显著增加Nrf2蛋白表达,降低Nox4蛋白表达.结论 CUR处理对小鼠压力负荷性HF有保护作用,其潜在机制可能与激活Nrf2/Nox4信号通路相关.     

槲皮素通过Wnt3a/β-catenin信号通路改善小鼠压力负荷性心力衰竭

目的 探讨槲皮素(Quercetin)对小鼠压力负荷性心力衰竭(HF)的影响及作用机制。方法 30只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分成假手术组(Sham)、心力衰竭组(HF)和HF+Quercetin组，采用主动脉弓缩窄术(TAC)构建小鼠压力负荷性HF,术后腹腔注射给予Quercetin, 2次/日，连续6周。小动物超声检测小鼠心功能；称量心脏重量并计算心脏重量指数；HE和Masson染色观察小鼠心脏组织病理学改变和纤维化程度；Western blot检测小鼠心肌组织Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、Wnt3a和β-catenin蛋白的表达。结果 Quercetin显著降低HF小鼠心脏重量和心脏体重比。超声心动图显示Quercetin显著改善HF小鼠的心功能，并降低升主动脉内径。Quercetin治疗改善HF小鼠心脏病理改变和纤维化程度；降低HF小鼠心脏组织Bax、cleaved caspase-3、Wnt3a和β-catenin蛋白的表达，升高Bcl-2的表达。结论 Quercetin通过抑制Wnt3a/βcatenin信号通路对HF小鼠心肌提供保护作用。     

人参炔醇通过Nrf2/ARE通路调控小鼠心肌缺血再灌注损伤

目的 阐明人参炔醇(Panaxynol,PNN)对小鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用及其可能机制.方法 30只健康雄性C57BL/6小鼠随机分成假手术组(Sham)、MIRI组和MIRI+PNN组,采用结扎冠状动脉方法建立小鼠MIRI模型,术后给予PNN干预,每日一次,连续1周.实验第7天,收集小鼠心肌组织,称取小鼠心脏重量;HE染色观察组织病理学改变;Western blot检测氧化应激和细胞凋亡相关蛋白表达.结果 MIRI组小鼠小鼠心脏重量和心脏重量指数明显升高,心肌间质出现明显的炎症细胞浸润,促氧化应激蛋白MDA5和IRE-α表达升高,而SOD-1蛋白表达降低,同时促细胞凋亡蛋白Bax和Caspase3表达升高,而Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.05).PNN处理能显著降低MIRI诱导的小鼠心脏重量和心脏重量指数,减少心肌间质炎症细胞浸润,降低MDA5、IRE-α、Bax和Caspase3蛋白表达,提高SOD1和Bcl-2蛋白表达.此外,PNN处理还能显著增加Nrf2蛋白表达,降低ARE蛋白表达(P＜0.05).结论 NN处理对小鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与激活Nrf2/ARE信号通路相关.     

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨lncRNA H19对支原体感染肺炎小鼠肺组织的影响北大核心CSCD

目的:基于核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路探讨lncRNA H19对支原体感染肺炎(MPP)小鼠肺组织的影响。方法:将60只BALB/c小鼠采用随机数字表法分为对照组、MP组、si-NC组和si-H19组。si-NC组、si-H19组鼻腔分别滴入阴性对照siRNA、lncRNA H19 siRNA。除对照组外,其余组鼻腔滴入MP菌液构建MPP模型,对照组滴入等量培养基。1次/d,连续3 d。同时构建支原体感染A549细胞模型,将A549细胞分为对照组、MP组、si-NC组、si-H19组、pcDNA-NC组和pcDNA-H19组。各组分别转染对应的RNA及质粒。除对照组外,其余组使用MP菌液感染A549细胞。HE染色观察小鼠肺组织病理学改变;qRT-PCR检测肺组织和细胞中lncRNA H19 mRNA的表达;ELISA检测肺组织和细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量;免疫组化染色观察小鼠肺组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达;细胞单克隆形成、MTT法及Annexin V-FITC/PI染色检测细胞增殖、凋亡能力;Western blot检测肺组织和细胞中Nrf2、HO-1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白表达。结果:支原体感染肺炎小鼠实验中:与对照组相比,MP组、si-NC组双肺塌陷呈灰白色,镜下肺泡大量增生,内有充血及炎症细胞浸润;lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、MMP-9、Nrf2、HO-1蛋白水平升高,CyclinD1、Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05);敲减lncRNA H19后,si-H19组情况较MP组肺部损伤有所改善,lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、MMP-9蛋白水平降低,CyclinD1、Bcl-2、Nrf2、HO-1蛋白水平升高(P<0.05)。同时支原体感染A549实验与支原体感染小鼠肺组织实验结果一致。与对照组相比,MP组细胞增殖能力降低,凋亡能力提高,lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6、Nrf2、HO-1蛋白水平升高,CyclinD1蛋白水平降低(P<0.05);敲减lncRNA H19后,si-H19组细胞增殖能力提高,凋亡能力降低,lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白水平降低,CyclinD1、Nrf2、HO-1蛋白水平升高(P<0.05);过表达lncRNA H19后,pcDNA-H19组细胞增殖能力降低,凋亡能力提高,lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白水平升高,CyclinD1、Nrf2、HO-1蛋白水平降低(P<0.05)。结论:lncRNA H19在支原体感染肺炎小鼠肺组织中表达上调,敲降lncRNA H19能够减轻小鼠肺部炎症反应,促进细胞增殖并抑制其凋亡,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

柚皮素通过调控AMPK/Nrf2/HO-1信号通路减轻糖尿病小鼠心肌损伤

目的:探讨柚皮素(naringenin,NAR)对糖尿病小鼠心肌的保护作用及对腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)/核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2-related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)信号通路的影响。方法:将50只C57BL/6小鼠随机分为正常组(N组)和模型组。模型组采用连续腹腔注射链脲佐菌素的方法建立1型糖尿病小鼠模型,成模后将其分为糖尿病组(D组)、低剂量NAR干预组(D+L-NAR组)、中等剂量NAR干预组(D+M-NAR组)和高剂量NAR干预组(D+H-NAR组),对干预组小鼠分别给予低、中、高剂量NAR灌胃,N组和D组给予与D+M-NAR组等体积的生理盐水灌胃。6周后处死小鼠,观察NAR对小鼠体重及血糖的影响;HE和Masson染色观察心脏形态学改变,测量心肌胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF);免疫组化观察心脏组织中白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和IL-10的蛋白水平;TUNEL染色检测心肌组织凋亡情况;荧光探针DHE测定心肌细胞中活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)的生成;超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)及丙二醛(malondialdehyde, MDA)试剂盒测定心肌细胞中SOD活性及MDA的含量;Western blot测定心脏组织p-AMPKα、AMPKα、Nrf2、HO-1、NAD(P)H:醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1, NQO1]和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:与N组相比,D组成模后血糖明显升高,体重明显下降;与D组相比较,NAR干预组的血糖有所下降,体重有所增高。与N组相比,D组CVF明显增大,凋亡率明显增加,IL-6和cleaved caspase-3蛋白水平升高,IL-10、p-AMPKα、Nrf2、HO-1和NQO1蛋白水平降低,ROS生成率和MDA含量升高,SOD活性降低(P<0.05);与D组相比较,NAR干预组CVF明显降低,IL-6和cleaved caspase-3蛋白水平降低,IL-10、p-AMPKα、Nrf2、HO-1和NQO1蛋白水平升高(P<0.05);与D组比较,D+L-NAR组ROS成率、MDA含量及SOD活性的差异无统计学显著性,D+M-NAR组及D+H-NAR组的ROS生成率降低、MDA含量降低,SOD活性升高。结论:NAR能减轻糖尿病小鼠心肌损伤,其机制可能与激活AMPK/Nrf2/HO-1信号通路,增强抗氧化反应,减轻心肌纤维化、凋亡及炎症反应有关。     

丹参酮ⅡA激活Nrf2/Nox4通路减轻脂多糖诱导的小鼠肺炎和纤维化

目的研究丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对脂多糖诱导小鼠肺炎和纤维化影响,探讨其潜在的作用机制。方法30只8周龄雄性C57BL/6小鼠,随机分成对照组、脂多糖(LPS)组和LPS+Tan ⅡA组。采用尾静脉注射LPS制作小鼠肺炎和纤维化动物模型,术后给予Tan ⅡA干预,每日一次,连续2周,实验第4周处死所有小鼠,收集血清和肺组织标本。采用HE染色检测肺组织炎症改变,Masson染色观察肺组织纤维化程度,ELISA检测血清IL-1β、TNF-α和IL-10蛋白表达,采用Western blot技术检测肺组织Nrf2、Nox4、Nqo1和Ho-1蛋白表达。结果与对照组相比,LPS组小鼠肺脏重量、肺脏/体重比显著增加,肺组织水肿、炎细胞浸润和纤维化明显加重,血清促炎蛋白IL-1β、TNF-α显著升高,抑炎蛋白IL-10表达下降(P<0.05)。Tan ⅡA处理显著减轻LPS导致的小鼠肺脏重量、肺脏/体重比,减轻肺水肿、炎细胞浸润和纤维化,减低血清IL-1β、TNF-α表达水平,升高IL-10表达水平。此外,Nrf2和Nox4蛋白表达水平LPS组高于对照组,Nqo1和Ho-1蛋白表达水平低于对照组,而Tan ⅡA处理可以上调Nrf2、Nqo1和Ho-1蛋白,降低Nox4蛋白表达水平(P<0.05)。结论Tan ⅡA减轻LPS诱发的小鼠炎症和纤维化,与激活Nrf2/Nox4通路相关。     

利多卡因对脓毒症大鼠心肌损伤及Nrf2/HO-1通路的影响

目的:探究利多卡因对脓毒症大鼠心肌损伤及核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1(Nrf2/HO-1通路的影响。方法:健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和利多卡因组,每组15只。模型组和利多卡因组采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症大鼠模型,假手术组大鼠仅打开腹腔而不进行盲肠结扎穿孔,造模后利多卡因组大鼠给予利多卡因10 mg/kg负荷剂量+10 mg·kg~(-1)·h~(-1)尾静脉输注3 h,假手术组和模型组输注等量生理盐水。采用ELISA法检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、肌红蛋白(Myo)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平;TTC染色法检测各组大鼠心肌梗死面积,计算心肌梗死率;HE染色观察心肌损伤病理变化;生物化学法检测心肌组织中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平;RT-qPCR和Western blot法分别检测心肌组织Nrf2和HO-1 mRNA及蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死率、血清中TNF-α、HMGB1、Myo和cTnI水平、心肌组织MDA含量及Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达量显著升高(P0.05),心肌组织SOD活性显著降低(P0.01),心肌组织出现严重病理损伤;与模型组比较,利多卡因组大鼠血清中TNF-α、HMGB1、Myo和cTnI水平、心肌梗死率及心肌组织MDA含量显著降低(P0.05),心肌组织SOD活性及Nrf2和HO-1 mRNA和蛋白表达量显著升高(P0.01),心肌组织病理损伤减轻。结论:利多卡因可减轻脓毒症大鼠心肌损伤,其机制可能与促进心肌细胞Nrf2/HO-1通路激活,提高其抗氧化应激能力有关。     

血红素加氧酶-1减轻糖尿病小鼠心肌损伤

目的观察血红素加氧酶-1(HO-1)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病心肌病是否发挥保护作用,并探讨相关的分子机制。方法常规腹腔注射STZ构建HO-1转基因小鼠(HO-1/DM)和同笼阴性小鼠(Wt/DM)糖尿病模型,8周后超声心动图检测小鼠左心室心脏功能。HE染色检测左室心肌,用RT-qPCR法检测心肌IL-6、TNF-α、Gpx3和p47 phox mRNA的表达。给予H9C2细胞高糖培养,过表达HO-1观察其对ROS生成的影响。结果 8周后Wt/DM组和HO-1/DM组小鼠较Wt/Con组体质量显著降低(P0. 05)。与Wt/Con组小鼠相比,Wt/DM组小鼠左心室心脏功能明显障碍,HO-1/DM组小鼠左心室功能明显好于Wt/DM组小鼠; Wt/DM组小鼠心肌结构紊乱,炎性反应细胞浸润,HO-1/DM组小鼠心肌结构趋于正常。Wt/DM组小鼠心肌中IL-6、TNF-α、Gpx3、p47phox mRNA表达较Wt/Con组小鼠升高(P0. 05),过表达HO-1可明显抑制该现象。结论 HO-1可能通过抗氧化和抗感染作用保护高血糖引起的心脏功能障碍和心肌结构损伤。     

赶黄草配伍葛花对乙醇诱导下L-02肝细胞的影响

目的:探究赶黄草配伍葛花制备的含药血清对乙醇诱导的L-02肝细胞的影响及其可能机制。方法:分别制备不同配比含药血清后,将L-02肝细胞分为6组进行实验:空白对照组,模型组,赶黄草配伍葛花1∶1组、2∶1组和1∶2组,凯希莱组。MTT法检测含药血清对乙醇诱导的L-02细胞存活率的影响;酶标法检测培养液中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)及受损细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平;realtime PCR法和Western blot检测赶黄草配伍葛花对L-02肝细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)mRNA及蛋白表达的影响。结果:与空白对照组相比,模型组ALT、AST及MDA水平明显升高,SOD活性明显降低(P0.01);与模型组相比,各药物组ALT、AST及MDA水平明显降低,SOD活性明显升高(P0.01)。机理研究中,与空白对照组相比,模型组TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白表达显著升高,Nrf2和HO-1的mRNA和蛋白表达显著降低(P0.01);与模型组相比,各配伍组TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白表达显著降低,Nrf2和HO-1的mRNA和蛋白表达显著升高(P0.01)。结论:赶黄草配伍葛花含药血清可能通过下调TNF-α和IL-6的表达,上调Nrf2和HO-1的表达,从而降低L-02肝细胞的炎症反应并减轻氧化应激,进而发挥治疗酒精性肝损伤的作用。     

天麻素调控Nrf2信号通路在癫痫中的抗炎作用

目的:探讨天麻素调控nuclear factor erythroid 2-related factor 2(Nrf2)信号通路在癫痫中的抗炎作用及发挥神经保护作用的新机制。方法:100只SD大鼠,随机分为5组:空白对照组,模型组,50 mg/kg天麻素治疗组,100 mg/kg天麻素治疗组,200 mg/kg天麻素治疗组。模型组构建氯化锂-匹罗卡品SD大鼠癫痫模型,治疗组采用天麻素进行干预。Racine分级标准判断模型是否构建成功,免疫印迹法及免疫荧光染色的方法检测Nrf2、血红素氧合酶-1(HO-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达含量。结果:与空白对照组相比,模型组小胶质细胞中抗氧化蛋白Nrf2和HO-1表达略有上调,炎症因子iNOS表达显著增加;经天麻素预处理的治疗组小胶质细胞中Nrf2和HO-1蛋白表达较模型组增加,而炎症因子iNOS的表达减少。结论:天麻素可能通过调控Nrf2/HO-1经典抗氧化信号通路,降低炎症因子iNOS的表达,从而在癫痫中发挥神经保护作用。