均一性人白细胞干扰素的纯化

自从发现干扰素以来,曾用常规技术、亲和层析法以及其它方法对干扰素进行了纯化。已报告人纤维母细胞和鼠L细胞干扰素纯化为均一性物质,但迄今未能提供这些分子的特性。虽然根据其抗病毒活性,对于干扰素的理化性质已有不少估计的资料,但是,这些间接结果本身就是粗略的。对干扰素分子进行全面的理化性质测定,有赖于获得足够数量的均一性干扰素。     

质量源于设计在PEG-干扰素交联和纯化中的应用

目的考察质量源于设计(quality by design,Qb D)理念在聚乙二醇化干扰素(PEGylated Interferon)的交联和纯化工艺优化中的应用。方法使用统计学实验设计(design of experiment,DOE)的方法,以单修饰干扰素的比例为关键质量属性,研究并优化PEG-干扰素交联和纯化工艺的关键参数及其水平,并对优化的工艺参数进行验证。结果交联后单修饰干扰素的比例为45%,纯化后单修饰干扰素的SEC-HPLC纯度为98.42%,试验结果基本与预期相符。结论 Qb D理念可以应用在PEG-干扰素交联和纯化工艺开发中。     

人免疫干扰素抗体的制备

特异性抗体是纯化干扰素与研究其特性的有用制剂。高效价的人α干扰素(HuIFN-α)和β干扰素(HuIFN-β)的特异抗血清早已生产,并应用在各方面的研究,而制备人     

HPLC法在干扰素α—2b的纯化和蛋白纯测度中的应用研究

目的：为开发干扰素α－２ｂ新剂型提供纯化和质控的技术指标。方法：用反相离子对色谱法对干扰素α－２ｂ的粗品进行分离纯化;用分子排阻色谱法测定其蛋白纯度。结果：反相离子对色谱法可使纯度为８５％精品提高到９５％以上;分子排阻色谱法可通过峰面积比,快速、客观地确定表达蛋白的百分比,对主峰、次峰的分离度大于１．５。结论：反相离子对ＨＰＬＣ法可作为干扰素α－２ｂ的纯化方法;分子排阻色谱法是鉴定基因工程干扰素的     

基因工程干扰素的纯化研究

本文介绍了用于基因工程干扰素纯化分离的一些常规方法,对各种方法的原理特点及适用范围作了较为详细的分析和比较,显示了干扰素纯化方法的多样性.     

重组人干扰素α2a分离纯化中试工艺研究

目的探索无单克隆抗体亲和层析的重组人干扰素α2a分离纯化工艺。方法用 7mmol·L-1盐酸胍抽提干扰素 ,然后用金属螯合层析、离子交换层析、反相柱层析和凝胶过滤将提取的干扰素纯化。结果目标蛋白纯化了 195 1倍 ,蛋白比活性达 2 4 0× 10 8IU·mg-1,回收率达 30 1%。SDS PAGE检定呈一条带 ,其分子质量约为 19kD ,纯度大于 97%。结论本工艺降低了生产成本 ,易于扩大生产规模 ,适合产业化要求。     

基因工程干扰素的纯化研究

本文介绍了用于基因干扰素纯化分离的一些常规方法，对各种方法的原理特点及适用范围作了较为详细的分析和比较，显示了干扰素纯化方法的多样性。     

重组人干扰素α2b包涵体纯化方法的研究

目的研究重组人干扰素α 2b包涵体的纯化方法。方法超声破碎菌体 ,干扰素α 2b包涵体经洗涤液洗涤后 ,SDS -PAGE检测其纯度 ,VSV -WISH细胞系统测定干扰素活性。结果差速离心很难完全将包涵体和细菌碎片分开。超声破碎 6次和 9次的干扰素α 2b包涵体纯度和活性相近 ,均明显高于 3次超声破碎处理的包涵体。用含2～ 4mol/L尿素、1%TritonX - 10 0的洗涤液对干扰素α 2b包涵体洗涤 ,能提高包涵体纯度。结论建议超声破碎 6次 ,用含 2～ 4mol/L尿素、1%TritonX - 10 0的洗涤液纯化干扰素α 2b包涵体     

单克隆抗体亲和层析法纯化Namalva细胞干扰素

采用自行研制的α干扰素单克隆抗体亲和层析胶3D9进行了Namalva细胞干扰素纯化的初步研究.结果表明α干扰素纯化活性回收率达96%,比活性达1×108IU/mg,一次亲和层析纯化倍数4.4×104.电泳及Westem blot结果显示相对分子质量在2.1×103.     

人巨噬细胞干扰素的不同抗病毒谱

病毒诱导人白细胞产生具有抗病毒活性的α干扰素,其抗病毒活性不依赖诱导的病毒。最近通过对抗原性差异、DNA杂交及氨基酸顺序测定,发现α干扰素至少有8个亚型,干扰素的不均一性可能在增强宿主抗病毒防御机能方面起作用。纯化的巨噬细胞接触不同的病毒后产生的干扰素具有不同的抗     

HPLC法在干扰素α-2b的纯化和蛋白纯度测定中的应用研究

目的:为开发干扰素α-2b新剂型提供纯化和质控的技术指标.方法:用反相离子对色谱法对千扰素α-2b的粗品进行分离纯化;用分子排阻色谱法测定其蛋白纯度.结果:反相离子对色谱法可使纯度为85%粗品提高到95%以上:分子排阻色谱法可通过峰面积比,快速、客观地确定表达蛋白的百分比,对主峰、次峰的分离度大于1.5.结论:反相离子对HPLC法可作为干扰素α-2b的纯化方法;分子排阻色谱法是鉴定基因工程干扰素的不可缺少的指标之一,它可对提纯工艺起到有效的监控作用.     

重组人干扰素α-2b原液的制备

目的优化重组人干扰素α-2b原液的发酵纯化方法,降低生产成本,提高产品的安全性。方法构建重组大肠杆菌,通过逐级扩大培养、发酵、纯化,收集菌体;菌体裂解后,进行变性、复性,通过不同的纯化方法,得到符合质量标准的重组人干扰素α-2b原液;通过对各步工艺的考察,优化重组人干扰素α-2b的发酵、纯化方法。结果制得的重组人干扰素α-2b菌种表达量高,原液纯度可达95.0%以上,生物学比活性高于1×108U.mg-1,符合《中华人民共和国药典》的质量要求,安全性强。结论此法可应用于重组人干扰素α-2b原液的生产。     

重组人干扰素α-2b原液的制备

目的 优化重组人干扰素α-2b原液的发酵纯化方法,降低生产成本,提高产品的安全性。方法 构建重组大肠杆菌,通过逐级扩大培养、发酵、纯化,收集菌体;菌体裂解后,进行变性、复性,通过不同的纯化方法,得到符合质量标准的重组人干扰素α-2b原液;通过对各步工艺的考察,优化重组人干扰素α-2b的发酵、纯化方法。结果 制得的重组人干扰素α-2b菌种表达量高,原液纯度可达95.0 %以上,生物学比活性高于1×108 U·mg^-1,符合《中华人民共和国药典》的质量要求,安全性强。结论 此法可应用于重组人干扰素α-2b原液的生产。     

用小剂量α(白细胞)干扰素治疗8周后毛细胞白血病获长期缓解

业已证明,部份纯化人α干扰素和重组α_2干扰素治疗毛细胞白血病高度有效,但关于最适用药量和疗程,尚未取得一致意见.作者报告1例毛细胞白血病伴有非典型分枝杆菌败血症患者经小剂量α干扰素治疗     

用微孔玻璃层析和乙醇分离的纯化方法制备人白细胞干扰素

制备人白细胞干扰素包括(1)从人血中分离得白细胞组分;(2)用氯化铵水溶液进行溶血以去除红细胞;(3)在含人血清的营养培养基中悬浮白细胞,使其浓度达500万～1500万/ml;(4)用干扰素预处理悬液;(5)用诱导剂处理悬液;(6)从细胞中分离得到的干扰素溶液;(7)用一定直径的微孔玻璃层析,乙醇分离和最适膜分离的结合方法纯化干扰素溶液.     

纯化人体β干扰素

Celltech公司宣布生产出一种新型纯化制剂β-琼脂糖凝胶.β-琼脂糖凝胶是世界上首批建立在单克隆抗体基础上的、用于纯化β干扰素的制剂.用该产品进行一步层析过程,实际上可消除全部杂质,并能保持高产量的活性β干扰素.     

重组毕赤酵母生产干扰素α-2b的研究

目的为探求生产干扰素-α2b的方法。方法采用重组毕赤酵母发酵,纯化生产干扰素-α2b。结果重组毕赤酵母生产干扰素α-2b,产量高达70mg/L(发酵液),目标蛋白干扰素α-2b不需要复性,在纯化过程中,不需要价格昂贵的单抗柱,即可从发酵液中提取获得纯度达96%以上的目标蛋白,蛋白质比活性大于1.0×109IU/mg。结论PichiaPastoris高效酵母分泌表达系统取代大肠杆菌表达系统生产干扰素-α2b。结论采用重组毕赤酵母生产干扰素-α2b,能提高蛋白质比活性,简化生产工艺,降低生产成本。     

快速高效液相色谱(FPLC)对猪脾干扰素分离

应用中性盐沉淀,离子交换层析及分子筛层析对猪脾细胞干扰素进行有效分离。猪脾细胞干扰素经过快速高效液相色谱系统分离纯化,活性回收率达87.8％。将DEAESepharose FF柱分离的不同组份进行干扰素基本生物学性质—抗病毒试验,证明其活性在第一峰和第二峰,两峰分别上高效液相色谱monoQ HR5/5柱分析,活性峰在线形盐梯度洗脱时呈一个主峰,并分别与标准人α、γ干扰素比较,出峰时间相同。分子量前者为20000后者为43000道尔顿左右。     

His肽修饰人干扰素γ制备

目的：为便于人干扰素γ功能研究,制备6His修饰的人干扰素γ。方法：采用一步反向PCR扩增编码人干扰素γ的cDNA序列,克隆到质粒pUC19,测序鉴定正确后构建于pQE80L表达质粒,BamHI和HindⅢ双酶切,行1．2％琼脂糖凝胶电泳鉴定;SDS—PAGE和Western blot检测表达的目的蛋白,Ni^2＋-NTA柱纯化蛋白,酶联免疫吸附测定纯化的目的蛋白。结果：一步反向PCR扩增得到编码人干扰素1eDNA片段,测序结果正确,SDS—PAGE和Western blot分析显示His修饰的人干扰素γ在大肠杆菌中获得了高效表达,SDS—PAGE证实目的蛋白具有较高纯度,酶联免疫吸附测定出目的蛋白。结论：本法成功制备了6His肽修饰的人干扰素γ。     

重组人干扰素引起的神经系统副作用

作者在一项临床试验中,研究了用DNA重组技术生产的高度纯化人白细胞α干扰素的效力和安全性,并首次报道其所引起的与剂量有关的能恢复的中枢神经系统毒性作用。观察10例晚期局部复发性乳癌患者,经放射治疗、激素和细胞毒制剂治疗无效后,肌注重组白细胞干扰素20×10~6U/m~2每日1