“抗体药物研究新趋势”专栏——致辞

<正>自1986年第一个治疗性抗体被FDA批准上市以来,抗体药物已成为疾病治疗的一个日益重要的组成部分,用于癌症、炎症或免疫疾病、高胆固醇、骨质疏松症、阿尔茨海默病和传染病等疾病的治疗。抗体药物在生物医药中的研究发展最快,2013年处方药全球销售前十位中抗体类药物占据6席,且排名前3位。过去几十年里,分子生物和生物技术领域研发最成功的是治疗性抗体药物,已有40多个抗体药物批准上市,处在临床研究的抗体药物有350多个。     

抗人纤维蛋白单链抗体的人源化

目的：人源化抗人纤维蛋白单莲抗体,降低人抗鼠抗体反应。方法：从人免疫球蛋白基因数据库中挑选到与鼠源抗人纤维蛋白单链抗体ｓｃＦｖ－８Ｅ５重链（ＶＨ－８Ｅ５）同源性最高的序列,作为人源化改造的框架,其中植入ｓｃＦｖ－８Ｅ５的互补决定区。人工合成其ＤＮＡ连接酶连接成完整的人源化ＶＨ－８Ｅ５和ＶＬ－８Ｅ５,构建表达载体,转化ＪＭ１０９后用ＩＰＴＧ诱导表达,ＥＬＩＳＡ测定其抗原结合活性。结果：表达产物分子量     

抗体组学和抗体组药物研究进展与展望

抗体组学是在基因组学和蛋白组学基础上,结合鼠、兔、人杂交瘤技术及基因工程抗体技术,经过抗体靶标高通量筛选、建立大规模抗体库、大规模高通量筛选、优化,最终应用于研究、诊断及治疗的抗体一门新兴学科。抗体组药物以高通量、整体化、信息化和系统化为特点,大大提高了抗体药物的研发速度,缩短了药物的研发周期;由于抗体组药物的筛选利用了基因芯片、蛋白芯片和组织芯片等高通量技术,减少了研发成本和风险,同时既可获得广谱的抗体药物,又可获得个性化的抗体药物。本文通过对抗体组学、抗体组药物研究的进展介绍与展望,回顾了单克隆抗体技术的发展,提出目前抗体组药物靶标筛选、抗体及全人抗体库制备、高效抗体组药物筛选和抗体组药物优化等技术的重要意义,介绍了转基因小鼠技术、噬菌体显示技术和人-人杂交瘤技术制备人及全人抗体的方法,并对当前抗体组药物的研发现状及药物市场进行分析。作为生命科学的主要发展方向,抗体组药物将成为治疗肿瘤、传染性疾病、自身免疫性疾病新的研究热点。     

生物薄膜干涉技术和ELISA法检测抗体药物免疫原性的方法学比较

采用生物薄膜干涉技术(BLI)开发快速检测治疗性单抗(抗EGFR单抗,Cetuximab)的抗抗体(ADAs)的检测方法。本研究利用ForteBio公司开发的Octet系统,在光纤制成的生物传感器底端覆盖生物分子相容层,偶联配体,形成生物膜层。当分析物结合传感器底端偶联的配体时,生物膜层厚度增加,反射光干涉光谱曲线产生可测量的漂移,从而可以实现对分子间相互作用的实时测量,同时以传统的抗体桥ELISA法作为平行对照。SA(Streptavidin)传感器结合生物素化的单抗,用免疫原性试剂孵育血清样品后,利用传感器检测血清样品的ADA。分别应用BLI和ELISA两种方法确定cutpoint,并进行剂量反应曲线的分析。研究结果表明BLI快速分析法具有同ELISA法极其相似的免疫原性检测行为,均能准确检测出筛选分析中的20例正常人血清的基线反应值。同时,BLI法在竞争抑制实验中体现出了很高的特异性。与ELISA相比,BLI技术用于治疗性抗体的临床免疫原性分析,更加省时,快捷,准确,而且可避免低亲和力ADA易受洗板干扰的弊端。因此,BLI技术可能成为抗体药物免疫原性检测的一种新的有效方法。     

人源化抗体研制策略分析及应用研究

鼠源性单克隆抗体由于可引起免疫反应而逐渐被人源化抗体所替代，人源化抗体开辟了抗体治疗临床应用的新时代。本文介绍并比较分析了几种制备人源化抗体的策略和抗体表达系统，并对其临床应用进行了展望。     

抗人纤维蛋白单链抗体重链可变区的人源化

目的人源化抗人纤维蛋白单链抗体的重链,降低人抗鼠抗体反应。方法从基因文库中挑选到与鼠源抗人纤维蛋白单链抗体重链（ＶＨ－８Ｅ５）同源性７１．８％的人源免疫球蛋白ＨＵＭＨＣＨ１０９重链（ＶＨ）序列,作为人源化改造ＶＨ－８Ｅ５的框架。人工合成人源化ＶＨ－８Ｅ５片段,用连接酶连接成完整的人源化ＶＨ－８Ｅ５,构建表达载体ｐＯＰＥ１０１－ＶＨ－８Ｅ５。转化ＪＭ１０９后用异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷诱导表达。结果经聚丙烯酰胺电泳和ＥＬＩＳＡ证明表达产物相对分子质量３０×１０３左右,有特异性识别和结合人纤维蛋白能力,是亲本抗体ＳｃＦｖ－８Ｅ５活性的４／５左右。人源化ＳｃＦｖ－８Ｅ５表达产量为转化菌总蛋白的１１．２％。结论人源化ＶＨ－８Ｅ５仍具有特异性识别人纤维蛋白的活性,ＳｃＦｖ－８Ｅ５重链的人源化基本获得成功     

抗体药物偶联物研究进展

近年来抗肿瘤抗体药物在基础研发、临床应用等方面都得到了快速发展。但现有抗体药物单独使用抗肿瘤疗效有限,临床上多与化疗药物联合应用,且多数初始接受抗体治疗有效的患者易产生耐药。抗体药物偶联物(antibody drug conjugates,ADCs)在提高抗体药物的治疗效果、克服耐药和充分利用抗体靶向性方面具有独特优势。目前,ADCs俨然已成为新型抗肿瘤抗体药物研发的重点。本文拟对现有ADCs研究现状作一简要概述。     

人源化抗体研制策略分析及应用研究

鼠源性单克隆抗体由于可引起免疫反应而逐渐被人源化抗体所替代 ,人源化抗体开辟了抗体治疗临床应用的新时代。本文介绍并比较分析了几种制备人源化抗体的策略和抗体表达系统 ,并对其临床应用进行了展望。     

人源化抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原单链抗体的设计和表达

目的:应用抗体"框架区重塑"技术,对鼠单克隆抗体(mAb)框架区进行人源化,制备人源化单链抗体(scFv)并检测其活性。方法:在获得抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原鼠mAb(5E1)可变区基因的基础上,保持鼠mAb互补决定区(CDR)不变,选择与框架区同源性最高的人源序列替换鼠mAb的框架区,保留个别关键的鼠源残基。通过融合PCR技术构建人源化的scFv,并在大肠杆菌中进行了表达。表达产物以包涵体形式存在,通过变性、镍柱亲和层析和复性,获得复性后的可溶蛋白。对纯化产物进行了SDS-PAGE、ELISA和抑制炭疽毒素中和活性的检测。结果:人源化后的序列具有与鼠源scFv一致的抗原结合活性和细胞水平的中和炭疽毒素活性。结论:获得了具有功能的人源化的抗体基因序列,为表达具有中和炭疽毒素活性的全分子人源化抗体奠定了基础。     

人过渡性B细胞的基础研究及相关靶向治疗影响

过渡性B细胞(transitional B cell,TrB)是处于骨髓未成熟B细胞与外周成熟B细胞间的关键发育阶段.近年研究发现,TrB在自身免疫性疾病和免疫缺陷性疾病的发病中发挥重要作用,其中自身免疫性疾病患者表现为自身反应性未成熟B细胞明显增多.靶向B细胞治疗通过影响TrB的生成为自身免疫性疾病的治疗提供新可能,...     

低剂量利妥昔单抗治疗温抗体型自身免疫性溶血性贫血的系统评价

目的标准剂量利妥昔单抗(RTX)(375 mg/m2/周×4)已成为难治复发温抗体型自身免疫性溶血性贫血(w AIHA)的首选二线治疗。尽管如此,低剂量RTX治疗w AIHA的疗效仍值得探讨。方法通过对PUBMED数据库和CNKI数据库的文献检索,本研究共纳入13项临床研究,对172例患者进行系统评价。结果低剂量RTX(100 mg/周×4)治疗w AIHA总反应率达到87.8%,其中完全缓解(CR)率62.8%,部分缓解(PR)率25%。由于病例数少,各组报道复发率差异较大,从0~62.5%不等,复发后再治疗仍有有效病例报道。无严重不良反应。结论低剂量RTX治疗w AIHA安全有效,不良反应少。     

B细胞在Graves’病中的作用

Graves’病(GD)是一种B细胞介导、T细胞依赖的器官特异性自身免疫性疾病.其致病性抗体促甲状腺激素受体抗体(TRAb)能导致甲状腺素分泌增加,促进甲状腺增生.以往Graves’病研究认为,B细胞主要通过分泌致病性抗体发挥作用,但是新近研究结果提示,B细胞在疾病中具有更广泛的作用,如抗原提呈、分泌细胞因子等.因此,进一步阐明B细胞在Graves’病中的作用将为Graves’病治疗提供重要的理论基础.     

淋巴瘤靶向治疗抗体研究进展

淋巴瘤是一组起源于淋巴结或其他淋巴组织的恶性肿瘤,在淋巴瘤的治疗中,单克隆抗体发挥着越来越重要的作用,显示出良好的应用前景。目前获得美国食品与药品管理局(FDA)批准的单抗中用于治疗淋巴瘤的有5个:Rituximab、90 Y-Ibritumomab tiuxetan、131I-Tositumomab、Brentuximab vedotin、Alemtuzumab。Blinatumomab、Ofatumumab及Obinutuzumab已获FDA批准用于白血病的治疗,目前正在进行淋巴瘤治疗的临床试验。此外,正在进行淋巴瘤治疗临床试验的单抗药物还有Zanolimumab等。本文对上述淋巴瘤抗体药物进行了综述,同时对我们最近研制的淋巴瘤靶向抗体进行了介绍。     

噬菌体抗体库技术应用研究进展

随着分子生物学技术的飞速发展,20世纪90年代出现的噬菌体抗体库技术在各个领域都得到了广泛的应用。 本文就噬菌体抗体库技术在制备人源化单克隆抗体、改良抗体性能以及面临的挑战和应用前景等方面进行简要综述。     

人源Fab抗体库的构建和抗hPRLR抗体的筛选鉴定

目的构建人源Fab噬菌体抗体库,筛选抗hPRLR抗体片段并进行初步鉴定。方法从乳腺癌患者外周血提取总RNA,通过RT-PCR扩增人抗体轻链和重链基因,构建抗hPRLR人源Fab抗体库。分别以His-hPRLR融合蛋白、BSA-hPRLR表位多肽融合蛋白和GST-hPRLR融合蛋白作为抗原包板,经过3轮循环的吸附-洗脱-扩增的筛选及1轮交叉筛选,挑单克隆用Phage-ELISA、DNA测序筛选阳性克隆,将筛选到的阳性克隆FabG2转化至Top10’受体菌,诱导表达可溶性Fab抗体,通过Western blot和ELISA进行特异性的鉴定。结果构建的人源Fab库容为1.0×109,4轮的筛选,获得6株能与hPRLR结合的人源抗体克隆。选取的FabG2能够进行可溶性Fab抗体蛋白的表达,ELISA初步鉴定,能够与hPRLR进行特异性地结合。结论成功构建了人源Fab噬菌体抗体库,筛选并鉴定了1株抗hPRLR Fab抗体的克隆。hPRLR特异性Fab抗体的获得将为高表达hPRLR乳腺癌的生物免疫治疗奠定了基础。     

人治疗性抗体的研究进展

抗体研究已有百余年的历史, 自从 20世纪 70年代德国学者K nler和英国学者Milstein利用细胞融合技术成功地制备了杂交瘤单克隆抗体 (mAb)以来, 抗体的生产技术才实现革命性的突破, 其在诊断、治疗、预防和蛋白提纯方面显示了重要的作用和非常广阔的应用前景。10多年来, 抗体被认为是理想的癌症和传染病的治疗分子。然而, 鼠源mAb作为异源性蛋白在人体内应用受到了限制: 如 ( 1 )可诱发鼠抗人抗体的生成(HAMA)[1]; (2)鼠源性Fc段不能有效地发挥人源性Fc段的功能; ( 3 )鼠源性抗体的生物半衰期很短 [2]。这严重影响了鼠mAb的治疗效…     

治疗性抗体的改造

市场上已有18个被FDA批准的单克隆抗体,它们用于治疗如肿瘤、移植排斥、自身免疫病、病毒感染等人类疾病。治疗性抗体代表了生物制药业发展最快的领域之一。随着技术的发展,各种形式的工程抗体被构建来改善它们的特性和效能,包括:鼠抗体人源化,提高生物学活性,如亲和力成熟,改进效应功能,改善药代动力学。文章评述了这一领域的最新进展,同时也讨论了工程抗体的免疫原性和亲和力。     

表没食子儿茶素没食子酸酯与西妥昔单抗联用体内外抗食管癌细胞Eca-109的作用研究

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与西妥昔单抗联用体内外抗食管癌Eca-109的作用。方法采用MTT法检测化合物对肿瘤细胞增殖的影响;采用克隆形成法检测EGCG对肿瘤细胞克隆形成的影响;采用流式细胞术检测化合物对肿瘤细胞凋亡的影响;采用动物实验评价药物或EGCG对移植于裸鼠的移植瘤的生长抑制作用;同时采用免疫组化的方法检测药物或EGCG对血管形成的影响。结果 EGCG能够剂量依赖性地抑制Eca-109细胞增殖,其IC50值为43.22μmol/L。经克隆形成法检测结果表明,EGCG能够明显抑制Eca-109细胞的克隆形成,IC50值为28.49μmol/L。EGCG能够显著引起Eca-109细胞凋亡,60和80μmol/L EGCG诱导的凋亡百分率分别为(21.70±0.62)%、(57.13±9.09)%。EGCG和西妥昔单抗联用对Eca-109细胞的增殖抑制作用较单独用药组强,具有相加作用。体内实验结果表明,EGCG和西妥昔单抗均能抑制Eca-109裸鼠移植瘤的生长,两者联用存在增强作用。EGCG和西妥昔单抗均能抑制裸鼠移植瘤的血管形成,两者联用血管形成抑制作用较单用组更强。结论 EGCG能够抑制食管癌Eca-109的细胞增殖和克隆形成,具有诱导Eca-109细胞凋亡作用,与西妥昔单抗联用在体内外均具有增强作用。     

利妥昔单抗治疗系统性红斑狼疮相关肺动脉高压的前景

肺动脉高压(PAH)是系统性红斑狼疮(SLE)的一种严重并发症,近期研究发现T、B淋巴细胞在PAH的发生过程中发挥重要作用。以B细胞为靶向,而同样对T细胞造成影响的利妥昔单抗(RTX)可能成为治疗SLE相关PAH(SLE-PAH)的有力武器。     

肺癌患者噬菌体抗体库的构建及抗肺癌单抗的筛选

目的　探索从人体肿瘤局部引流淋巴结扩增免疫球蛋白基因构建噬菌体抗体库及从中筛选抗肿瘤单抗的可行性。方法　从肺癌患者肺门淋巴结提取总RNA ,经逆转录 聚合酶链反应扩增免疫球蛋白重链Fd段和κ链基因 ,以pcomb3H为载体 ,构建噬菌体抗体库 ,以 2株肺癌细胞对噬菌体抗体库进行 6轮亲和筛选 ,再以人成纤维细胞进行 2轮吸附 ,以筛选出抗肺癌细胞抗体。以细胞ELISA法初步鉴定抗体活性。结果　构建成噬菌体抗体库 ,库容为 7.5× 10 7个克隆 ,κ链和Fd段基因与载体DNA的重组率分别为 10 0 % (10 / 10 )和 90 % (9/ 10 )。通过亲和筛选和吸附从中获得了能与肺癌细胞结合的人单抗。结论　从人体肿瘤局部引流淋巴结扩增免疫球蛋白基因构建噬菌体抗体库并从中筛选抗肿瘤单抗是可行的 ,以肿瘤细胞作抗原从抗体库中筛选抗肿瘤抗体是可取的。