四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮株IEC-6细胞增殖的作用

背景：一些实验证明多糖在感染、炎症．细胞间黏附和信号传导、免疫识别、细胞增殖分化及维持细胞正常结构和功能生理、病理等方面均起重要作用。但植物多糖对胃肠道黏膜的保护作用有待进一步研究。目的：观察不同浓度的四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮株IEC-6细胞增殖的影响。设计：观察对比实验。单位：广东省中医院中心实验室。材料：①细胞株：正常大鼠小肠上皮细胞株IEC-6（ATCC Catalog No．RL-1592）由美国ATCC（American Type Culture Collection）购得，主要来源于小肠隐窝细胞。②试剂和药品：DMEM培养基，牛胰岛素，庆大霉素，胎牛血清，DPBS均为GIBCO公司产品；细胞增殖试剂盒（MTT）为Roche公司产品；消炎痛为Sigma公司产品。四君子汤总多糖按药典处方比例取党参，白术．茯苓和甘草适量，加水浸泡后，煮沸提取4h，重复1次，合并提取液，减压浓缩．高速离心除去不溶物，提取液置玻璃纸中逆向流水透析2h，再于提取液中加乙醇至浓度约80％．保存过夜后分取沉淀，合并所有沉淀，采用Sevag法除去粗多糖中的蛋白，冻干后得到的总多糖。方法：①将IEC-6细胞株于干冰中取出，迅速放入37℃水浴中解冻后．加入已装有DMEM培养液的T-150培养瓶后放入CO2培养箱中，于37℃，饱和湿度，体积分数为0．05的CO2环境下培养。细胞隔天换液1次．每5～7天进行传代．传代比例为1：7。第15-20代细胞用于实验。②IEC-6细胞以1&;#215;10^4／孔的浓度接种于96孔细胞培养板上，接种后6h，各培养孔内依次加入浓度为50，100．200mg／L四君子汤总多糖．即为四君子汤总多糖3个剂量组。每天定时取出1板，按试剂盒说明书以MTT法进行细胞增殖检测。以未加任何干预措施的IEC-细胞作为正常对照组．在相应时间点以MTT法进行细胞增殖检测。③将IEC-6细胞按1&;#215;10^4／孔的浓度接种于96孔细胞培养板中，接种后次日更换以无血清培养液DMEM，24小时后，各培养板中分别加入消炎痛以及四君子汤总多糖，其中，消炎痛使用浓度为40mmol／L，即为消炎痛组。四君子汤总多糖使用3个剂量分别为50，100，200mg／L．即为四君子汤总多糖50，100，200mg／L组。药物作用20h后，按试剂盒使用说明书进行MTT法细胞增殖检测。以未加任何干预措施的IEC-细胞作为正常对照组．在各相应时间点以MTT法进行细胞增殖检测。主要观察指标：MTT法测定四君子汤总多糖不同作用时间对IEC-6细胞生长的影响结果；MTT法测定四君子汤总多糖对消炎痛所致的IEC-6细胞生长抑制的影响结果。结果：四君子汤总多糖不同剂量于不同的培养时间对IEC-6细胞的生长均有促进作用；IEC-6细胞在给予消炎痛40mmol／L作用24h后，细胞增殖的吸光度明显低于正常对照组（0．17&;#177;0．02，0．31&;#177;0．03；P〈0．01）。当四君子汤总多糖使用浓度为100mg／L时，IEC-6细胞的吸光度明显高于消炎痛组（0．25&;#177;0．04，0．17&;#177;0．02；P〈0．01），虽然未达到正常IEC-6细胞吸光度的水平，但与正常组无明显差异（P〉0．05）。结论；四君子汤总糖具有促进IEC-6细胞增殖的作用，它可能通过对小肠上皮细胞增殖的影响而发挥对肠道黏膜吸收和免疫功能的调整作用。     

当归多糖对体外造血微环境中肌卫星细胞增殖的影响

背景: 肌卫星细胞是造血功能重建最有希望的种子细胞来源.当归多糖对造血干细胞和造血祖细胞的增殖分化存在显著的促进作用,也可以有效改变肌卫星细胞的生长特性.目的: 观察当归多糖对不同培养条件下乳鼠骨骼肌卫星细胞增殖的影响.方法: 分离小鼠肌卫星细胞,培养5 d后采用a一肌动蛋白免疫细胞化学鉴定.将细胞接种于96孔板培养24 h,使细胞同步化;将细胞分为空白对照组,骨髓基质细胞培养上清组,加入含50,100,200,300,400 mg/L当归多糖的DMEM/F12培养基实验组及经50,100,200,300,400 mg/L当归多糖干预后骨髓基质细胞条件培养基组.经实验处理后采用MTT法检测各组细胞的增殖活性.结果与结论: 分离培养的骨骼肌卫星细胞呈α-肌动蛋白染色阳性,通过MTT法检测发现,经不同浓度当归多糖干预后的骨髓基质细胞条件培养基培养的各组肌卫星细胞增殖显著.且经当归多糖干预的骨髓基质细胞条件培养基可以有效改变肌卫星细胞的生长特性,并呈剂量依赖性.     

黄芪皂甙对大鼠肾小球系膜细胞增殖及周期的影响

目的:从细胞水平观察黄芪皂甙对大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响,拟验证黄芪皂甙对系膜细胞增殖影响与其浓度的相关性.方法:实验于2006-12/2007-07在辽宁医学院生理实验室完成.取高糖培养的第4～7代大鼠肾小球系膜细胞,随机分为对照组,黄芪皂甙50,100,200mg/L组4组,分别给予等量的高糖培养液及50,100,200mg/L黄芪皂甙,在给药后培养48 h,用MTT比色法检测细胞增殖程度,流式细胞仪检测细胞周期.结果:①MTT法显示培养48 h后,黄芪皂甙50,100,200mg/L组的吸光度值A490nm低于对照组(P＜0.01),且随黄芪皂甙浓度增加而递减.②流式细胞仪检测显示培养48h后,黄芪皂甙50,100,200mg/L组的G0/G1值高于对照组(P＜0.01),且随黄芪皂甙浓度增加而递增.结论:在一定质量浓度范围(50～200 mg/L)内,黄芪皂甙可抑制肾小球系膜细胞增殖,阻止细胞周期进程.     

黄芪多糖对内毒素刺激体外培养肠上皮细胞间黏附分子-1的调节作用

目的 观察黄芪多糖对内毒素脂多糖(LPS)体外刺激小肠上皮IEC-6细胞株产生细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的调节作用,探讨黄芪多糖对损伤IEC-6细胞的免疫保护机制.方法 以IEC-6细胞株为研究对象,将培养的细胞分别加入50、100、200和500 mg/L不同浓度的黄芪多糖,孵育1 h,以10 mg/L的LPS刺激1～4 h后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ICAM-1 mRNA的表达变化.结果 LPS刺激IEC-6细胞后ICAM-1 mRNA表达水平较正常对照组显著升高(0.74±0.06比1.45±0.07,P＜0.01);黄芪多糖100、200和500 mg/L时的ICAM-1 mRNA表达量分别为0.97±0.06、0.82±0.07和0.65±0.05;黄芪多糖500 mg/L作用1 h和4 h的ICAM-1 mRNA抑制率分别为32.7%(1.19±0.06和0.80±0.10)和36.3%(0.93±0.07和0.72±0.08),说明黄芪多糖呈浓度和时间依赖性地抑制了LPS诱导IEC-6细胞表达ICAM-1 mRNA的水平(P均＜0.01).结论 黄芪多糖具有抑制LPS刺激IEC-6细胞分泌ICAM-1的作用,对LPS所致的肠道损伤具有保护作用.     

千金子提取液对大鼠肺成纤维细胞增殖的影响及细胞毒性作用

目的:观察原代培养的大鼠肺成纤维细胞给予不同浓度的千金子提取液后,对肺成纤维细胞增殖的影响以及药物的细胞毒性作用。方法:实验于2003-12/2004-03在军事医学科学院附属医院药剂科临床药理室完成。选取纯系Wistar雌性大白鼠10只,千金子为北京首创大地药业有限公司产品,经鉴定为大戟科属植物续随子的种子。经过传代5代以后的肺成纤维细胞大部分呈梭形,可以用于实验,3个实验各自独立。①肺成纤维细胞增殖检测与分组:大鼠肺成纤维细胞在正规生长培养基中传代培养,48h后处于对数生长期,可进行增殖试验。随机分为1个空白对照组和6个实验组。空白对照组加入空白DMEM,实验组分别加入浓度为500,250,125,62.5,31.25,15.625mg/L的千金子提取液。应用四甲基偶氮唑盐比色法观察瑞香狼毒提取液对细胞增殖的影响。②乳酸脱氢酶活性测定与分组:随机分为1个空白对照组和5个实验组。空白对照组加入空白DMEM,实验组分别加入浓度为125,62.5,31.25,15.625,7.813mg/L的千金子提取液。全自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶活性值来观察其细胞毒性。③细胞形态学观察与分组:随机分为1个空白对照组和6个实验组。空白对照组加入空白DMEM,实验组分别加入浓度为500,250,125,62.5,31.25,15.625mg/L的千金子提取液,显微镜下观察细胞形态学变化。结果:实验纳入10只大鼠无脱落。①千金子提取液对肺成纤维细胞增殖的影响:浓度为500,250,125,62.5mg/L的千金子提取液的吸光度值明显低于空白对照组(0.108±0.004,0.089±0.002,0.093±0.005,0.187±0.002,0.285±0.011,P<0.01);浓度为31.25,15.625mg/L的千金子提取液的吸光度值仍低于空白对照组(0.231±0.014,0.218±0.023,0.285±0.011,P<0.05)。②千金子提取液对细胞的毒性作用:浓度为15.625,7.813mg/L的千金子提取液其乳酸脱氢酶吸光度值与空白对照组比较,均无显著性差异(28.91±0.88,26.77±0.26,25.91±0.39,P>0.05),说明千金子提取液在浓度为15.625,7.813mg/L范围内对细胞无毒性作用;而浓度为125,62.5,31.25mg/L的千金子提取液其乳酸脱氢酶吸光度值均显著高于空白对照组(P<0.05),且随着浓度的增加,毒性作用显著增强。③千金子提取液对肺成纤维细胞形态学的影响:细胞传代至第5代以后,所得细胞已经都是梭形呈放射状的成纤维细胞。用药前伸展良好,折光性较弱,有方向性;而加入千金子提取液后肺成纤维细胞数目显著减少,形状不规则,突起变短,细胞排列混乱,细胞内代谢产物增多。结论:千金子提取液对大鼠原代培养的肺成纤维细胞生长增殖有较强的抑制作用,随着给药剂量的增加,对细胞增殖抑制作用增强,呈剂量依赖性抑制。同时在高浓度范围内千金子提取液对细胞具有一定的毒性作用。     

香菇多糖对肝癌细胞Huh7.5.1增殖和侵袭的影响

目的:探讨香菇多糖对肝癌细胞Huh7.5.1增殖和侵袭的影响。方法:采用MTT法检测6.25、12.5、25、50、100μg/m L香菇多糖分别作用肝癌细胞24、48、72 h后,肝癌细胞增殖抑制率变化;采用Transwell侵袭实验考察其对细胞侵袭的影响。结果:6.25、12.5、25、50、100μg/m L香菇多糖分别作用肝癌细胞24、48、72h后,细胞的抑制率呈浓度和时间依赖性升高,100μg/m L香菇多糖作用48 h后肝癌细胞抑制率为(50.36±5.13)%,作为后续实验浓度和作用时间;100μg/m L香菇多糖处理肝癌细胞48 h后,肝癌Hep G2细胞体外侵袭能力明显抑制(P0.05)。结论:香菇多糖能够抑制肝癌细胞增殖和侵袭。     

MTT、MTS、WST-1在细胞增殖检测中最佳实验条件的研究

目的:探讨MTT、MTS、WST-1三种四唑盐在细胞增殖检测中的最佳实验条件。方法:取对数生长期的小鼠黑色素瘤B16细胞,用10%胎牛血清DMEM培养液制成不同浓度的细胞悬液加入96孔培养板中培养24h,分别加入三种试剂后在450nm、492nm和630nm波长处测定OD值,根据不同波长所测OD值的大小确定三种试剂的最佳实验波长。根据细胞浓度与OD值关系曲线确定三种试剂各自的最适细胞浓度。取最适浓度的B16细胞分别加入三种试剂在0.5h、1h、2h和4h四个不同时间点测定吸收值,根据OD值确定最佳的检测时间。结果:MTT、MTS法的最佳波长为492nm,WST-1法为450nm。MTT的最适细胞接种浓度为1.6×103—2.56×104/mL,MTS的最适细胞接种浓度为5×10—6.4×103/mL,WST-1的最适细胞接种浓度为2.5×10—1.6×103/mL。三种方法的最佳测定时间均为4h。结论:MTT、MTS、WST-1分别适用于不同条件下检测细胞的存活与增殖,可为抗病毒及抗癌药物的筛选提供实验依据。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞内核心蛋白多糖基因表达的影响(英文)

目的:研究己证实,碱性成纤维细胞生长因子刺激牙周膜细胞后可促进人牙周膜细胞的增殖,以利于重建丧失的牙周组织.利用不同质量浓度碱性成纤维细胞生长因子刺激体外培养的人正常牙周膜细胞,观察牙周膜细胞内核心蛋白多糖基因表达.方法:采用胰酶消化法分离培养牙周膜细胞.取第3代对数生长期的细胞,加入含有10%二甲基亚砜和含体积分数20%胎牛血清冻存液的DMEM中进行冻存,第2天移入液氮中保存.免疫组织化学方法行抗波形丝蛋白、角蛋白染色鉴定.取第6代人牙周膜细胞,分为实验组和空白组.实验组分别用含质量浓度为0.1,1,10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子的DMEM培养液标准条件下培养24 h;空白组用DMEM培养液标准条件下培养24 h.RT-PCR法检测细胞内核心蛋白多糖基因表达变化.结果:镜下观察空白组细胞未见明显变化,实验组可见细胞增殖,刺激前瓶底细胞较稀疏的区域变得密集了.加入碱性成纤维细胞生长冈了的牙周膜细胞内核心蛋白多糖的mRNA表达水平明显下降了,而且随着碱性成纤维细胞生长因子质量浓度的增加,抑制作用逐渐减弱,在0.1 μg/L时抑制作用最强,在10 μg/L时抑制作用最弱.结论:碱性成纤维细胞生长凶子刺激可促进牙周膜细胞增殖,呈剂量依赖性抑制核心蛋白多糖的合成,0.1 μg/L时抑制作用最强.     

中药复方制剂消可宁对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:观察中药复方制剂消可宁对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用。方法:实验于2004-04/11在南京医科大学第一附属医院内分泌代谢研究中心细胞培养研究室完成。①中药复方制剂消可宁(由制大黄、制附子、生黄芪组成,南京军区南京总医院制剂科生产,药品批号:院临(2003)第01017号,规格为90mL/袋)。大鼠系膜细胞株HBZY-1购自武汉大学中国典型培养物保藏中心。②将购入的系膜细胞株消化培养,取培养4～8代的细胞,吸去培养瓶中的上清液,消化离心后混匀,锥虫蓝染色观察细胞活性。③不同刺激时间系膜细胞增殖实验设立3组,正常糖浓度组每孔加入5.6mmol/L葡萄糖溶液200μL,高糖对照组每孔加入30mmol/L葡萄糖溶液200μL,高糖 消可宁组每孔加入30mmol/L葡萄糖与0.06g/mL消可宁混合液200μL,6孔/组。各组分别于培养24,48,72h后向板孔中加5g/L的4-甲基偶氮四唑蓝20μL,于酶标仪492nm波长处检测吸光度值。④不同浓度消可宁刺激高糖环境下系膜细胞增殖实验设立7组,高糖对照组每孔加入30mmol/L葡萄糖溶液200μL,消可宁20,40,60,80,120,200g/L组每孔加入30mmol/L葡萄糖 对应浓度的消可宁混合液200μL,6孔/组。培养72h后各组向板孔中加5g/L的4-甲基偶氮四唑蓝20μL,同法检测吸光度值。结果:①系膜细胞活性观察:原代培养的4～8代系膜细胞,经锥虫蓝染色,着色的死亡细胞数<5%,未着色活细胞数>95%。②不同刺激时间各组系膜细胞增殖情况的比较:与正常糖浓度组比较,高糖对照组于高糖刺激24h即可促进系膜细胞的增殖,且这种作用在刺激48h时最为明显,至72h细胞数量开始减少,但仍明显高于正常糖浓度组(0.527±0.047,0.659±0.018,P<0.05)。与高糖对照组比较,高糖 消可宁组在24h内并未表现出抑制系膜细胞增殖的作用,而刺激48h后显示出抑制趋势,但差异无显著性意义,于72h后表现出较强的抑制系膜细胞增殖的效应(0.659±0.018,0.538±0.023,P<0.05)。③不同浓度消可宁刺激对高糖环境下系膜细胞增殖的影响:刺激72h后与高糖对照组比较,20,40g/L的消可宁能够部分阻止系膜细胞的增殖;60,80g/L的消可宁则表现出明显阻止高糖对系膜细胞的过度刺激作用,且随着浓度的增加,抑制作用逐渐增强;浓度升至120g/L时出现细胞脱落死亡,高达200g/L时则不见存活的细胞。结论:消可宁能够有效抑制高糖诱导的系膜细胞增殖,可能是其早期防治糖尿病肾病的细胞学基础。     

海洋珍珠生物提取液对人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响

背景:海洋珍珠生物提取液中富含锗、硒等微量元素。目的:观察海洋珍珠生物提取液对宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响。方法:MTT法检测0,6,30,45,60,75,150mg/L海洋珍珠生物提取液对Hela细胞增殖的影响;0,6,30,60mg/L海洋珍珠生物提取液干预Hela细胞后,流式细胞仪AnnexinV和PI双染检测细胞凋亡率,PI单染法测定细胞周期,RT-PCR法测定细胞株内bcl-2,bax基因表达。结果与结论:6～45mg/L海洋珍珠生物提取液对Hela细胞增殖有抑制作用,表现出浓度依赖性和时间依赖性(P<0.05),在60～150mg/L范围内只表现出了浓度依赖性(P<0.05),无时间依赖性。6～60mg/L海洋珍珠生物提取液呈浓度依赖性促进Hela细胞凋亡,使细胞阻滞在G1期;30,60mg/L海洋珍珠生物提取液可降低细胞内bcl-2mRNA表达,升高baxmRNA表达。说明海洋珍珠生物提取液以浓度依赖性的方式抑制Hela细胞增殖,并通过降低bcl-2mRNA,升高baxmRNA来诱导细胞凋亡。     

不同剂量神经节苷脂对神经干细胞增殖和分化的影响

背景近年来研究表明神经节苷脂(gangliosides,GM-1)能够修复中枢神经系统中神经元的损伤.目的观察不同剂量神经节苷脂(GM-1)对神经干细胞增殖和分化的影响.设计完全随机对照的开放实验.地点与材料研究地点为郑州市第二人民医院脑外科和郑州大学医学生物工程研究所.材料为胎龄10周流产胚胎脑组织.方法与主要观察指标从人胚胎脑组织分离出神经干细胞,培养于含bFGF和B27的DMEM/F12细胞营养液中,实验组加入不同浓度的GM-1,用MTT比色分析法测定细胞增殖能力.用含3%血清的DMEM/F12营养液诱导细胞分化,每间隔6h于倒置相差显微镜下观察细胞分化情况.结果5 d,10 dMTT比色显示bFGF(20mg/L)+B27+DMEM/F12和GM-1(33.5mg/L)+B27+DMEM/F12两组间t检验,P值均＞0.05;GM-1(33.5mg/L)+B27+DMEM/F12与B27+DMEM/F12两组间t检验,P值均＜0.05;GM-1(0.335 mg/L)+B27+DMEM/F12,GM-1(3.35 mg/L)+B27+DMEM/F12与B27+DMEM/F12间t检验,P值均＞0.05.分化实验发现,接种6 h后,(3%)血清+DMEM/F12组神经球周边可见明显的细胞突起,呈放射状向周围伸出,而3个实验组和阴性对照组的细胞突起短且细小,随着培养时间的延长,各组的细胞突起均逐渐伸长,3个实验组分化能力低于对照组,与阴性对照组之间无明显差异.结论GM-1能够维持神经干细胞的原始神经状态,促进神经干细胞的增殖,对神经干细胞无明显的诱导分化作用.     

Effects of exogenous zinc supplementation on intestinal epithelial repair in vitro

BACKGROUND: Substitution of zinc modulates antioxidant capabilities within the intestinal mucosa and improves intestinal wound healing in zinc-deficient patients with inflammatory bowel diseases. The aim of this study was to characterize the modulating effects of zinc on intestinal epithelial cell function in vitro. MATERIALS AND METHODS: The effects of zinc on intestinal epithelial cell morphology were assessed by phase contrast and transmission electron microscopy using the non-transformed small intestinal epithelial cell line IEC-6. Zinc-induced apoptosis was assessed by DNA fragmentation analysis, lactate dehydrogluase (LDH) release and flow cytometry with propidium iodine staining. Furthermore, the effects of zinc on IEC-6 cell proliferation were assessed using a colorimetric thiazolyl blue (MTT) assay and on IEC-6 cell restitution using an in vitro wounding model. RESULTS: Physiological concentrations of zinc (25 microM) did not significantly alter the morphological appearance of IEC-6 cells. However, a 10-fold higher dose of zinc (250 microM) induced epithelial cell rounding, loss of adherence and apoptotic characteristics. While physiological zinc concentrations (< 100 microM) did not induce apoptosis, supraphysiological zinc concentrations (> 100 microM) caused apoptosis. Physiological concentrations of zinc (6.25-50 microM) had no significant effect on intestinal epithelial cell proliferation. In contrast, physiological concentrations of zinc (12.5-50 microM) significantly enhanced epithelial cell restitution through a transforming growth factor-beta (TGFbeta)-independent mechanism. Simultaneous addition of TGFbeta and zinc resulted in an additive stimulation of IEC-6 cell restitution. CONCLUSION: Zinc may promote intestinal epithelial wound healing by enhancement of epithelial cell restitution, the initial step of epithelial wound healing. Zinc supplementation may improve epithelial repair; however, excessive amounts of zinc may cause tissue injury and impair epithelial wound healing.     

锶矿泉水对人肾小管上皮细胞增殖及ATP酶活性的影响

背景:一定浓度的锶对人体健康有益,锶对人体多种细胞的增殖和酶活性有影响。目的:用不同浓度的锶矿泉水配制的培养基在体外培养人肾小管上皮细胞,观察细胞增殖情况及Na+-K+-ATP酶的活性。方法:体外培养人肾小管上皮细胞,用普通DMEM液体培养基(高糖)培养24h后,分别用含锶质量浓度2,4,6,8mg/L的矿泉水和双蒸水的条件培养基继续培养,分别于48,72,96和110h行MTT法观察HK-2细胞的增殖情况。培养110h的细胞以比色法测无机磷的量来判断Na+-K+-ATP酶的活性。结果与结论:MTT结果表明:质量浓度2mg/L锶矿泉水对HK-2细胞增殖无影响;细胞培养至110h,双蒸水组出现生长抑制时,质量浓度4,6,8mg/L锶矿泉水组却依然能保持旺盛的增殖状态(P<0.05),生长周期延长,尤以质量浓度4mg/L锶矿泉水组的效果最突出(P<0.05)。Na+-K+-ATP酶活性测试结果表明:与双蒸水组比较,锶矿泉水组Na+-K+-ATP酶活性更高(P<0.05),其中质量浓度6mg/L锶矿泉水组的酶活性最强(P<0.05)。结果证实,锶矿泉水可延长肾小管细胞的增殖周期,可促进肾小管细胞的转运功能。     

不同浓度尿酸对体外培养人脐静脉血管内皮细胞增殖过程的影响

背景:近年对尿酸特别是其与心血管疾病的研究较多,但多集中在流行病学领域,从细胞学角度探讨尿酸对内皮细胞影响的研究并不多见。目的:观察不同浓度的尿酸对体外培养的人脐静脉内皮细胞株(ECV304)丙二醛,一氧化氮及3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐的影响。设计:以人脐静脉内皮细胞为观察对象,随机对照实验。单位:解放军第四军医大学西京医院内分泌科。材料:脐静脉内皮细胞株ECV304由解放军第四军医大学免疫教研室提供;DMEM低糖培养基,美国Gibco公司生产;胎牛血清,北京元亨圣马生物技术研究所生产;胰蛋白酶,美国Gibco公司生产;3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,华美公司生产;二甲基亚砜(DM-SO),分析纯,天津博迪化工有限公司生产;尿酸,Sigma公司生产。一氧化氮测试盒,丙二醛测试盒,南京建成公司生产。普通倒置显微镜、酶联免疫检测仪IX70型倒置显微镜,日本Olympus生产;酶联免疫检测仪,华东电子管厂生产。方法:实验于2003-12/2004-04在第四军医大学内分泌科和烧伤科进行。内皮细胞的复苏、培养、传代、接种均参考司徒镇强等主编的《细胞培养》中的方法进行。用无血清DMEM培养24h使细胞同步化于G0/G1期,分4组实验,分别为对照组,低浓度尿酸组,中浓度尿酸组和高浓度尿酸组,每组分为24h,48h和72h3个时间点,每个时间点8个样本。对照组,低浓度尿酸组,中浓度尿酸组和高浓度尿酸组分别加入含有0mmol/L,0.1mmol/L,0.2mmol/L,0.4mmol/L尿酸的5%的血清培养液,然后将培养板放入37℃,体积分数为0.05的CO2孵箱中孵育。在24h后检测丙二醛,一氧化氮及3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,48h及72h分别再检测3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐。主要观察指标:各组人脐静脉内皮细胞增殖情况及一氧化氮和丙二醛的含量。结果:随尿酸浓度增高,ECV304产生丙二醛的含量逐渐下降,分别为(2.97±0.05),(2.89±0.09),(2.78±0.10),(2.44±0.03)μmol/L。ECV304产生一氧化氮的量分别为(6.86±1.41),(12.5±2.7),(18.9±1.8),(21.1±1.4)μmol/L,ECV304产生一氧化氮的量和3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐吸光度逐渐增加,细胞增殖以48h增加最为明显。结论:尿酸有抗氧化性,可促进血管内皮细胞的增殖及一氧化氮的释放。     

川芎嗪影响血管内皮生长因子诱导HL-60白血病细胞增殖的效应

背景:川芎嗪抑制血管内皮生长因子的表达,但对其诱导HL-60白血病细胞增殖是否有抑制效应尚需进一步实验.目的:观察川芎嗪对血管内皮生长因子诱导的白血病细胞HL-60细胞增殖的影响.设计:重复测量观察.单位:武汉科技大学医学院.材料:实验于2007-03/06在武汉科技大学医学院分子生物学实验中心完成.人白血病细胞系HL-60细胞购于上海细胞生物研究所.盐酸川芎嗪注射液为无锡市第七制药有限公司产品, 批号为011014,硫酸鱼精蛋白注射液购自上海第一生化药业公司,批号为010302, 免疫组化试剂盒购自博士德公司.方法:①取对数生长期人白血病细胞系HL-60细胞,加入100 μg/L 血管内皮生长因子,分别加入终浓度为1.5,15,150 mg/L川芎嗪实验培养基,以未加川芎嗪注射液的细胞为空白对照组,只含20 mg/L鱼精蛋白的细胞为阳性对照组,同时设立血管内皮生长因子对照组,细胞培养48 h后,采用MTT法检测HL-60细胞的生长抑制率.②川芎嗪影响HL-60细胞血管内皮生长因子蛋白表达实验:用终浓度为1.5,15及150 mg/L川芎嗪处理HL-60细胞,24 h后采用免疫组织化学法计算血管内皮生长因子蛋白阳性细胞表达率.主要观察指标:① HL-60细胞生长抑制率.②血管内皮生长因子蛋白表达情况.结果:① HL-60细胞生长抑制率:川芎嗪15, 150 mg/L作用血管内皮生长因子诱导的HL-60细胞吸光度值均低于血管内皮生长因子对照组,差异有显著性意义(P < 0.05).②血管内皮生长因子蛋白表达情况:川芎嗪作用HL-60细胞24 h后,血管内皮生长因子蛋白随川芎嗪给药浓度升高表达逐渐下调,呈一定依赖性,各川芎嗪浓度干预HL-60细胞血管内皮生长因子蛋白表达阳性细胞表达率与对照组比较差异均有显著性意义(P < 0.01).结论:川芎嗪可抑制血管内皮生长因子诱导HL-60细胞的增殖, 并下调血管内皮生长因子蛋白的表达.     

消可宁对高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞增殖的调控效应

背景:中药对早期糖尿病肾病有较好的防治作用,这一作用是基于中药有效成分的多样性而作用于糖尿病肾病不同靶点所引起的。目的:观察消可宁对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增生的影响,并探讨其可能的作用机制。设计:对照观察。单位:南京医科大学第一附属医院内分泌科。材料:实验于2003-07/2004-05在南京医科大学第一附属医院内分泌代谢研究中心细胞培养研究室完成。大鼠系膜细胞株HBZY-1:购自武汉大学中国典型培养物保藏中心。方法:系膜细胞按说明进行传代培养备用。①不同刺激浓度分组:高糖 消可宁组(消可宁分别取20.0,40.0,60.0,80.0,120.0,200.0g/L);正常糖对照组,细胞液中葡萄糖浓度为5.6mmol/L;高糖对照组,细胞液中葡萄糖浓度为30mmol/L,分别刺激72h进行观察。不同刺激时间分组:正常糖对照组,细胞液中葡萄糖浓度为5.6mmol/L;高糖对照组,细胞液中葡萄糖浓度为30mmol/L;高糖 消可宁组,细胞液中葡萄糖浓度为30mmol/L,消可宁浓度为60g/L;3组分别在刺激24,48,72h给予观察。②将配置好的细胞悬液放入96孔培养板,每孔加200μL。培养板放置体积分数为0.05CO2,37℃孵箱24h后,取出弃上清,加入各组含不同药物及浓度的细胞液,每孔200μL。将96孔板放入37℃含体积分数为0.05的CO2空气和100%湿度培养箱中孵育。不同刺激浓度组别于72h后分别向板孔中加20μL4-甲基偶氮四唑蓝(5g/L),不同刺激时间组别于24,48,72h后分别向板孔中加20μL4-甲基偶氮四唑蓝(5g/L),之后均在37℃培养箱中温育4h,置镜下观察4-甲基偶氮四唑蓝掺入细胞内,吸出上清,加入150μL二甲基亚砜使用甲醇溶解,用平板摇床摇匀振荡30s,于酶标仪492nm波长读数,并记录吸光度值。主要观察指标:不同培养时间及不同消可宁培养浓度下系膜细胞增殖情况(吸光度值)。结果:①不同刺激时间各组系膜细胞增殖的情况:(下转第201页)高糖对照组刺激24,48,72h系膜细胞吸光度值分别为0.685±0.010,0.750±0.087,0.659±0.018,高于正常糖对照组(0.586±0.054,0.598±0.040,0.527±0.047,P<0.05),高糖对照组及正常糖对照组葡萄糖刺激系膜细胞48h吸光度值高于24h(P<0.05),刺激72h吸光度值低于48h,(P<0.05)。高糖 消可宁组药物刺激72h后系膜细胞吸光度值为0.538±0.023,低于高糖对照组(P<0.05)。②不同浓度消可宁刺激系膜细胞增生情况:消可宁自浓度为60.0g/L起,可明显的阻止高糖对系膜细胞的过度刺激作用,并随着浓度的增加,这种作用逐渐增强,但过高的浓度(120.0g/L)则出现细胞脱落死亡,极高的药物浓度(200.0g/L)则不见存活的细胞。结论:高糖培养的系膜细胞在消可宁刺激72h后表现出较强的抑制系膜细胞增殖的作用,在一定范围内呈剂量依赖的方式,但过高的药物浓度又表现出很强的细胞毒性。     

创伤弧菌攻击对人脐静脉内皮细胞系的影响

背景:创伤弧菌感染后患者死亡率高达50%以上,且感染后大量创伤弧菌侵入血液之中,而血管内皮细胞是阻挡创伤弧菌进入血管的第一道屏障.目的:观察创伤弧菌对人脐静脉内皮细胞增殖能力和细胞形态的影响.方法:将对数生长期的人脐静脉内皮细胞消化后,调整细胞浓度至5×10~8 cfu/L,依培养基中创伤弧菌细菌浓度不同分为5个组:10~4,10~5,10~6,10~7 cfu/L创伤弧菌组和对照组.对照组不加创伤弧菌,仅用体积分数为10%胎牛血清DMEM培养基培养.锥虫蓝拒染法检测细胞存活率、MTT法观察创伤弧菌对人脐静脉内皮细胞增殖的影响,及光镜下观测细胞面积、周长、细胞核的面积、核浆比以及形状不规则指数.结果与结论:随着创伤弧菌作用浓度和时间的增加,人脐静脉内皮细胞的增殖能力逐渐减弱,攻击组细胞的面积和周长,细胞核的面积以及核浆比都比对照组明显增大,形状不规则指数比对照组更偏离.提示创伤弧菌对体外培养的人脐静脉内皮细胞系的增殖有明显的抑制作用,其抑制能力与创伤弧菌作用的浓度和时间有关.