miRNA-34a过表达对4种人宫颈癌细胞放射敏感性研究

目的 研究miRNA-34a过表达对4种人宫颈癌细胞放射敏感性的影响。方法 运用脂质体2000转染试剂盒将pGenesil-1-miRNA-34a表达质粒转染宫颈癌细胞系C33A、HeLa、SiHa和CaSki,通过G418筛选构建过表达miRNA-34a宫颈癌细胞系(miRNA-34a/C33A、miRNA-34a/HeLa、miRNA-34a/SiHa和miRNA-34a/CaSki)。细胞经不同剂量⁶⁰Coγ射线照射;运用TaqManRT-PCR和蛋白印迹法测定细胞中miRNA-34a表达;运用MTT法和克隆形成实验分别测定细胞增殖抑制率和克隆形成能力,流式细胞仪测定细胞凋亡率和蛋白印迹法测定细胞凋亡相关蛋白表达变化。结果 宫颈癌细胞系中miRNA-34a表达量显著高于阴性对照组(P<0.05),过表达miRNA-34a宫颈癌细胞增殖抑制率显著高于阴性对照组(P<0.05),细胞克隆形成率显著低于阴性对照组(P<0.05)。流式细胞仪结果显示过表达miRNA-34a宫颈癌细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。蛋白印迹法结果显示4 Gy+过表达miRNA-34a细胞中cleaved caspase 9和cleaved PARP蛋白表达量高于过表达miRNA-34a细胞。结论 本研究成功构建miRNA-34a过表达宫颈癌细胞系,miRNA-34a过表达增强宫颈癌细胞放射敏感性,其机制与激活细胞凋亡通路有关。     

沉默Ku86基因对Hela细胞放射敏感性影响

目的 探讨siRNA沉默Ku86基因表达对宫颈癌Hela细胞放射敏感性的影响。方法 X射线照射后采用qRT-PCR、蛋白印迹法检测Ku86基因在Hela细胞中的表达水平,利用siRNA沉默Ku86基因表达。将si-NC、si-KU86转染到宫颈癌Hela细胞中,0、2、4、6、8、10 GyX射线照射。CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,克隆形成实验分析转染前后细胞放射敏感性变化,检测p53、Caspase-8表达分析沉默Ku86基因表达对放射诱导的细胞凋亡影响。结果 X线照射后Ku86 mRNA和蛋白表达水平上调,沉默Ku86表达降低了Hela细胞的增殖能力和克隆形成能力,放射增敏比为1.57。沉默Ku86表达上调了p53和Caspase-8表达,细胞凋亡增加。结论 siRNA沉默Ku86表达提高了宫颈癌Hela细胞的放射敏感性。     

miR-224对宫颈癌SiHa和HeLa细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:探讨miR-224对宫颈癌SiHa和HeLa细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法:对宫颈癌细胞株SiHa和HeLa中miR-224进行过表达或沉默,采用qRT-PCR法检测miR-224的转染效果,转染成功后采用CCK-8法、FCM检验、Transwell试验检测各组细胞增殖、凋亡及迁移情况。结果:与正常293T细胞相比,宫颈癌细胞SiHa、HeLa中miR-224表达量均升高,差异具有统计学意义（P<0.01）;转染成功后CCK-8法检测SiHa和HeLa细胞增殖情况,与阴性对照组和空白组比较,miR-224 mimic组细胞增殖能力增强,miR-224 inhibitor组细胞增殖能力减弱,差异具有统计学意义（P<0.01）;流式细胞仪检测SiHa和HeLa细胞凋亡情况,miR-224 mimic组细胞凋亡百分比明显低于阴性对照组（P<0.01）,miR-224 inhibitor组细胞凋亡百分比明显高于阴性对照组（P<0.01）;划痕试验检测SiHa和HeLa细胞迁移能力,48 h时miR-224 mimic组细胞愈合速率明显较阴性对照组和空白组快,差异有统计学意义（P<0.01）,miR-224 inhibitor组细胞愈合速率明显较阴性对照组慢,差异有统计学意义（P<0.01）。结论:宫颈癌细胞中miR-224过表达可促进细胞增殖和迁移并抑制凋亡,沉默miR-224可抑制细胞增殖和迁移并促进凋亡。     

MiR-125a靶向调节P53表达对人喉癌细胞增殖、凋亡以及放射治疗敏感性的影响

摘 要：［目的］ 探究miR-125a通过靶向调节p53的表达对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡以及放射治疗敏感性的影响。［方法］ 培养人喉癌Hep-2细胞系,利用慢病毒分别转染miR-125a与空白质粒,RT-PCR法检测转染后各组细胞中miR-125a水平,采用MTT法检测细胞增殖情况。X线照射各组细胞后,行克隆形成实验、微核检测和流式细胞检测法检测转染细胞凋亡水平及放射敏感性,通过在线软件预测p53基因为miR-125a直接调控的靶基因,Western blot检测凋亡相关蛋白水平并进一步验证miR-125a与p53的关系,及在喉癌细胞放射治疗中的作用。［结果］ MTT实验结果示,转染miR-125a后Hep-2细胞增殖能力明显下降（P<0.05）。克隆形成实验与微核检测结果表明高表达miR-125a可使Hep-2细胞放射敏感性显著提高。流式细胞仪检测结果0Gy下Hep-2-miR-125a、Hep-2-con220组,10Gy下Hep-2-miR-125a、Hep-2-con220组凋亡率分别为(6.30%±0.11%),(0.09%±0.02%),(18.15%±2.49%),(1.95%±0.08%)(P<0.01)。TargetScan软件预测TRIAP1（TP53 regulated inhibitor of apoptosis 1）为miR-125a的直接调控的靶基因,Western blot实验结果显示高表达miR-125a可正向调控p53的表达,从而增强Hep-2细胞对X线的放射敏感性。［结论］ MiR-125a表达上调后可能通过上调p53的表达使Hep-2细胞增殖受到抑制,诱使其发生凋亡,并提高放射敏感性。     

lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p对宫颈癌SiHa细胞增殖及放疗敏感性的影响

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）SNHG6对宫颈癌SiHa细胞增殖和放疗敏感性的影响及其潜在的作用机制。方法 检测lncRNA SNHG6、miR‐485‐3p在宫颈癌组织、癌旁组织、SiHa细胞及X线照射的SiHa细胞中的表达。分析lncRNA SNHG6与miR‐485‐3p之间的关系。过表达或敲降SNHG6、miR‐485‐3p后,MTT、Transwell迁移实验和流式细胞仪检测细胞增殖能力、侵袭数目和凋亡率。分析miR‐485‐3p对Wnt/β‐catenin通路的影响以及XAV939对SiHa细胞增殖及放疗敏感性的影响。结果 lncRNA SNHG6在宫颈癌组织和SiHa细胞中高表达,在X线照射的SiHa细胞中低表达,miR‐485‐3p在宫颈癌组织和SiHa细胞中低表达,在X线照射的SiHa细胞中高表达。lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p。下调lncRNA SNHG6表达抑制了细胞增殖和侵袭,增强了其对X线的放疗敏感性,而miR‐485‐3p抑制剂转染细胞后则起到相反作用。上调lncRNA SNHG6通过miR‐485‐3p促进了SiHa细胞的增殖与侵袭,降低了放疗敏感性。下调miR‐485‐3p激活了Wnt/β‐catenin通路,促进了SiHa的细胞增殖和侵袭,降低了其对X线的放疗敏感性。结论 过表达lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p激活Wnt/β‐catenin通路调控SiHa细胞的增殖及其放疗敏感性。     

lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p对宫颈癌SiHa细胞增殖及放疗敏感性的影响

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）SNHG6对宫颈癌SiHa细胞增殖和放疗敏感性的影响及其潜在的作用机制。方法 检测lncRNA SNHG6、miR‐485‐3p在宫颈癌组织、癌旁组织、SiHa细胞及X线照射的SiHa细胞中的表达。分析lncRNA SNHG6与miR‐485‐3p之间的关系。过表达或敲降SNHG6、miR‐485‐3p后,MTT、Transwell迁移实验和流式细胞仪检测细胞增殖能力、侵袭数目和凋亡率。分析miR‐485‐3p对Wnt/β‐catenin通路的影响以及XAV939对SiHa细胞增殖及放疗敏感性的影响。结果 lncRNA SNHG6在宫颈癌组织和SiHa细胞中高表达,在X线照射的SiHa细胞中低表达,miR‐485‐3p在宫颈癌组织和SiHa细胞中低表达,在X线照射的SiHa细胞中高表达。lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p。下调lncRNA SNHG6表达抑制了细胞增殖和侵袭,增强了其对X线的放疗敏感性,而miR‐485‐3p抑制剂转染细胞后则起到相反作用。上调lncRNA SNHG6通过miR‐485‐3p促进了SiHa细胞的增殖与侵袭,降低了放疗敏感性。下调miR‐485‐3p激活了Wnt/β‐catenin通路,促进了SiHa的细胞增殖和侵袭,降低了其对X线的放疗敏感性。结论 过表达lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p激活Wnt/β‐catenin通路调控SiHa细胞的增殖及其放疗敏感性。     

宫颈癌组织和细胞中PAGE4的表达及其对癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响北大核心

目的:探究前列腺相关基因4(prostate-related gene 4,PAGE4)在宫颈癌组织和细胞中的表达及其对癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法:根据前期组学结果,已筛选出宫颈癌中显著差异表达的基因PAGE4。IHC和RT-qPCR检测PAGE4在宫颈癌组织和细胞中的水平。构建并验证PAGE4过表达载体,随后转染宫颈癌SiHa和HeLa细胞系,运用CCK-8实验、克隆形成实验、流式细胞术、划痕愈合实验、Transwell迁移实验和Western blotting探究PAGE4对宫颈癌细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和上皮间质转化的影响。应用STRING数据库预测PAGE4的潜在互作分子c-Jun,RT-qPCR检测其在过表达PAGE4的宫颈癌细胞系中的水平。通过沉默c-Jun和回复实验初步探究c-Jun在PAGE4介导的宫颈癌细胞转移中的作用。结果:测序结果表明PAGE4在宫颈癌组织中表达明显下调,倍数约为457倍。PAGE4在宫颈癌组织及细胞系中均呈低表达。与对照组相比,过表达PAGE4组细胞增殖、细胞周期以及凋亡无明显差异,但细胞迁移明显减弱,E-cadherin蛋白表达上调且Vimentin蛋白表达下调。c-Jun逆转过表达PAGE4对宫颈癌细胞迁移和上皮间质转化的影响。结论:过表达PAGE4能抑制宫颈癌细胞的迁移和上皮间质转化,其机制可能与c-Jun相关。总之,PAGE4可能在宫颈癌的转移中起一定作用,PAGE4有望成为抑制肿瘤转移的新靶点。     

RNAi抑制Survivin基因表达对宫颈癌SiHa细胞放射敏感性的影响

目的通过RNA干扰技术抑制宫颈癌SiHa细胞中Survivin基因的表达,观察其对X线敏感性的变化.方法构建Survivin短发卡RNA表达质粒pSurvivin-shRNA并转染入宫颈癌SiHa细胞,RT-PCR及Western印迹法分别检测Survivin mRNA及蛋白的表达情况,激酶活性检测法测定caspase-3活性变化,流式细胞仪法检测细胞凋亡率,克隆形成实验检测转染细胞放射敏感性的变化.结果与未转染细胞和转染阴性质粒细胞(SiHa/pNeg-shRNA细胞)相比,转染pSurvivin-shRNA质粒的SiHa细胞(SiHa/pSurvivin-shRNA细胞)中Survivin mRNA和蛋白表达明显下降;caspase-3活性明显增强,D405达1.34±0.05(P＜0.05);8 Gy的X线照射24 h和48 h后,SiHa/pSurvivin-shRNA细胞的凋亡率分别为(5.13±0.81)%和(11.27±1.89)%,明显高于SiHa/pNeg-shRNA细胞和未转染细胞(P＜0.05);克隆形成实验结果显示SiHa/pSurvivin-shRNA细胞的成克隆能力明显下降,对X线的敏感性明显增加.结论短发卡状RNA干扰技术阻抑宫颈癌SiHa细胞中Survivin基因的表达,增强caspase-3活性,可诱导细胞凋亡并促进SiHa细胞对X线的敏感性.     

宫颈癌细胞中ΔNp63α的MicroRNA表达谱及其对hsa-let-7b-3p的调控机制

目的 在宫颈鳞癌细胞中筛选出ΔNp63α显著调控的miRNAs,并探讨其对宫颈癌细胞功能的影响。 方法 通过miRNA芯片技术筛选出ΔNp63α过表达的SiHa细胞株（SiHa/p63）中差异明显的miRNAs,并进行qRT-PCR验证;通过qRT-PCR在沉默ΔNp63α的ME-180细胞株（ME-180/Shp63）中检测差异表达的miRNAs,并选择差异较显著的hsa-let-7b-3p作为研究对象;向SiHa细胞中转染hsa-let-7b-3p 刺激剂,通过生长曲线、Western blot以及流式细胞仪检测hsa-let-7b-3p对SiHa细胞增殖及凋亡的影响。 结果 （1）在ΔNp63α过表达的SiHa细胞株中,筛选出10个变化较显著的miRNAs;（2）在ΔNp63α沉默的ME-180细胞中,筛选出5个与上述变化趋势一致的miRNAs;（3）hsa-let-7b-3p过表达抑制SiHa细胞的增殖;（4）hsa-let-7b-3p过表达促进SiHa细胞的凋亡。结论 宫颈癌细胞株中,miRNA hsalet-7b-3p的表达与ΔNp63α的表达呈正相关,且可以有效抑制细胞增殖,其作用机制可能与诱导细胞周期阻滞和促进细胞凋亡相关。     

AFP通过激活STAT3的磷酸化促进肝癌细胞的增殖

摘 要：［目的］ 研究AFP基因过表达对肝癌细胞系HepG2细胞增殖的影响及其机制。［方法］ 利用慢病毒转染技术对HepG2细胞进行AFP基因过表达,通过Western Blot检测转染后HepG2细胞中AFP表达情况,采用流式细胞技术和CCK8细胞增殖实验检测细胞的增殖情况,Western Blot检测AFP过表达后STAT3、p-STAT3蛋白水平的变化。［结果］ CCK8细胞增殖实验显示,AFP过表达组HepG2细胞较对照组细胞增殖速度快（P<0.05）。流式细胞实验显示,AFP基因过表达组处于G1期和S期的细胞占比分别为49%和21%,而对照组相应的G1期、S期细胞占比分别为61%和12%,差异具有统计学意义（P<0.05）。AFP基因过表达后,HepG2细胞中p-STAT3表达水平升高,表明存在STAT3蛋白的激活。［结论］ AFP可促进HepG2肝癌细胞的增殖,其机制涉及STAT3蛋白的激活。