油酸钠与紫外线联用灭活血浆中病毒的研究

采用细胞感染法,对油酸钠与短波紫外线（ＵＶＣ）联用灭活血浆中病毒进行了研究。结果,３２００μＷ／ｃｍ２　ＵＶＣ与３．０ｍｇ／ｍｌ油酸钠联合作用３０ｍｉｎ或３２００μＷ／ｃｍ２　ＵＶＣ与２．０ｍｇ／ｍｌ油酸钠联合作用４０ｍｉｎ,可使血浆中水泡性口炎病毒（ＶＳＶ）滴度下降 ６．３３～６．４４ｌｇ ＴＣＩＤ５０,辛德比斯病毒滴度下降６．０９—６．３４ｌｇ ＴＣＩＤ５０。且两者联用协同系数（Ｔ／Ｅ）远大于１,有明显增效作用。但该方法使Ｍ１３噬菌体和ｆ噬菌体滴度下降≤３ｌｇ ＰＦＵ。用 ＲＴ－ＰＣＲ扩增 ＶＳＶ编码 Ｎ蛋白的一段核酸,研究此消毒方法对ＶＳＶ核酸的影响。结果,经ＵＶＣ照射的含ＶＳＶ血浆目的片段扩增阴性,油酸钠处理的含ＶＳＶ血浆扩增阳性。表明ＵＶＣ照射作用于ＶＳＶ核酸,使之断裂,从而灭活病毒,而油酸钠对ＶＳＶ的这段核酸无破坏作用。     

氯灭活甲型肝炎病毒与其核酸变化关系的研究

为了解氯灭活ＨＡＶ与ＨＡＶ核酸变化的关系，采用大片段逐步步移ＲＴ一ＰＣＲ技术对ＨＡＶ核酸全序列进行扫描。结果，在２５℃以１０ｍｇ／Ｌ有效氯作用３０ｍｉｎ，可完全灭活ＨＡＶ，而５ｍｇ／Ｌ有效氯作用６０ｍｉｎ则不能。在ＨＡＶ核酸全序列中，各部分对氯的抗力不一，以５′ＮＴＲ为敏感。用１０ｍｇ／Ｌ有效氯作用３０ｍｉｎ，检测其为阴性，其次为３′ＮＴＲ，当１０ｍｇ／Ｌ有效氯作用６０ ｍｉｎ时，亦为阴性；结构区的某些片段对氯的抗力较强。以１０ｍｇ／Ｌ有效氯作用３０ｍｉｎ，进一步缩小氯对ＨＡＶ核酸作用敏感区间｛即近５′ＮＴＲ）的检测发现，病毒最初的１～６７１ｂｐ检测呈阴性，而６６９～１０２３ｂｐ仍呈阳性。结果表明，氯灭活ＨＡＶ与其核酸５′ＮＴＲ的损伤一致，在充分了解氯对ＨＡＶ作用机理的基础上，ＰＣＲ可用于消毒效果的评价。     

巨细胞病毒即刻早期基因mRNA检测方法的建立

目的建立快速简便的逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）即刻早期（ＩＥ）基因ｍＲＮＡ。方法设计合成跨越ＨＣＭＶＩＥ基因内含子区的一对引物，分别用ＲＴＰＣＲ和ＰＣＲ技术扩增ＨＣＭＶｍＲＮＡ和ＤＮＡ，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定阳性产物。结果ＨＣＭＶＩＥ基因ｍＲＮＡ表达在感染后６小时即可出现，并持续到感染后至少９６小时，ＲＴＰＣＲ检测的最低敏感性为１００ｆｇ总ＲＮＡ，其他病毒和细胞ＲＮＡ不能被扩增。结论ＲＴＰＣＲ技术检测ＨＣＭＶｍＲＮＡ敏感、特异，有望应用于临床作为ＨＣＭＶ活动性感染的早期诊断方法     

改良凝胶吸附法制备的凝血酶原复合物

采用ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ凝胶从人血浆中吸附制备经Ｓ／Ｄ病毒灭活处理后的ＰＣＣ制品，ＤＥＡＥ洗脱液经Ｓ／Ｄ处理（０．３％磷酸三丁脂和１％Ｔｗｅｎ８０，６～８ｈ，２４℃）后，使所加入具有感染剂量（＞１０６）的标志病毒ＶＳＶ、Ｓｉｎｄｂｉｓ、ＨＩＶ均被有效灭活；ＰＣＣ制品中Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ因子的比活性（Ｕ／ｍｇ）分别为０．７９９±０．３４９、０．３４３±０．２５２、０．７４７±０．３４８、０．５８０±０．１９９（ｎ＝７），均比传统ＰＣＣ提高１．５～２．５倍（其中ＦⅨ∶Ｃ的比活性提高有显著性，ｔ＝３．１０５，Ｐ＜０．０１），同时也优于国内同类制品（ｔ＝２．３６０，Ｐ＜０．０５），对其杂蛋白（ＡＴ－Ⅲ、Ｆｎ、ＰＫＡ、Ｐｌｇ、ⅧＲ∶Ａｇ抗Ａ、抗Ｂ凝集素）的分析也反映出ＰＣＣ纯度有所提高。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＩＥ、ＣＩＥ电泳图谱及ＨＰＬＣ层析图谱证实上述结果，ＰＣＣ中ＴＮＢＰ残留量≤１０μｇ／ｍｌ，Ｔｗｅｅｎ８０残留量≤１００μｇ／ｍｌ，均在安全范围内。     

80℃,72h干热处理FⅧ制剂中指示病毒灭活效果的考察

以水泡性口炎病毒（ＶＳＶ）、Ｓｉｎｄｂｉｓ和ＰｏｌｉｏＩ型疫苗病毒为指示病毒，考察８０℃，７２ｈ干热处理对ＦⅧ制剂中的病毒灭活效果。结果表明，该法对加入制品中的ＶＳＶ、Ｓｉｎｄｂｉｓ和ＰｏｌｉｏＩ型疫苗病毒的灭活能力分别为８．３、９．１和７．７ｌｇＴＣＩＤ５０／ｍｌ；证实８０℃，７２ｈ干热处理，对模拟脂包膜和非包膜病毒的指示病毒ＶＳＶ、Ｓｉｎｄｂｉｓ和ＰｏｌｉｏＩ型疫苗病毒，均可起到有效的灭活作用。     

细胞感染法检测消毒剂灭活肠道病毒的研究进展

目前,化学消毒剂对细菌杀灭效果的检测,已基本形成一套较完整的试验方法;但消毒剂灭活病毒效果的检测和评价,尚无统一的试验方法。细胞感染法被认为是目前检测病毒感染性存在与否的最可靠方法。在消毒试验中,用细胞感染法评价消毒剂对病毒的灭活效果,还存在较多问题。现对有关用该法检测与评价消毒剂灭活肠道病毒效果的进展综述如下。 １病毒悬液的制备 试验肠道病毒多分离自病人粪便,经细胞培养、纯化后,用磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）、三羟甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）液或生理盐水稀释,制成病毒悬液。Ｔａｎ等用三羟甲基…     

甲型肝炎病毒PCR检测结果与其感染性关系的研究

据检测，以３００μＷ／ｃｍ２紫外线照射１０分钟，或用１％过氧化氢处理３０分钟，对甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）感染性的灭活率为９９．９９％，但用ＰＣＲ法未检出５＇端非编码区的扩增片段；经紫外线照时２０分钟，ＨＡＶ感染性虽全部消失，但仍可检出Ｐ１区扩增片段。结果表明，ＨＡＶ感染性的有无与ＰＣＲ扩增产物检出与否无平行关系．     

油酸钠与紫外线及维生素C灭活水泡性口炎病毒的试验观察

采用细胞感染法,对油酸钠、短波紫外线（ＵＶＣ）、维生素Ｃ（Ｖｉｔ Ｃ）灭活水泡性口炎病毒（ＶＳＶ）的作用进行了试验观察。结果,当油酸钠含量为２．０～３．０ ｍｇ／Ｌ,作用温度为４～３７℃时,随着油酸钠含量和温度的提高,ＶＳＶ滴度下降值由 １．１７ｌｇ ＴＣＩＤ５０增至４．５０ｌｇ ＴＣＩＤ５０;而作用时间在 ０．５～２ｈ之间变化,对病毒灭活效果无明显影响。ＵＶＣ照射剂量为 ２５ ５００～２０４ ０００ Ｊ／ｍ２,可使 ＶＳＶ下降 ２．３９～５．００个对数滴度,剂量－效应关系为指数函数关系。Ｖｉｔ Ｃ对 ＶＳＶ无明显灭活作用。     

RT—PCR检测呼吸道合胞病毒的研究

呼吸道合胞病毒是婴幼儿支气管炎和肺炎最常见的病原之一。应用逆转录－聚合酶链式反应对检测ＲＳＶ的方法进行了研究。采用的引物特异性扩增ＲＳＶ Ｆ糖蛋白Ｆ１亚基的一个片段，计算机检索与其它常见呼吸道病毒无同源性。敏感性测定显示该方法ＲＳＶ最低量为１０ＴＣＩＤ５０Ｓ。这些结果表明ＲＴ－ＰＣＲ可作为快速诊断ＲＳ的有效方法，在临床上推广应用。     

短波紫外线与交联淀粉碘联用法对血浆中病毒灭活的研究

采用细胞感染试验、全自动生化分析仪、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ等技术，观察短波紫外线（ＵＶＣ）与交联淀粉碘（ＣＳＩ）联用对血浆中辛德比斯病毒（ＳＶ）的灭活效果及血浆成分的变化。结果，以７１７０Ｊ／ｍ２ＵＶＣ照射后再经１００ｍｇ／ｍｌＣＳＩ处理６０ｍｉｎ，血浆中病毒的灭活可达６个对数级，且两消毒因子有协同增效作用。消毒后的血浆，除乳酸脱氢酶完全消失，总胆红素含量明显下降，钾离子含量比对照增加５２倍外，多种蛋白含量、蛋白分子量和生化指标均维持在正常值范围。     

热力法快速灭活冻干IgG制品中病毒的可行性研究

采用病毒细胞感染和免疫化学等试验观察了１００℃干热法快速灭活冻干ＩｇＧ中病毒的可行性。结果表明，１００℃处理３０ｍｉｎ可灭活ＩｇＧ中的水泡性口炎病毒（１０８２ＴＣＩＤ５０）和人类免疫缺陷病毒１型（１０４５～１０５２ＴＣＩＤ５０）。处理后ＩｇＧ的外观色泽和复溶效果均未见明显变化，抗原及抗体活性与未处理组相近，β－折叠构象仍然存在；但分子聚合体含量略有升高。如能找到减缓ＩｇＧ分子热聚合速度的方法，１００℃干热法有望用于快速灭活冻干ＩｇＧ中的病毒。     

糖类蛋白保护剂对热力灭活冻干IgG制品中病毒的影响

采用８０ ℃和１００ ℃干热灭活冻干蛋白制品中的病毒时,冻干品中的糖含量（ 作为蛋白保护剂） ≤１０％ ,对病毒灭活效果影响较小;糖含量≥２０ ％ ,热处理后的冻干蛋白剂型变化明显。     

四种理化因子对脊髓灰质炎病毒感染性与标志物破坏结果的比较

分别以热力、紫外线、次氯酸钠、碘对脊髓灰质炎病毒1型作用后、检测感染性、抗原性与核酸。经热力或碘作用后,病毒感染性消失与抗原性破坏较一致,而核酸破坏明显滞后,经氯或紫外线作用后,病毒感染性消失与核酸破坏较一致,而抗原性破坏不明显。     

微波对血浆中病毒灭活效果的试验观察

采用细胞感染法,试验观察了微波对血浆中病毒的灭活效果。结果,以微波加热５０℃作用２５ｍｉｎ,可使１０６．２５／ｍｌＴＣＩＤ５０的水泡性口炎病毒完全灭活,并且血浆感官形态不改变;而以水浴加热同样温度与作用时间时,则达不到完全灭活。微波消毒法可望用于对人血浆中病毒的灭活。     

RT-PCR法观察光化学法损伤VSV核酸的动态变化

目的 :了解光化学灭活病毒时 ,VSV核酸的动态变化。方法 :利用来源于VSV核衣壳蛋白基因的一对引物以RT PCR法检测VSV的核酸。结果 :RT PCR最大检测灵敏度为 1 8LgTCID50 ;在VSV光化学灭活过程中 ,RT PCR产物量在 5个灭活时间段上是不同的 ,随灭活时间的延长而减少。结论 :光化学法对VSV核酸损伤程度随病毒灭活时间的延长而增大。     

氯溴异氰尿酸对轮状病毒灭活效果初探

以酶标法、反向被动血凝法与电镜法对氯溴异氰尿酸灭活轮状病毒的效果进行了检测。经有效成分浓度为８００ｍｇ／Ｌ的氯溴异氰尿酸溶液作用５分钟（２５℃），以酶标法测得Ｐ／Ｎ值为１．５０，血凝法测得作用２０分钟时的灭活率为９８．５２％，电镜下见不到完整的轮状病毒及其残片。     

紫外线和热力灭活脊髓灰质炎病毒效果的试验观察

为了解紫外线和热力对脊髓灰质炎病毒１型（ＰＶＩ）的灭活效果及其影响因素,进行了悬液定量灭活病毒试验．结果,紫外线辐照剂量达 ２４０ ０００μＷ· ｓ／ ｃｍ２,可使滴度为 １０６·１７ ＴＣＩＤ５０的 ＰＶＩ全部灭活,灭活效果随病毒悬液厚度增加或悬液中存在有机物而降低。以 ５５℃作用 １０ ｍｉｎ,或以 ６０℃作用 ５ｍｉｎ,可使滴度为 １０６１７ ＴＣＩＤ５０的 ＰＶＩ全部灭活。病毒悬液中含体积分数为 ５０％的小牛血清时,需以５５℃作用 ２０ ｍｉｎ。 ＰＶＩ对紫外线的抗力强于大肠杆菌、肠球菌和大肠杆菌 ｆ２噬菌体,对热的抗力则仅比大肠杆菌ｆ２噬菌体强。     

消毒剂灭活猫杯状病毒中和剂鉴定试验方法

目的研究猫杯状病毒作为指标,评价化学消毒剂灭活病毒的中和剂试验方法。方法采用细胞感染法培养病毒,以噬斑计数法测定含氯消毒剂对猫杯状病毒的杀灭效果。结果采用本研究设计的中和剂试验方法所选出的中和剂能完全中和有效氯含量为1000 mg/L的该消毒剂,但其中和产物对培养细胞有毒。用EBSS溶液作2.5倍稀释后,可消除中和产物对试验细胞的毒性,使其可以用于病毒灭活试验的中和剂。以含有效氯1000 mg/L的次氯酸钠消毒液对猫杯状病毒作用1 min,平均灭活率为99.16%;作用5 min,平均灭活率为99.99%。结论以细胞感染法的噬斑计数测定消毒剂灭活猫杯状病毒的中和剂试验方法,达到操作简单、效果可靠的目的,可作为消毒试验参考。