更昔洛韦和黄芪对巨细胞病毒感染所致造血祖细胞增殖抑制的影响

目的　探讨更昔洛韦 (GCV)和黄芪对巨细胞病毒 (CMV)感染所致脐血粒 巨噬系祖细胞 (CFU GM)、红系早、晚期祖细胞 (CFU E、BFU E)、多向造血祖细胞 (CFU Mix)及巨核系祖细胞(CFU Mk)体外增殖抑制的影响。方法　采用造血祖细胞培养技术 ,培养、观察、计数巨细胞病毒AD169株 (CMV AD169)感染CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix和CFU Mk后各祖细胞集落、峰期及维持时间 ;用聚合酶链反应 (PCR)检测集落细胞内CMV DNA ;根据细胞毒性实验结果 ,将GCV和黄芪作用于CMV感染的CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix及CFU Mk祖细胞 ,再分别计数集落、峰期及维持时间。结果 ( 1)CMV感染组CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix及CFU Mk集落数较对照组明显减少 (P <0 0 1) ;集落维持时间CMV感染组较对照组明显缩短 ;( 2 )用PCR在感染组集落细胞内检测到CMV DNA的存在 ;( 3)黄芪和 (或 )GCV作用于CMV感染的祖细胞后 ,与病毒组比较集落维持时间明显延长 ,集落数和集落增殖率明显提高 (P <0 0 1) ,黄芪组集落增殖率分别为 2 7 2 %、4 5 2 %、4 9 1%、39 0 %、11 9% ;GCV组分别为 37 4 %、74 2 %、71 7%、6 7 4 %、38 9% ;GCV 黄芪组分别为 5 3 6 %、83 8%、88 7%、87 8%、6 1 5 %。结论　CMV AD169在体外能明显抑制CFU GM、CFU E、BFU     

更昔洛韦对人巨细胞病毒感染的粒-单祖细胞体外增殖的影响

目的　探讨更昔洛韦对人巨细胞病毒 (HCMV)感染的粒 单祖细胞 (CFU GM )体外增殖的影响。方法　采用造血祖细胞体外培养技术 ,用更昔洛韦干预HCMV感染的CFU GM ,观察计数CFU GM的产率、大小、峰期及维持时间。结果　①更昔洛韦组集落产率明显高于病毒组 (P <0 0 1)。②更昔洛韦组大集落所占比例明显高于病毒组 (P <0 0 1)。③更昔洛韦组集落维持时间较病毒组延长。结论　在体外 ,更昔洛韦对HCMV感染的CFU GM的生长具有促进作用。     

巨细胞病毒抑制多向祖细胞的增殖及干预研究

目的　在体外已证实人巨细胞病毒 (HCMV)能抑制骨髓造血祖细胞的增殖。该研究观察HCMV对脐血多向造血祖细胞 (CFU Mix)体外增殖的影响及黄芪和更昔洛韦 (GCV)对此的干预作用。方法　采用造血祖细胞体外培养技术 ,观察HCMV AD1 69感染的CFU Mix集落数、抑制率、提高率、集落峰值及集落维持时间 ;用聚合酶链反应 (PCR)技术检测集落细胞内HCMV AD1 69DNA。在 1∶1 0HCMV感染组中分别加入黄芪和 /或GCV ,观察黄芪和GCV干预HCMV AD1 69对CFU Mix增殖的抑制作用。结果　① 1∶1 0 ,1∶1 0 0 ,1∶1 0 0 0三种滴度HCMV AD1 69感染的CFU Mix集落数较对照组明显减少 (P <0 .0 5 ) ,集落数随病毒感染滴度的增高而减少 ,抑制率随病毒感染滴度的增高而逐渐增加 ;②各组集落峰值出现时间无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,但感染组集落维持时间明显短于对照组 (P <0 .0 1 ) ;③ 1∶1 0 ,1∶1 0 0 ,1∶1 0 0 0病毒感染组中检测到HCMV AD1 69DNA ;④ 1∶1 0感染组中加入黄芪和 /或GCV后 ,HCMV AD1 69感染的CFU Mix集落数明显高于未加药 1∶1 0感染组 (P <0 .0 5 )。结论　CFU Mix是HCMV的宿主细胞之一 ,HCMV能直接感染造血祖细胞 ;在体外HCMV AD1 69对CFU Mix生长和集落形成有明显抑制作用 ;黄芪和GCV有明显的抗HCMV作用 ,二者联     

人巨细胞病毒感染对脐血巨核系祖细胞体外增殖的影响

目的　探讨人巨细胞病毒 (HCMV)对脐血巨核系祖细胞 (CFU Mk)体外增殖的影响及其机制。方法　采用造血祖细胞体外培养技术 ,观察、计数HCMV AD169感染的CFU Mk集落产率、抑制率、集落峰值及维持时间 ;并采用聚合酶链反应 (PCR)技术检测集落细胞内HCMV AD169DNA。结果　 1.HCMV AD169感染组集落产率较对照组明显减少 ,HCMV对CFU Mk集落的抑制程度与病毒滴度有关 ,集落产率随病毒感染滴度增高而减少 ,抑制率随病毒感染滴度增高而渐增加 ;各组集落峰值出现时间无明显差异 (P均 >0 .0 5 ) ,但各感染组集落维持时间明显短于对照组 (P <0 .0 1) ;2 .用PCR在集落细胞内检测到HCMV AD169DNA。结论　CFU Mk是HCMV的宿主细胞之一 ,HCMV能直接感染CFU Mk ;在体外HCMV AD169对CFU Mk的增殖和集落形成有明显抑制作用 ,此作用可能与临床HCMV感染后患者血小板减少有关     

人巨细胞病毒感染对人骨髓粒－单系祖细胞生长的影响

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)对人骨髓粒－单系祖细胞(GM－CFUc)集落形成能力的影响。方法采用造血祖细胞培养技术，以HCMVAD169持续攻击骨髓GM－CFUc，观察计数GM－CFUc集落、簇的产率及集落的大小和维持的时间。结果①HCMV感染组GM－CFUc集落和簇的产率明显低于对照组(P＜0.01)；②HCMV感染GM－CFUc后，大集落的产率明显低于对照组；③集落维持的时间缩短，而集落出现峰值的时间无明显差异。结论在体外HCMV对GM－CFUc生长、集落的形成有明显抑制作用，提示HCMV感染患儿粒细胞减少可能与HCMV损伤GM－CFUc有关。     

人巨细胞病毒对造血系统的影响

目的 探讨人巨细胞病毒(HCMV)对造血系统的影响及其机制。方法 采用造血祖细胞体外半固体培养技术,研究HCMV AD169株对粒-巨噬系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(CFU—E)、多向造血祖细胞(CFU—Mix)及巨核系祖细胞(CFU-MK)集落生长的影响;分别用原位聚合酶链反应(IS-PCR)和聚合酶链反应(PCR)检测CFU-GM、CFU-Mix、CFU-MK及CFU-E集落细胞中的HCMV DNA;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CFU-E集落细胞中的晚期抗原(late antigen,LA)mRNA及CFU-MK集落细胞中的前早期抗原(immediate early antigen,IEA))mRNA;用免疫组化方法检测CFU—Mix集落细胞中HCMV早期蛋白P52。结果 HCMV AD169株在体外能明显抑制CFU—GM、CFU—E,CFU—Mix及CFU—MK的生长,抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系;经IS-PCR或PCR检测发现病毒感染组CFU-GM,CFU-E,CFU-Mix及CFU-MK细胞中有HCMV DNA存在;RT—PCR检测发现病毒感染组CFU-MK细胞中有IEA mRNA的表达,而CFU-E细胞中的LA mRNA为阴性;免疫组化(IHC)检测发现病毒感染组CFU-Mix集落细胞中有HCMV P52的表达。结论 HCMV AD169可抑制CFU-GM,CFU-E,CFU-Mix及CFU-MK的分化和增殖;HCMV AD169对造血系统有直接损害作用。此作用可能是HCMV感染所致的粒细胞和血小板减少及贫血的原因之一。     

人巨细胞病毒对多向造血祖细胞的影响

目的：探讨人巨细胞病毒（HCMV）对多向造血祖细胞（CFU－Mix)的抑制作用及其机制。方法：采用造血祖 外半固体培养技术,研究HCVMVAD169株对脐血CFU－Mix集落生长的影响;用原位聚合酶链反应（IS－PCR）检测集落细胞中的HCVM DNA;用免疫组化方法检测集落细胞中HCV早期蛋白P52。结果：HCMVAD169在体外能明显抑制UF－Mix集落生长,集落数随病毒感染滴度的增高而减少,抑制幅度亦加大的趋势;经IS－PCR检测发现病毒感染线CFU－Mix集落细胞中有HCVMVDNA存在,免疫组化检测发现病毒感染缄CFU－Mix涨集落细胞中有HCMV P52的表棕,结论HCMV AD169可抑制 CFU－Mix的分化、增殖;HCMV AD169对CFU－Mix有直接损害作用。此作用可能 是HCMV感染所致的粒细胞和血小板减少,贫血的主要原因;并证实CFU－Mix集落细胞右存在HCMV蛋白的早期表达。     

人类巨细胞病毒感染对脐血造血祖细胞增殖的影响(英文)

目的：探讨人类巨细胞病毒(HCMV)感染对脐血造血祖细胞(CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk)体外增殖的抑制作用及其机制。方法：20例脐血标本收集于正常足月顺产新生儿。实验共分5组:(1)3个HCMV感染组,每个感染组分别加入0.1 mL的103、104及105空斑形成单位(PFU)HCMV-AD169病毒液于培养体系中;(2)灭活对照组,加入同体积灭活HCMV病毒液;(3)空白对照组,不加HCMV病毒液,代之以同体积的IMDM。采用造血祖细胞体外半固体培养技术,培养、观察、计数HCMV-AD169株对脐血CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落数、抑制率和集落维持时间;并用聚合酶链反应(PCR)技术检测集落细胞内HCMV-DNA。结果：(1)在造血祖细胞培养体系中加入不同滴度的HCMV-AD169后,104和105PFU滴度感染对CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落形成均有显著的抑制作用,103PFU滴度感染对CFU-Mix及CFU-Mk集落形成有显著的抑制作用,与空白对照组和灭活对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。病毒滴度越高,抑制程度越明显(P<0.05)。(2)104和105PFU滴度感染组CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落维持时间较对照组明显缩短(P<0.01),103PFU滴度感染组CFU-Mix和CFU-Mk集落维持时间较对照组明显缩短(P<0.01)。(3)PCR显示3个感染组的CFU-GM、CFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落细胞内均有HCMV-AD169DNA存在。结论：HCMV-AD169能直接感染CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk造血祖细胞,并抑制造血祖细胞的增殖,这可能与HCMV感染患儿出现粒细胞减少、血小板减少和贫血等造血功能紊乱有关。     

巨细胞病毒感染对淋巴系祖细胞增殖的影响及其干预措施

目的探讨人类巨细胞病毒（HCMV）对淋巴系祖细胞（CFU-TL）体外增殖的影响、作用机制及其干预措施。方法本实验共分为空白对照组、灭活对照组、HCMV感染组、更昔洛韦（GCV）干预组、黄芪注射液（AMI）干预组5组。采用甲基纤维素半固体培养CFU-TL集落，不同浓度HCMV-AD169持续攻击CFU-TL，用AMI、GCV粉剂干预，观察CFU-TL集落形成：用四甲基偶氮唑盐法测HCMV对宿主细胞增殖活性的影响；用PCR检测CFU-TL集落细胞内HCMV-AD169DNA。结果1．与空白对照组及灭活对照组比较，各病毒感染组CFU-TL集落产率明显减少、维持时间明显缩短（P均〈0．01），抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系；2．HCMV感染48、72、96、120h对宿主细胞增殖活性的影响与对照组比较均有显著差异（F分别为11．412，18．058，13．259，56．360 P均〈0．01）。3．PCR检测到HCMV感染组CFU-TL集落细胞内HCMV-AD169DNA。4．与HCMV感染组比较，HCMV＋AMI组、HCMV＋GCV组CFU-TL集落产生率明显增加，集落维持时间均显著延长（P均〈0．01）。结论HCMV在体外能抑制CFU-TL集落的增殖和分化；HCMV感染患儿免疫功能低下可能与HCMV直接抑制CFU-TL有关；GCV、AMI在体外能有效干预HCMV感染所致的CFU-TL增殖抑制的发生。     

黄芪注射液对人巨细胞病毒感染的粒-单系祖细胞体外增殖的影响

目的：探讨黄芪注射液对人巨细胞病毒(HCMV)感染的粒—单系祖细胞(CFU-GM)体外增殖的影响。方法：采用造血祖细胞体外培养技术,用黄芪干预HCMV感染的CFU-GM,观察计数CFU-GM的产率,大小,峰期及维持时间。结果：①黄芪组每2×105个细胞中CFU-GM簇和集落的产率分别为 333.33±12.69 和81.23±4.93,病毒组每2×105个细胞中簇和集落的产率分别为 167.80±16.63,53.70±1.67,两者相比差异有显著性(P<0.01)。②黄芪组大集落的比例占(9.5±0.8)%,明显高于病毒组(2.7±1.0)%,P<0.01。③黄芪组大集落峰期出现早,集落和大集落维持时间长。结论：在体外黄芪注射液可以促进HCMV感染的CFU-GM增殖。     

再生障碍性贫血患儿骨髓祖细胞培养的临床意义

目的探讨再生障碍性贫血(AA)患儿红细胞集落生成单位(CFU-E)、爆式红细胞集落生成单位(BFU-E)、粒细胞-单核细胞集落生成单位(CFU-GM)及巨核细胞集落生成单位(CFU-Meg)骨髓祖细胞培养情况,了解骨髓祖细胞在AA发病中的作用及意义。方法抽取28例AA患儿骨髓3～4mL,以淋巴细胞分离液提取单个核细胞,用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤2次,调节单个核细胞水平为106/mL,取0.3mL分别接种于红系、粒-单核系、巨核系培养基分别作4类祖细胞培养,在7、14d测定其集落数。结果28例AA中,4类集落数均值与对照组比较,差异有显著意义(P<0.01或P<0.001)。集落数随病情加重而逐步下降。4类集落数低于对照组患儿下限所占百分比分别为BFU-E35.71%、CFU-E85.71%、CFU-GM75.00%、CFU-Meg89.29%。治愈及进步者4类集落数接近对照组水平,治疗无效及进展者与治疗前比较无变化。结论动态监测AA患儿骨髓4类祖细胞集落数变化对辅助诊断、观察疗效及预后判断均有指导意义。     

Cryopreservation of Pluripotent and Committed Hemopoietic Progenitor Cells from Human Bone Marrow and Cord Blood

As one of the studies on autologous bone marrow transplantation for childhood cancer, the viabilities of several kinds of hemopoietic progenitor cells after cryopreservation was assayed using bone marrow and cord blood samples. The mean recovery rates of granulocyte-macrophage colony forming units (CFU-GM), erythroid burst forming units (BFU-E) and erythroid colony forming units (CFU-E) from bone marrow cells were 47.9%, 31.3% and 10.5%, respectively. The mean recovery rates of CFU-GM, BFU-E and CFU-E from cord blood cells were 46.7%, 39.1% and 22.4%, respectively. The ratio of primitive to mature BFU-E did not change after cryopreservation. The mean recovery rate of mixed colony forming units (CFU-mix) from marrow cells was 30.2%, and that from cord blood cells was 58.9%, demonstrating their sufficient proliferative activity after cryopreservation. These results demonstrate that CFU-mix, primitive BFU-E as well as CFU-GM, mature BFU-E can be well cryopreserved, supporting the usefulness of autologous marrow transplantation for the rescue of the ruined hemopoiesis after intensive cancer therapy.     

造血干细胞分化过程中HOXB6基因表达及干预研究

目的探讨脐血造血干细胞(HSC)向粒-单系(CFU-GM)、红系(CFU-E)和淋巴系祖细胞(CFU-TL)增殖分化过程中HOXB6基因的表达情况及全反式维A酸(ATRA)对其的影响。方法1.采用造血干/祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类脐血造血干/祖细胞,观察HSC经人粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素(EPO)和植物血凝素(PHA)分别诱导后,在培养第3天、第7天和第12天的CFU-GM、CFU-E及CFU-TL集落生成情况。2.采用实时荧光定量RT-PCR技术(FQ-RT-PCR)检测造血干细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平。结果1.人类造血干细胞向CFU-GM、CFU-E和CFU-TL增殖分化过程中,各组细胞HOXB6基因均有表达。2.随时间推移,CFU-GMHOXB6 mRNA在增殖分化的第3天开始表达,第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱;CFU-E HOXB6 mRNA表达在第3天、第7天和第12天均持续增强;而在CFU-TL中,HOXB6 mRNA表达在第7天最强烈,第12天表达减弱。3.与对照组比较,ATRA可上调各组HOXB6基因的表达。结论1....     

Effects of amifostine on clonogenic mesenchymal progenitors and hematopoietic progenitors exposed to radiation

PURPOSE: To determine the radiation sensitivities of mesenchymal progenitors and hematopoietic progenitors, and to determine the in vitro effects of amifostine on hematopoietic and mesenchymal progenitors exposed to radiation. METHODS: Radiosensitivity of mesenchymal progenitor cells was determined by exposing marrow low-density cells to radiation at doses of 100 to 800 cGy. Mesenchymal cell colonies were established by plating 2.5 x 10(5) marrow low-density cells in long-term marrow culture medium (LTCM). The size, frequency, and cellular composition of the mesenchymal progenitor cells were scored after 14 days of incubation. Mesenchymal progenitor cells were subdivided into progenitors forming fibroblast and adipocyte mixed colonies (CFU-FA), and pure fibroblast colonies (CFU-F). Hematopoietic progenitors were assessed by methylcellulose-based assay. RESULTS: Radiation at 100 cGy caused a mild decrease in CFU-F and CFU-FA derived colonies by 12% and 13%, respectively; 200 cGy decreased CFU-F by 36% and CFU-FA by 52%; 400 cGy decreased CFU-F by 50% and CFU-FA by 86%; and 600 cGy decreased CFU-F by 24%, with total absence of CFU-FA. Pretreatment with amifostine protected 100% of CFU-F at 100 and 200 cGy, 84% at 400 cGy, 46% at 600 cGy, and 14% at 800 cGy. With CFU-FA colonies amifostine pretreatment provided only minimal radioprotection. For hematopoietic progenitors radiation at 100 cGy reduced CFU-GM by 74% but had no significant effect on CFU-GEMM and BFU-E. Radiation at 200 cGy decreased CFU-GEMM by 72%, BFU-E by 54%, and CFU-GM by 84%; 400 cGy further decreased CFU-GEMM by 83%, BFU-E by 81%, and CFU-GM by 93%. Pretreatment with amifostine resulted in twofold stimulation of CFU-GEMM and BFU-E colonies. All BFU-E colonies were protected up to 200 cGy. For CFU-GEMM amifostine pretreatment resulting in 68% at 200 cGy and 31% at 400 cGy. For CFU-GM colonies it was 54% at 100 cGy, 32% at 200 cGy, and 12% at 400 cGy. CONCLUSIONS: Mesenchymal progenitor cell subpopulations are differentially sensitive to radiation. Amifostine protects both mesenchymal and hematopoietic progenitors against radiation injury, though the level of protection appears to be dependent upon the sensitivities of these progenitor cells to radiation. Amifostine is a potent stimulant of BFU-E and CFU-GEMM progenitor colonies.     

Juvenile chronic myelogenous leukemia: In vitro characterization before and after allogeneic bone marrow transplantation

In previously published studies on patients with juvenile chronic myelogenous leukemia (JCML), excessive proliferation of malignant monocyte-macrophage elements and impaired growth of normal hematopoietic progenitors were demonstrated. A selective hypersentivity of granulocytemachrophage progenitors (CFU-GM) to granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) seems to represent the main pathogenetic mechanism. Allogeneic bone marrow transplantation (BMT) has been demonstrated to be the only curative strategy for patients with JCML. In this study, we evaluated the growth of peripheral blood hematopoietic progenitors in semisolid cultures in two children with JCML before and after allogeneic BMT. Serum levels of GM-CSF, interleukin-1 (JCIL-1) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) were also assessed. IL-1-β, GM-CSF and TNF-α serum levels of the patients before and after BMT did not differ significantly from those obtained in 45 healthy controls. After marrow transplant, the engraftment of donor hematopoietic stem cell was associated with the disappearance of both pretransplant GM-CSF hypersensitivity and CFU-GM spontaneous growth. The inhibitory effect on the growth of normal hematopoietic progenitors also resolved. This confirms that the substitution of the pathological hematopoietic progenitors represents the basis for the curvative effect of allogeneic BMT in the treatment of JCML, abolishing both the excessive responsiveness of JCML progenitor cells even to very low concentrations of GM-CSF and the growth-inhibitory effect on normal hematopoiesis. © 1995 Wiley-Liss, Inc.