结直肠癌细胞IL-4/Stat6信号传导活性与调节基因差异性表达相关性研究

目的:IL-4介导的Stat6信号传导活性在人细胞之间有差异,称为Stat6活化表型。旨在探讨Stat6活化表型及其产生的分子学基础。方法:结直肠癌细胞株HT-29与Caco-2的Stat6活化表型用EMSA半定量法测定。Stat6通路调节因子基因水平的表达用RT-PCR法检测。蛋白水平的表达用Western blotting法检测。结果:EMSA分析表明,HT-29为高活化表型(Stat6high)而Caco-2为零活化表型(Stat6null)。RT-PCR分析显示,与Stat6highHT-29比较,Stat6nullCaco-2癌细胞高表达负调节基因SOCS1和SHP1,而低表达正调节因子PP2A催化亚单位编码基因PP2CA和PP2CB。Westernblotting分析法证实Caco-2癌细胞高表达SOCS1和SHP1蛋白。结论:Stat6通路正、负调节基因的表达失衡可能是产生不同Stat6活化表型的分子机制之一。     

结直肠癌细胞IL-4／Stat6信号传导活性与调节基因差异性表达相关性研究

目的：IL-4介导的Star6信号传导活性在人细胞之间有差异，称为Stat6活化表型。旨在探讨Stat6活化表型及其产生的分子学基础。方法：结直肠癌细胞株HT-29与Caco-2的Star6活化表型用EMSA半定量法测定。Stat6通路调节因子基因水平的表达用RT-PCR法检测。蛋白水平的表达用Western blotting法检测。结果：EMSA分析表明，HT29为高活化表型（Star6^high）而Caco2为零活化表型（Star6^null）。RT-PCR分析显示，与Star6^high HT-29比较，Star6^null Caco-2癌细胞高表达负调节基因SOCS1和SHP1，而低表达正调节因子PP2A催化亚单位编码基因PP2CA和PP2CB。Westernb lotting分析法证实Caco-2癌细胞高表达SOCS1和SHP1蛋白。结论：Star6通路正、负调节基因的表达失衡可能是产生不同Star6活化表型的分子机制之一。     

沉默Stat3对卵巢癌细胞系OV2008恶性表型的影响

目的:探讨沉默信号转导和转录活化因子(Stat3)对卵巢癌细胞系OV2008恶性表型的影响.方法:腺病毒M4感染卵巢癌细胞系OV2008后,利用RT-PCR法检测Stat3 mRNA的表达水平;Western blot法检测Stat3蛋白的表达水平;MTT法检测沉默Stat3对OV2008细胞的增殖抑制的影响;Transwell小室法检测沉默Stat3对OV2008细胞的侵袭运动能力的影响;流式细胞术检测沉默Stat3对OV2008细胞的凋亡的影响.结果:RT-PCR以及Western blot结果显示,腺病毒M4感染卵巢癌细胞系OV2008后,OV2008细胞中的Stat3 mRNA以及Stat3蛋白的表达水平均明显降低;MTT结果显示,沉默Stat3表达后的OV2008细胞与空白对照组以及Ad5/dE1A病毒对照组的细胞相比,增殖能力明显减弱(P<0.05);Transwell小室法结果显示,沉默Stat3后的OV2008细胞12.64±7.10与空白对照组127.70±8.28以及Ad5/dE1A病毒对照组137.80±9.78相比,侵袭运动能力明显减弱(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,沉默Stat3表达后的OV2008细胞65.51±5.78与空白对照组10.73±4.28以及Ad5/dE1A病毒对照组12.17±3.87相比,细胞凋亡率明显增加(P<0.05).结论:沉默Stat3能明显抑制卵巢癌细胞系OV2008的增殖,降低其侵袭运动能力,并诱导其凋亡,即沉默Stat3能降低卵巢癌细胞系OV2008的恶性表型,提示Stat3可作为卵巢癌基因治疗的一个新的分子靶点.     

恩度联合化疗对不同Stat6活化表型直结肠癌细胞的作用

目的研究恩度联合化疗对直结肠癌细胞的抑制作用,并进一步观察不同Stat6表型的直结肠癌细胞对恩度联合化疗药物敏感性的差异。方法采用MTT法检测不同浓度的恩度单药或联合5-Fu及奥沙利铂对2种不同Stat6活化表型的直结肠癌细胞(Caco-2和HT-29)的增殖抑制作用。用流式细胞仪检测不同药物处理组对2种直结肠癌细胞早期凋亡率的影响。结果恩度单药作用于Caco-2和HT-29细胞没有显示出明显的增殖抑制和凋亡促进的作用(P>0.05)。而恩度联合1种或2种化疗药物[(5-Fu)和奥沙利铂(OXP)]对这2种癌细胞的生长抑制和凋亡促进的能力明显升高(P<0.05和P<0.01)。恩度联合化疗药物对Caco-2细胞生长抑制率和早期凋亡率均高于HT-29细胞(P<0.05)。结论恩度联合化疗药物能更好的抑制直结肠癌细胞的增殖能力,不同Stat6活化状态可能成为评价化疗疗效的潜在指标之一。     

bcl-2、IL-6、IL-6R反义寡脱氧核苷酸对小细胞肺癌细胞作用的比较

目的:比较bcl-2、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-6受体(interleukin-6 receptor,IL-6R)反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(antisense phosphorothiate oligodeoxynucleotide, AS-PS-ODN)对小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞增殖及诱导凋亡的作用,初步探讨反义核苷酸技术治疗中靶基因的选择策略.方法:合成反义寡脱氧核苷酸bcl-2 AS-PS-ODN、IL-6 AS-PS-ODN、IL-6R AS-PS-ODN,分别作用于NCI-H446细胞株,通过细胞克隆形成实验检测细胞增殖活性的变化,细胞凋亡线粒体流式检测及DNA倍体分析检测细胞凋亡,半定量RT-PCR检测相关基因表达水平的变化.结果:(1)bcl-2 AS-PS-ODN、IL-6 AS-PS-ODN、IL-6R AS-PS-ODN均能够抑制肺癌细胞增殖活性和诱导细胞凋亡,其中以IL-6 AS-PS-ODN抑制作用最强, bcl-2 AS-PS-ODN次之, IL-6R AS-PS-ODN作用最弱.(2)3种反义寡脱氧核苷酸均能下调肺癌细胞相应基因的表达水平,其中以IL-6下调幅度最大,达(84.1±5.01)%; bcl-2和IL-6R基因下调幅度相近,分别为(62.6±3.42)%和(60.3±4.45)%.(3)反义核苷酸作用后除了引起自身基因表达下调外,还伴对其他基因表达的调节作用,如IL-6 AS-PS-ODN作用使bcl-2基因表达下调(32.2±0.20)%;而bcl-2 AS-PS-ODN作用使IL-6基因表达上调(74.3±4.13)%. 结论:IL-6 AS-PS-ODN较bcl-2 AS-PS-ODN和IL-6R AS-PS-ODN能更有效地诱导小细胞肺癌细胞凋亡,IL-6是NCI-H446小细胞肺癌反义核苷酸治疗较为合适的靶基因.     

基因芯片技术检测乳腺癌多柔比星耐药相关基因

目的:探讨基因表达谱差异与乳腺癌化疗耐药之间相关性.方法:选择人乳腺癌多柔比星耐药细胞株MCF-7/ADM与其亲本细胞株MCF-7为研究对象.应用MTT法检测并比较化疗药物ADM对乳腺癌细胞株的体外抑制率,应用含14755个基因的人cDNA芯片检测多柔比星耐药细胞株MCF-7/ADM与其亲本细胞株MCF-7基因表达谱的变化.结果:经MTT快速比色法检测,MCF-7/ADM较MCF-7对多柔比星耐药性明显增强,耐药指数为33.67.通过cDNA芯片检测两乳腺癌细胞株基因表达谱,得到了乳腺癌多柔比星耐药细胞株与其亲本细胞株差异表达的基因,并初步筛选出在两个细胞株中,明显差异表达的基因2374个,其中1099个基因在多柔比星耐药细胞株中上调,1275个基因下调.这些基因涉及细胞凋亡、细胞骨架及信号传导、细胞增殖、分化及周期调控、基因转录和翻译以及细胞物质与能量代谢等多方面.上调基因主要为Bcl-2、GSTP1、c-myc、MMP-1和NNMT等,下调的基因主要是p53、p21、p27Kip1和CYPIA1等.结论:乳腺癌耐药是一个极其复杂并且不断变化的过程.这个过程涉及多种途径、多个基因,基因芯片技术可为筛选化疗药物敏感性相关基因提供全面、可靠的技术支持.     

WT1基因异构体WTA对NB4细胞基因表达谱影响的研究

目的:探讨WT1基因异构体比例的改变对急性早幼粒细胞性白血病细胞株NB4基因表达谱的影响。方法:用电穿孔法将携带WT1基因异构体WTA(-17AA/-KTS)全长cDNA的重组真核表达载体及其对照质粒pCB6 转染入白血病细胞株NB4,建立WT1基因异构体表达比例改变的单克隆细胞株NB4/WTA。运用cDNA微阵列技术检测WT1基因异构体表达比例的转变对NB4细胞基因表达谱的影响。并用RTPCR方法验证cyclinA1及CDK7基因表达的改变。结果:转染WT1基因异构体WTA后,外源基因在mRNA及蛋白水平上稳定表达,NB4细胞中共89个细胞周期相关基因、细胞凋亡相关基因、癌基因以及细胞信号和传递蛋白等基因出现2倍以上表达水平的改变。RTPCR证实与细胞周期相关的cyclinA1基因表达上调,CDK7基因表达下调。结论:WT1基因异构体WTA表达比例增加能引起NB4细胞基因表达谱的改变,这些基因的改变可能对白血病细胞增殖、分化和凋亡等生物学行为产生影响。     

蛋白质精氨酸甲基转移酶2在乳腺癌细胞中的表达及其对SKBR-3细胞生长特性的影响

目的:探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)基因在多种乳腺癌细胞株中的表达情况,以及外源性PRMT2基因过表达对乳腺癌SKBR-3细胞生长特性的影响.方法:采用real-time RT-PCR法检测PRMT2基因在不同乳腺癌细胞株中的表达,并建立稳定表达pcDNA3.1/NT-GFP-PRMT2的SKBR-3细胞株;激光共聚焦显微镜下观察外源性PRMT2蛋白在细胞中的定位,检测在雌激素和雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂4-OHT作用下过表达PRMT2基因对SKBR-3细胞增殖的影响.结果:PRMT2基因在ERα阳性乳腺癌细胞株中表达水平明显高于ERα阴性乳腺癌细胞株;在转染PRMT2基因的SKBR-3细胞株中,雌激素反应元件-荧光素酶报告基因(estrogen response elements-luciferase reporter,ERE-luc)的转录活性明显升高.在无处理因子情况下,外源基因PRMT2在SKBR-3细胞中的表达对细胞的形态及生长速度无明显影响.与未转染及转染GFP空载体的SKBR-3细胞相比,稳定转染PRMT2基因的SKBR-3细胞对雌激素的敏感性明显下降,但其对4-OHT处理的敏感性降低无明显差异.结论:PRMT2基因表达的多少及部位与乳腺癌细胞中ERα的表达密切相关.外源性PRMT2基因在乳腺癌SKBR-3细胞中稳定表达使细胞对雌激素的敏感性降低,但不增加细胞对ER拮抗剂4-OHT的耐药性.     

p27kip1高表达乳腺癌细胞株MCF-7基因表达谱的差异分析

目的:利用基因芯片技术筛选p27kip1转染乳腺癌MCF-7细胞的差异表达基因,探讨p27kip1调控肿瘤细胞增殖和细胞周期的分子机制。方法:将含p27cDNA的质粒在脂质体介导下体外转染乳腺癌MCF-7细胞,利用Affy-metrix公司的人类基因组基因芯片U133A分别检测表达p27kip1蛋白和空载体的乳腺癌细胞株的基因表达谱,用生物信息学软件进行比较分析,对差异表达基因进行功能分类。结果:在含22277个基因cDNA的芯片上差异表达的基因有1379条,其中表达谱发生明显变化(2倍以上)的基因173条,占总检测基因的0·78%。157条基因表达明显上升(SLR>1),占总检测基因的0·705%;16条基因表达明显下降(SLR<-1),占总检测基因的0·072%。基因表达差异主要集中在物质代谢、细胞增殖、细胞周期调控、细胞分化与凋亡、免疫反应、信号传导、蛋白转运、调节转录等方面。结论:多基因共同参与了p27kip1抑制肿瘤细胞过度增殖以及促进细胞凋亡的作用。对于p27kip1相关基因群的研究有助于认识p27kip1蛋白在细胞周期调控乃至整个细胞癌变过程中作用的分子机制。     

宫颈鳞癌组织IL-6和Stat3蛋白表达及其与临床病理因素相关性的研究

目的:探讨IL-6和信号转导及转录活化因子3(Stat3)在宫颈鳞癌组织中的表达及其与浸润和转移的相关性。方法:用免疫组织化学SP法检测44例宫颈鳞状细胞癌(ICC)、50例宫颈上皮内瘤变(CIN)和15例正常宫颈组织(NCE)中IL-6和Stat3的表达。结果:IL-6在ICC中的阳性表达率为75.0%(33/44),显著高于CIN的54.0%(27/50)和NCE的6.7%(1/15),差异有统计学意义,χ2值分别为4.471和21.392,P值分别为0.034和0.000。在ICC组织中,IL-6阳性表达与组织学分级和淋巴结转移有关,χ2值分别为9.570和4.314,P值分别为0.007和0.037,而与年龄、临床分期、间质浸润和脉管浸润无关,P值均>0.05。Stat3在ICC组织中的阳性表达率为84.1%(37/44),显著高于CIN的46.0%(23/50)和NCE的13.3%(2/15),χ2值分别为14.708和24.995,P值均为0.000。在ICC组织中,Stat3表达与组织学分级有关,χ2=10.579,P=0.007,而与年龄、临床分期、淋巴结转移、间质浸润和脉管浸润无关,P值均>0.05。在ICC组织中,IL-6与Stat3蛋白的表达呈正相关,r=0.471,P=0.001。结论:IL-6和Stat3蛋白的过度表达在宫颈癌的发生、发展中发挥着一定作用。