寡核苷酸阻断ROCK-1蛋白对人卵巢癌细胞恶性行为的影响

目的通过反义寡核苷酸(ASODN)对ROCK-1的特异性阻断,探讨ROCK-1蛋白在卵巢癌转移中的作用。方法将ROCK-1反义寡核苷酸(ASODN)以脂质体介导,转染人卵巢癌细胞系SW626和Caov-3细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)与Western blot印迹法,检测转染前后ROCK-1蛋白的表达,Boyden小室观察ROCK-1 ASODN对SW626和Caov-3细胞侵袭及迁移能力的影响,采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)比色法,测定转染前后细胞增殖及黏附能力的变化。结果转染ROCK-1 ASODN后,2株细胞内ROCK-1蛋白的表达明显减少,最大抑制率可达49.0%;细胞的侵袭能力受到明显抑制,10μmol/L组和20μmol/L组SW626细胞的侵袭能力分别为对照组的75.6%±3.8%和54.7%±2.9%,Caov-3细胞为68.8%±4.7%和50.0%±4.5%;转染2种浓度ASODN的SW626和Caov-3细胞的随机运动能力分别为对照组的80.0%±1.3%、63.7%±1.9%、72.0%±1.3%和55.9%±2.5%;定向运动能力分别为对照组的83.9%±1.4%、64.1%±1.3%、72.5%±3.4%和54.5%±1.9%。转染后2株细胞的体外黏附能力和增殖能力,均未显示出明显的变化。结论ROCK-1蛋白的表达与人卵巢癌细胞的体外侵袭和迁移密切相关,阻断ROCK-1的表达,可有效地抑制卵巢癌肿瘤细胞的转移。     

RhoC表达与体外乳腺癌细胞系侵袭行为的相关性

目的研究RhoC在不同转移能力乳腺癌细胞系中的表达及其与乳腺癌侵袭行为的相关性。方法利用逆转录-聚合酶链反应、Western blot、细胞爬片免疫组织化学和免疫荧光组织化学染色检测乳腺癌低转移细胞系MCF-7和高转移细胞系MDA-MB-231中RhoC mRNA和蛋白表达水平。构建RhoC真核表达载体,并转染乳腺癌低转移细胞系MCF-7;利用Matrigel穿膜侵袭实验检测转染后细胞的体外侵袭能力,划痕修复实验检测运动迁移能力,组织化学染色检测微丝骨架结构的变化,并利用Western blot检测Akt磷酸化水平变化。结果RhoC在不同转移能力的乳腺癌细胞系中呈不同程度表达,在高转移细胞系MDA-MB-231中高表达,在低转移细胞系MCF-7中低表达,差异有统计学意义(P<0.01)。基因转染过表达RhoC后,乳腺癌细胞的体外侵袭能力明显增强,正义转染组穿膜细胞数(56.88±4.18)与其相应空载体组(23.77±3.64)、反义组(23.12±3.22)和未转染对照组(28.44±2.48)比较,明显增多(P<0.01);运动迁移能力明显增强,正义转染组24 h划痕修复率(58.28%±2.14%)明显高于转染空载体组(28.23%±2.62%)、反义组(22.36%±2.73%)和未转染对照组(30.18%±2.86%),差异有统计学意义(P<0.01);组织化学染色显示,正义转染组细胞内肌动蛋白多聚体减少,微丝骨架重构;此外,RhoC正义转染组细胞p-Akt水平升高。结论RhoC过表达促进乳腺癌细胞的体外侵袭能力,并与乳腺癌细胞系转移潜能正相关,有望成为阻断乳腺癌转移的新靶点。     

MT1-MMP反义核酸抑制高转移人卵巢癌SW626细胞的侵袭效应

背景与目的:MT1-MMP(MMP-14)是新发现的一种膜型基质金属蛋白酶,研究表明MT1-MMP在肿瘤转移中发挥关键性作用。本研究应用反义核酸技术,观察了MT1-MMP反义核酸对高转移人卵巢癌SW626细胞体外生长和侵袭的抑制效应。方法:应用自行设计的引物,借助RT-PCR技术获得两端含不同限制酶位点的MT1-MMPcDNA片段,反向插入pcDNA3.1中,并应用脂质体介导的基因转染技术,将重组质粒导入SW626细胞中,应用MTT、Westernblot、明胶酶谱和体外侵袭实验等方法观察了SW626细胞转染前后,细胞生长、MT1-MMP蛋白表达、MMP-2和MMP-9酶活性及细胞体外侵袭能力等指标的变化。结果:成功构建了反义MT1-MMP真核表达载体(pMMP14as),将其转染入SW626细胞后,与空质粒转染组相比,MT1-MMP反义核酸转染组细胞MT1-MMP表达显著降低,抑制率为65.8%;MMP-2酶原的活化受到明显抑制;pMMP14as转染组的穿膜细胞百分数为(63.3±5.8)%,明显低于空质粒转染组(97.6±7.5)(P<0.05)%。结论:MT1-MMP反义核酸可明显抑制高转移SW626细胞体外生长和侵袭效应,提示MT1-MMP可作为人卵巢癌抗侵袭治疗的分子靶点。     

畸胎瘤细胞源性生长因子反义核酸载体对高度恶性人卵巢癌细胞增殖和侵袭的抑制效应及相关机制

目的 观察畸胎瘤细胞源性生长因子(PCDGF)反义核酸载体对高度恶性人卵巢癌细胞株Sw626和A2780增殖和侵袭的抑制效应,并初步探讨其相关机制.方法 采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法和Boyden小窒体外侵袭实验,检测PCDGF反义RNA真核表达载体对Sw626和A2780细胞增殖和侵袭能力的影响.采用Western blot技术,检测转染PCDGF反义RNA真核表达载体前后Sw626细胞cyclin D1和CDK4蛋自表达的变化.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和明胶酶谱法,分析PCDGF反义RNA真核表达载体对Sw626细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达和活性的影响.结果 与空白对照组相比,PCDGF反义核酸载体转染组Sw626和A2780细胞的增殖抑制率分别为72.9%和70.9%,侵袭能力分别被抑制了62.9%和59.0%.转染组Sw626细胞cyclin D1和CDK4蛋白的表达水平分别为0.38±0.08和0.37±0.13,明显低于空白对照组(0.84±0.11和0.64±0.11,P<0.01).与空白对照组(0.89±0.09)相比,转染组Sw626细胞MMP-2 mRNA的表达水平(0.66±0.11)虽未见降低(P>0.05),但MMP-2酶原的活性被叨显抑制.结论 PCDGF反义核酸可显著抑制高度恶性人卵巢癌细胞株Sw626和A2780的增殖和侵袭能力,并逆转其部分恶性表型,这可能与其能下调cyclin D1和CDK4蛋白的表达并抑制MMP-2酶原的活性有关;PCDGF可以作为卵巢癌治疗的新靶点.     

Tiam 1反义寡核苷酸转染对胃癌细胞体内外侵袭转移能力的影响

背景与目的:作为细胞骨架结构调节因子,T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam 1)与胃肠道肿瘤侵袭转移密切相关。本研究应用反义寡核苷酸(ASODN)转染技术,特异抑制胃癌细胞中Tiam1表达,进而观察对胃癌细胞体内、外侵袭转移能力的影响。方法:采用层粘连蛋白黏附法,由胃癌MKN-45细胞株(M0)中筛选获得高侵袭转移亚株(MH)。以脂质体介导将Tiam 1 ASODN转染至MH细胞中,并应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及定量细胞ELISA技术分别检测Tiam 1 mRNA和蛋白的表达。应用Boyden小室及裸鼠接种法分别观察ASODN转染后MH细胞在体内、外侵袭转移能力方面的改变。结果:应用0.43μmol/L Tiam 1 ASODN转染能特异性抑制胃癌MH细胞中Tiam1 mRNA和蛋白表达(0.162±0.018,0.982±0.119),与脂质体转染组(0.789±0.054,1.237±0.108)、正义寡核苷酸(SODN)-脂质体转染组(0.754±0.039,1.234±0.103)、未转染组(0.801±0.065,1.290±0.182)相比,分别约为后三者的20.2%~21.5%、76.1%~79.6%(P<0.05)。ASODN转染组细胞的体外侵袭、移行能力(10±3、21±9)较SODN转染组(27±10、56±13)、未转染组(26±6、53±12)明显受抑制(P<0.05),同时ASODN转染组细胞在裸鼠体内的肺转移率(1/5=20%)也较SODN转染组(4/5=80%)、未转染组(4/5=80%)显著下降(P<0.05)。结论:特异性ASODN转染可有效抑制Tiam1在胃癌细胞中的表达并削弱其体内、外侵袭转移能力。     

RhoA、RhoC及其效应分子ROCK-1的表达与卵巢癌细胞系恶性行为相关性的体外研究

目的　研究RhoA、RhoC及其效应分子ROCK 1在卵巢癌细胞中的表达水平 ,探讨其与卵巢癌转移的相关性。方法　逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测RhoA、RhoC及ROCK 1在SW6 2 6、Skov 3、A2 780和Caov 34种卵巢癌细胞中mRNA的表达水平 ;Westernblot法检测RhoA和ROCK 1蛋白质的表达情况 ;Boyden小室体外侵袭试验测定 4种卵巢癌细胞的体外迁移与侵袭能力。结果　RhoA、RhoC和ROCK 1在 4种卵巢癌细胞中呈不同程度表达 ,其中仅RhoC的表达水平与癌细胞侵袭力和迁移能力呈正相关 (r=0 .95 ,P <0 .0 1)。RhoA在转录水平和蛋白水平中呈不同步变化 ,且RhoA和RhoC的表达与ROCK 1的表达无相关性。 4种卵巢癌细胞的体外侵袭和迁移能力相一致 ,其中SW6 2 6最强 ,Caov 3最弱 ,Skov 3和A2 780居中。结论　RhoC的表达与卵巢癌细胞的体外侵袭和迁移能力相关 ,可能作为一个独立因素在卵巢癌的转移过程中起作用 ,有望成为阻断卵巢癌转移的新靶点。     

上调Twist基因对人结肠癌SW480细胞增殖凋亡及侵袭能力的影响

目的:上调人结肠癌SW480细胞株中Twist基因的表达,观察其对细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法:将高表达Twist基因的质粒和空载质粒稳定转染SW480细胞,分别命名为转染组和对照组,MTT法、细胞划痕实验和Matrige1侵袭实验分别检测肿瘤细胞体外增殖、迁移及侵袭能力的变化。FCM检测细胞周期及凋亡情况。将肿瘤细胞接种至裸鼠皮下,对比转染前后肿瘤细胞的成瘤情况。结果:从第4天开始,转染组SW480细胞生长速度明显高于对照组(P<0.05):转染组SW480细胞的增殖指数(PI)和S期细胞比例[(61.279±1.709)%,(33.171±3.154)%]均高于对照组[(26.142±1.518)%,(14.112±2.137)%](P<0.05);转染组的细胞凋亡率(6.83I±1.624)%低于对照组(12.223±1.733)%(P<0.05);划痕24 h及48 h时后转染组细胞迁移率[(40.06±5.56)%,(75.77±8.06)%]均高于对照组[(25.25±2.65)%,(35.37±6.79)%](P<0.05);Matrige1侵袭实验结果显示转染组侵袭细胞个数明显高于对照组(p<0.05);将两组细胞分别接种裸鼠,16 d左右可见肿瘤结节,转染组肿瘤体积及瘤重均大于对照组(P<0.05)。结论:上调Twist基因可提高SW480细胞体外增殖、迁移和侵袭能力,降低SW480细胞凋亡率。     

层黏连蛋白受体反义核酸对卵巢癌细胞侵袭能力的影响

目的:研究67 kD层黏连蛋白受体(67kDLN-R)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)对卵巢癌细胞HRA体外侵袭转移能力的影响.方法:采用流式细胞仪、RT-PCR及Transwell小室的方法检测反义核酸对67 kD LN-R基因和蛋白表达影响,及转染前后细胞体外侵袭转移能力变化.结果:67 kD LN-R ASODN可从蛋白质和mRNA水平下调67kDLN-R的表达,且下调作用呈剂量依赖性.与正义组及对照组相比差异有显著性(P＜0.05).体外侵袭实验证实转染后HRA穿透人工基底膜的能力显著降低并呈现剂量依赖性.结论:67kDLN-R ASODN可降卵巢癌细胞体外侵袭转移能力,有望为卵巢癌治疗提供新方向.     

RNA干扰下调RhoA表达对卵巢癌细胞SKOV-3恶性表型的影响

目的:探讨RNA干扰(RNAi)下调RhoA表达对卵巢癌细胞SKOV-3恶性表型的影响.方法:构建RhoA基因特异性短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,以脂质体介导转染卵巢癌细胞SKOV-3,RT-PCR和蛋白质印迹法检测RNAi后SKOV-3中RhoA的mRNA及蛋白表达水平变化;Boyden小室体外侵袭和划痕实验观察细胞侵袭和迁移能力,MTT比色法测定转染前后细胞增殖及粘附能力的变化.结果:转染RhoA shRNA的实验组细胞与转染空载体的对照组细胞比较,RhoA mRNA的表达分别为(5.46±2.02)%和(56.37±17.42)%,蛋白质的表达分别为(6.03±2.04)%和(59.03±19.94)%,细胞平均侵袭百分比为(15.84±4.17)%和(33.64±4.64)%,愈合百分比为(44.79±6.21)%和(68.36±4.46)%,增殖能力(A值)分别为0.726±0.166和1.703±0.340,P<0.05(n=3);而粘附能力(A值)分别为0.833±0.137和0.894±0.189,P>0.05(n=3).结论:通过RNAi降低RhoA的表达能降低卵巢癌细胞SKOV-3体外侵袭、迁移和增殖能力.     

Tiam 1表达下调对胃癌细胞骨架及裸鼠体内成瘤转移影响的观察

目的:观察T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam 1)反义寡核苷酸(ASODN)转染对胃癌细胞骨架及裸鼠体内成瘤转移能力的影响。方法:采用层粘连蛋白黏附法,由胃癌MKN-45细胞株中筛选获得高侵袭转移亚株(MH)。以脂质体介导将Tiam1ASODN转染至MH细胞中,并应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及定量细胞ELISA技术分别检测Tiam 1 mRNA和蛋白的表达。采用细胞骨架蛋白染色及裸鼠接种法分别观察Tiam1ASODN转染后MH细胞在骨架结构和裸鼠体内成瘤转移能力方面的变化。结果:应用0.43μmol/LTiam 1 ASODN转染可特异性抑制胃癌MH细胞中Tiam 1 mRNA和蛋白表达(0.162±0.018,0.982±0.119),与脂质体转染组(0.789±0.054,1.237±0.108)、正义寡核苷酸(SODN)-脂质体转染组(0.754±0.039,1.234±0.103)、未转染组(0.801±0.065,1.290±0.182)相比,分别为后3者的20.2%～21.5%、76.1%～79.6%(P=0.000、0.037)。同时ASODN转染组细胞在裸鼠体内的肺转移率25%(2/8)也较未转染组88%(7/8)、正义寡核苷酸组75%(6/8)显著下降(P=0.039),且其胞膜表面突起及伪足变稀疏或缩短、骨架结构紊乱程度减轻。结论:特异性ASODN转染可有效抑制Tiam 1在胃癌细胞中的表达并削弱其体内侵袭转移能力,这可能是通过调整胃癌细胞骨架结构重组,降低其变形、游走能力而实现的。     

环氧化酶2启动子调控促凋亡基因BAX在卵巢癌细胞系的特异性高表达

目的:验证环氧化酶-2(COX-2)启动子能调控下游基因特异性在COX-2阳性的卵巢癌细胞系高表达;并以CMV启动子为对照,分析COX-2启动子的转录效率.方法:构建重组质粒COX-2-BAX和CMV-Luc.脂质体介导分别把质粒phPES2,CMV-Luc瞬时转染COX-2阳性的卵巢癌细胞系SKOV-3和COX-2阴性的结肠癌细胞系SW480,检测荧光素酶报告基因的表达情况.同法把质粒COX-2-BAX、pcDNA3-BAX转染SKOV-3和SW480,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:成功构建重组质粒COX-2-BAX和CMV-Luc.COX-2-Luc转染SKOV3和SW480细胞24 h后报告基因活性分别为1554±86.5和53.7±10.9.CMV-Luc财法转染后,报告基因活性分别为9851.7±129.5和8831.0±167.3.COX-2-BAX转染SKOV-3和SW480细胞36 h后细胞凋亡率分别为10.4%,3.7%;CMV-BAX同法转染后,细胞凋亡率分别为21.7%,25.6%.结论:COX-2启动子可调控下游基因特异性地在COX-2阳性的卵巢癌细胞系中高表达,但转录效率明显低于CMV启动子.含COX-2启动子经合理修饰后可用于卵巢癌的基因治疗.     

卵巢癌细胞PCDGF的表达与意义

目的研究人卵巢癌细胞PCDGF的表达,探讨其与卵巢癌恶性表型的关系.方法应用半定量RT-PCR和Western blot分别检测3株卵巢癌细胞中PCDGF mRNA和蛋白表达水平.单层细胞增殖实验测定3株卵巢癌细胞的增殖能力;Boyden小室体外侵袭实验测定不同细胞株的侵袭能力.结果 3株卵巢癌细胞PCDGF转录和翻译水平呈同步变化(P<0.05),均为SW626最高,A2780稍低,Skov-3最低.而其增殖、侵袭能力亦为SW626最强, A2780次之, Skov-3最弱.结论 3株卵巢癌细胞PCDGF mRNA和蛋白表达水平与其增殖、侵袭能力呈正相关(前者r1=0.97, r2=0.89,后者r1=0.85,r2=0.84),提示PCDGF在卵巢癌发生演进中可能作为独立因素起多种作用,有望成为治疗的新靶点.     

Survivin反义寡核苷酸对卵巢癌细胞株凋亡和侵袭、迁移的影响

目的:观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡和侵袭、迁移的影响,探讨其作用的分子机制和临床价值。方法:用脂质体LipofectamineTM2000介导ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力的改变,流式细胞学技术检测细胞凋亡指数及survivin、Smac、VEGF蛋白表达改变,逆转录酶链反应(RT-PCR)检测survivin、Smac/DIABLO、VEGF基因表达改变。结果:脂质体LipofectamineTM2000介导ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,FCM及共聚焦显微镜(SLM510)检测结果显示转染率>95%。用600 nmol/L ASODN转染48 h后,细胞迁移和侵袭能力下降(t=3.47,P<0.05;t=5.72,P<0.01)。细胞凋亡指数(AI)明显增加(t=6.37,P<0.05)。Survivin mRNA和蛋白表达明显下调(t=3.50,P<0.05;t=7.81,P<0.01),Smac mRNA和蛋白表达上调(t=-2.80,P<0.05;t=11.39,P<0.01),VEGF mRNA和蛋白表达明显下调(t=2.54,P<0.05;t=33.84,P<0.01)。结论:ASODN可诱导卵巢癌细胞凋亡,降低卵巢癌细胞侵袭和迁移能力。这些作用是通过下调survivin、VEGF基因,上调Smac基因表达来共同完成的,他们之间的相互作用可能是卵巢癌发生、发展和转移的重要分子机制,survivin可能在其中起关键性作用。针对survivin的基因治疗将成为卵巢癌治疗的重要手段,有重要的临床价值。     

沉默Stat3对卵巢癌细胞系OV2008恶性表型的影响

目的:探讨沉默信号转导和转录活化因子(Stat3)对卵巢癌细胞系OV2008恶性表型的影响.方法:腺病毒M4感染卵巢癌细胞系OV2008后,利用RT-PCR法检测Stat3 mRNA的表达水平;Western blot法检测Stat3蛋白的表达水平;MTT法检测沉默Stat3对OV2008细胞的增殖抑制的影响;Transwell小室法检测沉默Stat3对OV2008细胞的侵袭运动能力的影响;流式细胞术检测沉默Stat3对OV2008细胞的凋亡的影响.结果:RT-PCR以及Western blot结果显示,腺病毒M4感染卵巢癌细胞系OV2008后,OV2008细胞中的Stat3 mRNA以及Stat3蛋白的表达水平均明显降低;MTT结果显示,沉默Stat3表达后的OV2008细胞与空白对照组以及Ad5/dE1A病毒对照组的细胞相比,增殖能力明显减弱(P<0.05);Transwell小室法结果显示,沉默Stat3后的OV2008细胞12.64±7.10与空白对照组127.70±8.28以及Ad5/dE1A病毒对照组137.80±9.78相比,侵袭运动能力明显减弱(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,沉默Stat3表达后的OV2008细胞65.51±5.78与空白对照组10.73±4.28以及Ad5/dE1A病毒对照组12.17±3.87相比,细胞凋亡率明显增加(P<0.05).结论:沉默Stat3能明显抑制卵巢癌细胞系OV2008的增殖,降低其侵袭运动能力,并诱导其凋亡,即沉默Stat3能降低卵巢癌细胞系OV2008的恶性表型,提示Stat3可作为卵巢癌基因治疗的一个新的分子靶点.     

妇科

卵巢癌抗独特型微抗体疫苗诱导BALB／C小鼠体内抗肿瘤免疫应答的实验研究//Survivin反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞SKOV3的抑制作用//RhoA、RhoC及其效应分子ROCK-1的表达与卵巢癌细胞系恶性行为相关性的体外研究//封闭ERCC1基因表达对卵巢癌细胞耐药的影响//卵巢上皮性癌组织中环氧合酶2的表达与治疗反应和预后的相关性研究     

靶向RhoA shRNA对卵巢癌HO8910细胞体外侵袭能力影响的研究

目的:观察RNA干扰(RNAi)技术对卵巢上皮癌HO8910细胞株RhoA基因表达的抑制作用,探讨其对HO8910细胞侵袭、迁移的影响。方法:构建RhoA基因特异性短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,以脂质体介导转染卵巢癌细胞HO8910,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测RNAi后HO8910中RhoA的mRNA及蛋白表达水平变化,Transwell小室体外侵袭和划痕试验检测细胞侵袭和迁移能力。结果:转染RhoA shRNA(质粒1、2和3)组的RhoA mRNA的表达明显弱于未转染任何质粒的空白组和对照组,P<0.05,且质粒2组表达最低(27.9%),抑制效率最高(72.1%),具有序列特异性。转染序列特异性RhoA shRNA的细胞(实验组)与对照组比较,RhoA蛋白的表达分别为(6.08±2.24)%和(59.25±17.96)%,P<0.05;细胞平均侵袭能力测值为18.82±2.61和35.25±5.12,P<0.05;愈合百分比为(43.80±6.21)%和(69.35±4.42)%,P<0.05。结论:靶向RhoA的shRNA可抑制卵巢癌HO8910细胞RhoA基因的表达,能降低细胞体外侵袭和迁移能力。     

NDRG2基因对结肠癌细胞SW620增殖和侵袭力的影响

目的 观察N-myc下游调节基因2(NDRG2)对结肠癌细胞SW620生长和侵袭能力的影响,并探讨其机制.方法 采用阳离子脂质体转染方法,分别将pcDNA3.1-NDRG2和siRNA-NDRG2转染入SW620细胞内,以空白组作为对照.Western blotting检测各组细胞NDRG2以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达情况;细胞侵袭试验对各组细胞侵袭能力进行分析;四甲基偶氮唑蓝法对各组细胞生长曲线进行测定.结果 pcDNA3.1-NDRG2转染入SW620细胞后,NDRG2蛋白表达升高,而MMP-2蛋白表达降低;siRNA-NDRG2转染入SW620细胞后,NDRG2蛋白表达降低,而MMP-2蛋白表达升高.pcDNA3.1组的穿膜细胞数(56.20±7.40)及siRNA组穿膜细胞数(94.20 ±9.23)分别与对照组(75.80 ±4.82)相比,差异具有统计学意义(t=13.102,P=0.000;t=11.820,P=0.000).生长曲线显示,转染后第5天,pcDNA3.1组细胞吸光度值(0.46 ±0.01)及siRNA组细胞吸光度值(0.91 ±0.02)分别与对照组(0.67 ±0.01)相比,差异具有统计学意义(t=9.561,P=0.000;t=10.922,P=0.000).结论 NDRG2能降低结肠癌细胞SW620的侵袭和增殖能力,其机制可能与下调MMP-2的表达有关.     

CD44v3短发夹RNA对透明质酸诱导人结肠癌SW480细胞体外粘附和侵袭的抑制作用

目的:研究CD44v3的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对体外培养的人结肠癌SW480细胞CD44v3表达及透明质酸诱导的粘附侵袭行为的抑制作用。方法:设计和构建带有U6启动子的CD44v3基因特异性的shRNA干扰表达质粒,转染至SW480细胞,以RT-PCR和Western blot检测SW480细胞转染前后CD44v3表达,以平板粘附模型和Boyden小室模型检测SW480细胞转染前后粘附和侵袭能力。结果:和转染前相比,转染了RNA干扰表达质粒的SW480细胞CD44v3mRNA和蛋白表达、以及受透明质酸诱导而粘附于平板和穿过Boyden小室隔膜的细胞数皆显著减少(P<0.01)。结论:针对CD44v3的短发夹RNA能显著抑制透明质酸诱导人结肠癌SW480细胞体外粘附和侵袭行为。