FOXJ1调控AKT信号通路对结直肠癌细胞凋亡和侵袭能力的影响

目的 探讨叉头框转录因子J1(FOXJ1)对人结直肠癌细胞凋亡和侵袭能力的影响及机制.方法 应用Western Blot方法检测人结直肠癌细胞HCT116、HT29、SW480及人正常肠上皮细胞FHC中FOXJ1的表达水平.细胞中转染pEGFP-N1-FOXJ1和pEGFP-N1,Western Blot检测细胞中FOXJ1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)的表达水平,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Transwell小室检测细胞的侵袭能力.结果 人结直肠癌细胞HCT116、HT29、SW480中FOXJ1的表达水平均明显低于人正常肠上皮细胞FHC(P﹤0.01).人结直肠癌细胞HCT116中FOXJ1的表达水平下降最多,后续选用HCT116细胞继续研究.转染pEGFP-N1后的细胞凋亡率、侵袭细胞数目及细胞中FOXJ1、Cleaved Caspase-3、MMP-2、AKT、p-AKT的表达水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05).转染pEGFP-N1-FOXJ1后的细胞凋亡率及细胞中FOXJ1、Cleaved Caspase-3的表达水平明显高于对照组(P﹤0.01);转染pEGFP-N1-FOXJ1后的侵袭细胞数目及细胞中MMP-2、p-AKT的表达水平明显低于对照组(P﹤0.01).结论 FOXJ1在人结直肠癌细胞中过表达.FOXJ1能够促进结直肠癌细胞凋亡,抑制结直肠癌细胞侵袭,其作用机制可能与AKT信号通路有关.     

EBV-LMP1上调Ezrin表达对鼻咽癌细胞转移潜能的影响

背景与目的:细胞骨架相关蛋白Ezrin的异常表达与肿瘤侵袭转移密切相关,既往研究已证实EB病毒潜伏膜蛋白1(Epstein-Barr virus latent membrane protein1,EBV-LMP1)可促进鼻咽癌细胞的转移能力。本研究旨在进一步探讨EBV-LMP1是否通过改变Ezrin的表达来影响鼻咽癌细胞的转移能力。方法:采用免疫细胞化学和Western blot检测两种鼻咽癌细胞株-CNE1细胞(EBV阴性)和CNE1-GL细胞(稳定转染EBV-LMP1)中LMP1和Ezrin的表达;细胞-基质粘附实验检测CNE1、CNE1-GL和经Ezrin抗体预处理的CNE1-GL细胞(AntiEzrin-CNE1-GL)对细胞外基质的粘附力;Transwell小室法检测上述3种细胞的运动和对重组基底膜侵袭能力。结果:CNE1细胞中Ezrin阴性表达,而CNE1-GL细胞中Ezrin强阳性表达。CNE1-GL细胞对细胞外基质的粘附率[(89.38±6.12)%]强于CNE1细胞[(49.42±5.37)%](P<0.001),而AntiEzrin-CNE1-GL细胞对基质的粘附率[(56.94±4.08)%]明显下降,与CNE1-GL相比,差异有统计学意义(P<0.05)。运动实验和侵袭实验均提示CNE1-GL细胞运动、侵袭能力(107±11和179±25)强于CNE1细胞(27±3和46±6),差异均有统计学意义(P<0.001),而AntiEzrin-CNE1-GL细胞的运动、侵袭能力(38±4和51±5)较CNE1-GL细胞显均显著下降(P<0.001)。结论:CNE1细胞中EBV-LMP1可通过上调Ezrin表达来促进细胞转移。     

KiSS-1抑制骨肉瘤MG63细胞的侵袭和迁移

摘 要　目的：探讨人肿瘤转移抑制基因KiSS-1对人骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移能力的影响。方法:构建KiSS-1表达质粒pSNAV2.0-KiSS-1。pSNAV2.0-KiSS-1质粒转染骨肉瘤MG63细胞,经G418筛选稳定表达KiSS-1基因的MG63细胞。应用real-time PCR、Western blotting检测KiSS-1 mRNA和蛋白的表达。Transwell小室法检测MG63细胞的侵袭力,millicell小室、细胞划痕愈合实验检测KiSS-1基因对MG63细胞迁移能力的影响。结果:成功建立pSNAV2.0-KiSS-1质粒并稳定转染MG63细胞（MG63-KiSS-1细胞）,MG63-KiSS-1细胞高表达KiSS-1 mRNA和蛋白。转染KiSS-1质粒后的MG63细胞侵袭力显著降低（P<0.05）;millicell法、细胞划痕愈合实验证实转染KiSS-1质粒后的MG63细胞迁移力也明显降低（P<0.05）。结论:KiSS-1基因能显著抑制人骨肉瘤MG63细胞的侵袭和迁移能力,在骨肉瘤的转移中起重要作用。     

人口腔上皮样癌KB细胞及其SP细胞在NOD/SCID小鼠皮下成瘤性的研究

目的:研究KB细胞及其SP细胞在NOD/SCID小鼠中的生长.方法:用流式细胞仪分离SP细胞,分别用KB细胞和分离出的SP细胞种植NOD/SCID小鼠皮下,观察移植瘤的生长.结果:注射1×106、1×107个KB细胞的鼠产生移植瘤,注射1×104 、1×105个KB细胞的鼠均未产生移植瘤.注射1×105个SP细胞的鼠产生移植瘤,注射1×102、1×103、1×104个SP细胞的鼠均未产生移植瘤.结论:SP细胞产生移植瘤的能力比KB细胞强.移植瘤组织病理特点与人口腔粘膜癌基本一致.     

沉默GCB型弥漫大B细胞淋巴瘤细胞中AFAP1-AS1的表达对细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨沉默GCB弥漫型大B细胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma,DLBCL）中AFAP1-AS1的表达对细胞增殖和凋亡的影响。方法:培养GCB-DLBCL细胞至对数生长期后转染OCI-Ly1细胞系，建立的GCB-DLBCL细胞系对AFAP1-AS1表达进行沉默；实验设立3组，实验组为腺病毒感染细胞，sh-NC无关序列腺病毒感染细胞组为无关序列对照组，未感染腺病毒细胞组为空白组，应用PCR法检测AFAP1-AS1表达水平、CCK-8法测定细胞增殖情况、流式细胞术检测细胞凋亡情况，对比检测结果。结果:AFAP1-AS1表达水平检测结果显示:三种shRNA序列干扰效率均较无关序列对照组（sh-NC）强，差异有统计学意义（P＜0.05）；采用CCK-8法检测各组细胞凋亡情况，结果显示:经腺病毒sh3-AFAP1-AS1感染后，OCI-Ly1细胞系中实验组细胞吸光度较无关序列对照组和空白组显著降低，下调AFAP1-AS1可抑制GCB-DLBCL细胞的增殖（P＜0.05）；采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况，结果显示:经sh3-AFAP1-AS1和sh-NC转染后，OCI-Ly1细胞实验组凋亡率明显高于无关序列对照组和空白组，下调AFAP1-AS1可诱导GCB-DLBCL细胞凋亡（P＜0.05）。结论:沉默GCB-DLBCL细胞中的AFAP1-AS1表达能有效抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，或可作为GCB-DLBCL治疗的靶目标。     

同种异体NK细胞KIR2DL1表达差异对其杀伤KG1A细胞活性的影响

目的:研究同种异体自然杀伤(natural killer,NK)细胞对人急性髓系白血病细胞株KG1A的杀伤率,探讨供者NK细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL1(killer immunoglobulin-like receptor 2DL1,KIR2DL1)表达差异对NK细胞杀伤KG1A细胞活性的影响。方法:自9名健康志愿供者分离外周血NK细胞,流式细胞术检测NK细胞表面KIR2DL1的表达率,LDH释放法测定NK细胞在效靶比为20∶1时对KG1A细胞的杀伤活性。结果:NK细胞表面KIR2DL1的表达率存在个体差异,9名供者的表达范围为(33.20±1.95)%～(92.69±1.47)%;9名健康供者NK细胞对KG1A细胞的杀伤活性不同,杀伤率范围为(44.40±1.97)%～(93.70±1.12)%。不同个体NK细胞KIR2DL1表达率与其对KG1A细胞的杀伤率呈负相关(r=-1.00,P=0.00)。结论:不同个体NK细胞其表面KIR2DL1表达率与NK细胞对KG1A细胞的杀伤率呈负相关。     

川芎嗪对PG干细胞样细胞VEGF、HIF-1α蛋白表达的影响

[目的]研究活血药川芎有效成分川芎嗪对高转移性人巨细胞肺癌细胞PG-BE1干细胞样细胞VEGF、HIF-1α蛋白表达的影响。[方法]利用无血清成球培养法分选PG-BE1中的干细胞亚群并验证其干性。用含不同浓度川芎嗪的培养液干预PG-BE1干细胞样细胞,同时设立空白对照组及顺铂(DDP)组,采用ELISA法检测PG-BE1亲代细胞、干细胞样细胞(常氧环境和低氧环境)以及不同浓度药物干预后的PG-BE1干细胞样细胞的VEGF表达,采用Wester blot法检测各组HIF-1α蛋白表达。[结果 ]PG-BE1干细胞样细胞VEGF表达强于其亲代细胞(P<0.001),VEGF在低氧环境中的表达高于常氧环境(P<0.001),不同浓度川芎嗪均可下调VEGF表达(P<0.001),且具有剂量依赖性;PG-BE1干细胞样细胞HIF-1α表达强于其亲代细胞(P<0.001),HIF-1α在低氧环境中的表达高于常氧环境(P=0.001),不同浓度川芎嗪均可下调HIF-1α表达(P<0.001),但不同剂量之间差异无统计学意义(P=0.477)。[结论]PGBE1干细胞样细胞VEGF、HIF-1α表达高于其亲代细胞,低氧环境下VEGF、HIF-1α表达上调,川芎嗪对VEGF、HIF-1α表达有一定的抑制作用。     

TFPI-2基因对Panc-1细胞凋亡的影响

[目的]研究TFPI-2基因对胰腺癌细胞系Panc-1细胞增殖及凋亡的影响。[方法]测定Panc-1-TFPI-2、Panc-1-V和Panc-1-P三组细胞的生长曲线．DNA片段化实验检测细胞凋亡，并用流式细胞仪分析三组细胞的细胞增殖、细胞周期情况。[结果]Panc-1-TFPI-2细胞同Panc-1-V和Panc-1-P细胞相比，细胞生长缓慢，细胞生长受到抑制，被阻滞于G0～G1期；DNA片段化实验显示Panc-1-TFPI-2细胞呈现凋亡细胞特有的“梯状”条带．而Panc-1-V和Panc-1-P细胞无明显“梯状”条带：流式细胞仪分析显示早期Panc-1-TFPI-2细胞凋亡率（6．93％± 0．53％）较Panc-1-V（3．01％± 0．39％）和Panc-1-P细胞凋亡率（3．52％±0．41％）增加，有显著性差异（P〈0．05）。[结论]TFPI-2能够抑制胰腺癌细胞生长、诱导胰腺癌细胞凋亡．可能具有抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

HIF-1α靶向SP1促进食管鳞状细胞癌转移及血管生成的机制研究

目的:探究HIF-1α对食管鳞状细胞癌转移及血管生成的作用及其可能的机制。方法:RT-PCR检测细胞HIF-1α和SP1 mRNA表达;Western blot检测细胞HIF-1α和SP1蛋白表达;CCK-8检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;体外血管生成实验检测人脐静脉血管内皮细胞HUVEC血管形成能力;ChIP-PCR实验检测HIF-1α和SP1启动子的结合。结果:与人食管上皮细胞HEEC相比,在食管鳞状细胞癌细胞Ec109、KYSE30、KYSE150和KYSE410中HIF-1α和SP1 mRNA和蛋白表达显著上调（P＜0.05）,其中Ec109细胞变化最为明显。与sh-NC组相比,sh-HIF-1α组Ec109细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著下调（P＜0.05）;与oe-NC组相比,oe-HIF-1α组Ec109细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著上调（P＜0.05）。HIF-1α靶向结合SP1启动子区。与sh-NC组相比,sh-HIF-1α组Ec109细胞SP1 mRNA和蛋白表达、细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著下调（P＜0.05）;与sh-HIF-1α+oe-NC组相比,sh-HIF-1α+oe-SP1组Ec109细胞SP1 mRNA和蛋白表达、细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著上调（P＜0.05）。结论:HIF-1α通过靶向SP1促进食管鳞状细胞癌转移及血管生成。     

沉默TUG1对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡、侵袭的影响

目的:研究长非编码RNA牛磺酸上调基因1(Taurine-upregulated gene 1,TUG1)对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡、侵袭的影响.方法:通过RNA干涉技术沉默Hela细胞中TUG1的表达,通过荧光实时定量PCR(RT-QPCR)检测Hela细胞中TUG1的沉默效果;MTT法检测沉默TUG1对Hela细胞增殖的影响,流式细胞术检测TUG1对Hela细胞凋亡的影响,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.结果:TUG1-siRNA可有效沉默TUG1在Hela细胞的表达,沉默Hela细胞中TUG1的表达可以明显抑制Hela细胞的增殖及侵袭能力,而促进Hela细胞的凋亡能力.结论:TUG1在宫颈癌的进展及转移中发挥着重要作用.