雄性大鼠去势后基底前脑NOS及Nestin阳性神经元的变化

目的　探讨睾丸源性雄激素对基底前脑一氧化氮合酶 (NOS)及巢蛋白 (Nestin)阳性神经元的影响 ,为阐明基底前脑的功能提供资料。方法　将 16只成年健康雄性SD大鼠随机分为去势组和对照组 ,2周后用组织化学及免疫组织化学染色方法观察基底前脑的内侧隔核 (MS)、斜角带垂直支 (vDB)及水平支 (hDB)的NOS和Nestin阳性神经元的形态和数目变化。结果　与对照组相比较 ,去势组大鼠MS、vDB的NOS阳性神经元数分别明显升高了 37 2 %和 2 9 1% (P <0 0 5 ) ;而且去势组大鼠MS、vDB的Nestin阳性神经元数升高更明显 ,分别达 6 8 2 %和 5 6 9% (P <0 0 5 ) ,但去势组大鼠hDB的NOS和Nestin阳性神经元数均升高不明显 (P >0 0 5 )。去势组与对照组大鼠的NOS和Nestin阳性神经元的形态均相似。结论　雄性大鼠去势后可选择性地使基底前脑各亚区的NOS、Nestin阳性神经元数升高 ,但不影响神经元的形态 ,这可能与神经元的表达摆脱了睾丸源性雄激素的抑制作用有关。     

雄激素替代对去睾丸大鼠基底前脑NOS及Nestin阳性神经元的影响

目的　观察雄激素替代对去睾丸大鼠基底前脑一氧化氮合酶 (NOS)及巢蛋白 (Nestin)阳性神经元的影响。方法　将 2 8只健康成年雄性SD大鼠随机分为 4组 :去势 2 4h雄激素替代组、去势 2w雄激素替代组、去势 2 4h芝麻油替代组及假手术组。用组织化学及免疫组织化学染色方法观察基底前脑NOS和Nestin阳性神经元变化。结果　去势芝麻油替代组内侧隔核 (MS)、斜角带垂直支 (vDB)NOS阳性神经元数明显多于假手术组 (P <0 .0 5 ) ;去势 2 4h或 2w行雄激素替代MS和vDBNOS阳性神经元数少于假手术组水平 (P <0 .0 5、P <0 .0 1) ,但去势芝麻油替代或雄激素替代对斜角带水平支 (hDB)的NOS阳性神经元数影响不大 (P >0 .0 5 )。去势芝麻油替代或雄激素替代 ,Nestin阳性神经数的变化趋势与NOS阳性神经元的相似。结论　去睾丸行雄激素替代 ,可选择性地使基底前脑的NOS、Nestin阳性神经元数明显下降 ,但与替代的时程关系不大 ,提示雄激素可能通过其受体下调NOS和Nestin的表达。     

成年大鼠基底前脑nestin阳性神经元的性别差异

为了探讨成年雌雄大鼠基底前脑nestin阳性神经元的性别差异及其意义,本实验应用免疫组织化学方法对正常成年雌雄SD大鼠及去势2周和4周的雌雄SD大鼠基底前脑的内侧隔核(MS)、斜角带垂直支(vDB)及斜角带水平支(hDB)的nestin阳性神经元的变化进行了比较研究。结果显示正常雌雄大鼠MS、vDB及hDB的nestin阳性神经元数十分接近(P>0.05);而去睾丸2周大鼠组MS、vDB、hDB的nestin阳性神经元数则明显高于去卵巢2周大鼠组(P<0.05,P<0.01);去睾丸4周大鼠组vDB、hDB的nestin阳性神经元数依然明显高于去卵巢4周大鼠组(P<0.05),但两组MS间的nestin阳性神经元数差别不大(P>0.05);各组大鼠的nestin阳性神经元的胞体和树突均相似。以上结果表明,正常成年雌雄大鼠基底前脑的nestin阳性神经元数不存在性别差异,无论去势与否,nestin阳性神经元的形态始终不存在性别差异;而去势后nestin阳性神经元数却存在着明显的性别差异。提示基底前脑nestin阳性神经元的性别差异不仅与雌激素和雄激素在雌雄个体中所发挥的不同作用密切相关,而且还可能是促使学习记忆出现性别差异的形态学基础。     

Nestin在成年大鼠基底前脑表达的鉴定

目的鉴定巢蛋白(Nestin)在成年大鼠基底前脑的表达。方法应用小鼠抗大鼠Nestin单克隆抗体(Rat401)对成年大鼠基底前脑进行了免疫组织化学研究和Westen-blot检测。结果Nestin免疫反应阳性神经元广泛分布于成年大鼠基底前脑的隔-斜角带(MS-DBB)复合体,基底前脑MS-DBB复合体的内侧隔核(MS)、斜角带垂直支(vDB)和斜角带水平支(hDB)分别有一相对分子质量约为240000的单一蛋白带。结论成年大鼠基底前脑MS、vDB和hDB均存在Nestin表达。     

大鼠基底前脑Nestin-IR神经元的纤维投射

目的观察大鼠基底前脑巢蛋白(Nestin)免疫反应阳性神经元的纤维投射。方法采用荧光素逆行追踪技术显示基底前脑投射至海马和额皮质的荧光素标记神经元,结合Nestin免疫组织化学染色,计算荧光素和Nestin双标细胞分别占荧光素标记神经元和Nestin免疫反应阳性(Nestin-IR)神经元的比例。结果荧光素注射至海马后,双标细胞在同侧内侧隔核(MS)、斜角带垂直支(vDB)和斜角带水平支(hDB)占Nestin阳性神经元的比例分别为28.5%、19.6%和18.1%;占荧光素标记神经元的比例分别为25.3%、29%和23.8%,并且,在注射点的对侧也发现有双标细胞存在。荧光素注射至额皮质后,双标细胞在同侧MS、vDB和hDB占Nestin阳性神经元的比例分别为16.6%、8.7%和9.3%;占荧光素标记神经元的比例分别为11.3%、3.5%和5.6%,注射点对侧未发现有双标细胞存在。结论大鼠基底前脑的Nestin-IR神经元发出纤维投射至海马和额皮质,Nestin-IR神经元至海马为双侧投射,而至额皮质为单侧投射。     

康复新对去卵巢大鼠学习记忆能力和基底前脑胆碱能神经元的影响

目的 探讨康复新对去卵巢大鼠的学习记忆能力的影响及其可能机制.方法 3月龄健康雌性SD大鼠36只,随机分成4组,即假手术组、去卵巢对照组、康复新低剂量组和康复新高剂量组,分别进行干预.8周后用Y迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力,用免疫组化染色检测大鼠基底前脑不同区域胆碱能神经元的数目.结果 康复新高剂量组大鼠"学会"所需总训练次数、训练错误次数及记忆检测时错误反应次数与去卵巢对照组比较明显减少(P＜0.05),与假手术组相比差异无统计学意义(P＞0.05);康复新液高、低剂量组大鼠基底前脑内侧隔核(MS)、斜角带核垂直支(vDB)和水平支(hDB)的ChAT阳性神经元数量增多;高剂量组基底前脑各区的ChAT阳性神经元数明显高于去卵巢对照组(P＜0.05),与假手术组相比差异无统计学意义(P＞0.05);而且康复新高剂量组大鼠vDB和hDB的ChAT阳性神经元数明显高于康复新低剂量组(P＜0.05).结论 康复新液可显著改善去卵巢大鼠学习记忆能力,其作用可能是通过增加基底前脑胆碱能神经元的功能实现的;康复新液有望成为防治雌激素撤退引起的神经功能障碍的药物.     

去卵巢后大鼠基底前脑NOS阳性神经元的变化及雌激素的作用

目的　研究基底前脑NOS阳性神经元在大鼠去卵巢之后的时程变化 ,为雌激素类药物替代防治绝经后老年性痴呆提供理论依据。方法　将 6 9只 3月龄雌性大鼠随机分为假手术组、去卵巢对照组及雌激素替代治疗组 ,各 2 3只 ,分别在术后 3d、1周、2周、4周、8周处死 ,脑切片用NADPH d组化方法染色 ,观察并和计数基底前脑各区NOS阳性神经元 ,并进行统计分析。结果　各组大鼠基底前脑各区NOS阳性神经元数目在去卵巢后先上升 ,2周时达到高峰 ,以后假手术组及雌激素替代组NOS阳性神经元数目逐渐下降 ,8周时达正常水平。去卵巢对照组斜角带核水平支及垂直支NOS阳性神经元数目却保持较高水平 ,在 8周时与假手术组及雌激素替代治疗组之间差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　去卵巢后基底前脑NOS阳性神经元表达增加 ,而雌激素替代治疗对其有保护作用。     

成年大鼠基底前脑隔-斜角带复合体的巢蛋白免疫阳性神经元至海马的纤维投射

目的 观察大鼠基底前脑巢蛋白(nestin)免疫阳性神经元的纤维投射。方法 先用荧光素逆行追踪法显示基底前脑内投射至海马的荧光素标记神经元，观察摄片后再进行nestin免疫组织化学染色。对比荧光照片和免疫组织化学染色照片，辨认荧光素和nestin双标神经元。结果 在基底前脑注射侧的内侧隔核(MS)和斜角带核的垂直支(vDB)和水平支(hDB)均存在荧光素标记细胞，其中一部分为nestin免疫阳性。在MS、vDB和hDB，双标细胞占逆行标记细胞的比例分别为21．3％、25％和20．6％；占nestin阳性细胞的比例分别为26．6％、15．7％和16．3％。结论 大鼠基底前脑的nestin免疫阳性神经元发出神经纤维向海马投射。提示在基底前脑有一个平行于隔-海马胆碱能投射和GABA能投射的第3条通路。     

神经干细胞与脑源性神经营养因子联合治疗对老年性痴呆鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元的影响

目的探讨神经干细胞（NSCs）与脑源性神经营养因子（BDNF）联合应用对老年性痴呆鼠基底前脑一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元的影响.方法切断成年SD大鼠左侧穹窿海马伞（FF）,基底前脑行神经干细胞移植,同时持续侧脑室注射BDNF,4周后行组织化学染色结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑NOS阳性神经元数量和形态学参数的变化.结果损伤后1个月,损伤侧基底前脑内侧隔核（MS）和斜角带垂直支（VDB）内可观察到NOS阳性神经元明显减少,分别为正常组的35.5%和55.8%,（与正常组相比P＜0.01）;移植组NOS阳性神经元数恢复到正常组的74.7%和95.7%,（与损伤组相比P＜0.01）;联合组NOS阳性神经元数达到正常组的115.2%和151.3%,（与移植组相比P＜0.05及P＜0.01）.细胞形态学参数提示,移植组NOS阳性神经元中含部分中等大小的未成熟细胞;联合组中该中等大小的细胞更多.结论神经干细胞移植与BDNF联合治疗,对AD模型鼠基底前脑MS、VDB的NOS阳性神经元有明显的补充和保护作用,并且联合治疗效果比单纯神经干细胞移植效果更佳.     

NSCs移植对AD鼠基底前脑胆碱能神经元和学习记忆能力的影响

目的:探讨神经干细胞(NSCs)移植对侧脑室注射192-IgG-saporin致老年性痴呆(AD)动物模型的治疗作用。方法:24只SD大鼠随机分为正常组,模型组和移植组,每组8只。左侧侧脑室注射192-IgG-saporin5μ(l0.5μg/μl),建立AD动物模型,基底前脑行NSCs移植,Y-迷宫行为检测,NADPH-d组织化学法染色,结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑NOS阳性神经元数目和形态学参数的变化。结果:侧脑室注射192-IgG-saporin1个月,损伤侧基底前脑内侧隔核(MS)和斜角带垂直支(VDB)一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元数明显减少,分别减少到正常组的22.43%和28.36%(与正常组相比P<0.01)。移植组NOS阳性神经元数恢复到正常组的70.22%和74.88%(与模型组相比P<0.01)。细胞形态学参数提示,移植组NOS阳性神经元中含有大小不等的未成熟细胞。大鼠的学习记忆能力与基底前脑NOS阳性细胞数呈正相关。结论:NSCs移植对注射192-IgG-saporin致AD鼠基底前脑胆碱能神经元有明显补充和保护作用,可改善大鼠的学习记忆能力。     

剥夺卵巢雌激素对成年大鼠基底前脑神经元表达Nestin的影响

目的 探讨剥夺卵巢雌激素对成年大鼠基底前脑神经元表达Ｎｅｓｔｉｎ的影响。方法 将健康成年雌性大鼠随机分为正常对照、卵巢切除２周及４周三组,用免疫组化法观察卵巢切除后基底前脑的内侧隔核（ＭＳ）、斜角带垂直支（ｖＤＢ）及水平支（ｂＤＢ）Ｎｅｓｔｉｎ免疫反应阳性（Ｎｅｓｔｉｎ－ＩＲ） 神经元的形态和数目变化。结果 卵巢切除２周、４周组ＭＳ、ｖＤＢ及ｈＤＢ的Ｎｅｓｈｎ－ＩＲ神经元形态与正常对照组相比无明显变化;但卵巢切除２周、４周组ＭＳ、ｖＤＢ及ｈＤＢ的 Ｎｅｓｔｉｎ－ＩＲ神经元的数目与正常对照组相比均有不同程度的减少,尤以ｈＤＢ的减少最明显（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．０５）。结论 提示基底前脑Ｎｅｓｔｉｎ－ＩＲ神经元的Ｎｅｓｈｎ表达受卵巢雌激素的影响,ｈＤＢ的Ｎｅｓｈｎ－ＩＲ神经元的表达受此影响更大。     

神经激肽B在成年大鼠基底前脑Nestin阳性神经元的表达

目的观察基底前脑Nestin-IR神经元是否表达神经激肽B(NKB),探讨基底前脑Nestin-IR神经元的递质属性。方法应用免疫组织化学双标染色方法,观察10只SD大鼠基底前脑的Nestin-IR神经元是否表达NKB。结果Nestin-IR神经元和NKB-IR神经元间杂分布于隔-斜角带(MS-DBB)复合体,两者数量相当。双标神经元在内侧隔核(MS)、斜角带垂直支(vDB)和斜角带水平支(hDB)占Nestin-IR神经元的比例分别为31.5%(27.2%～35.5%)、17.2%(12.9%～22.1%)和23.3%(18.7%～27.4%),占NKB-IR神经元的比例分别为13.1%(9.8%～16.6%)、15.7%(11.2%～20.3%)和32.9%(26.5%～40.1%)。结论成年大鼠基底前脑部分Nestin-IR神经元表达NKB。     

成年大鼠基底前脑存在一个Nestin免疫阳性神经元簇

目的　观察Nestin免疫活性在成年大鼠基底前脑中的表达和分布 ,并探讨其与胆碱能神经元之间的关系。方法　采用免疫组化方法对成年大鼠基底前脑的切片进行nestin免疫组化染色及其与ChAT ,NADPH d双标染色。结果　在成年大鼠基底前脑的隔斜角带复合体有一个连续的nestin免疫阳性细胞带 ,胞体较大 ,梭形或多极形 ,有 2～ 4个突起。双标染色显示 ,Nestin阳性神经元与ChAT ,NADPH d阳性神经元间杂分布 ,大多数不呈交叉反应 ,只有少数 ,约 10 %呈双标染色。结论　成年大鼠基底前脑存在一个有别于胆碱能神经元的nestin免疫阳性神经元簇 ,其化学属性和生物学意义有待进一步研究。     

雌激素对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元及一氧化氮合酶阳性神经元的影响

目的　探讨雌激素补充治疗对去卵巢大鼠胆碱能神经元及一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经元表达的影响及剂量效应关系。方法　 2 0只去卵巢SD大鼠分成 4个不同剂量组 :0 μg(对照组 )、2 0 μg(0 0 8mg/kg)、5 0 μg(0 2 0mg/kg)、10 0 μg(0 4 0mg/kg)组 ;1周后 ,用乙酰胆碱转移酶 (ChAT)免疫化学方法及尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶 (NADPH d)组织化学方法研究。结果　NOS阳性神经元在内侧隔核 (MS) ,其数目在各组间无明显差异 (P >0 0 5 )。在斜角带垂直支 (VDB) ,5 0 μg剂量组与对照组相比有明显差异 (P <0 0 5 ) ;ChAT阳性神经元在内侧隔核 (MS) ,其 2 0 μg、5 0 μg剂量组数目出现剂量递增效应 ,与对照组比较有明显差异 (P <0 0 5 ) ,但 10 0 μg剂量组与对照组比较没有明显差异 (P >0 0 5 ) ,同时 5 0 μg与 10 0 μg剂量组比较有明显差异 (P <0 0 5 )。ChAT阳性神经元在斜角带水平支 (HDB) ,各组间均无明显差异 (P >0 0 5 )。结论　雌激素补充治疗能选择性影响基底前脑各亚区NOS和胆碱能神经元 ,并有可能影响学习和记忆能力。