大鼠延髓至下丘脑室旁核的儿茶酚胺能投射神经元在胃伤害性刺激后的…

用ＨＲＰ注入下丘脑室旁核逆行追踪与抗Ｆｏｓ和抗酪氨酸羟化酶双重免疫细胞化学相结合的三重标记方法，对大鼠孤束核和延髓腹外侧区至下丘脑室旁核的儿茶酚胺能投射神经元对伤害刺激后的ｃ－ｆｏｓ表达进行了观察、发现孤束核和延髓腹外侧区有７种不同的标记细胞：ＨＲＰ、ＦｏｓＴＨ单标细胞、Ｆｏｓ／ＨＲＰ、Ｆｏｓ／ＴＨ、ＨＲＰ／ＴＨ双标细胞，Ｆｏｓ／ＨＲＰ／ＴＨ三标细胞，上述７种标记细胞主要分布在延髓中，尾段孤束核的     

大鼠孤束核和延髓腹外侧区至下丘脑外侧区的儿茶酚胺能投射神经元在胃伤害性刺激后的FOS表达

将ＨＲＰ注入下丘脑外侧区进行逆行追踪，并将之与抗ＦＯＳ和抗酪氨酸羟化酶双重免疫组织化学方法相结合，对大鼠孤束核和延髓腹外侧区至下丘脑外侧区的儿茶酚胺能投射神经元在胃伤害性刺激后的ｃ－ｆｏｓ表达进行了观察．光镜下见到孤束核和延髓腹外侧区出现七种不同的反应阳性细胞，即：ＨＲＰ、ＦＯＳ、ＴＨ单一反应阳性细胞，ＦＯＳ／ＨＲＰ、ＦＯＳ／ＴＨ、ＨＲＰ／ＴＨ双重反应阳性细胞和ＦＯＳ／ＨＲＰ／ＴＨ三重反应阳性细胞．七种反应阳性细胞中以ＦＯＳ、ＴＨ单一反应阳性细胞和ＦＯＳ／ＴＨ双重反应阳性细胞数量较多，其余的各类均较少．ＨＲＰ阳性细胞主要见于注射侧，对侧偶见。上述七种阳性细胞主要分布在延髓中、尾段的孤束核内侧亚核和延髓腹外侧区，两者之间的网状结构中少见．本文结果证明大鼠孤束核和延髓腹外侧区儿茶酚胺能神经元有少量向下丘脑外侧区投射，其中少部分儿茶酚胺能神经元参与了胃伤害性刺激的传导或调控．     

大鼠孤束核和延髓腹外侧区至下丘脑外侧区的儿茶酚胺能投射…

将ＨＲＰ注入下丘脑外侧区进行逆行追踪，并将之与抗ＦＯＳ和抗酪氨酸羧化酶双重免疫组织化学方法相结合，对大鼠孤束核和延髓腹外侧区至下丘脑外侧区的儿茶酚胺能投射神经元在胃伤害性刺激后的ｃ－ｆｏｓ表达进行了观察。光镜下见到孤束核和延髓腹外侧区出现七种不同的反应阳性细胞，即：ＨＲＰ、ＦＯＳ、ＴＨ单一反应阳性细胞，ＦＯＳ／ＨＲＰ、ＦＯＳ／ＴＨ、ＨＲＰ／ＴＨ双重反应阳性细胞和ＦＯＳ／ＨＲＰ／ＴＨ三重反应阳性细胞     

大鼠“延髓内脏带”向杏仁核投射的儿茶酚胺神经元对内脏伤害性刺激的FOS表达

本文通过建立ＨＲＰ逆行追踪结合抗ＦＯＳ和抗酪氢酸羟化酶（ＴＨ）的免疫组织化学三重标记技术,在延髓见到以下七种标记细胞：ＦＯＳ,ＨＲＰ,ＴＨ单标细胞,ＦＯＳ／ＨＲＰ,ＦＯＳ／ＴＨ,ＨＲＰ／ＴＨ双标细胞,ＦＯＳ／ＨＲＰ／ＴＨ三标细胞。这些细胞主要分布于延髓中、尾段由孤束核、腹外侧区以及在两者之间的网状结构共同组成的弧形带状区──“延髓内脏带”。本文结果表明大鼠“延髓内脏带”向杏仁核直接投射的儿茶酚胺能神经元中约有４８％对内脏伤害性刺激起反应,提示“延髓内脏带”及其向杏仁核的儿茶酚胺能投射通路参与机体应激反应的调控过程。     

大鼠“延髓内脏带”向杏仁核投射的儿茶酚胺神经元对内脏伤害性…

本文通过建立ＨＲＰ逆行追踪结合抗ＦＯＳ和抗酷氨酸羟化酶（ＴＨ）的免疫组织化学三重标记技术，在延髓见到以下七种标记细胞：ＦＯＳ，ＨＲＰ，ＴＨ单标细胞，ＦＯＳ／ＨＲＰ，ＦＯＳ／ＴＨ，ＨＲＰ／ＴＨ双标细胞，ＦＯＳ／ＨＲＰ／ＴＨ三标细胞。这些细胞主要分布于延髓中、尾段由孤束核、腹外侧区以及在两者之间的网状结构共同组成的弧形带状区－“延髓内脏带”。本文结果表明大鼠“延髓内脏带”向杏仁核直接投射的儿茶酚胺能神     

大鼠脑干内向杏仁中央核投射的神经元对胃肠道伤害性刺激的FOS表达

本文应用ＨＲＰ逆行追踪与ＦＯＳ免疫组化结合的方法，观察了脑干内向杏仁中央核投射的神经元对胃肠道伤害性刺激的ＦＯＳ表达。结果在脑干内见到ＦＯＳ样免疫反应阳性、ＨＲＰ标记和ＦＯＳ／ＨＲＰ双重反应阳性的细胞，它们分布在延髓的孤束核、腹外侧区以及两者之间的网状结构、脑桥臂旁核、中脑导水管周围灰质腹外侧区、中缝背核和被盖背侧核等区域．ＦＯＳ／ＨＲＰ双重反应阳性细胞占ＨＲＰ标记细胞总数的３２．７％．脑干内检出ＦＯＳ／ＨＲＰ双重反应阳性细胞１４８４个，其中延髓占１９．４％，脑桥占７９．５％，中脑仅占１．１％。以上结果提示大鼠脑干内向杏仁中央核投射的神经元中约有１／３参与胃肠道伤害性刺激信息向Ｃｅ的传导，其中绝大多数是通过臂务核中继后投向杏仁中央核的。     

大鼠脑干内向杏仁中央核投射的神经元对胃肠道伤害性刺激的FO…

本文应用ＨＲＰ逆行追踪与ＦＯＳ免疫组化结合的方法，观察了脑干内枵仁中央核投射的神经元对胃肠道伤害性刺激的ＦＯＳ表达，结果在脑干内到ＦＯＳ样免疫反应阳性，ＨＲＰ标记和ＦＯＳ／ＨＲＰ双重反是性的细胞，它们分布在延髓的孤束核，腹外侧区及两者之间的网状，脑桥臂旁核，中脑导水管周围灰上侧区，中缝背核和被美国背侧核等区域。ＦＯＳ／ＨＲＰ双重反应阳性细胞占ＨＲＰ标记细胞总数的３２．７％。脑干内检出ＦＯＳ／ＨＲＰ     

胃肠道伤害性刺激诱导大鼠孤束核,视上核,室旁核内FOS蛋白的表达

用抗ＦＯＳ免疫组化技术，观察胃肠道伤害性刺激诱导大鼠孤束核、视上核、室旁核内ｃ－ｆｏｓ的表达，并结合抗ＴＨ免疫双重染色技术，探讨孤束核内儿茶酚胺能神经元与ＦＯＳ蛋白的关系，结果表明：ＦＯＳ阳性细胞主要分布于孤束核的连合亚核、内业核以及背侧周边区，说明孤束核是内脏伤害性信息初级传和冲动的直接反应区。在下丘脑内主要２于视上核和室旁核，提示视上核和室旁核在内脏伤害性刺激的传递中起中毒作用。在双标切片中，     

在同一神经元内同时显示Fos－蛋白、酪氨酸羟化酶和HRP逆行标记的三重标记技术

本文介绍了一种能在同一神经元内同时显示ＨＲＰ逆行标记以及Ｆｏｓ和某类神经递质或相关酶（例如ＴＨ）的三重标记技术。首先将ＨＲＰ注入脑内某一核团（如中央杏仁核），动物存活４８ｈ后，再向胃内导入１％福尔马林２ｍｌ，以造成对胃的伤害性刺激，２ｈ后将动物处死。脑的切片（如本文的延髓切片）先用四甲基联苯胺－钨酸钠（ＴＭＢ－ＳＴ）法进行ＨＲＰ呈色反应，后用二氨基联苯胺（ＤＡＢ）和氯化钴作加强；然后按ＡＢＣ法进行Ｆｏｓ免疫组织化学反应，继之按ＰＡＰ法进行ＴＨ免疫组织化学反应。光镜下在延髓切片观察到７种标记神经元，即ＴＨ－、ＨＲＰ－或Ｆｏｓ－单标记神经元，ＴＨ和ＨＲＰ－、ＴＨ和Ｆｏｓ－或ＨＲＰ和Ｆｏｓ的双标记神经元以及ＴＨ和ＨＲＰ和Ｆｏｓ的三标记神经元。该方法为研究同时显示中枢神经元的功能活动状态、传出投射及所含神经递质提供了一个强有力的工具。     

大鼠脊髓内接受盆腔脏器伤害性刺激神经元的定位分布

本文用Ｆｏｓ蛋白免疫组织化学方法研究了大鼠脊髓内接受盆腔脏器伤害性刺激神经元的分布状况。在对照组，仅偶见Ｆｏｓ阳性细胞出现于Ｌ６、Ｓ１节段脊髓后角（＜２个／片），且染色浅淡。将３％福尔马林经插管分别注入膀胱、阴道和直肠造成伤害性刺激时，Ｆｏｓ阳性细胞数明显增多（１００～２６０个／片，Ｓ１），主要出现于Ｌ６、Ｓ１节段后角Ⅰ层内侧部、后角内侧缘、后连合核和中间带外侧核。少量散在于后角Ⅰ层外侧部、后角外侧缘、外侧脊核和前角背内侧部。为了确定脊髓内Ｆｏｓ阳性神经元是否向上位脑结构投射，将荧光金（ＦＧ）注入一侧臂旁外侧核后，给予膀胱伤害性刺激，结合Ｆｏｓ蛋白免疫组化技术，在后连合核和中间带外侧核发现有ＦＧ／Ｆｏｓ双标细胞。在中间带外侧核，ＦＧ标记细胞与Ｆｏｓ阳性细胞均主要位于核的背侧部，且ＦＧ标记细胞多数同时为Ｆｏｓ阳性，ＦＧ／Ｆｏｓ双标细胞占ＦＧ标记细胞总数的７１．２％（３７／５２），占Ｆｏｓ阳性细胞总数的１４．８％（３７／２５０），提示脊髓内接受盆腔脏器伤害性神经元部分投射至臂旁外侧核。为进一步确定Ｆｏｓ阳性细胞在中间带外侧核定位分布特征，采用ＮＡＤＰＨ脱氢酶反应（显示副交感节前神经元）与Ｆｏｓ蛋白免疫组化相结合?     

内脏伤害性刺激诱导的大鼠延髓内Fos表达

用抗Ｆｏｓ蛋白和酷氨酸羟化酶（ＴＨ）的免疫组织化学方法，对大鼠两种内脏伤害性刺激诱导的大鼠延髓Ｆｏｓ表达情况及其与儿茶酚胺能神经元的关系进行了观察。提示延髓内脏带半数以上的儿茶酚胺神经元参与对内脏伤害性刺激的反应。     

延髓内脏带儿茶酚胺能神经元对LPS免疫刺激的Fos表达

目的　探讨“延髓内脏带 (MVZ)至下丘脑室旁核 (PVN)”的儿茶酚胺能通路在“免疫 脑通讯”中的作用。　方法　应用WGA HRP逆行追踪与抗Fos和抗酪氨酸羟化酶 (TH)抗体双重免疫组织化学相结合的三重标记方法 ,即先将WGA HRP注入大鼠一侧PVN内 ,存活 4 8h后经腹腔注射免疫刺激剂脂多糖 (LPS)诱发免疫反应后 ,观察MVZ中WGA HRP逆标细胞、Fos蛋白和儿茶酚胺能神经元 (以TH为标记物 )的分布及表达状况。　结果　在MVZ内发现 7种阳性神经元 ,即HRP、Fos、TH单标细胞、Fos HRP、Fos TH、HRP TH双标细胞和Fos HRP TH三标细胞。Fos HRP双标记和Fos HRP TH三标记细胞分别占总HRP逆行标记细胞的 12 5 %和 39 6 %。　结论　MVZ对LPS免疫刺激起反应 ,并可能将免疫信息经儿茶酚胺能神经元上传至PVN ;MVZ可能作为“免疫 脑通讯”的一个中继站 ,通过“MVZ→PVN”通路起免疫调节作用。     

大鼠延髓内神经激肽B受体神经元对腹膜伤害性刺激的Fos表达——免疫组织化学双重染色研究

为探讨神经激肽Ｂ受体（ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎｂｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＮＫＲ）神经元在大鼠延髓的定位及其在腹膜伤害性传入信息整合中的作用。应用免疫组织化学双重染色方法，显示ＮＫＲ神经元的分布并观察它们对腹膜化学伤害性刺激的Ｆｏｓ表达。结果表明：ＮＫＲ样免疫反应（ＮＫＲ－ＬＩ）神经元主要分布在孤束核（Ｓｏｌ）、延髓腹外侧区（ＶＬＭ）、三叉神经脊束核尾侧亚核（Ｓｐ５Ｃ）浅层和三叉旁核（Ｐａ５）。腹膜伤害性刺激激诱导的Ｆｏｓ表达神经元多数分布在Ｓｏｌ、ＶＬＭ、Ｐａ５和最后区。Ｓｏｌ、ＶＬＭ和Ｐａ５中约３０．１％的ＮＫＲ－ＬＩ神经元同时呈Ｆｏｓ样免疫反应。本研究提示：延髓内上述核团ＮＫＲ－ＬＩ神经元与腹膜伤害性初级传入信息的整合有关，可能参与内脏伤害性刺激的抗伤害性感受（ａｎｔｉ－ｎｏｃｅｃｉｐｔｉｏｎ）过程。     

大鼠“延髓内脏带”向终纹床核投射的儿茶酚胺能神经元对内脏伤害性刺激的FOS表达

ＨＲＰ注入大鼠一侧终纹床核，存活４８小时，再将１％Ｆｏｒｍａｌｉｎ导入胃内造成内脏伤害刺激，存活２小时后，灌注取材．对延髓切片进行ＨＲＰ是色和抗ＦＯＳ（ＡＢＣ法）、抗ＴＨ（ＰＡＰ法）免疫组化反应的三重反应．在光镜下发现“延髓内脏带”内出现七种阳性细胞，包括ＨＲＰ阳性、ＴＨ和ＦＯＳ免疫反应阳性；ＴＨ／ＨＲＰ、ＦＯＳ／ＨＲＰ、ＦＯＳ／ＴＨ等双重阳性以及ＦＯＳ／ＨＲＰ／ＴＨ三重反应阳性细胞．这些阳性细胞主要见于内脏带背内侧部的孤束核，其次是腹外侧区的腹外侧网状核（ＶＬＲ），中间部较少．ＴＨ和ＦＯＳ免疫阳性细胞以及ＴＨ／ＦＯＳ双重阳性细胞为双侧分布，ＨＲＰ／ＦＯＳ、ＨＲＰ／ＴＨ以及ＨＲＰ／ＴＨ／ＦＯＳ阳性细胞也为双侧分布但以注射区同侧为多。     

The role of catecholaminergic neurons in the hypothalamus and medullary visceral zone in response to restraint water-immersion stress in rats

The activity of catecholaminergic neurons in the hypothalamus and the medullary visceral zone (MVZ) in rats in response to restraint water-immersion stress (RWIS) was measured by use of dual Fos and tyrosine hydroxylase (TH) immunohistochemistry. In RWIS rats Fos immunoreactive (Fos-IR) nuclei dramatically increased in the paraventricular nucleus (PVN), the supraoptic nucleus (SON), the dorsal motor nucleus of the vagus (DMV), the nucleus of the solitary tract (NTS), the area postrema (AP), and the ventrolateral medulla (VLM). A small number of TH-immunoreactive (TH-IR) and Fos/TH double-labeling neurons in the PVN, and their absence from the SON, were observed in both RWIS and nonstressed rats. More TH-IR neurons were observed in the MVZ of RWIS rats than in nonstressed rats. In RWIS and nonstressed rats, the percentage of Fos-IR nuclei in TH-IR neurons was 38.0 and 14.3% in the DMV, 34.4 and 9.7% in the NTS, 18.6 and 4.5% in the AP, and 45.7 and 18.9% in the VLM, respectively. In conclusion, catecholaminergic neurons in the MVZ are involved in the response to RWIS; although the PVN and SON also participate in the response to RWIS, the mechanism is not via catecholaminergic neurons.     

Evidence for the medullary visceral zone as a neural station of neuroimmunomodulation

The aim of the present study was to test the possibility that the catecholaminergic projectional pathway from the vagus nerve to the medullary visceral zone (MVZ) thence to the paraventricular nucleus of hypothalamus (PVN) was involved in the cytokine-to-brain communication. A triple labeling method in which WGA-HRP retrograde tracing was combined with anti-Fos and -TH immunohistochemical staining was used. WGA-HRP was stereotaxically injected into unilateral PVN in the rat, after a survival of 48 h, animals received intraperitoneal injection of lipopolysaccharide (LPS). The distribution of the HRP retrogradely labeled neurons, Fos protein positive and catecholaminergic neurons (tyrosine hydroxylase as marker) in the MVZ was observed. Subdiaphragmatic vagotomy (SDV) and sham surgery were also used to observe the different Fos expression in the MVZ after intraperitoneal administration of lipopolysaccharide (LPS) or pyrogen-free saline (NS). Under light microscope, seven types of positively stained neurons could be distinguished within the MVZ, namely neurons single-labeled with Fos, HRP or TH, respectively; neurons double-labeled with Fos/TH, Fos/HRP or HRP/TH separately; and neurons triple-labeled with Fos, HRP and TH staining. Intraperitoneal LPS caused lots of robust Fos expression within the MVZ in the sham surgery groups and this response in the MVZ was markedly inhibited in the vagotomized rats. The results suggested that some catecholaminergic neurons in the MVZ could send projections to the PVN and this pathway might be involved in the relay of peripheral immune information via vagus nerve. MVZ was a neural relay station in the immune-to-brain communication and might play a significant role in the neuroimmunomodulation via vagus-MVZ-PVN pathway.