山萘酚、芹菜素对H2O2诱导的心肌细胞凋亡过程中线粒体损伤的影响

目的:观察山萘酚和芹菜素对H2O2诱导的大鼠心肌细胞凋亡过程中线粒体损伤的影响.方法:采用胰蛋白酶消化法,体外分离和培养新生大鼠心肌细胞,建立H2O2损伤心肌细胞模型.以MTT法检测心肌细胞活力,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡情况,JC-1荧光探针测定线粒体膜电位,Western blotting法检测胞浆中细胞色素C(Cyt C)的表达.结果:与模型组比较,山萘酚和芹菜素能显著提高心肌细胞活力,降低心肌细胞凋亡率,抑制线粒体膜电位下降和Cyt C释放.结论:山萘酚和芹菜素对H2O2诱导的心肌细胞凋亡具有明显的抑制作用,山萘酚的抗氧化作用强于芹菜素,其机制可能依赖于抑制线粒体膜电位降低和Cyt C释放.     

卡维地洛对培养心肌细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨卡维地洛对培养心肌细胞氧化损伤的保护作用和机制。方法:H2O2作用于体外培养的新生SD大鼠心肌细胞,建立心肌细胞氧化损伤模型。用卡维地洛预处理后,镜下观察心肌细胞测定心肌细胞存活率(MTT比色法),丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)等指标水平。结果:卡维地洛干预后提高心肌细胞氧化损伤的细胞存活率(P0.01),减少MDA、GSG生成以及提高GSH的生成(P0.01)。结论:卡维地洛通过抗氧化作用对心肌细胞氧化损伤起保护作用。     

丝裂霉素C对体外培养心肌细胞中毒性损伤的研究

丝裂霉素C(MMC)为一有效抗肿瘤抗菌素,可引起造血系统及肝、肾、小肠等脏器的毒性反应,但对心肌的中毒性损伤尚无报告,我们在整体动物实验中发现MMC对心脏也有明显毒性,因而进一步研究了MMC对体外培养心肌细胞的中毒性损伤作用。     

缺氧导致体外培养乳鼠心肌细胞凋亡的研究

目的:通过体外培养乳鼠心肌细胞模拟缺氧模型,探讨心肌细胞缺氧损伤时是否发生心肌细胞凋亡。方法:取(1~3)d新生SD乳鼠心肌进行心肌细胞培养,采用模拟缺氧模型,通过HE染色、流式细胞仪等手段观察检测细胞凋亡的改变。结果:在本实验心肌细胞缺氧模型中,HE染色可见凋亡细胞体积变小,胞核浓缩,胞质嗜酸性增强。流式细胞仪检测出明显的凋亡峰。结论:本实验培养乳鼠心肌细胞缺氧模型可导致心肌细胞凋亡,可通过HE染色观察凋亡细胞形态学的变化,流式细胞术检测细胞DNA含量而对凋亡细胞进行定量分析。     

低氧工作站建立大鼠原代心肌细胞缺氧模型

正心肌梗死、缺血再灌注损伤等多种心血管疾病的发生和发展过程中多伴有细胞缺氧,进而引起细胞损伤,影响心正常生理功能~([1-2]),。体外心肌细胞缺氧模型能够较好排除神经、体液等因素及个体差异性的影响,更加有利于对缺氧性心肌损伤发生机制的研究,为探讨如何保护缺氧心肌提供重要理论基础。因此,建立体外细胞缺氧模型是从细胞和分子水平研究该类疾病     

吡格列酮对缺血再灌注乳鼠心肌细胞凋亡的作用

目的:研究吡格列酮对离体缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响及机制,为吡格列酮治疗心肌缺血再灌注损伤提供理论基础和实验依据.方法:体外培养Wistar乳鼠心室肌细胞,建立心肌细胞缺氧复氧模型.应用免疫荧光显色检测心肌细胞Caspase 3表达变化,免疫印迹法检测各组总Akt、 p-Akt蛋白的表达变化.结果:吡格列酮使离体培养的缺血再灌注损伤心肌细胞Caspase 3阳性细胞减少,p-Akt活性增加,这一作用可被Akt抑制剂Ly294002阻断.结论:吡格列酮激活PI3K/Akt通路,减轻离体缺血再灌注心肌细胞凋亡.     

吡格列酮与胰岛素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究吡格列酮与胰岛素联合应用对缺血再灌注损伤心肌细胞的保护作用,探讨其作用机制.方法:取Wistar大鼠幼鼠心室肌细胞进行体外培养,建立缺血再灌注损伤细胞模型.应用台盼蓝排斥试验测定细胞存活率,比色法检测各组培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙离子荧光强度,透射电镜观察心肌细胞超微结构.结果:吡格列酮与胰岛素联合应用町提高缺血再灌注损伤心肌细胞的存活率,降低细胞培养液中的LDH、CK和MDA含量,提高SOD的含量,降低心肌细胞钙离子染色的荧光强度.部分恢复心肌细胞的超微结构,与单独应用吡格列酮或胰岛素相比,具有统计学意义.结论:吡格列酮与胰岛素联合应用对心肌缺血再灌注损伤有更好的保护效果.     

银杏内酯B对体外培养乳鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨银杏内酯B对体外培养乳鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用及其机制.方法利用低浓度过氧化氢诱导原代培养乳鼠心肌细胞氧化损伤为模型,通过电镜观察细胞超微结构,以及培养介质中LDH活力,MDA含量,心肌细胞内Na -K -ATPase,GSH-PX活力的改变,来评价银杏内酯B对心肌细胞的保护作用,并探讨其机制.结果过氧化氢对心肌细胞有显著的损伤作用.银杏内酯B可使培养介质中的LDH和MDA水平显著下降,细胞内Na -K -ATPase,GSH-PX活力显著提高,同时细胞超微结构得到改普.结论银杏内酯B对过氧化氢致心肌细胞损伤有保护作用,机理与其抑制脂质过氧化和提高细胞内钠钾泵活力的作用有关.     

免疫损伤对离体培养心肌细胞力学特性的影响

目的：探讨病毒性心肌炎时免疫损伤对心肌细胞损害的发病机理。方法：成功建立自身免疫离体心肌细胞模型，在此基础上进行心肌细胞的细胞力学特性的分析。结果：免疫损伤对心肌细胞有明显的损害，心肌细胞收缩力下降，其中免疫损伤的心肌细胞在２４小时的心肌收缩力下降比１２小时更为明显。结论：免疫损伤使心肌细胞收缩力下降。     

新生大鼠心肌细胞的体外培养

心肌细胞培养作为一种体外实验研究模型,可以更方便地从细胞和分子水平研究心血管疾病的发病机制,成为心血管疾病研究的一项主要手段和基本技术。如何使心肌细胞培养的方法更为简单并且使分离的心肌细胞达到理想的存活率和纯度,是体外培养心肌细胞模型的关键问题。我们在本实验室多年新生大鼠心肌细胞培养的经验和方法的基础上加以改进,获得了简单并且稳定、可靠的心肌细胞培养的方法。     

山萘酚、芹菜素对H2O2诱导的心肌细胞凋亡过程中线粒体损伤的影响

目的：观察山萘酚和芹菜素对H₂O₂诱导的大鼠心肌细胞凋亡过程中线粒体损伤的影响。方法:采用胰蛋白酶消化法，体外分离和培养新生大鼠心肌细胞，建立H₂O₂损伤心肌细胞模型。以MTT法检测心肌细胞活力，流式细胞仪检测心肌细胞凋亡情况，JC-1荧光探针测定线粒体膜电位，estern blotting 法检测胞浆中细胞色素C（Cyt C）的表达。结果:与模型组比较，山萘酚和芹菜素能显著提高心肌细胞活力，降低心肌细胞凋亡率，抑制线粒体膜电位下降和Cyt C释放。结论:山萘酚和芹菜素对H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡具有明显的抑制作用,山萘酚的抗氧化作用强于芹菜素，其机制可能依赖于抑制线粒体膜电位降低和Cyt C释放。     

心复康对体外培养乳鼠心肌细胞缺血性损伤的影响

心肌细胞培养是排除神经、体液等因素的影响而研究药物对心肌细胞作用的一个重要方法。利用体外培养的大白鼠乳鼠心肌细胞,通过暂时停止供应心肌细胞生存必需的糖和氧,造成心肌细胞的缺血样损伤。设立正常对照组,缺氧缺糖组及中药组（由西洋参、白术、枸杞子、女贞子、...     

非促分裂型haFGF对H2O2损伤心肌细胞的保护作用研究

目的：了解活性氧自由基对心肌细胞的损伤状况，并在此基础上探讨非促分裂型haFGF(nm-haFGF)对心肌细胞的保护作用。方法： 采用胰蛋白酶消化法，体外分离和培养新生SD乳鼠心肌细胞，建立H2O2损伤心肌细胞的模型，检测细胞存活率、细胞凋亡和观察细胞形态学的变化，以评价H2O2对心肌细胞的损伤状况，并加入一定浓度的nm-haFGF，观察心肌细胞的存活率、SOD活性和MDA含量的改变，以及凋亡的变化。结果： H2O2对心肌细胞的损伤呈浓度依赖地加剧；在H2O2压力作用下，10-80 μg/L nm-haFGF逐步提高H2O2损伤心肌细胞的存活率，其中80 μg/L组的细胞存活力明显大于对照组(P＜0.05)，同时逐步提高SOD活性和降低MDA含量，其中40和80 μg/L组的SOD活性明显大于阳性对照组(P＜0.05)，40和80 μg/L组的MDA含量明显小于阳性对照组(P＜0.05)；此外，在0.01 mmol/L H2O2作用24 h后，10 μg/L和40 μg/L nm-haFGF组的心肌细胞凋亡百分率分别为32.4%和10.7%。结论： 心肌细胞的损伤与H2O2的浓度呈剂量依赖关系；nm-haFGF对由H2O2引起的心肌细胞损伤具有拮抗作用。     

阿霉素致人诱导性多潜能干细胞来源的心肌细胞损伤模型的建立

目的 利用人诱导性多潜能干细胞来源的心肌细胞（hiPSC-CMs）技术,建立人源的阿霉素心肌细胞损伤模型。 方法 从人诱导性多潜能干细胞分化hiPSC-CMs,再用不同浓度阿霉素对hiPSC-CMs作用24 h后检测其细胞活性、钙瞬变、氧化应激和DNA损伤等表型。 结果 阿霉素诱导hiPSC-CMs细胞活力下降,破坏其钙瞬变,引起氧化应激水平上升,导致线粒体膜电位下降和造成DNA损伤,同时右丙亚胺对阿霉素心肌细胞损伤有保护作用。 结论 利用hiPSC-CMs成功建立了人源阿霉素心肌细胞损伤模型,克服了人心肌细胞难以获得及对药物反应存在种属差异的局限性,更好地用于阿霉素心脏毒性的机制研究及药物筛选。     

兔心肌缺血再灌注损伤的超微结构变化及凋亡检测

目的　探讨实验性心肌缺血再灌注损伤时心肌超微结构变化及心肌细胞凋亡的发生。方法　选家兔 6只 ,阻断左冠状动脉的左室支建立心肌缺血模型 ,达到预定的缺血时间后 ,使血管再通 ,建立心肌的缺血再灌注模型。采用透射电镜、原位末端探针标记 (TUNEL)对不同损伤区心肌细胞的损伤情况进行研究。结果　电镜观察显示缺血再灌注损伤中心区呈现明显的心肌细胞凋亡征象 ,在缺血再灌注损伤交界区可见心肌细胞凋亡的早期征象 ,TUNEL检测结果显示缺血再灌注损伤中心区出现较多的凋亡阳性细胞 ,而损伤交界区出现较少的凋亡阳性细胞。结论　心肌细胞凋亡是心肌缺血再灌注损伤的重要特征 ,这与心肌的缺血性损伤存在不同     

麦冬总皂甙对培养心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用

目的:观察麦冬总皂甙(Ophiopogan Total Saponies,OTS)对培养心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用。方法:以培养的心肌细胞为模型,在缺氧再给氧损伤细胞后,观察心肌细胞活力及搏动频率的变化,测定培养液上清乳酸脱氢酶的含量。结果:OTS 10 μg/L和40 μg/L可以提高损伤后心肌细胞的活力,提高心肌细胞的搏动频率,并使培养液上清乳酸脱氢酶的含量明显降低。结论:OTS对缺氧再给氧损伤的心肌细胞具有保护作用。     

脂联素对氧应激所致心肌损伤的影响

目的： 通过原代培养SD大鼠的乳鼠心肌细胞建立过氧化氢(H2O2)心肌细胞氧应激损伤模型,观察脂联素 (adiponectin)对氧应激所致心肌细胞损伤的影响。方法: 采用酶消化法原代培养乳鼠心肌细胞,α-肌动蛋白免疫荧光法进行细胞鉴定。选用培养至3-4 d的细胞,用H2O2建立细胞损伤模型,细胞损伤前用脂联素和阿糖胞苷(Ara-A)进行预处理。观察心肌细胞形态的变化,测定乳酸脱氢酶(LDH)的释放、丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,通过琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术来检测心肌细胞的凋亡。结果: 脂联素预处理可以明显降低H2O2损伤后心肌细胞LDH的释放（P<0.05）和MDA的含量（P<0.05）,DNA ladder条带减弱,心肌细胞凋亡率也下降（P<0.05）,而心肌细胞SOD活性较H2O2损伤组增高（P<0.05）。Ara-A（终浓度为1 mmol/L）能够部分阻断脂联素预处理后对心肌细胞损伤的影响。结论: H2O2可以诱导心肌细胞的损伤及凋亡,脂联素可以通过单磷酸腺甘（AMP）激活蛋白激酶(AMPK)通道发挥保护作用。     

胚胎干细胞的定向心肌分化及其调控机制

胚胎干细胞是具有分化为各种类型组织细胞潜能的全能干细胞,可在体外大量扩增,细胞因子、激素、诱导剂和细胞内转录因子等可诱导和调控胚胎干细胞进行心肌细胞定向分化,这将使干细胞移植治疗心肌损伤性疾病成为可能。探讨胚胎干细胞向心肌细胞的定向分化及其调控机制,进而可在体内外调控干细胞向心肌细胞的定向分化,这将为临床应用干细胞分化新生心肌细胞以治疗心肌损伤性疾病提供理想的细胞来源和可靠的理论依据。     

胚胎干细胞的定向心肌分化及其调控机制

胚胎干细胞是具有分化为各种类型组织细胞潜能的全能干细胞,可在体外大量扩增,细胞因子、激素、诱导剂和细胞内转录因子等可诱导和调控胚胎干细胞进行心肌细胞定向分化,这将使干细胞移植治疗心肌损伤性疾病成为可能.探讨胚胎干细胞向心肌细胞的定向分化及其调控机制,进而可在体内外调控干细胞向心肌细胞的定向分化,这将为临床应用干细胞分化新生心肌细胞以治疗心肌损伤性疾病提供理想的细胞来源和可靠的理论依据.     

14-3-3γ对烧伤及LPS诱导所致大鼠心肌损伤的保护作用

目的: 研究14-3-3γ在烧伤及脂多糖(LPS)引起的心肌损伤中的保护作用。方法: 体内实验建立大鼠烧伤及LPS损伤模型,检测3、6、12、24 h各时点心功能及心肌细胞14-3-3γ蛋白表达水平的改变;体外实验采用新生大鼠心肌细胞,构建pFLAG-14-3-3γ质粒,于LPS损伤前24 h转染至心肌细胞,实验结束后检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH) 活性,MTT法测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,线粒体肿胀实验检测线粒体通透性转换孔(mPTP)开放。结果: 烧伤及LPS损伤模型大鼠心电图ST段均有明显改变,心肌细胞14-3-3γ蛋白表达水平均显著升高。转染了pFLAG-14-3-3γ质粒的心肌细胞能明显对抗随后的LPS损伤,与未转染组比较,14-3-3γ能明显提高细胞存活率,降低LDH活性,减少细胞凋亡,抑制mPTP的开放。结论: 14-3-3γ可能通过抑制mPTP的开放对烧伤及LPS所致的心肌损伤起保护作用。