Percoll密度梯度离心技术和上游法对精子的选择作用

Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心技术和上游法对精子的选择作用夏长所，朱桂金，罗丽兰，高家长为了进一步了解Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心技术对精子的选择作用，采用两层不连续Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度对３１例患者精液进行处理，对处理前后的各种精子特征进行分析，并且与上...     

两种精子体外处理技术的比较

两种精子体外处理技术的比较夏长所朱桂金罗丽兰由于在助孕技术中，需要用人工方法选择功能正常和最具备受精能力的精子，作者以２１例不育男性精液对目前最广泛使用的两层不连续Ｐｅｒｃｏｌ密度梯度离心技术和上游法进行比较，包括处理前后精子密度、活动力、前向活动力...     

Percoll法处理对人精子运动参数的影响

为观察来源于３种不同精液标本精子运动参数的差异及其Ｐｅｒｃｏｌ处理后的变化，本文对新收集的正常精液精子（Ⅰ组），少精及弱精症精子（Ⅱ组）及正常精液冻融精子（Ⅲ组）各１０份，分别于Ｐｅｒｃｏｌ处理前后用电子计算机精液分析仪（Ｃｏｍｐｕｔｅｒａｓｉｓｔｅｄｓｅｍｅｎａｎａｌｙｓｅｒ）进行运动特性分析，记录ＭＯＴ、ＶＳＬ、ＶＣＬ、ＬＩＮ、ＡＬＨ、及ＶＡＰ６项参数，其结果进行统计学分析。Ｐｅｒｃｏｌ处理后，各组精子６项参数值均较处理前提高，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５～０．００１）。处理前Ⅰ组与Ⅱ、Ⅲ组除ＶＳＬ无显著差异外，余５项参数值均有显著差异。Ⅲ组的ＡＬＨ，ＶＣＬ最高，其它参数Ⅰ组最高。Ｐｅｒｃｏｌ处理后差异值降低。Ｐｅｒｃｏｌ处理后精子运动６项参数值均提高；异常精液精子运动特性与正常精液精子有明显差异；正常精子冷冻复苏后其ＶＣＬ及ＡＬＨ明显提高。     

宫腔内人工授精前精液处理方法的随机对照研究

对促排卵的不育妇女采用宫腔内人工授精（ＩＵＩ）时，作者分别采用了三种方法来处理精液，为了比较这三种方法的效用，作者对门诊不育症患者随机选择一种精液的处理方法，以观察效果。在促排卵后准备做ＩＵＩ时，随机选择双离心法、多管上游处理法或Ｐｅｒｃｏｌ密度梯度...     

Percoll法处理对人精子运动参数的影响

为观察来源于３种不同精液标本精子运动参数的差异及其Ｐｅｒｃｏｌｌ处理后的变化，本文对新收集的正常精液精子（Ｉ组）少精及弱精症精子（Ⅱ组）及正常精液冻融精子（Ⅲ组）各１０份，分别于Ｐｅｒｃｏｌｌ处理前后电子计算机精液分析仪（Ｃｏｍｐｕｔｅｒａｓｓｉｓｔｅｄｓｅｍｅｎａｎａｌｙｓｅｒ）进行运动特性分析，记录ＭＯＴ，ＶＳＬ，ＶＣＬ，ＬＩＮ，ＡＬＨ及ＶＡＰ６项参数，其结果进行统计学分析，Ｐｅｒｃｏｌｌ处理     

精液体外处理对精子核DNA链完整性影响的研究

目的 研究3种不同精子优选技术对精子运动参数及DNA链完整性的影响。方法 通过计算机辅助精液分析及彗星试验从精子运动参数及DNA链完整性两个方面评价精液体外处理对精子的影响。结果 上游法与Percoll密度梯度离心法相比,除前者精子回收率(15.499.39)%明显低于后者(42.807.17)%外,P<0.05,其他差别无显著性,PureSperm密度梯度离心法与Percoll密度梯度离心法比较,各运动参数差别无显著性(P>0.05)。精液经Percoll法及PureSperm法密度梯度离心和上游法处理后,总彗星细胞率较处理前降低(P<0.05)。结论 上游法、密度梯度离心法和Puresperm 均可以不同程度优化精液质量;对精子DNA链的损伤程度不同。     

低温体外循环血中血管性假血友病因子浓度及循环内？…

目的 观察先天性心脏病患者体外循环围手术期血管性假血友病因子（ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ ｆａｃｔｏｒ，ｖＷＦ）及血循环内皮细胞（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ，ＣＥＣ）数的动态变化过程，探讨低温体外循环对血管内皮细胞的影响。方法 于肝素化后体外现患者血浆中ｖＷＦ浓度，同时用Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心法对患者血中ＣＥＣ进行计数和形态学观察。     

Percoll梯度离心结合上游法在人工授精中的应用

精子质量对受孕的影响是不言而喻的。因此,获取质量较好的精子,提高精子运动能力和穿透力,然后进行宫内人工授精,能大大提高受孕机率。但目前所用的精子分离方法,均各自存在一些缺点,如上游法精子必须克服重力向上,对精子活力明显低下的不适用;密度梯度离心技术适...     

低温体外循环血中血管性假血友病因子浓度及循环内皮细胞的观察

目的观察先天性心脏病患者体外循环围手术期血管性假血友病因子（ｖｏｎＷｉｌｅｂｒａｎｄｆａｃｔｏｒ,ｖＷＦ）及血循环内皮细胞（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ,ＣＥＣ）数的动态变化过程,探讨低温体外循环对血管内皮细胞的影响。方法于肝素化后体外循环前、转流３０分钟、开放主动脉５分钟、停机、停机后４小时和术后第１天晨用酶联免疫法测定２０例先天性心脏病患者血浆中ｖＷＦ浓度,同时用Ｐｅｒｃｏｌ密度梯度离心法对患者血中ＣＥＣ进行计数和形态学观察。结果转流３０分钟、开放主动脉５分钟、停机、停体外循环后４小时、术后第１天晨ｖＷＦ水平和ＣＥＣ数较体外循环前显著升高（Ｐ＜０．０５）。结论体外循环可导致血管内皮细胞激活或损伤     

密度梯度离心方式对人工授精结局的影响

目的探讨精液经密度梯度离心时经水平转子和角转子处理后对精液质量及其对人工授精结局的影响。方法回顾性分析352个人工授精周期,根据梯度离心时转子的不同,分成水平转子组和角转子组两组,精液经密度梯度离心法处理,形态学分析严格按照WHO(World Health Organization)人类精液检验与处理实验手册第五版标准,比较处理后精液质量及两组对妊娠结局的影响。结果(1)精液质量比较:水平转子组前向运动精子为(89.2±8.5)%、精子浓度为(47.8±14.3)×10~6/mL、前向运动精子总数为(13.6±6.3)×10~6;角转子组前向运动精子为(90.1±8.8)%、精子浓度为(43.4±15.1)×10~6/mL、前向运动精子总数为(12.9±6.1)×10~6,无统计学差异(P0.05)。水平转子组和角转子组正常精子比率分别为(18.5±8.2)%和(14.2±5.7)%,两者存在显著性差异(P0.05);(2)妊娠结局比较:水平转子组的临床妊娠率为16.5%(30/182)、流产率为3.3%(1/30)、活产率为96.7%(29/30);角转子组生化妊娠率为临床妊娠率为12.4%(21/170)、流产率为9.5%(2/21)、活产率为90.5%(19/21),无统计学差异(P0.05),生化妊娠率:两组分别为0%(0/30),19.2%(5/26),有统计学意义(P0.05)。结论密度梯度离心应用水平转子可以降低对处理后精液的精子形态的影响,减少生化妊娠率。     

冷冻复温后处理对精子功能影响的研究：I.不同介质处理的影响

本文对冷冻复温后精子在不同介质中进行了离心孵育处理，结果显示：精子营养液可使低温冷冻保存后复温的精子在较长时间内保持良好的活动率；细胞培养液１６４０能显著提高复温后精子的人宫颈粘液的穿透力（Ｐ〈０．０５）。细胞培养液Ｍ１９９、Ｈａｍ’ｓＦ１０和正常精浆对复温后精子功能无明显改善作用。离心处理（２０００ｒ／ｍｉｎ）对复温后精子功能无损害作用。     

冷冻复温后处理对精子功能影响的研究Ⅰ．不同介质处理的影响

本文对冷冻复温后精子在不同介质中进行了离心孵育处理，结果显示∶精子营养液可使低温冷冻保存后复温的精子在较长时间内保持良好的活动率；细胞培养液１６４０能显著提高复温后精子的人宫颈粘液的穿透力（Ｐ＜０．０５）。细胞培养液Ｍ１９９、Ｈａｍ＇ｓＦ１０和正常精浆对复温后精子功能无明显改善作用。离心处理（２０００ｒ／ｍｉｎ）对复温后精子功能无损害作用。     

非连续密度梯度离心法不同离心力对精子DNA完整性的影响

目的研究非连续梯度离心处理精液时不同离心力对精子活力、存活率、浓度、形态、DNA完整性的影响。方法搜集2016年6月至2017年6月共100例精液质量正常的不育症志愿者精液样本,充分充分混匀后取4mL均分4份,1份作为对照组,其它3份作为处理组,分别使用300×g、400×g、500×g离心力进行非连续密度梯度离心,检测处理前后每组精液浓度、前向运动精子百分率、正常形态率以及精子DNA碎片率,计算每组的前向运动精子回收率。结果离心后3个处理组与对照组在前向运动精子百分比、正常形态率、存活率方面无差异(P0.05),精子DNA碎片化指数(DFI)在离心力300×g和400×g组明显低于原液组(P0.05),500×g组DFI与对照组未见统计学差异,前向运动精子回收率在3个处理组之间无显著差异。结论精液处理时使用离心力300×g或400×g可在保证前向运动精子回收率的情况下有效提升样本的DNA完整性,提高辅助生殖的成功率。     

两种精子处理方法的卵细胞胞质内单精子显微注射结局的比较

目的:评价密度梯度离心和改良上游法两种处理活动精子的分离方法在卵细胞胞质内单精子显微注射(ICSI)中的效果,从而指导临床应用。方法:选取2004年10月~2005年4月在本中心完成的42例患者42个周期为研究对象,前瞻性比较了两种精子分离方法的受精率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率、精子畸形率、精子回吸收率等。结果:两种方法分离精子所获得的ICSI胚胎移植(ICSI-ET)中,受精率、卵裂率、优胚率、临床妊娠率均无明显差异,但是改良上游法所获得的精子畸形率明显高于密度梯度离心法(P<0.01);重度少精子症密度梯度离心法回吸收精子优于改良上游法(P<0.01)。结论:在辅助生育技术ICSI-ET中,密度梯度离心法分离活动精子临床妊娠结局与改良上游法无明显差异;除对重度少精子症者外,均可以采用改良上游法。     

从睾丸活检中获取精子

从睾丸活检中获取精子［ＰｅｒｓｓｏｎＢＥ，ｅｔａｌ．ＳｃａｎｄＪＵｒｏｌＮｅｐｈｒｏｌ１９９５；Ｓｕｐｐｌ１６９∶２６］输精管发育不全的男子收集附睾精子作体外受精（ＩＶＦ）或显微注射（ＣＳＩ）已有报告，但有些病人大部附睾也缺失致使精子抽吸更困难。曾见...     

趋化因子CXCL12及其受体CXCR4在人精子的表达

目的:分析趋化因子CXCL12及其受体CXCR4在人类精子的表达。方法:收集有生育史且精液常规分析结果正常男性精液标本10例,经过密度梯度离心纯化处理后,采用RT-PCR和免疫荧光化学染色技术在基因和蛋白水平分析CXCL12/CXCR4在人精子的表达。结果:虽然正常人精子同时表达CXCL12(0.641±0.180)与CXCR4(0.464±0.100)mRNA,但免疫荧光染色分析发现,在蛋白水平人精子主要表达CXCR4而不表达CXCL12,且CXCR4染色主要位于精子顶体后区。结论:CXCL12/CXCR4可能也是调节精子功能的重要分子。     

不同处理方法优选精子效果的比较

目的 比较上游法、三种密度梯度离心法和洗涤离心法优选精子的效果. 方法 门诊收集浓度与活力正常的精液标本44份,每份精液各取0.5 ml×5,分别采用上游法、密度梯度离心法和洗涤离心法进行处理,比较各组的精子浓度、活力、畸形率、精子畸形指数（SDI）和DNA碎片指数（DFI）,再按试剂来源将密度梯度离心法分为Sperm Grad梯度离心组（A组）、Pure Sperm梯度离心组（B组）和Pure Ception梯度离心组（C组）,进行上述参数比较. 结果与上游法和梯度离心法相比,洗涤离心法精子浓度、DFI值、畸形率、SDI值及头部、中段、尾部畸形率均显著增高（P＜0.05）,活力显著降低（P＜0.05）;与梯度离心法相比,上游法精子浓度、DFI值均显著降低（P＜0.05）,活力显著升高（P＜0.05）,两组间总畸形率、SDI值及头部、中段、尾部畸形率均无显著性差异（P＞0.05）.A、B、C组间精子浓度、活力、畸形率、SDI及DFI等参数均无显著性差异（P＞0.05）,但C组中段畸形率显著高于A组和B组（P＜0.05）,B组尾部畸形率显著高于A组和C组（P＜0.05）; 结论对于精子浓度和活力正常的精液标本,上游法精子活力最高、畸形率和DFI值最低,且精子浓度能够满足临床需要,是较为理想的精子优选技术;三种不同梯度离心法优选精子效果无显著性差异,适用于严重少精子症精液标本的处理.     

PureSperm密度梯度法对活动力差精液标本的分离效果

精液的体外处理是人工授精实施中的重要环节,目前常用的精子洗涤方法有精子游动法、玻璃纤维滤过法、血清蛋白滤过法、游动-沉淀法和密度梯度离心法等。PureSperm是一种新型、无毒的精子分离剂。PureSperm密度梯度离心法具有操作简便,洗涤效果佳等优越性,已被文献多次报道,但PureSperm密度梯度离心法对活动力差精子的回收情况报道较少。     

三种精子分离方法的比较评价

精液体外处理的目的是要提高精子的密度和活力，适当控制精子总数，减少或去除精浆内前列腺素、炎症细胞、抗精子抗体等不良成分，促进精子获能，改善精子受精能力，它是人工授精、试管婴儿等辅助生育技术的重要环节。常用的精液体外处理方法有上游法、密度梯度离心法、洗涤法及玻璃纤维过滤法。     

精液保存和优化处理方法对精子DNA完整性的影响

目的:探讨不同精液保存和处理方法对精子DNA完整性的影响。方法:筛选2015年1~12月就诊的100例精液正常志愿者,将每例志愿者的精液混匀后分别对其进行不同的保存和优化处理;保存方法包括直接冷冻法、试剂冷冻法、室温保存4 h和24 h等,优化处理方法包括简单洗涤法、直接上游法和非连续密度梯度离心法。保存和处理后均采用精子染色体扩散实验(SCD)分析其精子DNA碎片指数(DFI);优化处理各组继续培养24 h,培养后再分析其精子活动率和DFI。结果:精液保存条件两两组间分析显示,直接冷冻法、试剂冷冻法和室温保存4 h的精子DFI分别为(27.3±6.4)%、(26.9±6.1)%和(24.7±6.8)%,结果无显著性差异(P0.05),而室温保存24 h则显著增加精子DFI[(35.6±9.0)%](P0.05)。与简单洗涤法的精子DFI[(13.7±2.0)%]相比,直接上游法的精子DFI[(9.1±1.3)%]和非连续密度梯度离心法的精子DFI[(8.0±2.5)%]均显著降低(P0.05);再培养24 h后,非连续密度梯度离心法处理的精子DFI[(11.5±4.2)%]最低(P0.05)。结论:保存条件和优化处理方法对精子DNA完整性有影响,临床工作中需选取最合适的精液处理方法。