Dectin-1内在化表达介导氧依赖性方式杀伤白色念珠菌

目的 探讨Dectin-1介导人嗜中性粒细胞以氧依赖性方式杀伤调理吞噬后白色念珠菌孢子的机制.方法 在白色念珠菌孢子作用前后,流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测人嗜中性粒细胞中Dectin-1的表达率及表达部位;并通过Dectin-1阻断试验分析嗜中性粒细胞中Dectin-1的表达与胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的产生及对白色念珠菌孢子杀伤的相关性.结果 在白色念珠菌孢子刺激30或60 min后,细胞内Dectin-1的表达率明显上调(0min,8.32％;30 min,16.82％;60 min,23.88％.与0min相比,P均＜0.01),且Dectin-1与ROS在胞内的表达均被募集到吞噬的白色念珠菌孢子表面.Dectin-1的阻断分别与ROS峰值的抑制(R2=0.306,P＜0.01)及白色念珠菌杀伤率的降低(R2=0.251,P＜0.01)呈剂量依存关系.结论 Dectin-1可通过内在化的表达模式介导人嗜中性粒细胞以ROS依赖性方式杀伤调理吞噬的白色念珠菌孢子.     

人中性粒细胞防御素的分离纯化

从人中性粒细胞分离胞浆颗粒,以5%乙酸从中提取酸溶性组分,经SephadexG100及Bio-gel P10凝胶过滤层析后获得纯化的人中性粒细胞防御素(HNP)。纯化的HNP经AU-PAGE分析不含杂质蛋白区带,SDS—PAGE分析为一条分子量约3 000的带。氨基酸组成分析表明,在被检测的17种氨基酸中,HNP含12种,各种氨基酸残基的推算数与文献报道氨基酸序列分析结果一致。HNP在体外实验中表现较强杀白色念珠菌活性,在浓度为100μg/ml时,白色珠菌死亡率近90%。     

HMGN2分离制备及其趋化性研究

目的:建立分离天然HMGN2的方法并研究其抗菌性与对中性粒细胞的趋化活性。方法:5%高氯酸对子宫纤维囊腺瘤组织进行萃取,萃取物通过反相高效液相色谱(RP-HPLC)直接进行分离,Tricine-SDS-PAGE,AU-PAGE和Western-Blot对蛋白分子进行鉴定,采用Transwell实验检测HMGN2对中性粒细胞的趋化性。结果:分离出高纯度的HMGN2,HMGN2对大肠杆菌有杀菌活性但HMGN2在体外不能趋化中性粒细胞运动。结论:建立简单、直接分离高纯度的天然HMGN2的方法,有助于对其进一步研究,我们发现HMGN2对大肠杆菌有杀菌活性但它不能通过趋化中性粒细胞发挥作用。     

纳米载银抗菌剂与四针状氧化锌抗白色念珠菌的性能

背景：口腔修复材料室温固化甲基丙烯酸甲酯的表面结构疏松多孔,极易附着各种细菌、微生物导致患者义齿性口炎的发生,所以在甲基丙烯酸甲酯中加入抗菌剂成为国内外学者研究的热点。 目的：比较加入纳米载银抗菌剂与四针状氧化锌抗菌剂后,室温固化甲基丙烯酸甲酯对白色念珠菌的抗菌活性。 方法：采用对倍稀释法测定纳米载银抗菌剂与四针状氧化锌抗菌剂对白色念珠菌的最小杀菌浓度。将纳米磷酸锆载银抗菌粉体与四针状氧化锌抗菌剂分别以0%,1%,2%,3%的质量比加入到室温固化甲基丙烯酸甲酯粉剂中,检测各组试件对白色念珠菌的抗菌率。 结果与结论：纳米载银抗菌剂对白色念珠菌的最小杀菌浓度为 40 g/L,四针状氧化锌抗菌剂对白色念珠菌的最小杀菌浓度为25 g/L。未加入纳米载银抗菌剂或四针状氧化锌抗菌剂的甲基丙烯酸甲酯几乎无抗菌活性,加入两种抗菌剂后其抗菌活性明显增加,随着加入抗菌剂质量比的增加,抗菌活性逐渐增强;当抗菌剂质量比增加到3%时,加入纳米载银抗菌剂的甲基丙烯酸甲酯抗菌率为92.23%,加入四针状氧化锌抗菌剂的甲基丙烯酸甲酯抗菌率为98.23%。表明纳米载银抗菌剂与四针状氧化锌抗菌剂对白色念珠菌均有抗菌效果,且四针状氧化锌抗菌剂比纳米载银系抗菌剂抗菌效果好。     

大鼠β-防御素-2基因气道转染增强肺抗感染防御功能的研究

β 防御素体外试验显示具广谱抗菌活性 ,本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用。构建大鼠 β 防御素 2 (rBD2 )重组质粒 pBK CMV$CrBD2和 pCD NA 3.1 Myc His( + ) rBD2 ,通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入 ,检测其在气管和肺组织表达情况 ,并应用肺组织匀浆上清菌落计数法检察对绿脓杆菌的肺清除率。结果显示在基因转染大鼠的气管和肺组织内均检测到rBD2 His融合蛋白基因mRNA和蛋白的表达 ,说明脂质体包裹的重组 β 防御素 2pBK CMV$CrBD2质粒可有效转染气道上皮组织。肺细菌清除率实验显示构建重组质粒 p…     

2017～2020年血液病患者血流感染病原菌分布及耐药性分析

目的 探讨2017～2020年血液病患者血流感染的病原菌分布及耐药情况,为临床合理使用抗菌药物提供参考.方法 回顾性分析2017年1月至2020年12月发生血流感染的血液病患者病原菌分布及药物敏感性情况.结果 发生血流感染的306例患者共分离出病原菌347株,其中革兰阴性杆菌214株(61.7％),革兰阳性球菌106株(30.5％),真菌27株(7.8％).革兰阴性杆菌以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌为主,革兰阳性球菌以凝固酶阴性葡萄球菌为主,真菌以热带念珠菌为主.肠杆菌科细菌对碳青霉烯类、替加环素、阿米卡星的敏感性较好>90.7％.铜绿假单胞菌对阿米卡星、头孢吡肟、头孢他啶、喹诺酮类、哌拉西林他唑巴坦的敏感性较高>91.7％,高于碳青霉烯类.主要革兰阳性球菌对替考拉宁、万古霉素、利奈唑胺、替加环素的敏感性好,发现一株粪肠球菌对利奈唑胺耐药.热带念珠菌对唑类耐药率高>30％,对其他抗真菌药物敏感性均较好.结论 血液病患者血流感染病原菌的种类较多,以革兰阴性杆菌为主,不同的病原菌对抗菌药物的敏感性不同,应根据本地区本病种血流感染的病原菌分布及耐药情况合理使用抗菌药物.     

抗真菌药舍他康唑药理、毒理研究综述

舍他康唑（sertaconagole)是一个新型氮茂环类抗真菌药物，具有广谱抗真菌活性及抗菌活性强特点，对G^ 菌也有活性，商品名为dermoflex。2％乳膏外用，2次／d，广泛用于皮肤、粘膜真菌感染。Ⅱ期临床试验结果证明．对花汗斑癣、念珠菌病、皮肤真菌病有效。Ⅲ期临床试验结果证明，安全性好，疗效优于咪康唑，还适用于治疗阴道念珠菌病，预防咽喉部念珠菌感染。本品已在西班牙上市。     

P型纳米二氧化硅载银抗真菌耐高温及稳定性试验的研究

目的:研究P型纳米二氧化硅载银抗菌粉抗真菌效果及耐热性和稳定性。方法:(1)测定不同浓度,不同作用时间的抗真菌率。(2)耐高温和稳定性测试。结果:P型纳米二氧化硅载银抗菌粉浓度越高抗真菌效果越好,作用时间越长抗真菌效果越好。最小抑菌浓度,P型纳米二氧化硅载银抗菌粉(含银0.35%)1 g 5 mL水与白色念珠菌作用20分钟平均抑菌率可达70.21%。P型纳米二氧化硅载银抗菌粉置于94℃电热恒温水浴锅中放置14天后,配制浓度为1 g 5 mL的药液与白色念珠菌作用20分钟,抗真菌率仍可达到56.25%。结论:P型纳米二氧化硅载银抗菌稳定性很好,耐高温、不失效。     

G 试验阳性血清通过干扰 Dectin-1的内在化表达抑制 ROS 依赖性杀伤白念珠菌北大核心CSCD

目的：探讨G试验阳性血清中游离β-1,3-D-葡聚糖干扰人嗜中性粒细胞Dectin-1所介导的氧依赖性杀伤白念珠菌的机制。方法激光共聚焦显微镜检测经β-1,3-D-葡聚糖酶预处理前后的白念珠菌孢子作用下,人嗜中性粒细胞内Dectin-1表达分布的变化及与活性氧簇（ reactive oxy-gen species, ROS）的共定位关系;进一步分析Dectin-1的阻断对白念珠菌诱导下胞内ROS生成的影响;流式细胞术检测G试验阳性血清中游离的β-1,3-D-葡聚糖对白念珠菌诱导下人嗜中性粒细胞内Dectin-1和ROS表达水平的影响。结果在白念珠菌作用下,人嗜中性粒细胞内诱导性表达的Dec-tin-1主要被募集到内吞的孢子表面,且与ROS的产生具有一定的共定位关系。然而,经β-1,3-D-葡聚糖酶预处理后,胞内则未见Dectin-1的明显表达;当Dectin-1被其功能性抗体（5μg/ml）阻断后,白念珠菌诱导胞内ROS的表达与阻断前相比显著降低（LSD-t检验,P＜0．01）;经G试验阳性血清预处理的人嗜中性粒细胞中,白念珠菌诱导下胞内Dectin-1和ROS的表达水平均显著低于单一的白念珠菌作用组（LSD-t检验, P＜0．01）;线性回归分析提示G试验阳性血清中游离β-1,3-D-葡聚糖浓度分别与Dectin-1及ROS表达水平的抑制部分呈显著的剂量依存关系（ Dectin-1,R2＝0．702,P＜0．01;ROS,R2＝0．588,P＜0．01）。结论 G试验阳性血清中的游离β-1,3-D-葡聚糖可通过干扰人嗜中性粒细胞Dectin-1内在化表达的方式抑制ROS依赖性杀伤内吞的白念珠菌孢子。     

喹诺酮类药物对耐药肺炎克雷伯杆菌的体外抗菌活性分析

目的:了解耐喹诺酮类肺炎克雷伯杆菌的体外抗菌活性及CCCP对喹诺酮类药物体外抗菌活性的影响。方法:从99株肺炎克雷伯杆菌临床分离株中选取对环丙沙星耐药(M IC≥4μg/m l)菌株14株。采用琼脂二倍稀释法测定抗菌药的最低抑菌浓度(M IC),同时测CCCP对喹诺酮类药物M IC的影响。结果:14株肺炎克雷伯杆菌对5种喹诺酮类药物无一株敏感,且表现出较高水平的耐药。对其它抗生素的耐药率由高到低依次是氨苄西林、哌拉西林、氯霉素、庆大霉素、氨曲南、阿米卡星、头孢噻肟和头孢吡肟。亚胺培南未发现有耐药株。喹诺酮类药物与CCCP合用后,在部分菌中的M IC中出现了明显的降低。结论:耐喹诺酮类肺炎克雷伯杆菌对喹诺酮类呈交叉耐药,且呈较高水平耐药;CCCP可以明显提高部分喹诺酮类药物对肺炎克雷伯杆菌的体外抗菌活性;亚胺培南、第三代头孢菌素、氨曲南和阿米卡星对耐喹诺酮肺炎克雷伯杆菌仍有一定作用。     

不同药用辅料对人α防御素5抗菌活性影响的单因素实验研究

目的探索单种药用辅料不同浓度条件下对人α防御素5(HD5)抗菌活性的影响,为后期新药制剂配方的研制提供实验依据。方法采用抗菌实验平板计数法,分析不同浓度HD5的抗菌活性,然后选择不同浓度甘油、蔗糖、NaCl、吐温80、羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)、尼泊金甲酯钠作为候选辅料,以含有各浓度不同辅料添加HD5多肽作为实验组,以各浓度辅料的未添加HD5作为对照组,其中将未添加HD5和辅料的对照组称为空白对照组。计数平板菌落数,以抑菌率作为响应值,从而选择适宜的辅料种类和浓度范围。结果与单纯HD5多肽相比,分别单独加入浓度大于0.29%的NaCl和10%以上的(HP-β-CD),HD5的抑菌率明显下降(P<0.05),而单独加入设定浓度的甘油、蔗糖、吐温80、HP-β-CD和尼泊金甲酯钠均不会显著影响HD5的抑菌率,但是由于较高浓度的甘油、吐温80和尼泊金甲酯钠本身具有显著抑菌活性,所以在较高浓度时无法判断它们是否影响了HD5的抗菌活性,因此在选取浓度时要注意区分抑菌活性的主次关系。分别单独加入浓度低于10%的甘油、12%的蔗糖、0.5%的吐温80、5%的HP-β-CD和0.5%的尼泊金甲酯钠均不会显著影响HD5的抗菌活性。结论在一定浓度范围内,甘油、蔗糖、吐温80、HP-β-CD和尼泊金甲酯钠不会影响HD5的抗菌活性,可作为HD5的备选辅料。     

头孢他啶/阿维巴坦对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的体外抗菌活性研究

目的 研究头孢他啶/阿维巴坦(CZA)对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的体外抗菌活性并检测其相关耐药基因,为临床治疗CRKP提供参考依据.方法 选取2017年1月至2019年12月北京中医药大学东方医院临床分离的257株CRKP菌株,应用VITEK MS微生物质谱仪和VITEK-2 Compact微生物药敏分析仪进行菌种鉴定和药敏分析,用K-B法检测CZA的药物敏感性.采用碳青霉烯酶抑制剂增强试验对CRKP菌株进行产酶表型检测.通过NG-Test CARBA 5对耐CZA的CRKP菌株进行相关耐药基因检测.结果 257株CRKP菌株对CZA的耐药率为7.8％,对哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林/克拉维酸、头孢哌酮/舒巴坦、头孢呋辛、头孢他啶、头孢曲松、头孢西丁的耐药率均为100％,头孢吡肟97.2％、左氧氟沙星97.1％、阿米卡星48.5％、庆大霉素76.4％、复方新诺明46.5％、替加环素35.5％.碳青霉烯酶抑制剂增强试验结果显示,CRKP菌株耐药主要以产丝氨酸酶为主.20株耐CZA的CRKP菌株中,产KPC 11株,产OXA-481株,产IMP 1株,产NDM 4株,既产KPC又产NDM 2株,不产碳青霉烯酶1株.结论 CZA对CRKP菌株有较强的抗菌效果,抗菌活性明显优于临床常用抗菌药物.CZA体外药敏试验可在临床常规开展,为临床治疗CRKP提供更多的参考.     

阿莫西林与舒巴坦联合的抗菌作用及对β-人酰胺酶稳定性的研究

目的 :评价阿莫西林钠 /舒巴坦钠 (AMOX/SBT)的体内、外抗菌活性及对 β 内酰胺酶的稳定性 ,并与其他抗菌药比较。采用琼脂二倍稀释法对临床分离鉴定的产酶菌株 (2 0 0株 )及标准产酶株 (1 6株 )进行体外抑菌实验 ;体内抗菌实验按Bliss法用NDST软件计算半数有效量ED50 值及 95 %可信限 ;对标准产 β 内酰胺酶菌株用超声波碎法提取粗酶 ,比较各药的相对水解率。结果不同配比AMOX/SBT对 2 0 0株临床分离产 β -内酰胺酶菌株的抗菌活性较AMOX单用强 2～ 64倍 ,以 2∶1为最佳。对 1 6株国际标准产酶株的体外抗菌试验显示 :AMOX的MI…     

特异性白细胞移动抑制试验在诊断深部念珠菌感染中的意义进一步探讨

最近我们在研究免疫抑制剂—醋酸氢化考的松对免疫系统的影响时,发现氢考能深刻地抑制免疫应答。例如给小鼠一次皮下接种5mg 氢考,可引起血液中单核细胞和淋巴细胞大幅度下降,中性粒细胞先低后高,由 PHA 刺激的淋巴细胞增殖试验极度减低等。这种情况可持续至少2周。与此同时,小鼠对条件致病菌如白色念珠菌的易感性显著升高。为了探讨免疫抑制剂是否会抑     

妥布霉素伤用凝胶的体外抗菌作用研究

观察妥布霉素伤用凝胶的体外抗菌活性 ,为临床应用提供试验依据。采用平皿二倍稀释法测定了妥布霉素伤用凝胶对临床分离的 12 0株临床常见的革兰氏阳性及革兰氏阴性菌的体外抗菌作用。以对青霉素敏感的金葡菌、表葡菌、对庆大霉素敏感的大肠杆菌、敏感绿脓杆菌的作用为最强 ,MIC50 均为 0 2 5mg/L。妥布霉素伤用凝胶抗菌谱较广 ,对试验中的革兰氏阳性及革兰氏阴性菌均具有较强的杀灭或抑制作用 ,显示出较好的抗菌活性。     

噻克硝唑对厌氧菌的体内外抗菌活性

目的：考察及评价噻克硝唑体内外对临床分离厌氧菌的抗菌活性。方法：采用琼脂二倍稀释法测定噻克硝唑、甲硝唑、替硝唑对临床分离的165株厌氧致病菌的MIC。采用体内保护实验测定噻克硝唑的体内抗菌活性。结果：（1）体外实验证明，噻克硝唑具有较强的抗菌活性，其对革兰氏阴性厌氧菌抗菌活性略强于对革兰氏阳性厌氧菌的抗菌活性。（2）噻克硝唑体内试验也呈现较强的抗厌氧菌作用，略强于甲硝唑、替硝唑。结论：噻克硝唑具有广谱抗厌氧菌作用。     

816株真菌感染分布及药敏分析

目的了解本院医院感染真菌分布的特点及对常用抗真菌药物的耐药情况。方法CHROMagar显色培养基及ATB真菌试剂盒进行鉴定;药敏试验采用纸片扩散K—B法。结果2008年1月至2009年6月我院临床共分离真菌816株,其中白色念珠菌（占53．2％）是引起真菌感染的最常见菌种,其次是热带念珠菌（21．6％）、光滑念珠菌（15．6％）、近平滑念珠菌（5．0％）和克柔念珠菌（2．3％）。药敏试验结果显示各种真菌对两性霉素B、制霉菌素的敏感性最高,分别达98％和99％,其次是氟康唑、伊曲康唑。结论真菌感染率呈逐年上升趋势,耐药率也逐渐增高。因此应及时对送检标本进行真菌培养和药敏试验,合理使用抗真菌药物,减少医院感染多重耐药和深部真菌感染的发生。     

双唑泰棉栓的体外抗病原微生物及实验性阴道炎治疗作用研究

双唑泰棉栓是一混合物 ,其主要成分包括克霉唑、甲硝唑和洗必泰。我们采用了体外二倍稀释法进行了该药对临床分离的致病菌需氧菌、厌氧菌、真菌和滴虫MIC5 0的测定 ,在体内我们采用培养的白色念珠菌和厌氧菌造成实验性大鼠阴道炎模型并进行治疗 ,以阴道分泌物培养 ,阴道炎症引起的外阴肉眼改变的量化评分及阴道组织学检查 ,结果表明双唑泰棉栓具有广谱的抗菌作用 ,对所试验的 48株厌氧菌 (脆弱拟杆菌、核梭杆菌、牙龈拟杆菌、躯体拟杆菌、多毛拟杆菌、消化链球菌 )作用十分强。MIC50 在 0 .0 0 3～0 .0 2 5mg/L ,对白色念珠菌、淋球菌也…     

头孢他啶舒巴坦钠合用的抗菌增效作用

目的 :确定注射用头孢他啶舒巴坦钠复方的有效性。方法 :用琼脂二倍稀释法测定了CAZ与舒巴坦钠(SBT)分别以 1∶1、2∶1、4∶1联用的体外抗菌作用(MIC及MBC) ,采用小鼠实验性细菌感染全身败血症模型的观察体内疗效 ,采用分光光度法测定 β 内酰胺酶在体外对CAZ的水解作用。结果 :对临床分离42 5株致病菌 (其中需氧菌 3 99株 ,厌氧菌 2 8株 ;产酶菌 2 95株 ,非产酶菌 1 3 0株 )的体外抗菌活性结果显示 ,对革兰阴性菌产 β 内酰胺酶的大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单孢菌、不动杆菌及阴沟杆菌等 ,酶抑制剂 (SBT)加入CAZ能明显提高C…     

阿奇霉素对泌尿生殖道沙眼衣原体临床株的单独和联合药物敏感性检测

目的 检测本地区近年来泌尿生殖道沙眼衣原体临床分离株对阿奇霉素的药物敏感性,筛查耐药株,以及体外阿奇霉素与莫西沙星、多西环素、米诺环素和利福平的相互作用情况.方法 将经McCoy细胞培养法检测出的41例沙眼衣原体临床株,传代培养至感染率达90%以上,收集标本进行阿奇霉素、莫西沙星、多西环素、米诺环素和利福平5种抗菌药物的药敏试验,采用棋盘稀释法测定阿奇霉素与莫西沙星、阿奇霉素与多西环素、阿奇霉素与米诺环素、阿奇霉素与利福平4组抗菌药物联合后的体外相互作用情况.结果 阿奇霉素最低抑菌浓度(MIC)结果为0.063～0.5μg/ml.阿奇霉素与莫西沙星、多西环素和利福平体外联合时对分别对51.22%、53.66%和58.54%的菌株为协同或相加作用,统计结果显示3组之间差异无统计学意义(P＞0.05);阿奇霉素与米诺环素联合时对90.24%的菌株为拮抗作用.结论 在体外,阿奇霉素与莫西沙星、多西环素或利福平联用,能够提高各自的抗菌活性,可能对治疗沙眼衣原体反复感染或持续感染患者的疗效优于单用一种抗菌药物;相反,阿奇霉素与米诺环素联合应用时,它们之间的拮抗作用将极大地降低各自的抗菌活性.联合药敏试验在一定程度上能够弥补单独药敏实验的一些不足.