ANGPTL4基因在3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中表达水平的变化

目的观察血管生成素样蛋白-4（Angiopoietin-like protein 4,ANGPTL4）基因在3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中表达水平的变化,探讨ANGPTL4基因与脂肪细胞分化的关系。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,在3T3-L1前脂肪细胞分化成熟过程中（0-10 d）,采用油红O染色,观察脂肪细胞分化及脂质积聚情况;采用Real-time PCR、逆转录PCR技术检测脂肪细胞分化标志基因（LEPTIN,ADIPONECTIN）和ANGPTL4 mRNA表达;采用Western blot检测ANGPTL4蛋白表达。结果随着脂肪细胞诱导分化逐步深入,油红O染色显示,细胞中脂滴形成逐渐增多,达到占全视野95%以上;同时瘦素（LEPTIN）和脂联素（ADIPONECTIN）基因在诱导后的第2天开始表达并逐步增多,均提示脂肪细胞分化逐步成熟。ANGPTL4 mRNA和蛋白在前脂肪细胞中低表达,分化第2-6天ANGPTL4基因表达显著上调,分化第8-10天ANGPTL4基因表达保持在较高水平并趋于稳定。结论在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中ANGPTL4基因表达上调,ANGPTL4基因可能参与了脂肪细胞分化。     

Rh-SAA对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响

目的:通过检测不同浓度和不同时间点Rh-SAA干预的3T3-LI脂肪细胞对葡萄糖的转运情况,了解Rh-SAA对脂肪细胞胰岛素敏感性的影响.方法:采用不同浓度的Rh-SAA(1、10、20 μg/mL)干预3T3-LI脂肪细胞48 h及20 μg/mL Rh-SAA分别干预细胞6、12、24、48 h,采用3H-2-DG摄入法检测细胞对葡萄糖的转运率.结果:Rh-SAA显著减少3T3-L1脂肪细胞在胰岛素刺激下的葡萄糖摄取,呈剂量和时间依赖效应.结论:Rh-SAA能降低3T3-L1脂肪细胞对胰岛素的敏感性,提示炎症与胰岛素抵抗密切相关.     

睾酮对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的影响

目的观察睾酮对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的影响及胰岛素增敏剂的干预作用。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,并诱导其分化成熟,研究睾酮对脂肪细胞葡萄糖消耗量及甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)和甘油(Gly)等指标的影响及胰岛素增敏剂的干预作用。结果 5×10-7mol/L的睾酮刺激组葡萄糖消耗量明显降低,二甲双胍及吡格列酮处理组较睾酮组葡萄糖消耗量有所增加,睾酮刺激组较对照组TG增高,而Gly和FFA降低,二甲双胍和吡格列酮处理后,可使TG降低及Gly和FFA升高。结论环境中存在一定浓度的睾酮对脂肪细胞的糖脂代谢都有着不利的影响,而胰岛素增敏剂二甲双胍、吡格列酮可以改善这种不利影响。     

FTO基因在3T3-L1前体脂肪细胞成脂分化中的表达趋势

肥胖目前已成为一个重要的医学社会问题。学者认为肥胖的检出率近几十年大大提高与高热量饮食、活动减少密切相关，同时肥胖的遗传易感性也起到重要的作用。并希望通过各种方法筛选出肥胖的相关基因，FTO基因正是在这种背景下通过基因组相关性研究方法筛选出的肥胖相关基因。     

FTO基因在3T3-L1前体脂肪细胞成脂分化中的表达趋势

肥胖目前已成为一个重要的医学社会问题.学者认为肥胖的检出率近几十年大大提高与高热量饮食、活动减少密切相关,同时肥胖的遗传易感性也起到重要的作用[1].并希望通过各种方法筛选出肥胖的相关基因,FTO基因正是在这种背景下通过基因组相关性研究方法筛选出的肥胖相关基因[2-4].     

单核细胞趋化因子-1对小鼠3T3-L1脂肪细胞B族Ⅰ型清道夫受体表达的影响

目的:观察单核细胞趋化因子-1( MCP-I)对小鼠3T3-LI脂肪细胞B族I型清道夫受体(SR-BI)膜蛋白表达的影响.方法:3T3-LI前脂肪细胞应用"鸡尾酒"法:0.5 mmol/L 1-甲基-3-异丁基黄嘌呤、1 umol/L地塞米松和10 mg/L胰岛素诱导分化成熟,油红O染色法鉴定;将诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞应用MCP-1按照不同浓度及时间进行干预,分为浓度梯度组:分别加入MCP-10 ng/mL、20 ng/mL、40 ng/mL、80 ng/mL,各作用48 h;时间梯度组:分别加入MCP-1 40ng/mL各作用Oh、24 h、48 h、72 h.流式细胞仪分别测定各组细胞表面SR-BI表达.结果:(1)3T3-L1前脂肪细胞诱导分化至第9~10 d,油红O染色示90%以上可见明显脂滴,分化为成熟脂肪细胞.(2)流式细胞仪浓度梯度组结果示:与MCP-10 ng/mL组相比,20 ng/mL、40 ng/mL、80 ng/mL组细胞表面SR-BI表达均下降,差异均有统计学意义(P均<0.01);流式细胞仪时间梯度组结果示:与MCP-1Oh组相比,48 h和72 h组细胞表面SR-BI表达亦均下降,差异亦均有统计学意义(P均<0,01).结论:MCP-1干预3T3-L1脂肪细胞后,SR-BI细胞表面SR-BI的表达呈浓度依赖性和时间依赖性减少,MCP-1抑制3T3-L1脂肪细胞SR-BI细胞表面SR-BI的表达.     

NYGGF4基因过表达对脂肪细胞线粒体的影响

摘要：目的：观察NYGGF4基因过表达对脂肪细胞线粒体的影响。 方法：构建NYGGF4基因表达载体,转染3T3-L1前体脂肪细胞,G418筛选表达NYGGF4细胞株后,用RT-PCR及western blot技术验证,建立NYGGF4稳定过表达细胞株。用透射电镜观察NYGGF4基因过表达对脂肪细胞线粒体形态的影响,实时荧光定量PCR检测NYGGF4基因过表达及对照空载脂肪细胞中核转录因子PGC1-α、NRF1、mtTF-A mRNA含量。 结果：RT-PCR及western blot均提示NYGGF4稳定过表达细胞株建立成功。NYGGF4基因过表达可以导致脂肪细胞线粒体形态异常,显著上调脂肪细胞PGC1-α mRNA表达,对NRF1、mtTFAmRNA水平无明显影响。 结论：NYGGF4基因过表达可以导致脂肪细胞线粒体损伤。     

SIK2 shRNA重组腺病毒载体构建及其在3T3-L1脂肪细胞的表达

目的构建特异性小鼠盐诱导基因（Salt induced kinase2,SIK2）的shRNA腺病毒载体,干扰脂肪细胞中SIK2的表达。方法设计3对靶向SIK2的shRNA,插入穿梭质粒pENTR/U6载体,转染3T3-L1脂肪细胞,通过Real-timePCR方法筛选最佳沉默SIK2效果的穿梭质粒,经腺病毒同源重组后,重组小鼠SIK2shRNA腺病毒载体经脂质体转染HEK293A细胞,在细胞内包装获得腺病毒颗粒AdV-SIK2-shRNA,并进行大量扩增和纯化。纯化的腺病毒感染成熟的3T3-L1脂肪细胞,通过Real-time PCR及免疫印迹法检测鼠SIK2在3T3-L1脂肪细胞中的表达水平。结果纯化后的Ad-shRNA-SIK2重组腺病毒载体可特异下调成熟3T3-L1脂肪细胞SIK2 mRNA和SIK2蛋白的表达。结论干扰3T3-L1脂肪细胞SIK2表达的短发夹RNA重组腺病毒载体构建成功。     

利培酮抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化

目的研究利培酮对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。方法采用经典的激素鸡尾酒法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞,油红O染色观察。向诱导培养基中加入利培酮研究其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。结果用激素鸡尾酒法成功地将3T3-L1前脂肪细胞诱导为成熟的脂肪细胞。0.1、1、10μmol/L的利培酮均能够抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化。结论利培酮能够抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化。     

3T3-L1前脂肪细胞的体外培养及胰岛素样生长因子1对其增殖、分化的作用

背景：前脂肪细胞是一类具有增殖和向脂肪细胞分化潜力的特异化的前体细胞，如果能够找到可以强力促进前脂肪细胞增殖和分化的因子或药物，在脂肪组织移植的同时使用，则有希望提高脂肪组织的移植效果。目的：摸索体外培养经典的3T3-L1前脂肪细胞的最佳培养环境并积累培养经验，观察胰岛素样生长因子1对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化的影响，并探求胰岛素样生长因子1的最佳作用剂量。设计、时间及地点：以细胞为对象的对照观察实验，于2007—10／2008-02在辽宁医学院科学实验中心完成。材料：3T3-L1前脂肪细胞株购于上海中科院生命科学院；胰岛素样生长因子1购于美国Biological公司。方法：根据3T3一L1前脂肪细胞的体外培养条件分为6组：空白对照组应用含体积分数为0．1的胎牛血清的标准高糖DMEM培养基培养；各实验组分别应用含有5，10，20，50，100ug／L胰岛素样生长因子1的含体积分数为0．1的胎牛血清的高糖DMEM培养基培养。主要观察指标：倒置显微镜下观察各组3T3-L1前脂肪细胞的生长、增殖及分化情况并拍照记录。待细胞铺满瓶底达到单层汇合时，应用流式细胞仪检测细胞周期，应用四甲基偶氮唑盐比色法测定3T3-L1前脂肪细胞的增殖率；应用油红O染色提取法测定3T3-L1前脂肪细胞内脂肪含量的增殖率。结果：①倒置显微镜下观察分化前3T3-L1前脂肪细胞呈梭形，胞浆内无脂滴，分化后3T3-L1前脂细胞呈圆形，胞浆内含有大量的脂滴，脂滴聚集于核周，被油红O染成橙红色，形成“戒环”样形态。②四甲基偶氮唑盐比色法和油红O染色提取法检测结果均显示，不同剂量的胰岛素样生长因子1组中3T3．L1前脂肪细胞的增殖率及细胞内脂肪含量的增殖率均高于空白对照组（P〈0．05），胰岛素样生长因子120ug／L组对3T3-L1前脂肪细胞的增殖、分化作用最为明显（P〈0．05）；流式细胞仪的分析结果与四甲基偶氮唑盐比色法及油红O染色提取法的检测结果基本一致。结论：体外细胞培养实验表明，胰岛素样生长因子1对3T3-L1前脂肪细胞的增殖、分化有明显促进作用，其促进作用与浓度并非成正比，而是达到一定剂量后，其促进作用不再增加，而这个剂量接近本实验的最佳剂量值，即20ug/L。     

GEM基因在3T_3-L_1脂肪细胞诱导分化过程中的表达变化

目的观察3T3L1前体脂肪细胞诱导分化过程中GEM基因表达水平的变化,探讨GEM基因与肥胖发生的关系。方法体外培养3T3L1前体脂肪细胞,采用RTPCR技术检测分化不同时段的3T3L1脂肪细胞中GEM基因的mRNA表达水平。结果在3T3L1脂肪细胞的诱导分化过程中,GEM基因mRNA表达水平无显著变化(P>0.05)。结论GEM基因在脂肪细胞分化、脂质合成和积聚过程中的作用有待进一步研究。     

SIK2抑制3T3-L1脂肪细胞脂肪合成的效应及机制

目的探讨盐诱导基因(Salt Inducible Kinase 2,SIK2)对3T3-L1成熟脂肪细胞生脂的影响及其机制。方法利用小鼠SIK2重组腺病毒表达载体,转染3T3-L1成熟脂肪细胞,采用油红O染色提取法和RT-PCR,测定脂肪细胞生脂及其关键酶和转录因子固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)mRNA水平的变化。结果与未转染组和空载体转染组相比,SIK2转染组油红O染色提取的脂滴含量降低56%(P<0.05),脂肪合成相关酶乙酰辅酶A羧化酶(ACC2)、脂肪酸合酶(FAS)、硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)、甘油-3-磷酸转酰酶(GPAT)、二酰基甘油转酰酶1(DGAT1)的mRNA表达水平分别下降了31%、61%、57%、60%、52%(P<0.05),转录因子固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)mRNA的表达水平减少了28%(P<0.05)。结论 SIK2可抑制3T3-L1脂肪细胞脂肪合成代谢,其机制可能与下调甘油三脂合成代谢关键酶及转录因子SREBP1的基因表达有关。     

大黄素对3T3-L1前脂肪细胞诱导分化的作用

目的:观察大黄素(emodin)对3T3-L1前脂肪细胞的诱导分化作用,并探讨其可能机制。方法:采用油红O染色、三酰甘油(TG)含量测定及3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)活性测定等方法检测脂肪细胞的分化程度;用实时定量PCR法检测大黄素对脂肪细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)mRNA、CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)mRNA和脂肪酸结合蛋白ap2mRNA表达的影响;用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定3T3-L1前脂肪细胞的增殖;运用表面等离子体共振技术(SPR)测定大黄素与PPARγ2的亲和力。结果:大黄素呈剂量依赖性促进3T3-L1前脂肪细胞的诱导分化,50μmol/L大黄素可使脂肪细胞内TG含量和GPDH活性分别增加约22%及60%。大黄素可显著升高脂肪细胞的PPARγ2mRNA、C/EBPαmRNA及脂肪酸结合蛋白ap2mRNA表达水平。同时,50μmol/L大黄素可使前脂肪细胞的细胞增殖率下降约17%。SPR检测结果显示,大黄素具与PPARγ2结合活性,提示其可能是PPARγ2的配体。结论:大黄素作为PPARγ2的配体,能促进脂肪细胞分化、抑制前脂肪细胞增殖,而该过程可能是通过上调PPARγ2、C/EBPα的表达来实现的。     

Possible involvement of β-PKC rather than that of α-PKC in differentiation of 3T3–L1 cells to adipocytes

Abstract. The change of subspecies of protein kinase C (PKC) was studied in 3T3—L1 cells in terms of their differentiation to adipocytes. 3T3—L1 cells feasible to differentiate to adipocytes by exposure to 3–isobutyl-1–methylxanthine (IBMX) and dexamethasone had both α- and β-PKC. However, 3T3–Ll cells unfurnished with such feasibility had only α-PKC. α-PKC, therefore, seems to be more deeply involved in differentiation of 3T3–LI cells to adipocytes than α-PKC.     

Minimal effects of Darunavir on adipocyte differentiation and metabolism in 3T3-L1 cells

Darunavir (DRV) has been confirmed to be an effective option for antiretroviral-naïve and experienced patients. It results in a more favorable lipid and glucose profile than other antiretrovirals. The objective of this study was to investigate the molecular mechanisms that could underline the lack of toxicity of DRV to metabolism and the better profile observed in HIV-infected patients in comparison with other drugs. The effects of DRV on adipogenesis were evaluated by oil red O staining after 8 days of induction of differentiation in 3T3-L1 cells, a very adequate and convenient cell culture model for investigation of adipose function. Several adipogenic genes (C/EBPα, PPARγ, Pref-1, and AP2) were analyzed by real time-PCR. Fully differentiated adipocytes were also incubated with DRV for 24 h and glucose utilization and lactate and glycerol production were quantified by use of an autoanalyzer. No effects of DRV on murine adipocyte differentiation were observed. Significant decreases in lipolysis, glucose uptake, and lactate production were observed at the highest concentration used (50 μM) (p < 0.01–p < 0.001). However, DRV treatment did not modify the percentage of glucose transformed into lactate. Co-treatment with RTV did not induce any further effects on lipolysis and glucose metabolism. This study suggests that the decrease in lipolysis observed after DRV treatment could explain, at least in part, the lower plasma lipids observed in patients under DRV/r treatment in comparison with other drugs. The lack of effects of RTV co-treatment on glucose and lipid metabolism emphasizes the safety of this treatment.