miR-182-5p在膀胱癌中的表达及其机制

  目的  探究miR-182-5p及FOXO3在膀胱癌中的表达意义及其参与膀胱癌可能的机制。  方法  收集2017年6月至2019年6月64例于郑州人民医院行手术切除膀胱癌患者的组织标本和临床资料,采用RT-qPCR检测膀胱癌组织及膀胱癌细胞中的miR-182-5p和FOXO3表达,按照其表达水平分为miR-182-5p高表达组和miR-182-5p低表达组、FOXO3高表达组和FOXO3低表达组,采用Western blot实验检测FOXO3蛋白的表达。采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-182-5p和FOXO3与膀胱癌患者预后的相关性。采用双荧光素酶报告实验分析miR-182-5p与FOXO3的靶向关系,并采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western blot检测转染miR-182-5p抑制剂对FOXO3表达的影响;分别采用CCK-8、Transwell实验和流式细胞术检测转染miR-182-5p抑制剂对T24细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。  结果  miR-182-5p在膀胱癌组织中的表达量为2.27±0.66,显著高于癌旁组织的1.04±0.36,两者比较差异具有统计学意义（P<0.001）,与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移有关（P<0.05）;FOXO3在膀胱癌组织中低表达,与肿瘤大小、分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关（P<0.05）;miR-182-5p高表达组、FOXO3低表达组的患者的生存率显著低于miR-182-5p低表达组、FOXO3高表达组（P=0.038,P=0.004）。T24细胞中miR-182-5p高表达（P<0.05）。抑制miR-182-5p上调FOXO3表达,抑制miR-182-5p表达能抑制T24细胞的增殖和侵袭,促进细胞凋亡（P<0.05）。  结论  miR-182-5p在膀胱癌组织中高表达,而FOXO3低表达。miR-182-5p促进膀胱癌细胞的增殖和侵袭,抑制其凋亡,可能与负调控FOXO3有关。      

circFBXL5 通过靶向miR-515-5p 影响膀胱癌T24 细胞的恶性生物学行 为及其分子机制

目的：探讨circFBXL5 通过靶向miR-515-5p 影响膀胱癌T24 细胞的增殖、迁移、侵袭及其分子机制。方法：收集 2020 年4 月至2020 年6 月间在苏州市中西医结合医院手术切除的41 例膀胱癌组织及其癌旁组织,采用qPCR 法检测circFBXL5、 miR-515-5p 的表达;双荧光素酶报告实验验证circFBXL5 与miR-515-5p 之间的靶向关系,体外培养人膀胱癌T24 细胞,实验分为 si-NC 组、si-circFBXL5 组、anti-miR-NC+si-circFBXL5 组和si-circFBXL5+anti-miR-515-5p 组;MTT 法、细胞克隆形成实验、FCM、 Transwell 实验和WB 法分别检测转染后T24 细胞的增殖、细胞克隆形成、迁移、侵袭和凋亡及BAX、Bcl-2 蛋白水平。结果：膀胱 癌组织中 circFBXL5 呈高表达,miR-515-5p 呈低表达（均 P<0.05）;circFBXL5 靶向且负向调控 miR-515-5p 的表达;敲减 circFBXL5 后T24 细胞的增殖抑制率、凋亡率和BAX 蛋白水平均显著增高（均P<0.05）,细胞克隆形成数和迁移、侵袭细胞数均显 著减少（均P<0.05）,Bcl-2 蛋白水平显著降低（P<0.05）;同时敲减circFBXL5 和miR-515-5p 可部分逆转敲减circFBXL5 对T24 细胞增殖的抑制作用。结论：circFBXL5 通过调控 miR-515-5p 表达影响膀胱癌 T24 细胞的增殖、迁移、侵袭,circFBXL5 和 miR-515-5p 可能膀胱癌治疗的潜在分子靶标。     

circ_0001429 靶向miR-139-5p/TGIF1 分子轴调控膀胱癌T24 细胞恶行生物学行为

目的：探究circ_0001429 通过调控miR-139-5p/ 转录生长因子影响因子1（TGF-interacting factor 1,TGIF1）分子轴对膀胱癌T24 细胞恶性生物学行为的影响。方法：采用qPCR实验检测circ_0001429 在膀胱癌细胞系SW780、T24、5637 和人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1 中的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p、circ_0001429 与TGIF1 之间的靶向调控关系;将T24 细胞分为NC组、sh-circ_0001429 组、miR-139-5p mimics 组、sh-TGIF1 组、pcDNA-circ_0001429+sh-TGIF1 组、miR-139-5p mimics+pcDNA-TGIF1 组以及sh-circ_0001429+miR-139-5p inhibitor 组,Western blotting 检测各组细胞中TGIF1 的表达水平,CCK-8 法、Transwell 实验和流式细胞术分别检测circ_0001429、miR-139-5p 和TGIF1 对T24 细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。结果：circ_0001429 在3 珠膀胱癌细胞系中呈高表达（均P<0.01）,敲降circ_0001429 可以显著抑制T24 细胞增殖、侵袭、迁移并促进细胞凋亡（P<0.05 或P<0.01）;双荧光素酶报告基因验证结果显示,circ_0001429 与miR-139-5p、miR-139-5p 与TGIF1 存在靶向关系;过表达miR-139-5p 显著抑制T24 细胞增殖、侵袭、迁移并促进细胞凋亡（均P<0.01）。回复实验进一步证实circ_0001429 和TGIF1 竞争性结合miR-139-5p 促进T24 细胞增殖、侵袭、迁移且抑制细胞凋亡（均P<0.01）。结论：circ_0001429 与TGIF1 竞争结合miR-139-5p 促进膀胱癌细胞T24 的增殖、侵袭、迁移且抑制细胞凋亡。     

miR-372-3p 在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的：检测miR-372-3p 在膀胱癌组织和转染miR-372-3p mimics 膀胱癌细胞中的表达,研究miR-372-3p 对膀胱癌5637 和T24 细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法：采集2016 年3 月至2017 年1 月武汉中心医院收治的6 例膀胱癌患者癌及癌旁组织（距离肿瘤边缘>5 cm）,qPCR检测膀胱癌及癌旁组织miR-372-3p 表达。采用脂质体转染法将miR-372-3p mimics 或者miRNC转入膀胱癌5637 和T24 细胞。用qPCR和Western blotting 检测转染miR-372-3p mimics 和miR-NC膀胱癌细胞miR-372-3p 和ATAD2 mRNA和蛋白E-cadherin、N-cadherin 蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期分布,MTT法和集落形成实验检测细胞增殖和集落形成能力,划痕实验和Transwell 侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果：膀胱癌组织miR-372-3p mRNA的表达显著低于癌旁组织（0.65±0.56 vs 1.76±0.34,P<0.01）。和转染miR-NC膀胱癌细胞相比,转染miR-372-3p mimics 膀胱癌细胞的miR-372-3p mRNA表达显著增加,ATAD2 mRNA和蛋白的表达显著降低,E-cadherin 蛋白表达上调,N-cadherin 蛋白表达下调,细胞周期明显阻滞,细胞集落形成和增殖能力显著降低,细胞迁移数和侵袭数减少。结论：miR-372-3p 的低表达可能与膀胱癌的发生发展有关,其通过靶向调控ATAD2 抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能成为膀胱癌生物治疗的新靶标。     

微小RNA-106a在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌T24细胞增殖、侵袭作用的影响

目的:观察微小RNA-106a（miR-106a）在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌T24细胞增殖、侵袭作用的影响。方法:提取35例膀胱癌组织及正常膀胱组织中的总RNA，实时定量RT-PCR法检测miR-106a在膀胱癌组织及正常膀胱组织中的表达量；培养膀胱癌T24细胞，分成实验组及对照组，实验组转染miR-106a mimics，对照组转染空白脂质体，噻唑蓝(MTT)法检测转染miR-106a mimics后对T24细胞增殖的影响，流式细胞仪检测T24细胞周期变化，Transwell侵袭小室检测T24细胞侵袭能力。结果:膀胱癌组织中miR-106a的表达量显著低于正常膀胱组织。膀胱癌T24细胞转染miR-106a mimics后，T24细胞增殖能力降低，细胞周期停滞于G1期，Transwell侵袭小室检测提示T24细胞侵袭能力降低。结论:miR-106a的表达量在膀胱癌组织中减少，miR-106a过表达抑制膀胱癌T24细胞的增殖及侵袭能力。     

转染Livin基因对膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响的研究

目的:观察凋亡抑制蛋白Livin对于膀胱癌细胞系增殖和凋亡的影响.方法:采用脂质体转染法将Livin基因转入膀胱癌T24细胞系,经G418筛选后获得稳定表达Livin的亚克隆细胞系T24/Livin 及仅转染载体的T24/pcDNA3.1( ).应用Western blot RT-PCR法来检测Livin 在转染细胞中的表达;应用克隆形成试验检测细胞增殖活性;用丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)分别作用转染前后的膀胱癌细胞系24 h,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测转染前后细胞生长抑制率,应用流式细胞仪(FCM)及吖啶橙(AO)染色检测细胞凋亡.结果:成功建立了稳定表达Livin的亚克隆细胞系T24/Livin 及T24/pcDNA3.1( ).Western blot及RT-PCR法检测结果表明Livin在T24/Livin 中表达阳性,而在T24与T24/pcDNA3.1( )中表达阴性.Livin的表达导致了膀胱癌细胞系更强的细胞增殖能力(P<0.01); 经MMC作用24 h后,T24/pcDNA3.1( )与T24的细胞凋亡率分别为(21.38±2.27)%和(19.60±2.31)%,而T24/Livin 的细胞凋亡率则为(8.65±1.47)%,Livin表达阳性的细胞较阴性组的细胞凋亡率明显减少,差异有统计学意义,P<0.01.结论:Livin基因在膀胱癌细胞系T24中可以诱导细胞增殖,并赋予其在化疗中具有更强的抗凋亡能力.     

miR-138-5p靶向调控SOX4对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

目的:研究微小RNA-138-5p(miR-138-5p)通过调控SOX4抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡的机制。方法:分别利用miR-NC与miR-138-5p体外模拟物(mimics)转染骨肉瘤细胞系MG63,构建阴性对照与miR-138-5p上调表达模型;采用CCK8法检测细胞增殖活力;采用Transwell实验检测细胞侵袭能力和迁移能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡变化;通过双荧光素酶活检检测miR-138-5p与SOX4的相互作用关系;利用Real-time PCR(RT-PCR)法检测不同处理组中miR-138-5p与SOX4的mRNA水平表达变化;利用Western blot法检测不同处理组中SOX4及凋亡相关蛋白BAX与BCL2的表达变化。结果:利用miR-138-5p mimics转染MG63细胞后,细胞中miR-138-5p表达较对照组显著上调(t=8.661,P=0.001);miR-NC与miR-138-5p mimics分别转染细胞24 h、48 h以及72 h后,CCK8结果显示MG63细胞的增殖能力较对照组显著降低(24 h:t=4.145,P...     

miR-542-5p对卵巢癌细胞SKOV3恶性生物学行为的影响

目的:探讨miR-542-5p对卵巢癌细胞系SKOV3的增殖、迁移、侵袭、凋亡等恶性生物学行为的影响。方法:应用miR-542-5p mimics和mimics阴性对照 (mimics NC)分别转染卵巢癌细胞SKOV3。采用MTT实验、划痕试验、Transwell实验和流式细胞术检测过表达miR-542-5p对SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。结果:过表达miR-542-5p后,SKOV3细胞的增殖能力较阴性对照和正常SKOV3细胞明显降低（P<0.05）;Transwell实验和划痕实验显示,过表达miR-542-5p后,细胞的迁移和侵袭能力较阴性对照组明显下降（P<0.05）;流式细胞术结果显示,过表达miR-542-5p后,SKOV3细胞的凋亡率较阴性对照组升高,而对细胞周期无影响。结论:过表达miR-542-5p可以抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外增殖、迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡。提示miR-542-5p在卵巢癌恶性生物学进程中可能发挥重要作用。     

Circ＿0058063通过miR-338-3p靶向SOX4调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:探讨Circ＿0058063通过miR-338-3p靶向SOX4调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法:qRT-PCR、Western Blot分别检测正常人尿路上皮细胞系SV-HUC-1细胞、T24膀胱癌细胞Circ＿0058063、miR-338-3p、SOX4表达;将si-NC、si-Circ＿0058063、si-Circ＿0058063+inhibitor NC、si-Circ＿0058063+miR-338-3p inhibitor分别转染至T24细胞并命名为si-NC组、si-Circ＿0058063组、si-Circ＿0058063+inhibitor NC组、si-Circ＿0058063+miR-338-3p inhibitor组,未做任何处理的T24细胞记为NC组。双荧光素酶报告基因实验检测Circ＿0058063、miR-338-3p、SOX4关系;qRT-PCR检测T24细胞中Circ＿0058063、miR-338-3p表达;CCK-8法检测T24细胞增殖情况;流式细胞术检测T24细胞凋亡率;Transwell检测T24细胞侵袭、迁移数量;Western...     

MicroRNA-30a在膀胱癌中的表达及作用

目的 探究微小RNA(miRNA)在人膀胱癌细胞系中的表达及其对人膀胱癌细胞增殖、凋亡及迁移侵袭能力的影响。方法 应用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)法检测膀胱癌细胞系(5637和T24)和膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)中miRNA-30a的表达水平。通过对T24细胞转染miR-30a mimic和5637细胞转染miR-30a inhibitor上调或下调miR-30a的表达,并对其分别转染NC mimic和NC inhibitor作为对照。利用流式细胞技术、MTT法和Transwell法探究miR-30a的表达对膀胱癌细胞增殖、凋亡以及侵袭能力的影响。结果 在两种膀胱癌细胞系(5637和T24)中miRNA-30a的表达显著低于正常膀胱细胞系SV-HUC-1,并且在恶性度较高的T24膀胱癌细胞中其表达水平明显低于恶性度相对较低的5637细胞系。细胞转染72h后,miR-30a mimic组T24细胞OD值(0.83±0.09)明显低于NC mimic组(1.21±0.12)(P=0.003);miR-30a inhibitor组5637细胞OD值(1.28±0.14)高于NC inhibitor组(1.09±0.14)(P=0.019)。miR-30a mimic组T24细胞凋亡率(21.27±2.42)%明显高于NC mimic组(10.61±1.29)%;miR-30a inhibitor组5637细胞凋亡率(6.78±2.57)%明显低于NC mimic组(13.42±1.40)%,差异均具有统计学意义(P=0.0002,P=0.0014)。miR-30a mimic组穿膜细胞数(183.57±16.61)低于NC mimic组(465.80±9.20)(P＜0.0001);miR-30a inhibitor组(581.25±11.02)高于NC mimic组(397.13±7.57)(P＜0.0001)。结论 miR-30a表达的上调能够抑制膀胱癌细胞的增殖,促进细胞的凋亡,并降低膀胱癌细胞的迁移及侵袭的能力。膀胱癌细胞中miR-30a的低表达可能与膀胱癌的发生发展及转移有关。     

miR-486-5p对胃癌细胞株SGC7901生物学行为的影响

背景与目的：既往研究表明微小RNA-486-5p(miR-486-5p)在多种肿瘤的进展中起重要作用,但其在胃癌中作用的研究较少,本研究旨在探讨miR-486-5p对胃癌细胞株SGC7901增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法：使用实时定量PCR(quantification real-time PCR,qRT-PCR)检测胃癌细胞株SGC7901及胃黏膜上皮细胞GES-1中miR-486-5p的表达,构建miR-486-5p过表达质粒,使用脂质体法瞬时转染胃癌细胞株SGC7901,qRT-PCR检测转染细胞后miR-486-5p的表达丰度,噻唑蓝(MTT)法及流式细胞仪检测细胞的增殖及凋亡情况,Transwell小室迁移实验检测细胞的迁移能力。结果：miR-486-5p在SGC7901细胞中表达明显下调,SGC7901细胞转染miR-486-5p过表达质粒后,miR-486-5p表达明显上调,细胞增殖、迁移能力降低,凋亡率增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：miR-486-5p可抑制胃癌细胞株SGC7901的增殖和迁移。     

miR-93-5p靶向CCNG2基因对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:研究miR-93-5p对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR、Western blot检测甲状腺癌细胞SW579、人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中miR-93-5p、CCNG2的表达;将anti-miR-93-5p组（转染anti-miR-93-5p）、anti-miR-NC组（转染anti-miR-NC）、pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-CCNG2组（转染pcDNA-CCNG2）、anti-miR-93-5p+si-con组（共转染anti-miR-93-5p和si-con）、anti-miR-93-5p+si-CCNG2组（共转染anti-miR-93-5p和si-CCNG2）,均用脂质体法转染至SW579细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1相比,甲状腺癌细胞SW579中miR-93-5p表达显著升高,CCNG2表达显著降低（P<0.05）;抑制miR-93-5p、过表达CCNG2均可抑制SW579细胞增殖,促进凋亡;miR-93-5p可直接抑制SW579细胞中CCNG2的表达,敲减CCNG2可逆转抑制miR-93-5p对SW579细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:抑制miR-93-5p可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向负调控CCNG2有关,将可为分化型甲状腺癌的预防和治疗提供新靶点。     

miR-194-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制探讨

目的:分析miR-194-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法:采用生物信息学方法对miR-194-3p的表达情况以及预后信息进行统计分析。采用荧光定量PCR检测胃癌细胞系中miR-194-3p的表达情况;采用CCK-8实验、克隆形成实验和流式细胞技术检测miR-194-3p对胃癌细胞增殖和凋亡能力的影响;Western blot检测过表达miR-194-3p后Caspase3的表达情况。结果:与癌旁组织相比,miR-194-3p在胃癌组织中显著高表达。TCGA预后分析显示,miR-194-3p的高表达与良好的预后相关。与GES-1相比,miR-194-3p在6种胃癌细胞系中均显著低表达。CCK-8和克隆形成实验结果显示,与空载组相比,慢病毒转染过表达miR-194-3p后显著抑制胃癌细胞增殖。流式细胞术显示,miR-194-3p可显著促进胃癌细胞凋亡。Western blot结果显示,Caspase3的表达在miR-194-3p过表达的胃癌细胞中显著增加。结论:miR-194-3p在胃癌细胞中低表达,miR-194-3p的过表达可显著抑制胃癌细胞的增殖,并促进细胞凋亡。其中miR-194-3p促进凋亡的机制可能是通过Caspase3的凋亡相关通路发挥作用。     

miR-138靶向调控SIRT1表达及其对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-138（miRNA-138）在膀胱癌细胞中的表达情况,并研究其对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的靶基因。方法 采用实时定量PCR（QPCR）法检测膀胱癌细胞T24和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中miR-138的表达水平。将T24细胞分为3组：未转染组、miR-138对照组（转染阴性对照片段）和miR-138转染组（转染miR-138 mimics）。采用MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞的凋亡情况;Western blotting检测细胞中沉默信息调节因子1（SIRT1）蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-138与SIRT1间的靶向关系。结果 膀胱癌T24细胞中miR-138的表达量为0.57±0.19,低于SV-HUC-1细胞的1.00±0.26（P＜0.05）。miR-138转染组的miR-138表达量为2.59±0.67,高于未转染组的1.00±0.36和miR-138对照组的1.08±0.49（P＜0.05）。miR-138转染组T24细胞的增殖率显著低于未转染组和miR-138对照组（P＜0.05）。 转染48 h后,miR-138转染组的细胞凋亡率为（29.8±1.9）％,高于未转染组的（5.8±1.2）％和miR-138对照组的（7.7±0.9）％（P＜0.05）。miR-138转染组SIRT1的相对表达量为0.59±0.22,低于未转染组的1.00±0.35和miR-138对照组的1.20±0.42（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验证明SIRT1是miR-138的直接作用靶点。结论 miR-138在膀胱癌细胞中低表达,可能通过靶向SIRT1调控膀胱癌细胞的增殖和凋亡。     

lncRNA LINC01410通过miR-205-5p调控胶质瘤A172细胞的增殖、凋 亡和替莫唑胺敏感性

目的：探讨长链非编码RNA（lncRNA）LINC01410对胶质瘤A172细胞增殖、凋亡和替莫唑胺（temozolomide, TMZ）敏 感性的影响及其机制。方法: 用qPCR法检测胶质瘤细胞系H4、SHG-44、A172和正常星形胶质细胞HA1800中LINC01410表达 水平。将LINC01410 shRNA、shRNA control和miR-205-5p 抑制剂（inhibitor）、inhibitor control转染至A172细胞,MTT法、流式细 胞术分别检测400 μmol/L TMZ处理后,转染细胞的增殖活性和凋亡水平,WB法检测细胞中Bax、Bcl-2、cyclin D1、p27的表达。 在线生物信息学软件LncBase分析LINC01410的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证LINC01410与miR-205-5p的靶向关系。 结果: LINC01410在3种胶质瘤细胞中的表达水平均显著高于正常星形胶质细胞HA1800（均P<0.01）,以在A172细胞中的表达 水平最高（P<0.01）。转染LINC01410 shRNA和TMZ 处理后 ,A172 细胞的增殖能力下降、G1 期细胞比例和凋亡率均升高 （均 P<0.01）,细胞中 Bax、p27 表达水平升高而 Bcl-2、cyclin D1 表达水平下降（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实 LINC01410 靶向结合 miR-205-5p,下调 LINC01410 促进 miR-205-5p 表达。转染 miR-205-5p 抑制剂可逆转下调 LINC01410 和 TMZ处理对A172细胞增殖、周期和凋亡的影响。结论: 下调lncRNA LINC01410可抑制胶质瘤A172细胞增殖、阻滞细胞周期、 诱导细胞凋亡且提高对TMZ敏感性,其发生机制似与LINC01410对miR-205-5p的靶向作用有关。     

miR-409-5p对肝癌细胞系HepG2增殖及迁移的影响

目的 观察过表达miR-409-5p对肝癌细胞系HepG2增殖及迁移能力的影响。方法 利用miR-409-5p mimics进行转染肝癌细胞系HepG2,并通过实时荧光定量PCR进行验证。高表达miR-409-5p后,使用MTT法和划痕实验分别检测HepG2细胞增殖能力及迁移能力的变化。结果 MTT实验显示,HepG2细胞转染miR-409-5p mimics后细胞增长趋势减缓,且随miR-409-5p mimics浓度和时间成正比。划痕实验显示,在24h和48h两个时间点三组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05),证实过表达miR-409-5p mimics的细胞体外迁移能力明显低于转染阴性对照组(NC mimics)组和对照组。结论 上调miR-409-5p可抑制肝癌细胞系HepG2的增殖及迁移能力。     

miR-32-5p通过调节Twist1抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-32-5p在甲状腺癌组织中的表达及其对甲状腺癌细胞生物学行为的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测甲状腺癌组织和对应癌旁组织中miR-32-5p的表达水平,筛选miR-32-5p高表达的甲状腺癌细胞系TPC-1细胞和低表达的甲状腺癌细胞系KTC-1细胞。采用miR-32-5p inhibitor转染TPC-1细胞(inhibitor-miR-32-5p)和miR-32-5p mimics转染KTC-1细胞(mimics-miR-32-5p),另分别转染无关系列作为阴性对照(inhibitor-NC和mimics-NC)。使用平板克隆形成、CCK-8法检测各组细胞增殖能力,划痕实验、Transwell小室法检测各组细胞迁移、侵袭能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blotting检测各组细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达水平。采用荧光素酶报告基因测定Twist1与miR-32-5p的关系;利用转染法分别上调mimics-miR-32-5p-KTC-1细胞及沉默inhibitor-miR-32-5p-TPC-1细胞中Twist1的表达...     

miR-195-5p靶向FGF2 抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞恶性生物学行为

目的：探讨miR-195-5p 通过靶向FGF2 抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的分子机制。方法：HEC-1B细胞培养与转染完成后分为4 组：HEC-1B组、miR-195-5p mimic组、pLV-FGF2 组和miR-195-5p+FGF2 组。qRT-PCR检测细胞miR-195-5p 和FGF2 mRNA水平,荧光素酶实验验证miR-195-5p 与FGF2 的靶向关系,Western blotting 检测FGF2 表达水平,CCK-8 法检测HEC-1B细胞增殖水平,流式细胞术检测HEC-1B细胞凋亡率,Transwell 实验检测HEC-1B细胞侵袭能力,划痕实验检测HEC-1B细胞迁移能力。结果：与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic 组miR-195-5p 表达升高、FGF2 mRNA水平下降(均P< 0.01);miR-195-5p 可直接靶向FGF2。与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic 组FGF2 的蛋白表达水平下降,pLV- FGF2 组FGF2 的蛋白水平明显上升,且miR-195-5p+FGF2 组FGF2 的蛋白表达水平低于pLV- FGF2 组(均P< 0.01)。miR-195-5p mimic 组细胞增殖水平低于HEC-1B组,pLV-FGF2 组细胞增殖水平高于HEC-1B组(均P< 0.01)。与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic 组细胞凋亡率增加,pLV- FGF2 组细胞凋亡率降低,且miR-195-5p+ FGF2 组细胞凋亡率高于pLV- FGF2 组(均P< 0.01)。与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率下降,pLV- FGF2 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率上升,且miR-195-5p+FGF2 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率低于pLV- FGF2 组(均P<0.01)。结论: miR-195-5p 通过靶向FGF2 抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖、侵袭和迁移并促进细胞凋亡,其作为子宫内膜癌的治疗靶点。