根皮苷对过氧化氢诱导损伤PC12细胞的保护作用

目的探讨根皮苷对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法以H_2O_2损伤PC12细胞建立氧化损伤模型,随机分为空白对照组、模型组(400μmol·L~(-1) H_2O_2)、阳性对照(20μmol·L~(-1)N-乙酰半胱氨酸)组和不同浓度根皮苷(16、32、64μmol·L~(-1))预处理组。采用MTT法检测细胞活力,显微镜观察细胞形态,ELISA检测细胞活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力,Western blot检测NF-E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果模型组细胞活力较空白对照组显著降低,ROS和MDA含量增加,SOD活力下降,Nrf2和HO-1蛋白表达下降(均P<0.05)。根皮苷低、中、高浓度(16、32、64μmol·L~(-1))组较模型组细胞存活率均显著提高,ROS和MDA含量降低,SOD活力升高,Nrf2和HO-1蛋白表达上调(均P<0.05)。结论根皮苷能够抑制H_2O_2对PC12细胞的氧化损伤,其保护作用可能与抑制氧化应激引起的细胞死亡并调控Nrf2信号通路有关。     

己酮可可碱联合骨髓间充质干细胞对高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡及氧化应激的影响

目的探讨己酮可可碱(PTX)联合骨髓间充质干细胞(MSC)对高糖诱导下小鼠肾小球系膜细胞凋亡和氧化应激的影响。方法葡萄糖30 mmol·L~(-1)刺激培养12 h的小鼠肾小球系膜细胞,肾小球系膜细胞分为细胞对照组、高糖组、高糖+MSC组(高糖系膜细胞与MSC按1∶10共培养)、高糖+MSC+PTX 0.1,0.3和1.0 mmol·L~(-1)组,孵育48 h。酶联免疫法检测系膜细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量;流式细胞术检测系膜细胞凋亡;Western印迹法检测系膜细胞中Bcl-2,Bax,胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9蛋白表达水平。结果与细胞对照组相比,高糖组系膜细胞的SOD活性显著降低,MDA和ROS含量显著升高(P<0.01)。与高糖组相比,高糖+MSC组、高糖+MSC+PTX 0.1,0.3和1.0 mmol·L~(-1)组SOD活性显著升高,MDA和ROS含量显著降低(P<0.01)。与细胞对照组相比,高糖组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);Bax、胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9蛋白表达水平显著升高(P<0.01),但Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与高糖组相比,高糖+MSC组、高糖+MSC+PTX 0.1,0.3和1.0 mmol·L~(-1)组细胞凋亡率显著降低(P<0.01);Bax、胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论 PTX联合MSC可通过减少肾小球系膜细胞凋亡以及抑制其氧化应激来改善糖尿病肾病。     

探讨氧化应激在良性前列腺增生和前列腺癌发病中的价值

目的分析探究良性前列腺增生与前列腺癌发病者中氧化应激的价值。方法检测分析比较丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和还原型谷胱甘肽(GSH)等氧化应激具体指标在正常小鼠细胞、小鼠良性前列腺增生细胞和小鼠前列腺癌细胞中表达情况。结果小鼠前列腺癌细胞中MDA、NO的水平明显高于小鼠良性前列腺增生细胞,小鼠良性前列腺增生细胞MDA、NO的水平明显高于正常小鼠细胞,小鼠前列腺癌细胞中GSH的水平明显低于鼠良性前列腺增生细胞,鼠良性前列腺增生细胞中GSH的水平明显低于正常小鼠细胞,且三种比较存在显著性差异,P<0.05。结论氧化应激和前列腺增生、前列腺癌发生密切相关,在小鼠的良性前列腺增生细胞、前列腺癌细胞中氧化应激的指标表达有差异性,小鼠前列腺癌细胞中氧化应激的反应明显强于小鼠良性前列腺增生细胞。     

大黄酚对氨诱导小鼠星形胶质细胞c-fos和c-jun mRNA表达下调的影响及其相关机制

目的探讨大黄酚对氨诱导小鼠星形胶质细胞的影响及相关机制。方法原代小鼠星形胶质细胞共分5组,分别同时加入氯化铵5 mmol·L~(-1)+大黄酚0.1,1.0和10.0 mg·L~(-1)(共3组),氯化铵5 mmol·L~(-1)+细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)抑制剂UO126(10μmol·L~(-1))组和氯化铵5 mmol·L~(-1)+p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB239063(10μmol·L~(-1))组,处理48 h。紫外分光法测定氧化应激指标丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮合酶(NOS)的活性;Western蛋白印迹法检测ERK1/2和p38 MAPK磷酸化水平,RT-PCR检测c-fos和c-jun m RNA的表达。结果与氯化铵5 mmol·L~(-1)相比,大黄酚1.0和10.0 mg·L~(-1)显著改善氨诱导的细胞氧化应激,降低了MDA和NO的含量及NOS的活性(P<0.05),明显升高了GSH-Px和SOD的活性(P<0.05);大黄酚1.0和10.0 mg·L~(-1)也明显降低氨诱导ERK1/2和p38 MAPK的磷酸化增加(P<0.05);大黄酚0.1,1.0和10.0 mg·L~(-1),UO126和SB239063均可逆转氨诱导c-fos和c-jun m RNA表达下调的作用(P<0.05)。结论大黄酚通过抗氧化机制影响ERK1/2和p38 MAPK的磷酸化,进而逆转氨诱导c-fos和c-jun m RNA表达下调。     

肾脏OAT1/3蛋白介导的玉屏风抗炎免疫药效配伍增效的药动学机制

目的本研究通过整体动物、细胞模型水平分别考察复方玉屏风(YPF)、各单味药黄芪、白术、防风以及部分有效成分对肾组织、细胞有机阴离子转运蛋白(OAT)蛋白及mRNA表达的影响,探讨YPF配伍后抗炎免疫药效增强的药动学分子机制及其与肾脏OAT1/3蛋白表达、活性的相关性。方法整体动物实验:大鼠随机分为生理盐水组、YPF组、黄芪组、白术组、防风组,灌胃连续给药21天。第21 d收集各组肾组织,Western印迹法及RT-PCR法检测肾组织中OAT1/3蛋白及mRNA的表达。细胞实验:培养人胚胎肾细胞HEK-293,采用MTT法确定YPF组、黄芪组、白术组、防风组及单一活性成分升麻苷组、5-O-甲基维斯阿米醇苷组、白术内酯Ⅰ组、白术内酯Ⅲ组的给药浓度,并以该浓度刺激细胞,应用Western印迹法及RTPCR法检测各给药组细胞的OAT1/3蛋白及mRNA表达变化。结果 YPF、防风水煎剂均能不同程度降低大鼠肾脏、HEK-293细胞中的OAT1/3蛋白及mRNA表达水平。白术水煎液降低了大鼠肾脏、HEK-293细胞的OAT1蛋白及mRNA的表达水平,但升高了OAT3蛋白及mRNA的表达水平;白术内酯Ⅰ(30 g·L~(-1))、升麻苷(30 g·L~(-1))、5-O-甲基维斯阿米醇苷(50 g·L~(-1))能显著降低HEK-293细胞中的OAT1/3蛋白及mRNA表达水平。白术内酯Ⅲ(30 g·L~(-1))降低了HEK-293细胞中OAT1蛋白及mRNA的表达,但明显升高OAT3蛋白及mRNA的表达水平。结论相较于黄芪,YPF、防风水煎剂和部分有效成分如升麻苷等,可明显抑制肾OAT1和OAT3 mRNA和蛋白的表达,进而抑制其底物的肾排泄,延长药物的体内作用时间,这可能即是YPF配伍增效的药动学机制之一。     

益甘宁颗粒对对乙酰氨基酚诱导小鼠肝损伤模型的保护作用

目的探讨益甘宁颗粒对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的小鼠肝损伤的保护作用以及作用机制。方法 60只小鼠随机分为6组,分为正常组、模型组、联苯双酯组(阳性对照)、益甘宁颗粒低剂量组(0.13 g·m L~(-1))、益甘宁颗粒中剂量组(0.39 g·m L~(-1))和益甘宁颗粒高剂量组(1.17g·m L~(-1)),各剂量组小鼠连续灌胃益甘宁颗粒14 d。以一次性腹腔注射APAP 300 mg·kg~(-1)诱导肝损伤模型,ELISA法测定小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的浓度,病理切片观察肝组织的损伤情况,硫代巴比妥酸检测丙二醛(MDA)含量;黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与模型组相比,益甘宁颗粒各剂量组小鼠血清中AST、ALT的浓度均降低;肝脏较完整、清晰,只有少量细胞坏死;MDA含量显著降低(P<0.01);SOD活性较模型组显著升高(P<0.01)。结论益甘宁颗粒对APAP损伤的肝细胞具有很好的保护作用,这可能与其抗自由基有关。     

依帕司他抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激的分子机制

目的探究依帕司他对高糖诱导的肾小球系膜细胞抑制氧化应激的分子机制。方法将106个肾小球系膜细胞转移至培养瓶中,分为正常生理浓度葡萄糖(5.5 mmol·L~(-1))组、高浓度葡萄糖(30 mmol·L~(-1))组、依帕司他高剂量浓度组(10μmol·L~(-1))、依帕司他中剂量浓度组(1μmol·L~(-1))、依帕司他低剂量浓度组(0.1μmol·L~(-1)),在37℃,体积分数5%CO_2培养箱内于无血清培养基培养48 h。分别测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,T-SOD)、铜锌-超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、一氧化氮(NO)含量。采用western-blot方法分别测定肾小球系膜细胞内硝化酪氨酸蛋白(NT)来反映肾小球细胞内过氧亚硝基阴离子(ONOO~-)的生成量。结果与高浓度葡萄糖组对比,依帕司他各剂量组中的肾小球系膜细胞内ROS含量显著地降低;系膜细胞中T-SOD和Cu/Zn-SOD含量显著升高;系膜细胞中GSH的含量无显著变化。与高浓度葡萄糖组相比,依帕司他各剂量组的系膜细胞中NO含量显著地升高;高剂量(10μmol·L~(-1))和中剂量(1μmol·L~(-1))的依帕司他能够显著地降低NT的蛋白表达,表明ONOO~-的生成被显著抑制。结论依帕司他能够升高由高糖诱导的肾小球系膜细胞中T-SOD和Cu/Zn-SOD含量,增强其对ROS的清除能力,降低由高糖诱导的系膜细胞中ROS含量。依帕司他虽能够升高NO生成,但仍能抑制高糖培养的系膜细胞中NT蛋白表达,抑制ONOO~-生成。     

马里苷通过AMPK通路抑制高糖软脂酸诱导大鼠肾小球系膜细胞氧化应激及炎症损伤的作用机制

目的研究马里苷介导AMPK信号通路,延缓糖尿病肾病(DN)氧化应激、炎症损伤,抑制纤维蛋白表达的作用。方法高糖软脂酸诱导大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)建立体外DN模型,将细胞分为:正常对照组(NG)、模型组(葡萄糖100 mmol·L~(-1)+软脂酸250μmol·L~(-1),HG+PA)、马里苷不同剂量组(25、50、100、200μmol·L~(-1))。采用MTS法检测马里苷对HBZY-1细胞增殖的影响,从中筛选最适给药浓度; Western blot法检测各组细胞中NOX4、MCP-1、TGF-β1、FN、α-SMA、CollagenⅥ,以及AMPK蛋白家族中AMPKγ1、p-AMPKα的表达水平。结果马里苷抑制高糖软脂酸诱导的HBZY-1细胞增殖;下调模型细胞中NOX4、TGF-β1、MCP-1、α-SMA、FN及CollagenⅥ的表达;上调p-AMPKα及AMPKγ1的表达。结论马里苷可能通过活化AMPKγ1,激活AMPK信号通路,抑制HBZY-1细胞氧化应激、炎症反应与纤维化蛋白的表达,延缓DN肾脏损伤。     

柴胡皂苷-b2对HepG2细胞迁移及血管生成相关蛋白表达的影响

目的研究柴胡皂苷b2(SS-b2)对HepG2细胞迁移的影响,并探讨其潜在的分子机制。方法用MTT法检测SS-b2对HepG2细胞存活的影响,并根据结果将细胞分为细胞对照组、SS-b2治疗组(15,30和60 mg·L~(-1))和阳性对照组〔多柔比星(DOX)2 mg·L~(-1)〕;利用划痕实验观察SS-b2对HepG2细胞迁移的影响;采用Western印迹法检测HepG2细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9的表达和细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的磷酸化水平。结果 SS-b2 15,30和60 mg·L~(-1)处理HepG2细胞48 h后,划痕愈合率分别为74.71%,72.50%和66.82%,随着SS-b2浓度的增加,划痕愈合率明显减小。与细胞对照组相比,SS-b2 30和60 mg·L~(-1)组的划痕愈合率显著降低(P<0.05);SS-b2 15,30和60 mg·L~(-1)可显著降低HepG2细胞中VEGF和HIF-1α的表达(P<0.05,P<0.01),而SS-b2 60 mg·L~(-1)可显著降低MMP-2和MMP-9蛋白的表达以及ERK1/2的磷酸化(P<0.05,P<0.01);阳性对照组可显著降低上述4种蛋白的表达以及ERK1/2的磷酸化(P<0.05,P<0.01)。与阳性对照组相比,SS-b2 60 mg·L~(-1)下调VEGF和MMP-2的表达更显著(P<0.05,P<0.01),SS-b2 15,30和60 mg·L~(-1)对HIF-1α的表达与阳性对照组无显著性差异,对MMP-9蛋白表达的下调不如阳性对照组效果显著(P<0.01),SS-b2 60 mg·L~(-1)与阳性对照组的ERK1/2磷酸化程度无显著性差异。结论 SS-b2可以抑制HepG2细胞的迁移,该作用可能与其抑制血管生成通路相关蛋白的表达有关。     

NADPH氧化酶在高脂诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤中的作用

目的探讨NADPH氧化酶在高脂诱导的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化应激损伤中的作用。方法不同浓度(0.1、0.2、0.4、0.8 mmol·L~(-1))棕榈酸(palmitic acid,PA)刺激HUVECs 0、12、24、48 h,CCK-8法检测血管内皮细胞增殖能力;免疫印迹法检测血管内皮细胞NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox、p67phox、gp91phox的表达水平;免疫荧光法检测血管内皮细胞细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的表达水平。结果 0.4 mmol·L~(-1)PA刺激HUVECs 24、48 h组的细胞增殖率出现明显降低。因此,实验中我们采用0.4 mmol·L~(-1)PA刺激24 h作为模型组;0.4 mmol·L~(-1)PA刺激HUVECs24、48 h时,p22phox、p47phox、p67phox、gp91phox的表达均明显升高(P<0.05),24 h组与48 h组差异不明显(P>0.05);0.4mmol·L~(-1)PA刺激血管内皮细胞24、48 h时,细胞内ROS表达水平均明显增高(P<0.05),24 h组与48 h组差异不明显(P>0.05);与模型组(0.4 mmol·L~(-1)PA刺激24 h)相比,NADPH氧化酶抑制剂diphenyliodonium(DPI,10μmol·L~(-1))预处理可以使模型组血管内皮细胞ROS表达水平明显下调(P<0.05)。结论 NADPH氧化酶活性对高脂所致血管内皮细胞氧化应激损伤的防治有重要意义。