S-腺苷甲硫氨酸对阿尔茨海默病小鼠淀粉样蛋白生成的影响

目的探讨S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM),对自发阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的APP/PS1双转基因小鼠淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)生成的影响。方法 7月龄APP/PS1双转基因AD小鼠10只,随机分为2组,每组5只,均饲喂叶酸缺乏饲料。干预组(SAM),每日灌胃400μl SAM溶液(13.2 mg/kg bw);对照组(Cont)每日灌胃400μl双蒸水。干预60 d后分别检测两组肝脏SAM、S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH);脑组织海马区Aβ沉积,淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)、早老素1(presenilin 1,PS1)蛋白表达,DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMTs)活性及APP、PS1基因启动子的甲基化水平。结果 SAM干预60 d后,SAM组小鼠脑海马区Aβ沉积及PS1蛋白表达均低于Cont组(P0.05);与Cont组相比,肝脏SAM水平与细胞甲基化潜能升高,脑组织中DNMTs活性升高,促进APP、PS1基因启动子甲基化(P0.05)。结论补充SAM可减少AD转基因小鼠脑海马区Aβ沉积,其可能机制是:SAM作为甲基供体,可增高AD小鼠甲基化潜能与DNMTs活性,降低PS1蛋白表达,从而抑制海马区Aβ沉积。     

莱菔硫烷对APP/PS1转基因AD模型小鼠认知功能的影响及其机制探讨

目的探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的作用及机制,为防治AD提供依据。方法将20只4月龄APP/PS1双转基因小鼠分为AD模型(APP/PS1)和AD模型干预(APP/PS1+SFN)、野生型小鼠对照(Wild type)和野生型小鼠干预(Wild type+SFN)4组,每组10只,雌雄各半。各干预组经口灌胃SFN 25 mg/(kg·bw),1/d,Wild type及APP/PS1组灌胃等量蒸馏水,连续5月。采用跳台实验检测小鼠的认知功能;刚果红染色法检测脑组织淀粉样斑块;丫啶橙染色法检测自噬小体,Western Blot法、免疫组织化学法分别检测脑皮质与海马微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达水平,以反映脑组织自噬水平。结果与Wild type组相比,APP/PS1组小鼠的认知功能下降,脑组织淀粉样斑块增多,脑组织自噬小体减少、脑皮质LC3Ⅱ/Ⅰ比值、海马LC3蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);与APP/PS1组相比,APP/PS1+SFN组小鼠认知功能增强,脑组织淀粉样斑块减少,脑组织自噬小体增多,脑皮质LC3Ⅱ/Ⅰ比值、海马LC3蛋白表达水平升高差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。Wild type+SFN组小鼠海马CA1区LC3蛋白表达水平高于Wild type组(P0.05),其余各检测指标与Wild type组相比,均未见统计学差异(P0.05)。结论 SFN可改善APP/PS1转基因小鼠的认知功能,减轻该模型小鼠脑组织自噬水平的下降以及脑内淀粉样斑块的异常沉积。     

莱菔硫烷对APP/PS1转基因AD模型小鼠认知功能的影响及其机制探讨北大核心CSCD

目的探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的作用及机制,为防治AD提供依据。方法将20只4月龄APP/PS1双转基因小鼠分为AD模型(APP/PS1)和AD模型干预(APP/PS1+SFN)、野生型小鼠对照(Wild type)和野生型小鼠干预(Wild type+SFN)4组,每组10只,雌雄各半。各干预组经口灌胃SFN 25 mg/(kg·bw),1/d,Wild type及APP/PS1组灌胃等量蒸馏水,连续5月。采用跳台实验检测小鼠的认知功能;刚果红染色法检测脑组织淀粉样斑块;丫啶橙染色法检测自噬小体,Western Blot法、免疫组织化学法分别检测脑皮质与海马微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达水平,以反映脑组织自噬水平。结果与Wild type组相比,APP/PS1组小鼠的认知功能下降,脑组织淀粉样斑块增多,脑组织自噬小体减少、脑皮质LC3Ⅱ/Ⅰ比值、海马LC3蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与APP/PS1组相比,APP/PS1+SFN组小鼠认知功能增强,脑组织淀粉样斑块减少,脑组织自噬小体增多,脑皮质LC3Ⅱ/Ⅰ比值、海马LC3蛋白表达水平升高差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。Wild type+SFN组小鼠海马CA1区LC3蛋白表达水平高于Wild type组(P<0.05),其余各检测指标与Wild type组相比,均未见统计学差异(P>0.05)。结论 SFN可改善APP/PS1转基因小鼠的认知功能,减轻该模型小鼠脑组织自噬水平的下降以及脑内淀粉样斑块的异常沉积。     

叶酸对AD模型小鼠脑内Aβ沉积及BACE1表达影响

目的探讨叶酸对阿尔茨海默病(AD)小鼠脑内β–淀粉样蛋白(Aβ)沉积影响及机制。方法将6月龄雄性APP/PS1模型小鼠随机分为4组:叶酸缺乏组、叶酸对照组、叶酸低、高剂量组(120、600μg/kg);同月龄野生型小鼠作为阴性对照组。叶酸缺乏组小鼠饲以叶酸缺乏饲料,其他各组饲以普通饲料,干预60 d。采用实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测β位淀粉样前体裂解酶–1(BACE1)mRNA水平;免疫印迹法(WB)检测脑组织BACE1蛋白表达;免疫组化法检测脑组织Aβ表达;酶联免疫吸附法检测脑组织中和含量。结果与叶酸对照组比较,叶酸高剂量组小鼠脑组织中Aβ蛋白表达降低,叶酸缺乏组Aβ蛋白表达升高(P<0.05);与叶酸对照组(0.295±0.034)比较,叶酸高剂量组小鼠脑组织含量(0.209±0.041)降低,叶酸缺乏组含量(0.396±0.043)升高(P<0.05);与叶酸对照组(15.99±1.434)比较,叶酸缺乏组小鼠脑组织BACE1 mRNA水平(21.97±4.396)升高,叶酸低、高剂量组小鼠脑组织中BACE1 mRNA表达水平[分别为(9.932±1.903)、(10.53±2.750)]均降低(均P<0.05);与叶酸对照组(1.371±0.213)比较,叶酸缺乏组小鼠脑组织中BACE1蛋白表达水平(1.655±0.241)升高,叶酸低、高剂量组小鼠脑组织中BACE1蛋白表达水平[分别为(1.003±0.271)、(0.906±0.188)]均降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论补充叶酸可减少AD小鼠脑组织中Aβ沉积及含量,其机制可能与叶酸抑制小鼠脑组织中淀粉样蛋白生成途径的分泌酶BACE1表达有关。     

低聚半乳糖对AD模型小鼠认知功能及炎性反应的调节作用

目的探讨低聚半乳糖(GOS)改善阿尔茨海默病(AD)模型小鼠认知功能的作用及机制。方法将5月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠分成AD模型组(AD组)和AD干预组(AD+GOS),将同窝出生野生型小鼠分成野生对照组(WT)和野生干预组(WT+GOS),每组10只。干预组喂饲含有5%GOS的饲料,WT和AD组喂饲普通饲料,连续干预6月。采用Morris水迷宫进行神经行为学检查,采用硫黄素T染色法检测脑组织Aβ沉积情况,采用qRT-PCR和Western Blotting法检测大脑皮质GFAP(反应性星形胶质细胞标记物)、CD86(小胶质细胞M1型活化标记物)以及Toll样受体-2(TLR2)、白介素-1β(IL-1β)mRNA和蛋白表达水平,Western Blotting法检测大脑皮质核转录因子(NF-κB)p65蛋白表达水平。结果与WT组相比,AD模型组小鼠逃避潜伏期增加,停留时间、穿台次数减少,脑组织Aβ沉积个数增多,GFAP、CD86、IL-1β、TLR2 mRNA和蛋白、NF-κBp65蛋白相对表达水平升高(P0.05或P0.01)。与AD组相比,AD+GOS组小鼠逃避潜伏期降低,停留时间、穿台次数增加,脑组织Aβ沉积个数减少,GFAP、CD86、IL-1β、TLR2mRNA和蛋白、NF-κBp65蛋白相对表达水平下降(P0.05或P0.01)。结论 GOS可下调TLR2表达,降低反应性星形胶质细胞和小胶质细胞M1型活化,减少NF-κBp65活化和IL-1β表达,减轻Aβ沉积,改善AD模型小鼠的认知功能损伤。[营养学报,2021,43(4):377-383]     

APP/PS1双转基因小鼠的认知功能、炎症与肠道菌群特征分析

目的 探究阿尔茨海默症动物模型APP/PS1双转基因小鼠的认知功能、炎症及肠道菌群特征。方法 15只3月龄WT雄性小鼠为对照组,15只3月龄APP/PS1双转基因小鼠为模型组,饲养6个月后进行水迷宫实验,观察潜伏期。实验结束后采集小鼠血清、海马组织和粪便,测定小鼠血清细胞因子、海马Aβ蛋白沉积和细胞因子表达情况以及肠道菌群多样性和群落结构。结果 APP/PS1组小鼠海马中有明显的Aβ蛋白沉积、水迷宫潜伏期显著增加(t=-2.16;t=-3.20,P<0.05)。WT组小鼠血清LPS水平显著高于APP/PS1组(t=2.97,P<0.01),IL-1β水平显著低于APP/PS1组(t=-3.69,P<0.01)。APP/PS1组小鼠海马组织中BDNF mRNA表达水平显著高于WT组(Z=-2.79,P<0.01)。APP/PS1双转基因小鼠的肠道菌群Alpha多样性显著低于WT组(t=3.01,P<0.05),Beta多样性分析表明两组群落结构具有显著差异(R=0.45,P<0.05);APP/PS1组的疣微菌门和阿克曼氏菌属的相对丰度显著低于WT组(Z=2.61,P<0.05)。结论 APP/PS1组出现明显的认知功能下降、炎症反应以及肠道菌群结构的异常改变。肠道菌群可能是防治阿尔茨海默症的新靶点,值得进一步研究。     

灯盏乙素对神经母细胞瘤细胞中β-淀粉样蛋白生成的影响

目的观察灯盏乙素(Scutellarin,Scu)对神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞中β淀粉样蛋白(β-Amyloid peptide,Aβ)生成的影响,探讨其针对阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)发挥的防治作用。方法将SH-SY5Y细胞分为对照组、Aβ处理组和Aβ+Scu处理组,用CCK-8试剂盒测定细胞存活率;分别用免疫组织化学法、蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组细胞Aβ_(1-42)、β-淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)、APP切割酶1(β-Site APP-leavingnzymes1,BACE1)、APP切割酶2(β-Site APP-leavingnzymes2,BACE2)的表达。结果与对照组相比,Aβ处理组的细胞存活率下降,Aβ_(1-42)、APP、BACE1蛋白和m RNA的表达水平增高,BACE2蛋白和m RNA的表达水平下降,Scu干预后,各检测指标的变化与Aβ处理组的结果正好相反。结论 Scu能够影响Aβ生成相关因子的表达,可能通过减少Aβ的沉积在AD防治中发挥积极作用。     

AD模型小鼠脑组织AQP4、SNTA1表达水平的变化及DADS的干预研究

目的探讨二烯丙基二硫化物(DADS)对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠的干预作用,为AD的防治提供理论依据。方法将20只5月龄APPswe/PS1d E9双转基因鼠按窝别和体质量分为AD模型组和AD干预组,同时将野生型小鼠分为野生对照组和野生干预组,每组10只。干预组小鼠每日1次灌胃给予50 mg/kg DADS,AD模型组小鼠和野生对照组小鼠每日1次灌胃等量溶媒,连续处理6月。采用水迷宫和旷场实验测定小鼠神经行为学变化。免疫组化法分析大脑皮质β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积情况,q RT-PCR和Western blot法分别检测大脑皮质水通道蛋白4(AQP4)、α-互养蛋白(SNTA1)m RNA及蛋白的表达水平。结果与对照组相比,AD模型组小鼠水迷宫实验中定位航行逃避潜伏期延长、穿越平台次数减少,在旷场实验中中央停留时间延长、穿格次数和直立次数减少,大脑皮质Aβ沉积数量增多,AQP4m RNA及蛋白表达升高,SNTA1m RNA及蛋白的表达水平下降,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。与AD模型组相比,DADS干预组小鼠的定位航行逃避潜伏期缩短、穿越平台次数增多,中央停留时间缩短、穿格次数和直立次数增多,大脑皮质Aβ沉积数量减少,AQP4及SNTA1 m RNA及蛋白的表达水平上调,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 AD模型小鼠大脑皮质AQP4表达升高,但SNTA1表达的降低可改变AQP4极性分布而影响AQP4的功能。DADS可明显减少AD模型小鼠大脑皮质Aβ沉积,改善认知能力,其作用机制可能与DADS调节AQP4表达及其极性分布有关。     

小檗碱改善AD模型小鼠认知障碍作用

目的 观察小檗碱对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠脑内神经生长因子(NGF)通路变化及改善AD小鼠学习记忆机制.方法 以APP/PS1双转基因小鼠为模型,采用Y迷宫进行学习记忆能力评价,Western blot检测NGF及相关通路蛋白表达.结果 与对照组[(77.57±11.81)％]比较,模型组小鼠自发交替反应率[(55.71±12.33)％]降低(P＜0.01);与模型组比较,小檗碱组小鼠自发交替反应率[(70.93±15.99)％]升高(P＜0.01);与对照组比较,模型组小鼠海马NGF、络氨酸激酶(TrkA)、磷酸化蛋白激酶(ERK)、磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)表达水平[分别为(0.186 ±0.031)、(0.187 ±0.019)、(0.572 ±0.101)、(0.499 ±0.138)]均降低(均P＜0.05);与模型组比较,小檗碱组小鼠海马NGF、TrkA、磷酸化ERK、磷酸化CREB表达水平[分别为(0.592±0.043)、(0.281 ±0.085)、(0.906 ±0.097)、(0.895 ±0.152)]均升高(均P＜0.05).结论 小檗碱可以改善APP/PS1小鼠学习记忆障碍,其机制可能与调控NGF通路有关.     

铝对APP/PS1双转基因小鼠认知能力及mGluR1表达的影响

[目的]对子代APP/PS1双转基因小鼠进行基因鉴定,研究铝对小鼠学习记忆及脑组织内代谢性谷氨酸受体-1（mGluR1）表达的影响。[方法]用PCR扩增转入基因组DNA中的APP基因,鉴定其基因型;将鉴定出的子代小鼠随机分为2组,即生理盐水组和5mg/kg铝暴露组,每组8只;采用腹腔注射,连续2个月,采用①Morris水迷宫试验检测小鼠学习记忆能力的改变;②用蛋白印迹法（Western blot）和实时荧光定量PCR法检测脑组织中mGluR1蛋白和基因的表达水平。[结果]①鉴定出APP/PS1双转基因小鼠;②Morris水迷宫实验结果显示,染铝组小鼠找到平台的潜伏期较对照组显著增加（P〈0.01）;③Western blot结果显示染铝组mGluR1蛋白表达量高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）;实时荧光定量PCR结果显示染铝组mGluR1基因表达量高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。[结论]铝可致APP/PS1双转基因小鼠学习和记忆能力障碍,且与mGluR1蛋白和基因的表达水平均升高有关。     

叶酸对阿尔茨海默病模型大鼠的影响

目的观察铝致AD模型大鼠脑组织内Aβ神经元的分布，探讨叶酸对AD模型大鼠学习记忆力、Aβ42影响。方法所有大鼠均采用30％AlCl3灌胃4个月诱导建立AD大鼠模型。治疗组用叶酸治疗6个月。在模型建立前后及治疗后通过一次性被动回避试验分别测试大鼠的潜伏期和受电击次数以观察大鼠的学习记忆能力；免疫组织化学Power—Version^TM二步法测定脑组织内沉积的β-淀粉样蛋白。结果（1）大鼠用叶酸治疗6个月后，潜伏期较对照组明显延长（P〈0．01），受电击次数减少（P〈0．01）；（2）AlCl3诱导大鼠成功出现了AG在脑组织中的沉积；以海马CA1的锥体细胞层及齿状回多形细胞层、内嗅区外主层、颞顶叶Ⅲ、Ⅳ，Ⅴ层明显。叶酸组Aβ42阳性神经元数目明显减少，与AlCl3组比较，有显著性差异（海马P〈0．05，内嗅区P〈0．05，颞顶叶P〉0．05）。结论叶酸可以改善AD大鼠的学习记忆，其机制是通过直接或间接抑制或清除海马、内嗅区内Aβ的沉积来实现的。     

氯化铝染毒对大鼠海马APP基因甲基化的影响

目的观察氯化铝(AlCl_3)对大鼠海马淀粉样前体蛋白(APP)启动子区甲基化及β淀粉样蛋白(Aβ)含量的影响。方法健康6月龄雄性SPF级SD大鼠40只,分成4组(正常对照组和AlCl_3低、中、高剂量组),每组10只,各组分别腹腔注射AlCl_30、10、20和30 mg/kg组,正常对照组注射相应体积生理盐水,连续5天,休息2天,共8周。甲基化特异性PCR法(MSP)检测海马APP启动子区的甲基化状态,实时荧光定量PCR(RT-PCR)测定APP mRNA表达水平,ELISA法测APP、Aβ_(42)蛋白表达量。结果随着AlCl_3浓度的增加,大鼠平均逃避潜伏期明显延长(P0.05),AlCl_3中、高剂量组穿越平台的次数明显减少(P0.05);AlCl_3染毒组海马APP启动子区甲基化检出率降低(χ~2=27.61,P0.05),其中,高剂量组APP甲基化的检出率低于其余3组(P0.01),APP甲基化的检出率随AlCl_3染毒剂量增加而降低的趋势(趋势χ~2=19.08,P0.01)。各AlCl_3染毒组APP mRNA的表达水平高于生理盐水组(F=8.973,P0.05)。与正常对照组比较,各AlCl_3染毒组大鼠海马APP、Aβ_(42)蛋白浓度均增高(F=11.14,P=0.032;F=17.82,P=0.018)。与低剂量组相比,中剂量组APP蛋白表达量增加,高剂量组APP、Aβ_(42)蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P0.05)。Aβ_(42)蛋白免疫组化法检测结果示,中、高剂量组海马神经细胞内外出现棕黄色物质,考虑有Aβ的沉积。结论氯化铝染毒可引起大鼠海马APP启动子甲基化水平降低,进而影响APP mRNA表达水平增高,海马组织APP表达量增多,从而导致Aβ产生增多而沉积。     

限时摄食改善AD模型小鼠大脑皮质AQP4极性分布的作用及机制探讨

目的探讨限时摄食可通过升高β羟基丁酸(βOHB)水平而抑制组蛋白去乙酰化酶(HDACs),进而调节α-互养蛋白(SNTA1)表达,改善阿尔兹海默病(AD)模型小鼠脑中水通道蛋白-4(AQP4)极性分布。方法将5月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠分为AD模型组、AD禁食组,同窝出生的野生型C57/BL6小鼠分为野生对照组、野生禁食组,每组10只,雌雄各半;禁食组小鼠隔日禁食,AD模型组与野生对照组小鼠自由摄食,连续处理5月;采用免疫荧光双标法检测大脑皮质AQP4极性分布情况,qRT-PCR和Westernblotting法检测大脑皮质SNTA1、HDAC1/2mRNA及蛋白表达水平。以终浓度为1mmol/LβOHB预处理人星形胶质细胞瘤(U251)细胞,再以终浓度为2、10μmol/L的β-淀粉样蛋白(Aβ)进行处理,同时设立对照组;此外,以siRNA方法沉默U251细胞HDAC1/2基因,并设立对照组;qRT-PCR和Western blotting法检测细胞SNTA1、HDAC1/2 mRNA及蛋白表达水平。结果限时摄食可改善AD模型小鼠大脑皮质AQP4极性分布的丧失,并可抑制AD模型小鼠大脑皮质SNTA1的降低和HDAC1/2的升高(P0.01)。βOHB可抑制2、10μmol/L Aβ诱导的U251细胞SNTA1的降低和HDAC1/2的升高(P0.05或P0.01)。沉默HDAC1可上调U251细胞SNTA1mRNA和蛋白表达(P0.01),而沉默HDAC2后SNTA1表达则未见改变。结论βOHB可通过抑制HDAC1表达,介导限时摄食拮抗AD模型小鼠大脑皮质SNTA1表达的降低,从而恢复AQP4的极性分布。[营养学报,2019,41(6):580-586]     

番茄红素对β-淀粉样蛋白诱导的脉络丛上皮细胞炎症损伤及TLR4信号通路的作用

目的探讨番茄红素对β-淀粉样蛋白诱导脉络丛上皮细胞炎症损伤的保护作用及可能机制。方法成年健康清洁级雄性SD大鼠40只,体质量(250±18.7g),随机分为空白对照、阿尔茨海默病(AD)模型、阿尔茨渊默病(AD)+番茄红素Ⅰ[ig.5 mg/(kg·d)]、AD+番茄红素Ⅱ[ig.10mg/(kg·d)]、番茄红素[ig.10mg/(kg·d)]共5组,每组8只。适应性饲养1w后,采用脑立体定位仪将8μg凝聚态Aβ1-42注入双侧大鼠海马区,建立AD动物模型。三个干预组连续灌胃番茄红素40 d,1/d。在造模后的第2、3、4、5w末进行水迷宫实验,评估大鼠学习记忆力。实验结束后,处死动物取血离心,ELISA法测定血清中TNF-α、IL-1β及IL-6β含量。RT-q PCR、Western blot法检测脉络丛上皮TLR4、NF-κB p65 mRNA、蛋白表达及海马神经元PS-1、β-APP mRNA、蛋白表达。结果神经行为结果显示,AD组大鼠平均逃逸时间及靶象限活动时间显著高于空白对照组(P0.05),而番茄红素干预后,显著低于AD组(P0.05)。血清中TNF-α、IL-1β及IL-6β含量结果显示,AD组大鼠TNF-α、IL-1β及IL-6β含量显著高于空白对照组(P0.05),而番茄红素干预后,TNF-α、IL-1β及IL-6β含量显著降低(P0.05)。脉络丛上皮TLR4、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达结果显示,AD组大鼠TLR4、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达显著高于空白对照组(P0.05),而番茄红素干预后TLR4、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达显著低于AD组(P0.05)。海马神经元PS-1、β-APP mRNA及蛋白表达结果显示,AD组海马神经元PS-1、β-APP mRNA及蛋白表达显著高于空白对照组(P0.05),而番茄红素干预后海马PS-1、β-APP mRNA及蛋白表达显著降低(P0.05)。结论:番茄红素对β-淀粉样蛋白诱导脉络丛上皮炎症损伤有一定的保护作用,其作用机制可能通过脉络丛上皮TLR4信号通路,抑制炎症介质的产生,缓解AD的病理进程。     

同型半胱氨酸对大鼠学习记忆及海马APP代谢影响

目的探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对大鼠学习记忆能力和海马β-淀粉样前体蛋白(APP)代谢影响及叶酸干预作用。方法将40只Wistar大鼠随机分为对照组、HHcy组和叶酸干预组,每组10只,在大鼠饮水中添加蛋氨酸(1.0 g/kg)制作HHcy模型,叶酸低、高剂量干预组大鼠同时分别给予叶酸0.7和3.4 mg/kg灌胃,持续8周。在实验前后测定各组血浆同型半胱氨酸(Hcy)、叶酸浓度,采用Morris水迷宫试验检查大鼠学习记忆能力,观察大鼠海马区APP表达水平。结果与对照组比较,HHcy组逃避潜伏期[(29.34±4.69)s]延长,穿过平台次数[(1.36±0.98)次]减少,停留时间[(1.36±0.98)s]缩短,差异均有统计学意义(P<0.05);与HHcy组比较,高剂量叶酸组学习记忆能力明显改善;与对照组比较,HHcy组γ-分泌酶PS1基因的在mRNA表达水平(1.43±0.10)明显升高(P<0.01),与HHcy组比较,叶酸干预组明显降低;与对照组比较,HHcy组皮质和海马Aβ水平明显升高,与HHcy组比较,叶酸干预组皮质和海马Aβ水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Hh-cy可导致大鼠学习记忆能力下降,大鼠海马APP蛋白代谢改变和Aβ产生增多,叶酸对HHcy具有拮抗作用。     

莱菔硫烷对铝及D-半乳糖联合染毒小鼠阿尔茨海默病样损伤的干预作用研究

目的探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对铝及D-半乳糖联合染毒小鼠阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)样损伤的干预作用,为防治AD提供理论依据。方法健康成年昆明种小鼠按体重随机分为3组,每组18只,雌雄各半。模型组和干预组小鼠饮用含铝水(浓度为0.4 g/100 ml),并隔日皮下注射200mg/kg D-半乳糖。干预组小鼠灌胃给予25 mg/kg SFN 1/d,模型组小鼠灌胃等量蒸馏水,同时设立溶媒对照组,连续处理90 d。采用Morris水迷宫测定小鼠的学习记忆能力,免疫组织化学染色法检测脑组织β-淀粉样肽(Aβ)沉积,分光光度法检测大脑皮质丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,Real-time q RT-PCR法检测大脑皮层Cu-Zn SOD、GSH-Px m RNA的表达水平。结果与对照组比,模型组小鼠学习记忆能力下降,海马、大脑皮质Aβ斑块数量增多,差异均有统计学意义(P0.05);与模型组比,干预组小鼠学习记忆能力增强,海马、大脑皮质Aβ斑块减少,差异均有统计学意义(P0.05)。模型组和干预组小鼠大脑皮质SOD活性及SOD m RNA水平高于对照组,差异均有统计学意义(分别为P0.05,P0.01);干预组小鼠大脑皮质SOD活性及SOD m RNA水平与模型组比较,差异无统计学意义(P0.05)。各组小鼠大脑皮质MDA、GSH含量,活性及GSH-Px m RNA水平,差异均无统计学意义(P0.05)。结论 SFN可减少铝及D-半乳糖联合染毒小鼠脑内的Aβ斑块沉积,改善其学习记忆能力;SFN是否通过氧化应激影响AD有待深入研究。     

叶酸对小鼠甲基代谢作用的研究

目的研究叶酸缺乏和补充对小鼠甲基代谢的作用。方法小鼠随机分为叶酸缺乏组(FA-D)、叶酸对照组(FA-C)和叶酸补充组(FA-S)三组,叶酸干预4 w,采用化学发光免疫法检测血清叶酸浓度;高效液相色谱法检测蛋氨酸循环代谢产物同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)、S-腺苷高半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)在血浆、脑组织和肝脏中的含量。结果叶酸缺乏组血浆、脑组织和肝脏的SAH含量高于对照组,SAM/SAH比值低于对照组(P<0.05);叶酸补充组SAH含量低于对照组,而SAM/SAH比值高于对照组(P<0.05)。叶酸缺乏组和叶酸补充组血浆Hcy则分别高于和低于对照组(P<0.05)。结论叶酸缺乏可降低SAM/SAH比值,使体内甲基供体水平下降,影响小鼠正常甲基代谢;而叶酸补充可以提供相对更多甲基供体SAM,降低小鼠Hcy水平。     

穿心莲内酯对阿尔茨海默病大鼠血小板活化因子及β淀粉样蛋白的影响

目的研究穿心莲内酯(ANDRO)对阿尔茨海默病(AD)大鼠血小板活化因子(PAF)及β淀粉样蛋白的影响。方法将30只SD大鼠随机分为治疗组(10只)、模型组(10只)、假手术组(10只)。采用侧脑室注射链脲霉素(STZ)制做AD大鼠模型。治疗组大鼠给予以ANDRO(200mg/kg)治疗。用Morris’s水迷宫评估大鼠认知功能,采用酶免法测定大鼠血浆PAF含量,免疫组化法检测大鼠海马Aβ表达。结果治疗组大鼠水迷宫潜伏期短于模型组但长于假手术组(P0.05)。模型组、治疗组、假手术组穿过平台次数分别为(1.90+1.10)、(5.60+1.65),(3.70+1.56),(F=16.10,P0.05)。模型组、治疗组、假手术组大鼠血浆PAF含量分别为(210.30±15.18)pg/ml、(182.90±12.08)pg/ml、(167.50+10.31)pg/ml,两两比较差异均有统计学意义(F=29.21,P0.05)。模型组、治疗组、假手术组海马Aβ灰度值分别为(131.71±8.83)、(144.93±9.71)、(164.21±9.05),两两比较差异均有统计学意义(F=31.52,P0.05)。结论 ANDRO可能通过下调AD大鼠血浆PAF及海马β淀粉样蛋白的表达进而改善认知功能。     

颅内注射Aβ1-42单抗对阿尔茨海默病大鼠模型疗效的实验观察

目的:观察淀粉样蛋白(Aβ)1-42诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠模型经颅内注射Aβ1-42单克隆抗体(mAb)后其行为及脑组织病理的改变。方法:利用Aβ1-42蛋白片段诱导建立AD大鼠模型后,侧脑室内注入Aβ1-42 mAb,记录Morris水迷宫试验逃生时间作为行为学指标,同时取脑组织作切片染色,观察其病理改变。结果:AD大鼠模型颅内注射Aβ1-42 mAb后,水迷宫试验逃生时间明显缩短,表明其学习记忆能力明显改善;病理切片染色观察到脑组织内Aβ沉积斑块消失。结论:颅内注射Aβ1-42 mAb对AD动物模型有明显疗效。     

氯化甲基汞蓄积对成年大鼠脑组织中Aβ_(1-42)的影响

目的探讨不同剂量氯化甲基汞蓄积时长差异对成年大鼠记忆力及脑组织中Aβ1-42的影响。方法通过灌胃给予大鼠不同剂量的氯化甲基汞,采用水迷宫观察大鼠记忆力变化,采用免疫组织化学方法观察不同时间点各组大鼠脑组织中Aβ1-42的变化。结果氯化甲基汞明显增加学习及记忆潜伏期,并增加了脑组织内β淀粉样蛋白沉积,大剂量组与其他各组比较,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01),且与汞蓄积量明显相关。结论氯化甲基汞促进Aβ1-42在脑组织中沉积是引起认知损害的机制之一。