硫代硫酸钠在体内、外辅佐抗癌药药效学初步研究

目的 研究硫代硫酸钠（ＳＴＳ）是否能在体内,外作为化疗药的辅药,方法：应用ＭＴＴ法研究ＳＴＳ分别与ＡＤＭ,ＭＭＣ和ＣＤＤＰ等６种抗癌单药合用时对ＢＥＬ－７４０２和ＭＧｃ８０－３细胞的细胞毒性作用,应用小鼠肝癌腹水瘤（Ｈ２２）模型判断ＳＴＳ与ＡＤＭ等３种药合用时的抗癌疗效,２０例人原发性肝癌病人肝动脉插管化疗（ＡＤＭ,ＭＭＣ和ＣＤＤＰ）前３０ｍｉｎ静脉推注ＳＴＳ（１．２５～２．５ｇ／ｍ＾２）考察ＳＴ     

肝癌患者外周血树突状细胞免疫状态的研究

目的研究荷瘤宿主免疫无能与其树突状细胞（ＤＣ）免疫功能间相关性。方法以健康成人（ｎ＝１０）作为对照，检测１０名临床确诊的肝癌患者外周血ＤＣ表面ＨＬＡ－ＤＲ及Ｂ７表达水平及其免疫诱导能力。结果发现肝癌患者ＤＣ表面ＨＬＡ－ＤＲ及Ｂ７表达水平（６．７±１．６及６．１±１．１）明显低于对照组（１０．７±１．４及９．６±１．２，Ｐ＜０．０５）；其ＤＣ体外诱导Ｔ细胞增殖的能力（６２００±９０ｃｐｍ）明显低于对照组（３１００±１２０ｃｐｍ，Ｐ＜０．０５）；以抗ＨＬＡ－ＤＲ单抗及抗Ｂ７单抗封闭正常人ＤＣ后，其诱导Ｔ细胞增殖能力亦明显低于对照组。结论肝癌患者ＤＣ表面ＨＬＡ－ＤＲ及Ｂ７表达低下致ＤＣ的免疫功能低下，而ＤＣ的免疫功能低下则可能是肝癌（或许包括其他肿瘤）逃避宿主免疫监视的重要原因     

抗人肝癌细胞膜单克隆抗体HCMP－1的制备及其生物学特性的初步鉴定

用超选择免疫法，诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠对正常人肝细胞抗原产生选择性低免疫反应后，二步腹腔注射人肝癌细胞悬液，２～４周后用人肝癌细胞作强化免疫动物１次，取出脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞用ＰＥＧ法融合制备杂交瘤。采用细胞抗原ＥＬＩＳＡ法，同时测定培养上清对肝癌细胞及正常肝细胞的免疫反应，筛出一株能稳定分泌抗人肝癌细胞膜抗原的单克隆抗体（ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ）的杂交瘤细胞株。ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ是一种ＩｇＧ２ａ亚型的单抗，它与ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ、ＨＢｅＡｇ等乙型肝炎病毒相关抗原无交叉免疫反应，与ＡＦＰ－亦无阳性反应。免疫萤光法证实ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ对ＱＧＹ－７７０３、ＢＥＬ－７４０２及ＳＭＭＣ－７７２１等人肝癌细胞株呈阳性反应。改良ＡＢＣ免疫组织化学证明ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ与肝细胞癌组织呈阳性反应。说明ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ对肝癌反应的阳性率较高，特导性较好。超选择免疫法，先联合应用免疫抑制药物使动物对正常肝细胞抗原产生低免疫反应性。再以肝癌细胞免疫时，有利于动物免疫系统对肿瘤相关抗原的识别及特异性抗体的产生。从而提高了杂交瘤制备的成功率。我们认为这一方法在单抗制备方面有较高的应用价值。     

AK细胞及环磷酰胺对肝癌的实验研究

为研究１种新的过继免疫化疗治疗肝癌的方法，采用肝癌细胞株Ｈ２２接种于近交系Ｂａｌｂ／ｃ小鼠皮下，制成肿瘤模型。全胜、肿瘤活化的杀伤细胞（ＡＫ细胞）及环磷酰胺（Ｃｙ）进行治疗，检测小鼠脾淋巴细胞ＮＫ、ＬＡＫ及ＣＴＬ活笥，用流式细胞仪检测Ｌ３Ｔ４ｙｔ－２亚群含量结果表明在过继免疫化疗组小鼠ＬＡＫ及ＣＴＬ活性明显高于其它治疗组（Ｐ〈０．０１），生存期也明显高于其它各治疗组（Ｐ〈０．０１）。该研究过继免疫     

腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶自杀基因联合IL-2基因疗法的肿瘤治疗作用及免疫机理分析

目的以腺病毒作为载体，将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因与小鼠ＩＬ－２基因联合转移，研究其体内抗肿瘤作用及免疫机理。方法小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞后３天，肿瘤局部注射表达ＩＬ－２的重组腺病毒ＡｄＩＬ－２和表达ＣＤ的重组腺病毒ＡｄＣＤ，然后连续１０天给予５－氟胞嘧啶（５－Ｆｃ）３００ｍｇ／ｋｇ进行治疗。结果联合治疗组荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长明显受到抑制，小鼠存活期明显长于ＡｄＩＬ－２、ＡｄＣＤ／５－Ｆｃ、ＡｄｌａｃＺ／５－Ｆｃ或ＰＢＳ组。经联合治疗后，小鼠脾细胞的ＮＫ活性和ＣＴＬ杀伤活性明显增强；肿瘤瘤体内ＣＤ４、ＣＤ８细胞浸润增加；肿瘤细胞表达Ｈ－２Ｋｂ和Ｂ７－１分子明显增加。结论联合应用自杀基因和ＩＬ－２基因治疗，一方面可以明显抑制荷瘤小鼠肿瘤生长，另一方面可以提高机体对肿瘤细胞免疫应答，增加机体的抗肿瘤作用，是肿瘤基因治疗中一条行之有效的途径。     

低密度脂蛋白—阿克拉霉素复合物抗肿瘤作用的研究

目的：观察低密度脂蛋白－阿克拉霉素（ＬＤＬ－ＡＣＭ）复合物对小鼠肝癌Ｈ２２细胞的细胞毒作用。方法：ＭＴＴ法及蛋白质合成抑制实验。结果：ＭＴＴ显示，与正常肝细胞组相比，与正常肝细胞组相比，ＬＤＬ－ＡＣＭ复合物对Ｈ２２细胞有更显著的生长抑制作用。蛋白质合成抑制实验除显示了ＬＤＬ－ＡＣＭ复合物的生长抑制作用外，还反映出该复合物作用的饱和性。结论：ＬＤＬ－ＡＣＭ复合物对小鼠肝癌Ｈ２２细胞有靶向杀伤作用。     

石斛多糖增强脐带血和肿瘤病人外周血LAK细胞体外杀伤作用的研究

目的：探讨石斛多糖（ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＤＣＰ）与ｒＩＬ－２联合应用对脐带血ＬＡＫ细胞（ＣＢ－ＬＡＫ）和肿瘤病人外周血ＬＡＫ细胞（ＰＢ－ＬＡＫ）体外杀伤肿瘤细胞作用的影响。方法：应用＾３Ｈ－ＴｄＲ释放法测定ＣＢ－ＬＡＫ和ＰＢ－ＬＡＫ细胞的杀伤活性。结果：①ｒＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）能明显提高ＣＢ－ＬＡＫ对Ｒａｊｉ细胞的杀伤活性，０ｈ的ＣＢ－ＬＡＫ活性为１３．６３％，ｒＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）诱导４８、７２、９６、１２０ｈ后，ＣＢ－ＬＡＫ活性分别提高至２２．２８％、２６．２３％、２８．５５％和２５．７６％（Ｐ〈０．０１）；②ＤＣＰ（１００ｍｇ／Ｌ或４００ｍｇ／Ｌ）与ｒＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）联合诱导ＣＢ－ＬＡＫ的活性，比单纯ｒＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）的作用     

异体外周血造血干细胞移植治疗白血病的研究

报告用ＨＬＡ相合的同胞异基困外周血造血干细胞移植治疗白血病３例，１例为ＣＭＬ－ＣＰ，１例为ＡＬＬ－ＣＲ１，１例为ＡＭＬ－Ｍ２ＣＲ１，预处理方案均为环磷酰胺６０ｍｇ／ｋｇ×２天，全身６０Ｃｏ照射４Ｇｙ×３天，供者于－５日起间步每日给予Ｇ－ＣＳＦ５μｇ／ｋｇ，－５日后即－１日用ＢａｘｅｒＣＳ３０００血细胞分离机分离单个核细胞（ＭＮＣ）其ＭＮＣ为７．７０、３．４４及２．４６×１０８／ｋｇ，ＬＤ３４＋细胞为２５．７及１９．２×１０６／ｋｇ，ＣＤ３４＋／ＣＤ３３－细胞为１．１１及０．５９×１０６／ｋｇ，ＣＤ３＋细胞为９４．９及１３６．８×１０６／ｋｇ，血循环量为１０升分离后给思考静脉输注（在ＴＢＩ４小时以后）．次日（０日）再分离一次ＭＮＣ输注给病人，认为Ａｌｌｏ－ＰＢＳＣＴ可以使造血细胞植入恢复得快，感染及出血的机会减少，抗菌素的使用天数减少，急性ＧＶＨＤ并不增多、对Ａｌｌｏ－ＰＢＳＣＴ的有关问题讨论。     

抗人肝癌细胞膜单克隆抗体HCMP—1的制备及其生物学特性的初步鉴定

用超选择免疫法，诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠对正常人肝细胞抗原产生选择性低兔疫反应后，二步腹腔注射人肝癌细胞悬液，２－４周后用人肝癌细胞作强化免疫动物１次，取出脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞用ＰＥＧ法融合制备杂交瘤。采用细胞抗原ＥＬＩＳＡ法，同时测定培养上清对肝癌细胞及正常肝细胞的免疫反应，筛出一株能稳定分泌抗人肝癌细胞膜抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ是一种ＩｇＧ２亚型的单抗，它与ＨＢｓ     

AK细胞及环磷酰胺治疗肝癌的实验研究

为研究１ 种新的过继免疫化疗治疗肝癌的方法,采用肝癌细胞株Ｈ２２ 接种于近交系Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠皮下,制成肿瘤模型。使用ＩＬ２ 、肿瘤活化的杀伤细胞（ＡＫ细胞）及环磷酰胺（Ｃｙ） 进行治疗,检测小鼠脾淋巴细胞ＮＫ、ＬＡＫ及ＣＴＬ 活性,用流式细胞仪检测Ｌ３Ｔ４ 亚群及Ｌｙｔ２ 亚群含量。结果表明在过继免疫化疗组小鼠ＬＡＫ 及ＣＴＬ活性明显高于其它治疗组（Ｐ＜ ０．０１）,荷瘤小鼠肿瘤结节生长较ＩＬ２ 组及Ｃｙ 组明显缓慢（Ｐ＜ ０．０１）,生存期也明显高于其它各治疗组（Ｐ＜０ ．０１）。该研究表明过继免疫化疗有较强的抗肿瘤作用。     

高氧刺激下ＰＡＣ１诱导乳腺癌细胞凋亡的机制探讨

目的　初步探讨高氧刺激下ＰＡＣ１对人乳腺癌细胞株ＭＤＡ-ＭＢ４３５的凋亡诱导作用及其机制。方法　通过脂质体法转染目的质粒ｐｃＤＮＡ３.１（＋）／ＰＡＣ１进入人乳腺癌细胞株ＭＤＡ ＭＢ４３５,筛选稳定表达ＰＡＣ１的细胞克隆,并使用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ法鉴定高表达ＰＡＣ１的ＭＢ４３５细胞克隆。应用台盼蓝染色法检测不同细胞在Ｈ２Ｏ２处理后的存活率变化,同时进一步使用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ法检测ＭＢ４３５／ＰＡＣ１细胞克隆经Ｈ２Ｏ２处理后其ＥＲＫ１／２磷酸化的水平。结果　在细胞克隆ＭＢ４３５／ＰＡＣ１-Ｃ２和ＭＢ４３５／ＰＡＣ１-Ｃ６中均有高水平的ＰＡＣ１表达,这些高表达ＰＡＣ１的肿瘤细胞经高氧化合物Ｈ２Ｏ２刺激后细胞存活率相对于对照组均明显降低（Ｐ＜０.０１）,而且ＰＡＣ１的高表达可以引起细胞内ＭＡＰＫ激酶ＥＲＫ１／２的活性受到抑制,使磷酸化水平降低。结论　ＰＡＣ１可以通过抑制ＥＲＫ１／２的磷酸化水平而介导细胞对高氧刺激的反应,从而诱导细胞发生凋亡。     

2（3）—叔丁基—4—羟基茄香醚对HBV转基因小鼠肝肿瘤的防护作用研究

目的 观察抗氧化剂２（３）－叔丁基－４－羟基茄香醚（ＢＨＡ）对ＨＢＶ转基因小鼠肝肿瘤的防护作用。方法２６只ＨＢＶ转基因和２４只非转基因小鼠,用生化法测定肝脏混还原酶（ＱＲ）和谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴｓ）内二醛（ＭＤＡ）含量和免疫组化法研究肝肿瘤ＰＣＮＡ表达。结果 转基因小鼠ＨＢＡ组肝癌发生率０,显著低于普饲组４２％。ＢＨＡ诱导肝脏ＱＲ和ＳＴ活性升高３－７倍,降低ＭＤＡ。ＢＨＡ组肝腺瘤ＰＣＮＡ标准     

双特异抗体介导的CD3AK对人小细胞肺癌细胞株的细胞毒作用

目的：研究在双特异性抗体的介导下ＣＤ３ＡＫ细胞（ＣＤ３单克隆栓激活的杀伤细胞）对人小细胞肺癌细胞株ＬＴＥＰ－ｓｍｌ的细胞毒作用。方法：用＾３１Ｃｒ－Ｎａ２ＣｒＯ４释放试验检测单抗（２Ｄ６、ＵＣＨＴ１）和双特异性抗体（ＷＳＴ－Ｈ７）与ＣＤ３ＡＫ共同对人小细胞肺癌细胞株的杀伤活性。持异性抗体体外能明显增强ＣＤ３ＡＫ细胞对人小细胞肺细胞株ＬＴＥＰ－ｓｍｌ的杀伤活性结论：与单纯ＣＤ３ＡＫ相比,加入双特异性     

消化系癌症血汪及肿瘤细胞相关成分的测定

收集肝癌等５种消化系癌症患者血清，用免疫电泳法测定血清α１－抗胰蛋酶（α１－ＡＴ）水平，结果发现各癌症组血清α１－ＡＴ水平均显著高于对照组（Ｐ〈０．００１）。另选择培养两种分化不同的消化系胃癌细胞，分离胞浆核ＫＣ１抽提液，用ＤＣＣ法测定相应性激素受体，结果ＳＧＣ－７９０１细胞胞浆及胞核抽提液中ＥＲ为３０．２和３５．７ＲＲ为２０．３和２２．７ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白；ＮＫＭ－４５细胞相应ＥＲ为２４．８和２     

低密度脂蛋白- 阿克拉霉素复合物抗肿瘤作用的研究

目的：观察低密度脂蛋白－ 阿克拉霉素（ Ｌ Ｄ Ｌ Ａ Ｃ Ｍ） 复合物对小鼠肝癌 Ｈ２２ 细胞的细胞毒作用。方法： Ｍ Ｔ Ｔ 法及蛋白质合成抑制实验。结果： Ｍ Ｔ Ｔ 实验显示,与正常肝细胞组相比, Ｌ Ｄ Ｌ Ａ Ｃ Ｍ 复合物对 Ｈ２２ 细胞有更显著的生长抑制作用。蛋白质合成抑制实验除显示了 Ｌ Ｄ Ｌ Ａ Ｃ Ｍ 复合物的生长抑制作用外,还反映出该复合物作用的饱和性。结论： Ｌ Ｄ Ｌ Ａ Ｃ Ｍ 复合物对小鼠肝癌 Ｈ２２ 细胞有靶向杀伤作用。     

共刺激因子B7和LFA3对人外周T细胞增殖和IL—2产生的效应

目的 观察不同的共刺激因子在抗原提呈细胞存在情况下，地人外周Ｔ细胞的增殖反应及ＩＬ－２产生作用。方法 用选择性淘洗法经人外周Ｔ细胞，以葡萄球菌肠毒素Ａ（ＳＥＡ）为抗原，在体外培养的纯化Ｔ细胞中（１０＾６／ｍｌ）加入１０＾５／ｍｌ用ＨＬＡ－ＤＲ４，Ｂ７，ＴＬＦＡ５单纯，双重或天重转染的人仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）作为抗原提呈细胞（分别用ＣＨＯ－ＤＲ４、ＣＨＯ－ＤＲ４／ＬＦＡ３，ＣＨＯ－ＤＲ４／Ｂ７，ＣＨ     

^32P后标法分析二氯胺基酚—DNA加合物

本研究以核酸酶Ｐ１和正丁醇增强的＾３２Ｐ后标法分析了２，４－二氯－６－胺基酚（ＤＣＡＰ）染毒的Ｖ７９细胞ＤＮＡ加合物。试验结果：在核酸酶Ｐ１富集方式下，观察到４种ＤＣＡＰ诱发的ＤＮＡ加合物，其含量分别为３８．７、７１．５、８５．７和２２．４／１０＾８单核苷酸；而正丁醇萃取法，未检出加合物。该结果表明：ＤＣＡＰ具有与哺乳动物细胞ＤＮＡ产生共价结合的能力，与ＤＮＡ共价结合可能是ＤＣＡＰ产生遗传危害和致     

自杀基因治疗恶性胶质瘤的研究

目的：单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶（ＨＳＶ－ｔｋ）基因治疗恶性胶质瘤体内外试验。方法：分子克隆及真核细胞基因转染技术构建逆转录病毒（ＲＶ）载体ｐＭＶ７（ｔｋ）及ＰＡ３１７ｔｋ包装细胞系;体外不同比例混合鼠Ｃ６胶质瘤细胞与ＰＡ３１７ｔｋ细胞,在ＧＣＶ（Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）作用下观察细胞存活率;建立ＳＤ大鼠颅内Ｃ６胶质瘤模型（种植５×１０５Ｃ６细胞）,治疗组第３天原位注射５×１０６ＰＡ３１７ｔｋ细胞,５天后腹腔给予ＧＣＶ（３０ｍｇ／ｋｇ．ｄ）,ＭＲＩ全程监测肿瘤消长,观察病症及存活期,并行病理检查。结果：在ＧＣＶ０．１～１０１μｇ／ｍｌ浓度范围内,Ｃ６细胞存活率随ＰＡ３１７ｔｋ细胞混入比例增加而逐渐减低（Ｐ＜０．００１）,并具有ＧＣＶ剂量依赖性（Ｐ＜０．０１）;体内试验治疗组病症轻,生存期延长,ＭＲＩ表明治疗组肿瘤体积较对照组明显减小（Ｐ＜０．０１）,１个月时病理检查见肿瘤细胞消失,代之以小胶质细胞增生并形成坏死囊。结论：应用本实验室构建的ＲＶ载体ｐＭＶ７（ｔｋ）及其ＰＡ３１７ｔｋ包装细胞系治疗恶性胶质瘤是一种有效及具有前途的治疗方法。     

CD3AK细胞的体外诱导及免疫生物学特征的实验研究

目的：研究ＣＤ３ＡＫ细胞的体外诱导方法及其免疫生物学特征。方法：采用抗单克隆抗体（ａｎｔｉ－ＣＤ３ＭｃＡｂ）和基因重组人白细胞介素２（ｒＩＬ－２）、植物血凝素（ＰＨＡ０共同诱导人外周血单核细胞（ＰＢＭＣｓ）制备ＣＤ３ＡＫ细胞,应用ＡＰＡＡＰ法、吉姆萨染色法分析ＣＤ３ＡＫ细胞的表型、核型等免疫生物学特征。结果：微量的ａｎ－ｔｉ－ＣＤ３ＭｃＡｂ（终浓度３０～５０００ｎｇ／ｍｌ）辅以少量的ｒＩＬ－２（１     

树突状细胞诱导抗人肝癌细胞系的肿瘤免疫

目的 以树突状细胞（ＤＣ）在体外诱导抗肝瘤免疫。方法 自肝癌患者外周血中分离ＤＣ;以粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白介素－４（ＩＬ－４）联合刺激ＤＣ;以人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞的肿瘤相关抗原（ＴＡＡ）激活ＤＣ;ＤＣ诱导自体Ｔ淋巴细胞增殖、分化为细胞毒素性Ｔ细胞（ＣＴＬ）;检测ＣＴＬ对ｅｐＧ２细胞,ＢＥＬ－７４０２细胞、ＳＧＣ－７９０１细胞、ＬＯＶＯ细胞及ＨＯＳ－