敲减OGT对肝细胞脂肪合成的作用研究

目的探讨敲减N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)对肝细胞脂肪合成的影响。方法建立L02正常肝细胞脂肪变模型,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测OGT及O-连接糖基化(O-GlcNAc)表达。建立L02细胞OGT敲减细胞系,油酸诱导后检测其脂质形成能力。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测脂肪合成相关酶的mRNA和蛋白表达。采用独立样本t检验。结果Western blot显示L02细胞脂肪变后OGT及O-GlcNAc表达均升高(P<0.05)。shOGT慢病毒感染L02细胞后,OGT mRNA相对表达水平明显下调(P<0.01)。油红O染色显示,L02 shOGT细胞内脂质减少,qRT-PCR显示系列脂肪合成酶:乙酰辅酶A羟化酶、脂肪酸合成酶和硬脂酰辅酶A去饱和酶mRNA相对表达水平均降低,差异具统计学意义(P值均<0.05),蛋白水平与mRNA相对表达量一致。结论敲减OGT后可通过降低O-GlcNAc水平抑制肝细胞脂肪合成。     

旋毛虫排泄分泌蛋白对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用

采用MTT法检测旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白对人肝癌Hep G2细胞增殖的抑制作用。AO/EB荧光染色观察与300μg/ml排泄分泌蛋白共培养24 h的Hep G2细胞的细胞核形态。用75μg/ml排泄分泌蛋白作用Hep G2细胞24 h后,流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率,免疫荧光法检测细胞cleaved-caspase 9的表达。结果显示,旋毛虫排泄分泌蛋白呈剂量依赖性抑制人肝癌Hep G2细胞的增殖。300μg/ml排泄分泌蛋白作用24 h后,Hep G2细胞核固缩呈圆珠状凋亡特征。75μg/ml排泄分泌蛋白作用细胞24 h后,细胞早期和晚期凋亡率分别为17.9%和7.3%,细胞坏死占6.6%;Hep G2细胞中cleaved-caspase 9荧光强度明显高于阴性对照。     

HBx 基因转染对人肝癌细胞系 HepG2细胞增殖的影响

目的探讨HBx基因转染对人肝癌细胞系Hep G2细胞增殖的影响。方法用脂质体转染法将HBx真核表达载体pc DNA3/HBx瞬时转入Hep G2细胞(转染HBx细胞组);以转染空载体细胞组和未转染Hep G2细胞组作为对照。以流式细胞仪及荧光显微镜观察各组肝癌细胞增殖情况。结果转染HBx细胞组的Hep G2肝癌细胞生长较其他两组密集。流式细胞仪检测显示转染HBx细胞组的Hep G2细胞较多处于增殖期(G2期细胞占5.68%)。荧光显微镜图像显示转染HBx细胞组处于增殖期的Hep G2细胞比率为47%,转染空载体细胞组为28%,未转染Hep G2细胞组为25%;转染HBx细胞组Hep G2细胞处于增殖期的比率与其他两组比较有统计学差异(P均<0.05)。结论 HBx基因转染能促进人肝癌细胞系Hep G2细胞增殖。     

马鞭草总黄酮对肝癌HepG-2细胞凋亡的影响

目的探讨马鞭草总黄酮(TFV)对肝癌Hep G-2细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测TFV对肝癌Hep G-2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡水平,Western印迹法检测核因子(NF)-κB p65和IκB-α蛋白表达情况。结果与阴性对照组比较,不同浓度TFV能明显抑制Hep G-2细胞的生长(P0.01),呈浓度和时间依赖性。TFV作用于Hep G-2细胞24 h后,Hep G-2 G0/G1期细胞比例下降,S期和G2/M期细胞百分率增加(P0.05),诱导细胞凋亡效果明显(P0.01),能明显的降低NF-κBp65表达,升高IκB-α蛋白表达(P0.05)。结论 TFV能抑制Hep G-2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,机制可能与促进IκB-α蛋白表达,下调NF-κBp65蛋白表达有关。     

Zebularine对肝癌HepG2细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨新型DNA甲基转移酶抑制剂Zebularine对肝癌细胞系Hep G2细胞凋亡的影响及其机制。方法体外培养Hep G2细胞,用不同浓度的Zebularine(25~400μmol/L)处理24、48、72 h,MTT法测定其对Hep G2细胞增殖的影响;Zebularine(100、200、400μmol/L)处理Hep G2细胞48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Rho123探针染色流式细胞仪检测线粒体膜电位变化,Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase3、Caspase9表达,并检测RUNX3基因表达情况。结果 Zebularine能抑制Hep G2细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;Zebularine(浓度分别为50、100、200μmol/L)作用Hep G2细胞48 h后,细胞凋亡率分别为12.4%、23.4%、35.4%,对照组凋亡率仅为3.3%;线粒体膜电位降低;凋亡相关蛋白Bax蛋白表达量升高,而bcl-2蛋白表达量降低,Pro-Caspase-3、Pro-Caspase-9表达减弱,而Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9表达增强,呈浓度依赖性;RUNX3表达上调,也呈剂量依赖性。结论 Zebularine能抑制Hep G2细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与上调RUNX3表达,进而增加细胞Casepase-3、Casepase-9活性,下调Bcl-2基因的表达及上调Bax基因有关。     

长链非编码RNA LNC01309对人肝癌细胞增殖和迁移能力的影响及作用机制

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）LNC01309对人肝癌细胞增殖和迁移能力的影响及作用机制。方法 收集2018年2月—2019年6月在解放军总医院第六医学中心手术治疗的12例肝细胞癌（以下简称肝癌）患者标本及对应的癌旁组织,采用荧光定量PCR方法检测LNC01309的相对表达量。利用荧光定量PCR法检测LNC01309在人肝癌细胞系（Hep G2、SNU-398和Hep 3B）和人永生化正常肝细胞系（THLE-2）中的表达水平。在肝癌细胞Hep G2中过表达LNC01309,分为质粒对照组（pEXP-control）和过表达组（pEXP-LNC01309）。采用CCK-8检测各组细胞增殖变化,采用划痕愈合试验和Transwell试验检测各组细胞迁移能力。利用RNA免疫共沉淀试验检测LNC01309与RBM38的相互作用（分组为IgG组和RBM38抗体组）。利用放线菌酮追踪分析检测LNC01309对于RBM38蛋白稳定性的影响。在肝癌细胞Hep G2中过表达RBM38进行回复试验,采用CCK-8试验、划痕愈合试验和Transwell试验,分别检测细胞增殖和迁移能力的变化。计量资...     

辛二酰苯胺异羟肟酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养SMMC-7721细胞,给予不同浓度（2.5、5.0和7.5μmol/L）SAHA处理12~72h,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖;加入SAHA（5.0和7.5μmol/L）处理SMMC-7721细胞24h或48h,使用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化;采用RT-PCR法检测p53、bcl-2及bax基因mRNA水平;采用分光光度法检测Caspase-3蛋白表达。结果经5.0μmol/L SAHA处理细胞24h和48h时,细胞增殖率较对照下降了25.8%和28.8%,经7.5μmol/L SAHA处理细胞24h和48h时,下降了30.6%和48.6%;经5.0μmol/L或7.5μmol/L SAHA处理细胞24 h后,S期细胞从对照水平（24.33±0.17）%分别显著上升至（32.08±0.160）%和（33.96±0.20）%,（P=0.00）,早期凋亡率均由（0.19±0.04）%显著上升至（1.67±0.59）%和（8.92±0.94）%,（P=0.03）,而在48h后,S期细胞由（24.33±1.18）%分别显著上升至（32.25±0.53）%和（34.61±0.08）%,早期凋亡率由（0.19±0.04）%分别显著上升至（14.49±2.26）%和（26.23±0.55）%,（P=0.00）;SAHA能够上调p53、bax基因mRNA水平,下调bcl-2基因mRNA水平;经5.0μmol/L和7.5μmol/L SAHA处理细胞24h后,Caspase-3蛋白活性由对照水平（0.41±0.07）分别上升至（0.81±0.02）,（P=0.01）和（1.09±0.21）,（P=0.00）,而在处理48 h后,Caspase-3蛋白活性由对照水平分别上升至（1.43±0.23）和（2.01±0.01）,（P均=0.00）。结论 SAHA通过影响p53、bcl-2及bax凋亡相关基因水平及Caspase-3蛋白的活性,对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用。     

抗增殖蛋白过表达对HepG2细胞增殖和凋亡的影响*

目的 探讨抗增殖蛋白（PHB）过表达对人肝癌细胞系HepG₂细胞增殖和凋亡的影响。方法 在已构建的PHB真核表达质粒pEGFP-N1-PHB瞬时转染HepG₂细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测HepG₂细胞增殖;使用流式细胞仪检测HepG₂细胞周期和凋亡。结果 转染pEGFP-N1-PHB细胞增殖明显低于pEGFP-N1空载转染细胞或未转染细胞（P<0.05）;在转染后48 h,转染组G2/M期细胞比例为（27.84±0.47）%,显著高于空载转染组的（17.21±0.64）%或未转染组的（22.67±0.33）%（P<0.001）;转染组细胞凋亡率为（31.72±0.35）%,显著高于空载转染组的（18.66±0.56）%或未转染组的（13.47±0.94）%（P<0.001）。结论 PHB过表达可抑制人肝癌HepG₂细胞增殖,诱导细胞进入G2/M期后被阻滞,并诱导细胞凋亡。     

B7-H1在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨B7-H1在人肝癌组织中的表达情况及其对肝癌Hep G2细胞增殖能力和凋亡水平的影响。方法采用组织化学染色方法观察肝癌组织和癌旁正常组织中B7-H1的表达情况。采用Lonza电转染的方法转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2进入肝癌Hep G2细胞,并通过RTPCR和Weatern印迹方法检测肝癌Hep G2细胞中B7-H1的表达情况。敲低肝癌Hep G2细胞中B7-H1的表达后,采用MTT方法检测肝癌Hep G2细胞的增殖情况,并采用Annexin V/7-AAD双染的方法检测肝癌Hep G2细胞的凋亡水平。结果与癌旁正常组织相比,肝癌组织中B7-H1的表达水平显著升高。采用Lonza电转染的方法转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2进入肝癌Hep G2细胞后,肝癌Hep G2细胞中-B7-H1的表达水平均显著降低。转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2敲低肝癌Hep G2细胞中B7-H1表达后,肝癌Hep G2细胞的增殖能力均显著降低,与对照组相比差异显著(P0.01)。转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2敲低肝癌Hep G2细胞中B7-H1表达后,肝癌Hep G2细胞的凋亡均显著升高,与对照组相比差异显著(P0.01)。结论肝癌组织中B7-H1的表达水平显著升高,且B7-H1可促进肝癌Hep G2细胞的增殖能力,并抑制肝癌Hep G2细胞的凋亡水平,提示肝癌组织中高表达的B7-H1与肝癌的发生和发展密切相关。     

小核糖体核蛋白B对肝癌细胞增殖与转移的调控作用

目的研究小核糖体核蛋白B(SNRPB)在肝癌组织及细胞中的表达情况,以及SNRPB对肝癌细胞增殖与转移的作用。方法通过生物信息数据库starBase v3.0和GEPIA分析SNRPB在肝癌组织和正常肝脏组织中的表达,并进行肝癌患者预后生存分析;qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分析SNRPB mRNA和蛋白在肝癌细胞系中的表达;利用RNA干扰技术(siRNA)下调SNRPB蛋白的表达,通过MTT实验观察其对肝癌细胞增殖的作用,Transwell侵袭迁移实验检测下调SNRI>B后肝癌细胞转移能力的变化;利用Western blot技术检测下调SNRPB表达后肝癌细胞上皮-间质转化(EMT)标志物的改变。数据两组间比较采用〖检验,多组间比较采用方差分析。结果SNRPB在肝癌组织中的表达明显高于正常肝脏组织,且其表达水平并与肝癌患者预后相关。与永生化肝细胞LO:相比,SNRPB在肝癌细胞系中的表达显著升高(P值均<0.01)。siRNA-SNRPB显著抑制肝癌细胞内SNRPB mRNA和蛋白表达。MTT结果显示SNRPB敲低组的吸光度值较阴性对照组降低,其中转染96 h的差值最显著(P值均<0.01)。Transwell实验结果显示,与阴性对照组相比,SNRPB敲低组肝癌细胞的侵袭(MHCC-97H:121.27±8.12对比46.38±7.54,Huh7:126.50±6.98对比41.10±8.01)和迁移(MHCC-97H:125.20±4.77对比43.18±7.32;Huh7:132.22±8.21对比38.00±6.78)能力显著降低(P值均<0.01)。Western blot显示下调SNRPB后上皮表型标志物E-钙黏蛋白表达水平下降,间质表型标志物N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达水平上升,表明下调SNRPB抑制肝癌细胞EMT。结论SNRPB在肝癌组织及细胞中表达显著升高,并且参与调控肝癌细胞的增殖与转移及EMT。     

高胰岛素对近端肾小管上皮细胞利用β-羟丁酸供能的影响

目的研究高胰岛素对低糖环境下近端肾小管上皮(HK2)细胞利用β-羟丁酸(BHB)供能的影响及其机制。方法在无糖及低糖环境下,用不同浓度BHB(0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L)干预HK2细胞24 h,检测BHB对HK2细胞增殖能力的影响。在不同时间(0、6、12、24、48 h)下,检测2.0 mmol/L BHB对HK2细胞三磷酸腺苷(ATP)产生的影响。将HK2细胞分为正常对照(NC)组、低糖(LG)组、BHB干预(LG+BHB)组和高胰岛素(LG+BHB+HI)组,检测HK2细胞促凋亡基因Bax mRNA表达水平,抗凋亡基因Bcl2 mRNA、细胞凋亡数量、回吸收白蛋白、ATP产生、线粒体数量以及过氧化物酶体增殖物激活受体共激活因子-1α(PGC1α)、线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体动力相关蛋白1(DRP1)蛋白及mRNA表达水平变化。采用不同浓度的胰岛素(5、50 ng/ml)干预HK2细胞,检测Na+偶联单羧酸转运蛋白1(SMCT1)蛋白及mRNA表达水平。两组间比较采用t检验,多组之间比较采用单因素方差分析。结果在无糖环境下,与0 mmol/L BHB组相比,2.0 mmol/L BHB组HK2细胞增殖能力增加(P<0.05);在低糖环境下,与0 mmol/L BHB组相比,2.0 mmol/L BHB组细胞增殖能力无明显变化(P>0.05)。与2.0 mmol/L BHB干预0 h组相比,2.0 mmol/L BHB干预24 h组HK2细胞ATP产生明显增加(P<0.05)。与NC组相比,LG组HK2细胞Bax mRNA表达、细胞凋亡数量、DRP1 mRNA表达均增加(P<0.05),Bcl2 mRNA表达水平、细胞回吸收白蛋白、ATP产生、PGC1α、Mfn1蛋白表达均降低(P<0.05);与LG组相比,LG+BHB组HK2细胞Bax mRNA、细胞凋亡数量、DRP1 mRNA表达均降低(P<0.05),Bcl2 mRNA表达、细胞回吸收白蛋白、ATP产生、PGC1α、Mfn1 mRNA及蛋白表达均增加(P<0.05);与LG+BHB组相比,LG+BHB+HI组HK2细胞Bax mRNA、细胞凋亡数量和DRP1 mRNA表达均增加(P<0.05),Bcl2 mRNA、细胞回吸收白蛋白、ATP产生、PGC1α、Mfn1 mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05)。与5 ng/ml胰岛素干预组相比,50 ng/ml胰岛素组细胞SMCT1蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05)。结论高胰岛素可抑制近端肾小管上皮细胞对酮体的利用,机制可能与其抑制酮体回吸收蛋白SMCT1的表达有关。     

Growth hormone and amino acid supply interact synergistically to control insulin-like growth factor-I production and gene expression in cultured ovine hepatocytes.

Many of the anabolic effects of growth hormone (GH) are indirect, occurring through GH-stimulated production of insulin-like growth factor-I (IGF-I) by the liver. As well as being regulated by GH, plasma IGF-I concentrations have been demonstrated to depend upon the level of dietary protein intake, with low protein diets being associated with reduced circulatory IGF-I levels. This inhibitory effect cannot be reversed by GH injection, suggesting that liver sensitivity to GH becomes impaired.To investigate the mechanisms through which protein supply affects GH sensitivity, primary cultures of ovine hepatocytes were grown in defined media, containing various proportions (0.2, 1.0 and 5.0) of jugular amino acid concentrations in fed sheep. Production of IGF-I by these cells was measured after 24 and 48 h in culture by radioimmunoassay. In the first 24-h period basal IGF-I production was the same in all defined media, and GH caused an approximately 2-fold increase in IGF-I release in cells grown in 1.0xor 5.0xamino acid media (P<0.01). Although GH appeared to increase IGF-I release in this period for cells grown in 0.2xamino acid media, this effect was not statistically significant. In the period from 24-48 h in defined media, both basal and GH-stimulated IGF-I production was dependent on amino acid availability (P<0.05 and P<0.001 respectively). Factorial analysis of variance demonstrated a strong positive interaction (P<0.001) between the effects of amino acid availability and GH, such that GH increased IGF-I production by more than 2-fold in cells grown in 5.0xamino acid media (P<0.01) but had no effect on production by cells grown in 1.0xor 0.2xamino acid media.Measurement of steady state concentrations of exon 1-derived IGF-I mRNAs using an RNase protection assay demonstrated that the observed effects on IGF-I peptide secretion were strongly associated with parallel effects at the RNA level.Incorporation of (35)S-methionine into cellular proteins over a 4-h period starting 20 h after transfer to defined culture media was not significantly reduced in 1.0xcompared with 5.0x amino acid media, although rates under both of these conditions were significantly higher than those seen in 0.2xamino acid media (P<0.01). The lack of correspondence between the dose-dependent effects of amino acid supply on cellular protein synthesis and those on basal and GH-stimulated IGF-I production, suggests that amino acid supply modulates IGF-I production through selective mechanisms.Steady state levels of the CCAAT/enhancer-binding protein beta (C/EBPbeta) isoforms, liver-enriched activating protein (LAP) and liver-enriched inhibitory protein (LIP) were determined by Western blotting. When levels of LAP were expressed relative to LIP levels in the same extracts, a significant decrease in the LAP:LIP ratio was observed in response to amino acid limitation (P<0.05).These data strengthen earlier arguments that synergistic interaction between the effects of amino acids and GH on hepatic IGF-I gene expression underlie nutrition-dependent changes in circulating IGF-I titres. The association between these effects and altered levels of C/EBPbeta isoforms suggests that CCAAT/enhancer mediated control of IGF-I gene expression may be involved in this phenomenon.     

Foetal recapitulation of nutrient surplus signalling by O-GlcNAcylation and the failing heart

The development of the foetal heart is driven by increased glucose uptake and activation of mammalian target of rapamycin (mTOR) and hypoxia-inducible factor-1α (HIF-1α), which drives glycolysis. In contrast, the healthy adult heart is governed by sirtuin-1 (SIRT1) and adenosine monophosphate-activated protein kinase (AMPK), which promote fatty-acid oxidation and the substantial mitochondrial ATP production required for survival in a high-workload normoxic environment. During cardiac injury, the heart recapitulates the foetal signalling programme, which (although adaptive in the short term) is highly deleterious if sustained for long periods of time. Prolonged increases in glucose uptake in cardiomyocytes under stress leads to increased flux through the hexosamine biosynthesis pathway; its endproduct – uridine diphosphate N-acetylglucosamine (UDP-GlcNAc) – functions as a critical nutrient surplus sensor. UDP-GlcNAc drives the post-translational protein modification known as O-GlcNAcylation, which rapidly and reversibly modifies thousands of intracellular proteins. Both O-GlcNAcylation and phosphorylation act at serine/threonine residues, but whereas phosphorylation is regulated by hundreds of specific kinases and phosphatases, O-GlcNAcylation is regulated by only two enzymes, O-GlcNAc transferase (OGT) and O-GlcNAcase (OGA), which adds or removes GlcNAc (N-acetylglucosamine), respectively, from target proteins. Recapitulation of foetal programming in heart failure (regardless of diabetes) is accompanied by marked increases in O-GlcNAcylation, both experimentally and clinically. Heightened O-GlcNAcylation in the heart leads to impaired calcium kinetics and contractile derangements, arrhythmias related to activation of voltage-gated sodium channels and Ca²⁺/calmodulin-dependent protein kinase II, mitochondrial dysfunction, and maladaptive hypertrophy, microvascular dysfunction, fibrosis and cardiomyopathy. These deleterious effects can be prevented by suppression of O-GlcNAcylation, which can be achieved experimentally by upregulation of AMPK and SIRT1 or by pharmacological inhibition of OGT or stimulation of OGA. The effects of sodium–glucose cotransporter 2 (SGLT2) inhibitors on the heart are accompanied by reduced O-GlcNAcylation, and their cytoprotective effects are reportedly abrogated if their action to suppress O-GlcNAcylation is blocked. Such an action may represent one of the many mechanisms by which enhanced AMPK and SIRT1 signalling following SGLT2 inhibition leads to cardiovascular benefits. These observations, taken collectively, suggest that UDP-GlcNAc functions as a critical nutrient surplus sensor (which acting in concert with mTOR and HIF-1α) can promote the development of cardiomyopathy.     

肝细胞癌患者IL-18基因-137G/C和-607A/C位点单核苷酸多态性变化及其意义探讨*

目的 探讨肝细胞癌（HCC）患者白细胞介素-18（IL-18）基因-137G/C和-607A/C位点单核苷酸多态性（SNP）的变化。方法 在178例伴有HBV感染的HCC患者和251例健康人,取外周静脉血提取DNA,采用聚合酶链反应-连接酶检测反应（PCR-LDR）行基因分型,测定IL-18基因-137G/C和-607A/C位点SNP。结果 HCC患者和健康人IL-18-37 G/C基因GG基因型、GC基因型和CC基因型分布频率分别为75.3%对47.0%（P<0.05）、20.8%对51.4%（P<0.05）和3.9%对1.6%（P>0.05）,G等位基因和C等位基因分布频率分别为93.6%对72.7%（P<0.05）和6.4%对27.3%（P<0.05）;HCC患者和健康人IL-18-607A/C位点AA基因型、AC基因型和CC基因型分布频率分别为37.6%对13.5%（P<0.05）、43.3 %对66.9%（P<0.05）和19.1%对19.5%（P>0.05）,A等位基因和C等位基因分布频率分别59.3%对47.0%（P<0.05）和40.7%对53.0%（P<0.05）;HCC组IL-18-137G/C位点的GG基因和G等位基因频率显著高于健康人（P<0.05）,HCC组IL-18-607A/C位点的AA基因和A等位基因频率也显著高于健康人（P<0.05）,提示携带IL-18-137G/C和IL-18-607A/C位点基因型和A等位基因者罹患HCC的风险增加。结论 携带IL-18基因-137G/C位点GG基因型和G等位基因以及-607A/C位点AA基因型和A等位基因者可能更容易发生HCC,对HBV感染者筛查这些基因可能有助于早期发现肝肿瘤,以利于早期处理和改善预后。     

肝细胞癌组织miRNA-155水平变化及其对预后的影响

目的 观察肝细胞癌（HCC）组织miRNA-155水平变化,并分析其对患者预后的意义。方法 2013年1月~2014年5月我院诊治的50例HCC患者,取手术切除的癌组织,另取50例正常肝组织作为对照组,采用荧光定量PCR法检测组织miRNA-155水平。结果 正常肝组织miRNA-155水平（1.06±0.1）明显低于HCC癌组织,10例Ⅰ级、15例Ⅱ级、12例Ⅲ级和13例Ⅳ级HCC 组织miRNA-155水平分别为（2.04±0.82）、（3.02±1.20）、（4.20±1.84）和（6.24±2.36）;miRNA-155低水平HCC患者生存率（24.00%）明显高于miRNA-155高水平患者（9.24%,P<0.05）;在不同分级HCC（14.26月对9.02月）、不同肿瘤大小（15.68 月对10.02月）、肿瘤是否转移（8.20 月对14.46月）、是否静脉侵犯（9.36 月对14.36月）、肿瘤分化程度（15.20月对7.84月）和miRNA-155水平高低（7.86月对16.32月）患者间生存期均存在明显差异（P<0.05）;肿瘤大小（>5 cm,HR=1.46,P=0.038）、肿瘤转移（是,HR=1.72,P=0.026）、静脉侵犯（是,HR=1.46,P<0.001）、肿瘤分化（高分化,HR=1.33,P=0.012）和miRNA-155（高水平,HR=1.65,P<0.001）均为影响HCC患者预后的独立危险因素（P<0.05）。结论 肝癌组织miRNA-155水平明显高于正常肝组织,且高水平的miRNA-155为HCC患者预后的独立危险因素。结果表明,miRNA-155水平高低可评估HCC患者预后,可考虑将其作为评估HCC患者预后的独立预测因子之一。     

肝细胞肝癌组织中CXCL12及其受体CXCR4的表达变化

目的观察肝细胞肝癌（HCC）组织中趋化因子CXCL12及其受体CXCR4的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测60例HCC、10例肝硬化和10例正常肝脏组织中的CXCL12、CXCR4蛋白。结果 HCC组织中CXCL12、CXCR4蛋白阳性率（88.3%、53.3%）明显高于肝硬化组织（30.0%、10.0%）及正常肝脏组织（均为0）,P分别〈0.05、〈0.01;HCC组织中CXCR4蛋白表达与肝门淋巴结转移、侵犯门静脉分支、术后复发转移有关（P均〈0.05）,CXCL12、CXCR4蛋白表达呈正相关（r=0.715,P〈0.05）。结论 HCC组织中CXCL12、CXCR4蛋白高表达,二者共同参与了HCC的发生发展,可作为HCC预后评估的标志物。     

围手术期应用乌司他丁治疗对肝细胞癌患者肝切除术后外周血Th22细胞百分比和血浆白细胞介素-22的影响*

目的 观察围手术期应用乌司他丁对肝细胞癌（HCC）肝切除手术患者术后外周血Th22细胞百分比和血浆白细胞介素（IL）-22水平的影响。方法 2015年7月~2017年4月解放军昆明总医院普通外科行肝切除手术的HCC患者88例,术后51例接受常规治疗,37例另加乌司他丁治疗7 d。另选30例健康人作为对照。分离外周血单个核细胞（PBMC）,使用流式细胞术检测CD3⁺CD4⁺IL-22⁺的Th22细胞百分比,采用ELISA法检测血浆IL-22水平。对符合正态分布的计量资料比较采用独立样本t检验,对于非正态分布的计量资料比较采用Mann-Whitney检验。结果 HCC患者外周血Th22细胞百分比为（1.4±0.3） %,显著高于健康人【（0.8±0.1） %,P<0.0001】;HCC患者血浆IL-22水平为（116.9±32.6） pg/ml,亦显著高于健康人【（42.1±18.2） pg/ml,P<0.0001】;在术后3 d,乌司他丁治疗组和常规治疗组血清ALT分别为【219.4（40.1,510.9） IU/L和450.6（56.1,820.7） IU/L,P<0.05】,血清AST分别为【108.8（82.5,439.1） IU/L和257.3（115.3,7265） IU/L,P<0.01】;在术后7 d,乌司他丁治疗组和常规治疗组血清ALT分别为【72.4（25.6,471.5） IU/L和115.4（35.7,625.2） IU/L,P<0.05】,血清AST分别为【61.4（29.4,351.4） IU/L和90.5（45.5,293.8） IU/L,P<0.05】;术后3 d和术后7 d,乌司他丁治疗组外周血Th22细胞百分比分别为（1.2±0.4）%和（1.1±0.3）%,较常规治疗组显著降低【分别为（1.3±0.3）%,P<0.05和（1.3±0.2） %,P<0.05】;血浆IL-22水平分别为（98.1±20.1） pg/ml和（94.1±24.8） pg/ml,亦较常规治疗组显著降低 【分别为（109.7±29.8） pg/ml,P<0.05和（110.7±37.1）%,P<0.05】。结论 肝切除术后应用乌司他丁治疗可降低外周血Th22细胞比例和血浆IL-22水平,对肝功能具有一定的保护作用     

术前预后营养指数评估肝细胞癌患者肝切除术后早期肿瘤复发价值探讨*

目的 探讨术前预后营养指数（PNI）和中性粒细胞/淋巴细胞比值（NLR）评估肝细胞癌（HCC）患者在肿瘤切除术后早期肿瘤复发的价值。方法 2012年1月~2015年12月诊治的HCC患者237例,均接受肝癌切除术。根据术前检查结果计算 PNI 和NLR,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,由最高约登指数确定截断点,比较不同PNI和NLR组患者临床和病理学特征。应用单因素和多因素 Logistic 回归分析影响HCC术后早期肿瘤复发的因素。结果 本组高PNI组（≥45.95）128例,低PNI组（<45.95）109例,高NLR组（≥2.52）99例,低NLR组（<2.52）138例;高PNI组术后早期肿瘤复发率为51.6%（66/128）,显著低于低PNI组的73.4%（80/109,P<0.01）,低NLR组早期肿瘤复发率为55.8%（77/138）,显著低于高NLR组的69.7%（69/99,P<0.05）;经单因素和多因素 Logistic 回归分析发现高PNI（HR=2.036,95%CI=1.113~3.722,P=0.021）、低NLR（HR=2.235,95%CI=1.221~4.091,P=0.009）和TNM分期晚（HR=2.540,95%CI=1.237~5.215,P=0.011）是肝癌根治术后早期肿瘤复发的独立危险因素。结论 高PNI和低NLR对预测HCC患者术后早期肿瘤复发具有潜在的应用价值。     

Bax、Fas蛋白在原发性肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Bax和Fas蛋白表达在原发性肝细胞癌（HCC）发生、发展中的作用。方法采用免疫组化法检测56例HCC癌旁组织和癌组织中Bax和Fas蛋白表达,并分析两指标与HCC临床病理特征的关系及两指标间的相关性。结果 Bax蛋白在癌旁组织和HCC癌组织中的阳性表达率分别为21.4%（12/56）、66.1%（37/56）,P〈0.05（χ2=28.32）;Fas蛋白在癌旁组织和HCC癌组织中的阳性表达率分别为80.4%（45/56）、41.1%（23/56）,P〈0.05（χ2=21.42）。Bax、Fas蛋白在HCC癌组织中的表达无明显相关性,两者表达均与肿瘤分化程度相关（P〈0.05）,但与年龄、性别、肿瘤直径、是否伴有肝硬化无明显相关（P〉0.05）。结论 Bax、Fas蛋白异常表达可能通过不同途径参与HCC发生、发展。