探索双重荧光染色并利用两种不同显微镜在Hep-2细胞上观察抗核抗体荧光模式的临床价值

目的 探索荧光显微镜,激光扫描共聚焦显微镜以及双重荧光染色法在Hep-2细胞上观察抗核抗体荧光模式的临床价值.方法 选取临床上抗核抗体呈阳性的血清样本结合到抗原片上,先后用异硫氰酸荧光素(FITC)和4 ',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)两种荧光染料孵育,之后在两种不同的显微镜下观察.结果 FITC荧光出现的部位是抗原抗体结合处,DAPI荧光出现的部位为细胞核,当通过DAPI荧光对细胞核定位后,可使得FITC的荧光模式更易于观察.本实验通过利用两种荧光标记的方法在两种显微镜上分别观察了斑点型、均质型、着丝点型、核点型、核膜型、胞浆颗粒型——抗高尔基体抗体.结论 综合各种因素,利用双荧光染色法染色,并在激光扫描共聚焦显微镜下观察,对于在Hep-2细胞上观察抗核抗体荧光模式最具临床价值.     

金纳米链及抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链共轭物近红外热疗可启动 细胞凋亡通路*☆

背景：金纳米颗粒在近红外激光照射下对肿瘤细胞具有杀伤效应。 目的：评价金纳米链及抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链共轭物近红外热疗对人喉癌Hep-2细胞的热杀伤作用并探讨其凋亡通路。 方法：取生长良好的人喉鳞癌Hep-2细胞,分别应用金纳米链或抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链共轭物溶液进行干预,在此基础上应用8 W/cm2近红外激光(808 nm)照射6 min,以单独应用1640培养液培养及单独给予近红外激光照射的细胞作对照。 结果与结论：透射电镜观察发现,金纳米链热疗后Hep-2细胞有明显的损伤,抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链热疗后细胞的损伤程度最重。Western blot检测显示,金纳米链热疗和抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链热疗后细胞热休克蛋白70和促凋亡蛋白Bax表达明显增高,而抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低。说明金纳米链及抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链共轭物近红外热疗可通过启动细胞凋亡通路杀伤人喉癌Hep-2细胞。关键词：金纳米链;抗表皮生长因子受体抗体;Hep-2细胞;热疗;凋亡;生物材料;纳米技术 缩略语注释：EGFR：epidermal growth factor receptor,表皮生长因子受体;Hsp70：heat shock protein 70,热休克蛋白70 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.16.006     

抗GPI抗体和抗CCP抗体对RA诊断价值的比较分析

目的:评价抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体和抗葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)抗体对类风湿关节炎(RA)的诊断价值.方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定RA患者42例、其他风湿病患者32例以及健康对照者30例血清中的抗CCP抗体和抗GPI抗体,并应用R0C曲线比较两者对RA的诊断价值.结果:RA组血清抗CCP抗体水...     

抗核抗体检测在自身免疫性疾病中的应用评价

目的 探讨抗核抗体（ANA）检测对自身免疫性疾病诊断的指导意义.方法 回顾性分析2010年1月~2010年12月间在我院就诊的患者血清自身抗体的检测结果,599例患者,其中自身免疫性疾病患者313例,非自身免疫性疾病286例,所有患者血清检测ANA,以Hep-2细胞/肝组织为基质的间接免疫荧光法检测ANA.结果 在自身免疫性疾病中,干燥综合征（SS）、类风湿性关节炎（RA）、混合型结缔组织病（MCTD）和系统性红斑狼疮（SLE）中的阳性率分别为73.43%、53.66%、61.04%和90.63%;在非自身免疫性疾病中的阳性率为21.68%,阳性率明显低于自身免疫性疾病组（P〈0.01）;在自身免疫性疾病组,荧光核型以颗粒型最多见,占47.22%~63.84%.结论 ANA的检测有助于自身免疫性疾病的诊断和筛查.     

间接免疫荧光法测定抗人肾脏集合管细胞抗体

<正>越来越多的研究表明不少远端肾小管性酸中毒(dRTA)可继发于自身免疫性疾病,如临床上发现某些甲状腺疾病患者可伴发dRTA,这可能是抗甲状腺球蛋白抗体(TG)及抗甲状腺微粒体抗体(TM)与集合管细胞存在交叉反应.因此测定体内抗集合管抗体,对于研究和诊治dRTA具有较大价值.为此,我们用培养的人集合管细胞作为载体.运用间接免疫荧光法建立了测定血清中抗集合管细胞抗体的检测方法.1 材料和方法1.1人肾脏集合管细胞株H_5培养于载玻片.H_5细胞为法国Tenon医院肾脏实验室赠送.1.2对象阳性对照:小鼠抗人集合管细胞单克隆抗体(McAb).阴性对照:正常人血清.测定对象:两例甲亢病例,同时伴有典型dRTA,且血清抗甲状腺球蛋白抗体及抗甲状腺微粒体抗体阳性.1.3FITC标记的羊抗人IgG抗体及羊抗小鼠IgG抗体(华美生物工程公司).     

SLE患者ANA、抗ss-DNA、抗ds-DNA及抗ENA联合检测的临床意义

系统性红斑狼疮(SLE)是一种较常见的累及多器官的自身免疫性疾病, 其发病机理主要是由于机体细胞和体液免疫功能紊乱, 产生多种自身抗体, 从而形成免疫复合物, 继而引起组织、脏器的损伤.本文对SLE患者ANA(抗核抗体)、抗ss-DNA(抗单链DNA抗体)、抗ds-DNA(抗双链DNA抗体)和抗ENA(抗ENA抗体)等自身抗体进行了检测, 并对检测结果及其临床意义进行了分析和探讨, 现报道如下.     

HIV感染血友病患者中抗IgG自身抗体

文章报道用免疫酶标法测定HIV感染血友病人中抗IgG自身抗体及其相互之间的关联.对76例HIV阴性(HIV~-)血友病患者(n=84),103例HIV阳性(HIV~+)非AIDS或AIDS相关复合症(ARC)血友病患者(n=205)和32例HIV~+AIDS或ARC的血友病患者(n=96)的血清样本作四种不同抗IgG抗体活性测定:IgG-抗-F(ab')2r,IgM-抗-F(ab')2g,IgG-抗-Fcr和IgM-抗-Fcr.血友病患者的血清(28-HIV~-,25HIV~+非AIDS/ARC和5HIV~+AIDS/ARC)做合成肽活性测定.所有血清测定前56℃30分钟加热处理,以灭活补体.     

治疗鼻咽癌的新策略：抗独特型疫苗的主动免疫治疗

目的和方法 :用两株具有鼻咽癌相关抗原内影像的抗独特型单克隆抗体 2Ｈ4、5Ｄ3,经氢氧化铝凝胶沉淀法制备成抗独特型疫苗Ａｌｕｍ - 2Ｈ4、Ａｌｕｍ - 5Ｄ3,对 1 9例晚期鼻咽癌放疗病人作主动免疫治疗 ,9例放疗加生理盐水注射为对照组。用ＥＬＩＳＡ检测治疗前后病人血清抗体和细胞因子水平。用原位Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ)ＩＬ - 2ｍＲＮＡ的表达。结果 :接受Ａｌｕｍ - 2Ｈ4或Ａｌｕｍ - 5Ｄ3治疗的病人无一例有过敏或其他毒副反应 ,血清中均检测到抗抗独特型抗体 (Ａｂ3)、抗肿瘤抗体 (Ａｂ1’)水平均有不…     

严重急性呼吸综合征自身免疫指标的初步研究

目的　探讨严重急性呼吸综合征(SARS)患者是否存在着自身免疫现象,寻找患者体内异常出现的抗自身组织器官的抗体。方法　随机选取2 7例SARS患者及18例健康献血员对照血清同时应用免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗线粒体抗体(AMA)、抗胃壁细胞抗体(PCA)、抗心肌抗体(HRA) ,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗肝肾微粒体抗体(LKM)及抗线粒体M2亚型抗体,同时利用猴肺组织基质片应用免疫荧光法定位血清中的SARS相关抗体的靶细胞。结果　2 7例SARS患者中有3例ANA阳性、1例SMA阳性、1例AMA阳性、1例LKM阳性、其余均为阴性;18例献血员中有1例ANA阳性、1例AMA阳性,其余均为阴性。统计分析表明SARS患者与献血员间各项自身抗体阳性率差异均不具有统计学意义。在2 7例SARS患者血清中有2 6例在肺组织细小支气管柱状上皮细胞的腔面尖端呈现强阳性荧光信号,献血员中有5例,统计分析表明两者阳性率差异有统计学意义。结论　SARS患者未出现抗肺外组织、器官的自身抗体。患者血清中出现了抗肺组织的自身抗体,定位于细小支气管柱状上皮细胞。     

人源性抗乙酰胆碱受体自身抗体的构建及特异性鉴定

目的 用人抗乙酰胆碱受体(AchR)自身抗体的抗原结合片段(Fab)构建完整的抗人AchR自身抗体,为重症肌无力(MG)的实验研究提供人源性抗体材料. 方法 应用PCR技术从分离自MG患者胸腺的Fab637扩增重链Fd片段基因和轻链基因,并克隆至含有免疫球蛋白(IgG1)基因的载体pIgG1上,构建人源性抗AchR自身抗体哺乳类细胞表达的重组载体pIgG1-637.将pIgG1-637转染CHO-k1细胞,细胞培养上清液经斑点杂交试验检测抗体的表达,以放射免疫测定法测定表达的抗体与特异性人AchR结合的活性.结果 细胞培养24 h后能检测到抗体的分泌,表达的抗体能特异性地与抗原结合,且结合活性很高.结论 已成功地构建了具有与抗原特异性结合的人源性IgG1类抗人AchR自身抗体IgG1-637.     

miRNA-132通过Hedgehog信号通路对肝癌细胞凋亡的作用机制

目的：探究miRNA-132（miR-132）通过Hedgehog 信号通路对肝细胞癌细胞凋亡的机制。方法：用miR- 132 类似物转染人肝癌HepG2 细胞,将样本分为空白组（ 无转染HepG2）、NC组（HepG2 转染miR-132-NC）、 YJ 组（HepG2 转染miR-132 mimic）。通过qRT-PCR 检测miR-132 在HepG2 细胞中的表达量,采用CCK-8 法、流 式细胞仪、Transwell 小室、免疫印迹检测细胞增殖、凋亡、侵袭能力以及Shh 蛋白表达。结果：PCR检测结果显示, 3 组对比,YJ 组HepG2 细胞中miR-132 表达量最高,说明转染成功;CCK-8 检测结果显示,YJ 组HepG2 细胞增 殖数量最低,空白组HepG2 细胞的增殖与NC组相似,皆高于YJ 组;流式细胞检测结果显示,与NC组及空白组 比较,YJ 组HepG2 细胞凋亡数量最多 ;Transwell 小室检测结果显示, YJ 组细胞侵袭数量与空白组和NC组相比 明显降低,空白组细胞侵袭数量与NC组相比数据接近;免疫印迹检测结果显示,YJ 组Shh 蛋白相对表达量与空 白组和NC组比明显降低。结论：过表达miR-132 降低Hedgehog 信号通路,可促进人肝癌HepG2 细胞凋亡作用。     

Coagulase production by strains of Staphylococcus aureus of differing resistance characters: a comparison of two traditional methods with a latex agglutination system detecting both clumping factor and protein A.

Five groups of strains of Staphylococcus aureus (54 in total) were tested by slide and tube coagulase methods with rabbit and human plasma, and the results were compared with a latex test for both clumping factor and Protein A (Staphaurex, Wellcome Foundation). The five groups comprised: epidemic methicillin resistant S aureus (group 1); other methicillin resistant S aureus (group 2); other resistant S aureus (group 3); other S aureus (group 4); and a group of reference strains, not all true S aureus (group 5). Groups 1, 3, and 4 gave consistently strong positive results with the tube test and the latex test and less strong positive results with the slide test. Group 2 strains sometimes gave weak or negative results in slide and latex tests, but tube tests with both types of plasma were strongly positive. Only within group 5 strains were negative results in the tube test found. Group 1 strains showed no diminution in expression of free coagulase or of clumping factor. The latex test was more sensitive than the slide test but less sensitive than the tube test. Doubtful or negative slide test or latex test results, particularly with strains resistant to methicillin, should be checked by a tube coagulase test.     

促红细胞生成素对急性肾损伤大鼠肾小管细胞凋亡和p-MAPKAPK-2表达的影响

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对急性肾损伤大鼠肾小管细胞凋亡和MAPKAPK-2水平的影响。 方法：30 只SD雄性大鼠分为假手术组、模型组、EPO治疗组,假手术组仅分离肾被膜后逐层关闭腹腔;模型组采 用缺血再灌注法建立急性肾损伤模型;EPO治疗组为急性肾损伤大鼠腹腔注射EPO 50 U/kg,每周3 次,共6 周,其 余大鼠注射等体积的生理盐水。ELISA法检测各组大鼠肾功能指标改变情况,H-E染色观察各组大鼠肾组织结构改 变情况,RT-PCR和免疫印迹检测肾组织p-MAPKAPK-2 mRNA和蛋白表达水平,流式细胞术检测肾小管细胞凋亡 率。结果：与假手术组相比,模型组大鼠肾功能降低;与模型组相比,EPO治疗组肾功能好转,差异均有统计学 意义;假手术组大鼠肾组织未见水肿及炎症细胞浸润,结构完整。模型组大鼠肾组织大量水肿,有炎症细胞浸润 且肾间质见散在出血点,EPO治疗组肾组织明显改善,水肿缓解;与假手术相比,模型组MAPKAPK-2 mRNA水 平、蛋白水平均升高,肾小球细胞凋亡率升高;与模型组相比,EPO治疗组上述指标均降低,差异均有统计学意义。 结论：EPO能抑制急性肾损伤大鼠肾小管细胞凋亡,降低p-MAPKAPK-2的水平,减轻急性肾损伤程度。     

钙干预对生长性骨痛儿童骨代谢的影响

通过对确诊为生长性骨痛的儿童进行钙干预,探讨其对儿童生长性骨痛骨代谢的影响.将157例患儿随机分为补钙组、对照组,不同时点记录骨代谢生化指标血bALP、尿Ca、血Ca的变化.生长性骨痛的儿童钙干预后,其骨释放减少;血钙值无统计学差异;补钙组尿钙排出量不变,对照组尿钙排出量减少且低于实验组.生长性骨痛的儿童适当补充钙,对...     

阻断DLK/MKK4/JNK/c-JUN通路对ITON小鼠视网膜神经节细胞存活的影响

目的　研究阻断DLK/MKK4/JNK/c-JUN通路的表达能否促进间接性创伤性视神经病变（ITON）小鼠视网膜神经节细胞（RGCs）的存活并比较阻断不同位点产生的阻断效果。 方法　使用能够产生创伤性轴突损伤（TAI）的撞击加速（IA）模型对6~8周龄的小鼠进行处理模拟间接性创伤性视神经病变,筛选出符合条件的小鼠分为4组：空白对照组,IA组,IA+sunitinib组,IA+SP600125组。在实验要求的各个时间点留取标本,进行γ-synuclein或p-c-JUN免疫荧光染色、TUNEL染色和Western blot检测,并进行统计学分析。 结果　免疫荧光染色结果显示,与IA组相比,IA+sunitinib组和IA+SP600125组存活的RGCs密度显著升高、p-c-JUN（+）RGCs密度显著降低（P<0.05）;TUNEL检测结果显示,与IA组相比,IA+sunitinib组和IA+SP600125组凋亡的RGCs密度显著降低（P<0.05）;Western blot检测结果显示,与IA组相比,IA+sunitinib组和IA+SP600125组DLK/MKK4/JNK/c-JUN通路中的相应下游蛋白表达水平均降低（P<0.05）。 结论　DLK/MKK4/JNK/c-JUN通路的激活与ITON小鼠中RGCs的存活率相关,应用DLK抑制剂或JNK抑制剂可有效阻断该通路的蛋白表达,并促进RGC的存活,且后者效果更佳。     

多发性脑梗塞大鼠纹旁区NOS的定量分析

选用 Wistar大鼠 ,应用微栓子栓塞阻断法建立多发性脑梗塞 (MCI)模型 ,用 NADPH- d组织化学方法、透射电镜技术结合显微图像分析观察大鼠纹旁区一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经元的分布及 MCI后NOS的变化。结果显示 ,MCI时大鼠纹旁区 NOS阳性神经元先增多后减少。提示 NO在缺血所致的神经损伤中起重要作用。     

氯胺酮对帕金森病小鼠模型α-突触核蛋白表达的影响

目的:观察氯胺酮(ketamine,Ket)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导的帕金森病(Parkinson's disease,PD)小鼠模型黑质-纹状体区α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)异常表达的影响。方法:选取48只健康雄性小鼠随机分为3组:对照组(NaCl组)、模型组(MPTP组)和治疗组(MPTP+Ket组)。采用rotarod实验和gait analysis system评价3组小鼠行为学差异;免疫组化染色观察黑质区酪氨酸羟化酶阳性神经元数目变化;免疫荧光染色和Western blot检测小鼠脑黑质-纹状体区α-Syn的表达。结果:(1)Rotarod实验及gait analysis system结果显示,MPTP组较NaCl组转棒仪圈数减少,步距减小(P0.05),MPTP+Ket组较MPTP组转棒仪圈数增加,步距增宽(P0.05);(2)免疫组化及免疫荧光实验结果表明,MPTP组较NaCl组多巴胺能神经元数目减少,黑质-纹状体区荧光强度增加(P0.05),MPTP+Ket组较MPTP组多巴胺能神经元数目增多,荧光强度减少(P0.05);(3)Western blot实验结果显示,MPTP组较NaCl组黑质-纹状体区的α-Syn表达增多(P0.05),而MPTP+Ket组较MPTP组的α-Syn表达量减少(P0.05)。结论:氯胺酮对PD小鼠黑质-纹状体区α-Syn异常表达具有抑制作用。     

依达拉奉对惊厥持续状态幼年大鼠海马中caspase-3和caspase-12表达的影响

目的:探讨依达拉奉(edaravone,ED)对幼年大鼠惊厥持续状态(status convulsion,SC)后海马中caspase-3和caspase-12表达的影响。方法:将195只SD幼年雄性大鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)、SC组和ED组;各组又均按时点分为4 h、12 h、24 h、48 h和72 h 5个亚组,每组13只。采用氯化锂-匹鲁卡品化学点燃法制备幼年大鼠SC模型。应用免疫组织化学法检测大鼠海马中caspase-3和caspase-12蛋白表达情况,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测caspase-3和caspase-12 mRNA的表达。结果:(1)免疫组织化学法检测SC 24~72 h组幼年大鼠海马中caspase-3表达增强,与NS组比较差异有统计学意义(P0.05);与SC组比较,ED 48~72 h组的caspase-3表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05);RT-PCR法检测结果显示caspase-3 mRNA的表达趋势与蛋白基本相似。(2)免疫组织化学法检测SC组幼年大鼠海马中12~72 h组caspase-12表达增强,与NS组比较差异有统计学意义(P0.01);与SC组比较,ED 24~72组caspase-12表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05);RT-PCR法检测结果显示caspase-12 mRNA的表达趋势与蛋白基本相似。(3)经比较,ED组Ⅴ级惊厥率较SC组低,差异有统计学意义(P0.05);且ED组惊厥潜伏期也较SC组明显延长,差异有统计学意义(P0.05)。结论:依达拉奉可抑制匹鲁卡品所致SC大鼠海马caspase-12和caspase-3的表达,提示依达拉奉对SC引起的脑损伤可能有保护作用。     

临床脑电图教学方法的分析

目的对脑电图临床教学方法进行分析探讨,以进一步提高临床脑电图教学质量。方法选取60名临床实习生,随机分为研究组和对照组,每组各30人,研究组给予现代化的教学模式,对照组给予传统教学模式,于实习期结束后对比两组学生的临床教学效果。结果研究组脑电图实践操作能力优于对照组,研究组总体操作成绩及格率93.33%,对照组总体操作成绩及格率66.67%,两组比较p0.05;研究组脑电图报告书写比较规范,但与对照组相比并无明显差异p0.05;研究组总体基础理论知识成绩及格率为90.00%,对照组总体基础理论知识成绩及格率为53.33%,两组比较p0.01。结论现代化的教学模式在临床脑电图教学中效果显著,值得临床教学推广。     

Multiple-drug intolerance syndrome: clinical findings and usefulness of challenge tests.

BACKGROUND: Multiple-drug intolerance syndrome (MDIS) is characterized by adverse reactions to several classes of chemically unrelated drugs. OBJECTIVE: To analyze all patients with a history of adverse reactions to at least 3 drugs at the Allergy Unit of Policlinico Gemelli in a 6-year period to better characterize patients with MDIS and to find safe alternative drugs. METHODS: We studied 480 patients (aged >16 years) with a history of adverse reactions to at least 3 unrelated drugs and with negative allergy test results. Patients who had experienced mild adverse reactions that remitted spontaneously underwent challenge tests without any premedication (group A). Patients with a clinical history of moderate reactions received sodium cromolyn, 500 mg, before the challenge (group B). Patients with a clinical history of severe reactions or undergoing parenteral challenges were given an antihistamine 30 minutes before the challenge (group C). RESULTS: In group A, 491 tolerance challenge tests were performed: 414 had negative results and 77 had positive results. In group B, 1,077 tolerance challenge tests were performed: 956 had negative results and 121 had positive results. In group C, 240 tolerance challenge tests were performed: 214 had negative results and 26 had positive results. Comparing the tolerance of alternative drugs in groups A and B, groups A and C, and groups B and C, no significant results were observed (P = .24, .14, and .44, respectively). CONCLUSIONS: Patients with MDIS can tolerate alternative drugs. Premedication with sodium cromolyn or oral H1-antihistamines may be useful in preventing adverse reactions.