缺氧诱导因子-1α与基质金属蛋白酶-2在慢性压迫性颈脊髓损伤大鼠模型中的表达及意义

目的 :探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)在慢性压迫性颈脊髓损伤大鼠模型中的表达及意义。方法 :将80只成年SD大鼠随机分为假手术组和慢性压迫性颈脊髓损伤组(脊髓压迫组),每组40只。大鼠麻醉后充分显露C5和C6椎板,切除C5左侧半椎板,显露硬脊膜,脊髓压迫组在C6椎板和硬脊膜之间置入吸水后可膨胀聚氨酯薄板(1×3×1mm);假手术组只显露硬脊膜不置入压迫物。两组分别通过BBB(Basso Beattie Bresnahan)评分和体感诱发电位(somatosensory evoked potential,SEP)检测评估脊髓功能;于造模后7d、28d、42d和70d时处死大鼠取颈脊髓组织进行HIF-1α及MMP-2免疫组化染色,检测其在各时间点的表达量(IOD值),采用独立样本t检验比较两组各时间点的差异,分析HIF-1α、MMP-2与脊髓功能变化的相关性。结果:造模后7d时,两组BBB评分无显著性差异;SEP潜伏期显著性延长,波幅显著性降低;HIF-1α显著性降低,MMP-2显著性升高。28d时脊髓压迫组BBB评分显著性低于假手术组,SEP潜伏期与7d比较显著性延长(P0.05)、波幅显著性降低(P0.05),HIF-1α表达显著性增高(P0.05),而MMP-2表达显著性降低(P0.05)。42d时,脊髓压迫组BBB评分、SEP潜伏期和波幅与28d时比较无显著性差异,HIF-1α表达显著性增高(P0.05),而MMP-2表达显著性降低(P0.05);70d时脊髓压迫组神经功能较28d时显著性改善,BBB评分显著性增高(P0.05),SEP潜伏期显著性缩短(P0.05)、波幅显著性升高(P0.05);HIF-1α表达较前显著性降低,而MMP-2表达升高,但与假手术组比较仍有显著性差异(P0.05)。HIF-1α表达量与BBB评分呈显著性负相关(r=-0.458,P0.05),MMP-2表达量与BBB评分呈显著性正相关(r=0.903,P0.05)。结论:大鼠慢性压迫性脊髓损伤后具有一定程度的自我修复能力,HIF-1α、MMP-2表达变化与慢性脊髓压迫性损伤后神经功能改善相关。     

神经调节素对缺血再灌注损伤大鼠脊髓MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的:观察神经调节素-1β(neuregulin-1β,NRG-1β)对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后脊髓组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响,并初步探讨其作用与机制。方法:48只SD大鼠随机分为对照组(n=16)、缺血再灌注组(模型组,n=16)、NRG-1β治疗组(n=16),对照组仅分离暴露腹主动脉,其余两组采用腹主动脉阻断法制备动物模型。治疗组在打开动脉夹后立即经尾静脉注射NRG-1β(10μg/kg),缺血再灌注模型组在打开动脉夹后立即经尾静脉注射等量的0.1mol/L的PBS缓冲液。于取材前3min根据改良Tarlov评分标准进行神经功能评分。分别于术后3h、6h、12h、24h取材(每个时间点4只),HE染色观察脊髓病理变化,免疫组化和Real-time PCR分别检测MMP-9、TIMP-1蛋白和m RNA水平的表达。结果:模型组在术后各时间点的Tarlov评分较对照组显著下降(P0.05),治疗组在术后6h、12h、24h的Tarlov评分较模型组显著增高(P0.05)。HE染色显示模型组和治疗组均存在脊髓组织损伤,但治疗组较模型组减轻。免疫组化结果显示,对照组未见MMP-9、TIMP-1阳性表达细胞;模型组MMP-9免疫阳性细胞数(个/高倍视野)在术后3h、6h、12h、24h分别为9.00±1.63、23.80±1.71、28.30±1.50、34.80±2.63,治疗组分别为8.50±0.58、17.80±0.96、20.80±3.50、30.00±2.16,其中6h、12h、24h治疗组与模型组相比阳性细胞数明显减少(P0.05)。模型组TIMP-1免疫阳性细胞数(个/高倍视野)在术后3h、6h、12h、24h分别为11.80±0.96、12.30±1.50、7.80±0.96、7.80±1.50,治疗组分别为12.30±0.96、13.80±0.96、10.50±1.73、10.30±0.96,其中12h、24h治疗组与模型组相比阳性细胞数明显增多(P0.05)。对照组MMP-9在术后3h、6h、12h、24h的m RNA表达量分别为4.93±0.21、4.95±0.24、4.96±0.25、4.98±0.23,模型组分别为5.38±0.25、6.53±0.31、6.87±0.29、7.53±0.33,治疗组分别为5.35±0.26、5.56±0.22、5.74±0.27、5.90±0.31,其中6h、12h、24h模型组与对照组比较MMP-9的m RNA表达量明显增加(P0.05),6h、12h、24h治疗组MMP-9的m RNA表达量较模型组明显减少(P0.05)。对照组TIMP-1在术后3h、6h、12h、24h的m RNA表达量分别为4.74±0.23、4.76±0.21、4.73±0.25、4.76±0.24,模型组分别为4.53±0.32、4.62±0.21、3.83±0.20、3.65±0.32,治疗组分别为4.55±0.26、4.65±0.27、4.28±0.22、4.25±0.24,其中12h、24h模型组与对照组比较TIMP-1的m RNA表达量明显减少(P0.05),12h、24h治疗组TIMP-1的m RNA表达量较模型组明显增加(P0.05)。结论 :神经调节素可在大鼠脊髓缺血再灌注损伤过程中发挥神经保护作用,该作用的实现可能与MMP-9的表达下调和TIMP-1的表达上调有关。     

慢性肾衰竭患者血清MMP-9和TIMP-1表达及意义

目的检测慢性肾衰竭（CRF）患者血清基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达状况,拟在探讨其与肾脏纤维化的关系。方法采用ELISA法测定60例CRF患者（氮质血症期15例,肾衰竭期24例,尿毒症终末期21例）和20例正常对照组血清MMP-9、TIMP-1水平,同时收集患者临床资料,分析血清MMP-9、TIMP-1水平和MMP-9／TIMP-1比值与肾功能损害等临床指标之间的相关性。结果CRF患者各期血清MMP-9、TIMP-1水平明显升高,MMP-9／TIMP-1比值显著降低,随着肾小球滤过率（GFR）下降,MMP-9、TIMP-1呈降低趋势,而MMP-9／TIMP-1比值却逐渐上升。血清TIMP-1水平和MMP-9／TIMP-1比值与血肌酐、GFR及血红蛋白呈高度相关性。结论血清MMP-9、TIMP-1参与了CRF的进展,血清TIMP-1水平或MMP-9／TIMP-1比值能较好地反映肾脏纤维化的程度。     

大鼠脊髓慢性压迫性损伤动物模型的建立

目的 建立一种大鼠脊髓慢性压迫性损伤模型。方法 应用平头不锈钢螺钉从大鼠C4椎体前侧钻入压迫脊髓腹侧，术后保留螺钉30d，并用联合行为评分(CBS)、神经电生理、光镜、电镜检查进行综合评判。结果 模型动物脊髓慢性压迫随着螺钉轻、中、重程度的不同，其术后行为学、运动诱发电位(MEP)及组织学观察符合脊髓慢性压迫症病理改变的特点。结论 建立了大鼠脊髓慢性压迫性损伤模型，此模型制作简便，可重复性强，脊髓损伤能表现出不同的压迫深度，为进一步研究脊髓慢性压迫损伤病理机制奠定了基础。     

RECK、MMP-2和MMP-9基因在结肠癌组织中的表达及其意义

目的：研究回复引导半胱氨酸丰富蛋白Kazal基元（RECK）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）基因在结肠癌中的表达情况及其意义。方法：采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测40例结肠癌组织及癌旁组织RECK、MMP-2、MMP-9基因的表达并作相对定量分析。结果：与癌旁组织相比,结肠癌组织中RECK基因表达显著降低（0.46±0.16比0.88±0.08,P〈0.01）,而MMP-2、MMP-9基因表达显著增高（0.41±0.13比0.14±0.13,0.28±0.11比0.12±0.06,P〈0.01）,RECK基因的表达与MMP-2、MMP-9呈显著负相关（r=-0.918,P〈0.01;r=-0.855,P〈0.01）;MMP2、MMP9基因表达水平与淋巴结转移、TNM分期相关;RECK则与肿瘤分化程度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期相关。结论：结肠癌组织中存在RECK基因的低表达和MMP-2、MMP-9基因的高表达,其机制可能与RECK抑制MMP-2和MMP-9基因的表达有关。联合检测RECK、MMP2、MMP9基因的表达对结肠癌的诊断以及转移和临床分期的判断具有重要的意义。     

基质金属蛋白酶-9与脊髓损伤后脊髓水肿的关系

目的：探讨基质金属蛋白酶-9与急性脊髓损伤后脊髓水肿的关系。方法：健康雄性SD大鼠70只，随机分为对照组和损伤组。对照组大鼠10只，仅做椎板切除术，术后6h取材；损伤组采用改良Allen法制作T8～T9节段脊髓损伤模型，分别于伤后6h、12h、1d、3d、5d、7d（每时间点10只）处死取材。采用干湿重法测定脊髓含水量，免疫组化检测基质金属蛋白酶-9的表达。结果：急性脊髓损伤后6h，损伤组脊髓含水量较对照组增多，3～5d时达到高峰。基质金属蛋白酶-9在对照组未见表达，而损伤组在损伤后6h表达增加，并在1～3d达到高峰，损伤后7d仍有表达。相关性分析显示基质金属蛋白酶-9的表达与脊髓含水量呈正相关。结论：急性脊髓损伤后，基质金属蛋白酶-9的表达与脊髓水肿的形成有关，但两者达到高峰的时间不完全一致。     

颈脊髓慢性压迫症的代谢组学研究

目的探讨应用磁共振波谱技术（magneticresonance spectroscopy,MRS）测量颈脊髓慢性压迫症患者脊髓代谢组改变的可行性,探讨脊髓代谢组学与脊髓功能的相关性。方法 2009年1月至2010年6月行减压手术的脊髓型颈椎病（cervical spondylotic myelopathy,CSM）患者13例作为实验组,男8例,女5例;年龄37～84岁,平均58.2岁。术前进行神经系统检查、神经功能评价（JOA评分）和MRS检查,将感兴趣区放置在脊髓受压最严重部位的相邻节段。通过MRS测得以下代谢物的浓度：氮-乙酰天门冬氨酸（NAA）、胆碱（Cho）、肌酸（Cr）、乳酸（Lac）、肌醇（Ins）、谷氨酰氨（Glx）。15名健康志愿者为正常对照组,年龄和性别与实验组无明显差异,同样用MRS测得脊髓代谢浓度。计算以下代谢浓度的比值：NAA/Cr、Cho/Cr、Lac/Cr、Ins/Cr、Glx/Cr。结果实验组的NAA/Cr和Glx/Cr比正常对照组明显降低（1.18 vs 2.58,P=0.023;0.56 vs 1.25,P=0.008）。实验组的NAA/Cr与脊髓JOA评分呈正相关。但是两组其他代谢物浓度比值如Cho/Cr,mI/Cr,Lac/Cr的差异均无统计学意义。实验组患者中有4例出现乳酸峰,而对照组中无一例出现乳酸峰。结论 MRS可以定量测量颈脊髓的代谢组学改变。慢性颈脊髓压迫症患者的NAA/Cr和Glx/Cr较健康志愿者明显降低,说明神经元和轴突的减少和损伤。NAA/Cr与脊髓功能的相关性,提示有评价脊髓功能的临床价值,但尚需大样本的研究来证实。     

颈脊髓慢性压迫症实验模型的初步研究

目的　探讨研究一种理想的致颈脊髓慢性压迫的实验模型。方法　采用自制弹性塑料双套管导管经颈前入路埋入犬颈 5椎体上缘正中 ,通过内套管的缓慢推动作用 ,产生对颈脊髓的慢性压迫。结果　术后行为学、影像学、电生理及组织学观察犬颈脊髓损伤符合颈脊髓慢性压迫症病理改变的特点。结论　双套管法致颈脊髓受到慢性压迫是一种简便 ,理想及可靠的实验方法。     

颈脊髓慢性压迫模型的建立及其病理改变

目的:建立与临床相近的颈脊髓慢性压迫动物实验模型,观察其MRI和病理改变。方法:56只20～24个月的雄性山羊(体重13～17kg,平均15kg),随机分为对照组(8只)、颈脊髓压迫3个月组(24只)和6个月组(24只)。均经前路通过C5置入钛合金螺钉,后路在相应的椎板下置入钛合金钢板,不直接压迫颈脊髓,当羊颈椎活动时才会对脊髓逐渐造成压迫和损害。对照组山羊螺钉和钢板置入后立即取出。在置入螺钉和钢板后3个月和6个月时对山羊进行运动功能评分,颈椎拍X线片和进行MRI检查,然后处死山羊取颈髓做病理检查。对照组山羊做相同检查。结果:对照组山羊的运动功能评分(平均5.0±0.0分)和影像学检查均没有明显变化。而脊髓压迫3个月和6个月组山羊运动功能评分分别为3.8±0.6分和2.7±1.2分,与对照组比较P<0.05;MRIT2加权矢状位和冠状位像均可见受压部位脊髓白质和灰质密度明显增加。病理检查发现受压3个月组在脊髓前角和后角出现神经原减少和坏死,且压迫6个月组较压迫3个月变化更为明显。结论:新的颈脊髓慢性压迫动物实验模型容易复制,通过该模型可较好地观察脊髓受压不同时间的影像学和病理改变。     

MMP-2、MMP-9、TIMP-1在血管成形术后再狭窄中的表达及其意义的实验研究

目的观察PTA后MMP-2、MMP-9和TIMP-1在血管壁各层随时间的演变规律,探讨其在血管再狭窄过程中的表达及意义。方法48只大鼠制作成颈动脉再狭窄动物模型,选取30只内膜增生满意的标本,分别代表动脉损伤后1、3、7、14、28、42天6个观察时间点,对胶原纤维进行Masson染色。MMP-2、TIMP-1、PCNA进行免疫组织化学染色,MMP-9进行免疫组织化学和原位杂交两种染色。分析它们的表达与内膜增生和血管重塑的关系。结果正常血管不表达MMP-9mRNA及蛋白,损伤后第3天中膜、外膜mRNA表达达高峰,第7天内膜表达达高峰。MMP-9蛋白第7天内膜表达达高峰,且阳性细胞率高于中膜和外膜。第14、28天,血管壁各层表达逐渐下降至基线水平,内膜的阳性细胞主要集中在新生内膜靠近管腔的一侧。内膜MMP-2表达高峰出现晚至第14天,且近内弹力板处MMP-2也有明显的表达。正常血管壁不表达TIMP-1,损伤后第3天,中膜和外膜表达达高峰。第7天,新生内膜表达达高峰,中膜和外膜仍有较高水平表达。结论MMP-9、MMP-2、TIMP-1参与再狭窄,内膜MMP-9表达与早期增殖的细胞向内膜迁移形成新生内膜有关。MMP-2表达与晚期内膜形成、内膜重塑有关。TIMP-1的表达对内膜增生和重塑没有直接作用,其表达升高是机体为适应MMPs升高做出的代偿反应,在维持自身平衡中起作用。     

双套管法慢性颈脊髓压迫症模型的实验研究

目的探讨研究一种理想的模拟脊髓型颈椎病脊髓慢性压迫的实验模型。方法结扎犬两侧椎动脉,采用自制弹性塑料双套管导管经颈前入路埋入犬C5椎体上缘正中,通过内套管的缓慢推动作用,产生对颈脊髓的慢性压迫。结果通过对犬行为学、影像学、电生理及组织学观察,对犬颈脊髓慢性损伤符合颈脊髓慢性压迫症病理改变的特点。结论双套管法致颈脊髓受到慢性压迫是一种简便,理想及可靠的实验方法。     

体外遥控压迫装置构建羊慢性颈脊髓压迫模型

目的 :使用一种体外遥控的压迫装置制作羊慢性颈脊髓压迫模型,以实现可数字化精确调控的压迫过程。方法:压迫装置由椎间压迫装置和体内皮下控制模块两部分组成,整个装置由体外安卓手机遥控控制。12只成年小尾寒羊随机分成3组,每组4只,分别为对照组(A组),压迫10周组(B组)和压迫20周组(C组)。将压迫装置置入到C2/3椎间隙并固定,将控制模块置入皮下。A组在手术后推杆不推进,B组和C组动物在清醒状态下遥控推杆每两天推进0.1mm,观察术后1周、5周、10周、15周、20周各组动物Tarlov评分;术后1周、5周、10周、15周、20周行CT扫描并计算椎管内侵占率(ER);术后即刻、1周、10周、20周时进行电生理检查;实验终止时,取C2/3节段脊髓切片,分别进行HE染色、尼氏体染色及TUNEL检测,观察组织学改变。用Pearson相关系数及一般线性回归分析B、C组ER与时间(t)的关系,用Pearson相关系数分析ER与Tarlov评分的关系。结果:实验过程中,B组1只羊的皮下控制模块出现故障,经再次手术更换后故障排除。A组动物术后20周内Tarlov评分未观察到变化,均为5分;实验终止时,B组动物中两只为5分,两只为4分;C组动物中3只为3分,1只为2分;C组在实验终止时的行为学评分与A组终止时存在显著性差异(P0.05)。实验终止时,B组动物ER为(33.0±1.8)%,C组动物ER为(64.8±1.9)%,B组及C组动物ER与t的Pearson相关系数r=0.998(P0.001);ER与t的线性回归方程为ER=3.197t。ER与Tarlov评分呈负相关(r=-0.862,P0.001)。手术过程中及术后即刻,全部动物潜伏期和波幅都未发生明显改变;术后即刻、术后1周时,B组和C组动物的SEP潜伏期及波幅与A组比较无显著性差异,但10周及20周时较A组潜伏期明显延长(P0.001),波幅明显下降(P0.001)。实验终止时,A组观察到形态正常的前角运动神经元和皮质脊髓束神经纤维结构;B组切片中观察到前角运动神经元细胞萎缩,尼氏体减少,皮质脊髓束轴索出现脱髓鞘病变和空泡变性等,此情况在C组中更加明显,各组间异常形态细胞比例存在显著性差异(P0.001);TUNEL检测观察到荧光阳性细胞数目随着压迫时间增加而显著增加(P0.001)。结论:应用该体外遥控的压迫装置可以建立羊的可靠、精准可控的慢性颈脊髓压迫模型。     

颈髓慢性受压与减压对神经细胞凋亡的影响

目的：观察脊髓慢性受压不同时间以及手术减压后不同时间受压节段神经细胞凋亡的变化。方法：将56只雄性山羊随机分为对照组（8只）、颈脊髓受压3个月组（24只）和6个月组（24只），同时将受压迫3、6个月组再分为减压术前及术后1、3个月组（每组8只）。实验动物通过颈椎前路钛合金螺钉和后路钢板置入产生慢性压迫。各组在相应时间点处死动物后取压迫节段脊髓标本，应用TUNEL技术和免疫组织化学方法检测受压脊髓不同部位神经细胞的凋亡情况。结果：脊髓慢性受压3、6个月后在受压节段不同区域均可见凋亡细胞，受压6个月组较受压3个月组有更多的凋亡细胞数（P〈0．05）。后角胶质细胞凋亡变化幅度最大，而后角神经元凋亡变化幅度最小。减压手术后1个月脊髓各区凋亡细胞均减少，减压后3个月时减少更为明显（P〈0．05）。结论：颈脊髓慢性受压后不同时间在脊髓不同区域出现不同数量的凋亡细胞，压迫时间越长凋亡细胞数越多；减压手术后脊髓受压区域凋亡细胞数目开始减少，术后时间越长凋亡细胞数目越少。     

一种新型慢性压迫性颈髓损伤大鼠模型的建立

目的 建立并验证一种新型慢性压迫性颈脊髓损伤大鼠模型. 方法 2011年6-2011年11月,将54只SD大鼠随机分为对照组(n=6)、急性压迫组(4h、24h,n=6)、慢性压迫组(4h、12 h、24 h、48 h、72 h、1周,n=6).在C5～6硬膜外间隙置入不同规格吸水聚氨酯胶片制作急、慢性压迫性脊髓损伤模型.造模后不同时间行MRI、组织学和组织化学观察,运动功能评分(BBB)评价神经功能. 结果 ①急性压迫组4 ～24 h,T2WI见脊髓明显受压、髓内高信号,组织学见脊髓出血坏死,前角神经元计数显著低于对照、慢性压迫组(P＜0.05),BBB评6.0分.②慢性压迫4～12h,见脊髓水肿、中央管变形,神经元计数、髓鞘染色强度与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),BBB评20.6分;24 ～ 72 h,脊髓受压明显,中央管扩大、静脉淤血,神经元计数减少(P＜0.05),后索神经纤维排列紊乱、断裂,髓鞘染色强度低于对照组(P＜0.05),BBB评19.3分;1周,髓内空泡化,神经元数目减少(P＜0.05),后索髓鞘蓝染强度低于对照组(P＜0.05),BBB评17.5分.T2WI示脊髓受压变形,髓内未见出血信号. 结论 慢性压迫组造模方法可以实现慢性压迫性脊髓损伤,符合慢性压迫性脊髓损伤的病理、影像学和神经功能变化特征.     

基质金属蛋白酶家族在骨关节炎软骨组织中表达的研究

[目的]观察骨关节炎关节软骨中MMP-7、MMP-9、MMP-13和TIMP-1的表达,探讨其与软骨退变的关系及可能的作用机制。[方法]选取20例因骨关节炎行关节置换的软骨组织,常规HE染色观察其组织学形态,ABC免疫组化法观察关节软骨MMP-7、MMP-9、MMP-13和TIMP-1的表达,2例因意外受伤截肢患者的正常膝关节软骨标本作为对照。统计采用Mann-Whitney U非参数检验及相关分析。[结果]骨关节炎关节软骨出现裂隙、纤维化,软骨细胞增多、排列紊乱,并出现大量簇聚软骨细胞和肥大软骨细胞。MMP-7和MMP-13在正常软骨全层均呈低表达,但在退变软骨中的表达则明显增多,光密度值行U检验,两组差异有显著性(P<0.01)。在正常与OA软骨的浅层,MMP-9和TIMP-1的表达无显著性差异(P>0.05);但在深层软骨中,OA软骨MMP-9和TIMP-1的表达较正常软骨明显增多,两组差异有显著性(P<0.01)。[结论]MMP-7,13在OA软骨全层表达均多于正常软骨;MMP-9,13仅在OA软骨深层出现过多表达。MMPs与TIMPs的失衡是导致关节软骨发生组织学退变的原因之一。     

大鼠慢性颈脊髓压迫减压术后神经功能改变及其相关机制探讨

目的:观察大鼠慢性颈脊髓压迫减压术后神经功能的恢复情况,探讨其相关机制。方法:30只成年SD大鼠随机分为假手术组(A组,10只)、压迫组(B组,10只)和减压组(C组,10只)。压迫组和减压组在C6~C7椎板下置入聚乙烯醇丙烯酰胺互穿网络水凝胶制作慢性颈脊髓压迫模型,减压组于造模后4周行手术咬除椎板充分减压。三组均于造模后4周行运动诱发电位(MEP);12周先行MRI和MEP检测,再处死大鼠取出颈段脊髓,行大体形态观察和组织学切片,快蓝(LFB)染色观察三组大鼠脊髓组织髓鞘变化,免疫荧光染色观察神经元数目形态及脑源性神经营养因子(BDNF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的变化。结果:造模后4周时,B、C组MEP潜伏期与A组比较明显延长(P<0.05),波幅与A组比较明显降低(P<0.05),B组和C组比较潜伏期和波幅均无显著性差异(P>0.05)。造模后12周时MRI轴位和矢状位均显示B组大鼠椎管狭窄,颈脊髓明显受压,A组和C组大鼠椎管无明显狭窄,脊髓无明显受压;三组间MEP潜伏期和波幅两两比较差异有显著性(P<0.05),潜伏期A组C组>B组。大体形态观察示A组脊髓形态正常,B组脊髓受压节段压痕明显,C组压痕较B组轻。LFB染色示A组脊髓组织中髓鞘染色密集,B组轴突脱髓鞘明显,C组脱髓鞘现象较B组轻。免疫荧光染色示A组脊髓组织中可见大量形态正常的神经元;B组脊髓受压节段压迫侧神经元明显减少,胞体固缩;C组脊髓受压节段神经元数量比B组多,有轻微细胞固缩,三组神经元计数有显著性差异(P<0.05),A组>C组>B组。免疫荧光染色示A组大鼠脊髓组织有少量BDNF和VEGF的表达;B组大鼠BDNF表达水平较A组有所升高,且主要集中在脊髓受压部位附近的白质区域,VEGF表达无明显增加;C组BDNF和VEGF表达水平明显增加,主要集中在原受压部位白质周围,灰质部位有少量表达。C组BDNF和VEGF表达阳性细胞计数与A、B组比较有显著性差异(P<0.05);B组BDNF表达阳性细胞与A组比较有显著性差异(P<0.05),VEGF表达阳性细胞数与A组无显著性差异(P>0.05)。结论:大鼠慢性颈脊髓压迫减压术后神经功能有所恢复,其可能是通过减轻神经元损伤和轴突脱髓鞘改变、增加BDNF和VEGF的表达水平,从而促进受损脊髓组织的修复。     

大鼠慢性颈髓损伤后颈髓中IL-1β的表达及其与神经细胞凋亡的关系

目的:观察白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)在慢性颈髓损伤大鼠颈脊髓中的表达及其与神经细胞凋亡的关系。方法:4月龄SD大鼠随机分为3组:A组(模型组),破坏大鼠颈椎后柱稳定性建立慢性颈髓损伤模型,造模后立即腹腔注射生理盐水10μl,以后每周注射一次;B组(药物干预组),建立模型后立即腹腔注射IL-1受体阻滞剂(IL-1Ra,1mg/μl)10μl,以后每周注射一次;C组(对照组),切开颈椎后方皮肤后即缝合。分别饲养3、5个月后,腹腔麻醉取C4～C6脊髓。免疫组化法测定颈脊髓IL-1β的表达,TUNEL法测定颈脊髓神经细胞凋亡情况,Western Blot及定量RT-PCR分别测定caspase-3的蛋白表达及mRNA含量。结果:相同时间点颈脊髓IL-1β的表达A、B、C三组间均有显著性差异(P<0.05),A、B组同组间不同时间点比较也有显著性差异(P<0.05)。5个月时A、B、C三组神经细胞凋亡数分别为32.38±4.75个、16.56±3.89个、1.82±0.64个,三组间比较有统计学差异(P<0.01)。颈脊髓caspase-3的蛋白表达随着时间延长表达增强,使用IL-1Ra后,其表达明显减弱(P<0.05)。caspase-3 mRNA含量(拷贝数取对数)3个月时A组为8.46±0.32,B组为8.30±0.26,C组为7.95±0.36;5个月时A组为8.92±0.85,B组为8.50±0.78;C组为8.05±0.46,相同时间点各组间比较有统计学差异(P<0.01)。结论:IL-1β在大鼠慢性颈脊髓损伤的脊髓组织中有异常表达,其可能通过激活caspase-3基因参与诱导细胞凋亡。     

人类恶性胶质瘤细胞中变异型IκBα对基质金属蛋白酶-2、-9表达的调节作用

目的 探讨变异型IκBα（IκBαM）基因对人类多形性胶质母细胞瘤（GBM）细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-2、-9表达的调控作用。方法 通过构建质粒、基因转染以及IκBαM蛋白表达的筛选，建立稳定表达IκBαM的人类GBM细胞株，运用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测细胞及肿瘤组织内MMP-2、MMP-9在RNA水平的表达；并将肿瘤细胞植入裸鼠皮下制作异位移植瘤生长动物模型，进一步通过免疫组织化学染色方法分析MMP-2、MMP-9的蛋白表达。结果RT-PCR结果显示，体外试验中，MMP-2与对应GAPDH平均吸光度值的比值分别为1．450±0．180（G36Δ-W）、0．292±0．040（G36Δ-M）、1．187±0．140（G36Δ-P）和1．463±0．160（G36Δ）；MMP-9与对应GAPDH平均吸光度值的比值分别为1．424±0．130（G36Δ-W）、0．275±0．020（G36Δ-M）、1．357±0．180（G36Δ-P）和1．608±0．240（G36Δ）。在体内试验中，MMP-2与对应GAPDH平均吸光度值的比值分别为0．870±0．060（G36Δ-W）、0．024±0．010（G36Δ-M）、0．785±0．070（G36Δ-P）和0．686±0．070（G36Δ）；MMP-9与对应GAPDH平均吸光度值的比值分别为0．768±0．010（G36Δ-W）、0．054±0．010（G36Δ-M）、0．802±0．020（G36Δ-P）和0．746±0．020（G36Δ）。在体外和体内试验中，G36Δ-M组与其余各组之间的差异均有统计学意义（P〈0．05），而其他3组间差异无统计学意义。体内试验肿瘤组织中，MMP-2及MMP-9的在G36Δ-M组中的染色显著低于G36Δ、G36Δ-W和G36Δ-P组；而在G36Δ、G36Δ-W和G36Δ-P三组间的表达差异无统计学意义。结论 IκBαM基因可以在分子及蛋白水平显著抑制人类恶性胶质瘤中MMP-2、MMP-9的表达，减弱肿瘤细胞的侵袭和浸润能力。     

Diabetes-related intestinal region-specific thickening of ganglionic basement membrane and regionally decreased matrix metalloproteinase 9 expression in myenteric ganglia

BACKGROUNDThe importance of the neuronal microenvironment has been recently highlighted in gut region-specific diabetic enteric neuropathy. Regionally distinct thickening of endothelial basement membrane (BM) of intestinal capillaries supplying the myenteric ganglia coincide with neuronal damage in different intestinal segments. Accelerated synthesis of matrix molecules and reduced degradation of matrix components may also contribute to the imbalance of extracellular matrix dynamics resulting in BM thickening. Among the matrix degrading proteinases, matrix metalloproteinase 9 (MMP9) and its tissue inhibitor (TIMP1) are essential in regulating extracellular matrix remodelling.AIMTo evaluate the intestinal segment-specific effects of diabetes and insulin replacement on ganglionic BM thickness, MMP9 and TIMP1 expression.METHODSTen weeks after the onset of hyperglycaemia gut segments were taken from the duodenum and ileum of streptozotocin-induced diabetic, insulin-treated diabetic and sex- and age-matched control rats. The thickness of BM surrounding myenteric ganglia was measured by electron microscopic morphometry. Whole-mount preparations of myenteric plexus were prepared from the different gut regions for MMP9/TIMP1 double-labelling fluorescent immunohistochemistry. Post-embedding immunogold electron microscopy was applied on ultrathin sections to evaluate the MMP9 and TIMP1 expression in myenteric ganglia and their microenvironment from different gut segments and conditions. The MMP9 and TIMP1 messenger ribonucleic acid (mRNA) level was measured by quantitative polymerase chain reaction.RESULTSTen weeks after the onset of hyperglycaemia, the ganglionic BM was significantly thickened in the diabetic ileum, while it remained intact in the duodenum. The immediate insulin treatment prevented the diabetes-related thickening of the BM surrounding the ileal myenteric ganglia. Quantification of particle density showed an increasing tendency for MMP9 and a decreasing tendency for TIMP1 from the proximal to the distal small intestine under control conditions. In the diabetic ileum, the number of MMP9-indicating gold particles decreased in myenteric ganglia, endothelial cells of capillaries and intestinal smooth muscle cells, however, it remained unchanged in all duodenal compartments. The MMP9/TIMP1 ratio was also decreased in ileal ganglia only. However, a marked segment-specific induction was revealed in MMP9 and TIMP1 at the mRNA levels.CONCLUSIONThese findings support that the regional decrease in MMP9 expression in myenteric ganglia and their microenvironment may contribute to extracellular matrix accumulation, resulting in a region-specific thickening of ganglionic BM.