卵巢癌微环境中巨噬细胞和LPA的研究进展

卵巢癌是妇科肿瘤中最致命的一种癌症,其特点是独特的肿瘤微环境(TME),使其具备特异和高效的转移机制,能削弱免疫监测、导致抗药性。肿瘤相关巨噬细胞(TAM)是肿瘤微环境的重要组成部分,参与了肿瘤发生、发展的各个方面。TAM合成的溶血磷脂酸(LPA)是卵巢癌中LPA的主要来源,并且TAM细胞表面表达LPA的受体蛋白(LPAR)。LPA在卵巢癌血液、腹水和组织中显著升高,使其成为有用的生物标记物和潜在的治疗靶点。LPA可调节巨噬细胞的分化,诱导单核细胞转化为巨噬细胞。本文综述了近年来巨噬细胞和LPA在卵巢癌中的研究进展,巨噬细胞和LPA的相互关系,重点介绍了TAM和LPA在卵巢癌中的作用。     

溶血磷脂酸与卵巢肿瘤

溶血磷脂酸(LPA)是一种多功能磷脂信使,通过G蛋白耦联受体介导的多种信号传导通路发挥其生物学效应.已知的人类LPA受体有3种,LPA1(Egd2),LPA2(Edg4)和LPA3(Edg7),其中LPA1主要分布于正常组织,而LPA2和3在某些肿瘤组织中明显增多.LPA主要通过靶细胞上特异性受体发挥其多种生物学功能.近年的研究表明,其与卵巢癌的发生、发展、浸润、转移及代谢耐药关系极为密切,了解其作用机制,信号传导通路及与卵巢肿瘤的关系,可指导早期诊断、复发预测、预后判断及基因调控靶向治疗卵巢癌.     

间充质干细胞与卵巢癌的相互作用

间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSCs)与肿瘤的关系日益受到重视。MSCs可趋化到肿瘤局部,参与间质形成,与肿瘤细胞相互作用。研究表明,MSCs可通过分泌细胞因子、促进肿瘤干细胞化等抑制或促进卵巢癌细胞增殖;与卵巢癌细胞发生交互作用,促进或抑制卵巢癌的侵袭和转移;MSCs还可通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、骨形成蛋白4/Hedgehog(BMP4/HH)信号通路增强卵巢癌化疗耐药性;可利用MSCs对肿瘤组织的趋向性将其作为载体构建靶向给药系统对卵巢癌进行靶向治疗。因此,MSCs在卵巢癌的发生发展中起重要作用,为该病的治疗提供了新的研究思路,但具体作用及机制仍存在较多争议,有待进一步研究。     

溶血磷脂酸与卵巢癌

溶血磷脂酸(LPA)是一类生长因子的磷脂类信号分子,通过G蛋白偶联受体引起多种生物学效应,其中最主要的作用是诱导各类细胞增生。近年研究发现,LPA在卵巢癌患者的腹水及血浆中显著增高,有可能成为卵巢癌早期诊断的有效标志物。体外研究表明,LPA能促进卵巢癌细胞增殖,在癌细胞的浸润和转移过程中起重要作用。调节LPA的代谢,阻断LPA受体,干扰LPA信号传递途径,均可成为新的抗卵巢癌药物的治疗靶点。     

靶向阻断CXCR4对卵巢上皮性癌上皮间质转化影响的研究

目的:探讨靶向阻断趋化因子受体4(CXCR4)对卵巢上皮性癌上皮间质转化(EMT)形成及肿瘤侵袭转移的影响。方法:CXCR4拮抗剂AMD3100作用后,采用MTT法、细胞克隆形成能力实验及Transwell侵袭实验分别检测卵巢癌细胞的增殖能力、细胞克隆形成能力及侵袭能力;采用Western blot法检测卵巢癌OVCAR3细胞中CXCR4以及EMT相关蛋白的表达。结果:AMD3100作用后,卵巢癌细胞OVCAR3的增殖能力、细胞克隆形成能力及侵袭能力明显受到抑制,且卵巢癌细胞中随着CXCR4表达的下降,EMT相关蛋白E-cadherin表达升高,而Vimentin、Snail表达则明显下降,且呈浓度依赖性,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P0.05)。结论:CXCR4可能调节EMT相关蛋白的表达,从而抑制卵巢癌的增殖、侵袭及转移能力。CXCR4有望成为治疗卵巢上皮性癌的新靶点。     

RNA干扰EFEMP1对卵巢癌细胞增殖、侵袭与转移的影响

目的:探讨fibulin糖蛋白家族中fibulin-3(EFEMP1)对卵巢癌细胞增殖、侵袭与转移的影响,为卵巢癌针对性治疗提供理论基础。方法:利用慢病毒转染RNA干扰的方式,转染具有高侵袭转移能力的S1克隆细胞株,抑制EFEMP1表达。Western blot、Real-time RT-PCR和免疫组化对转染效果进行验证。采用体外细胞功能分析技术检测干扰前后EFEMP1对细胞增殖、侵袭与转移能力的影响。建立裸鼠皮下移植瘤模型,体内观察EFEMP1对肿瘤生长的影响。结果:RNA干扰有效抑制EFEMP1表达,EFEMP1降表达显著抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和转移能力,裸鼠体内成瘤率降低并且肿瘤体积显著下降,同时肿瘤组织Fibulin基因表达显著降低。结论:EFEMP1与卵巢癌发生发展及侵袭转移密切相关,为卵巢癌的治疗提供新的思路。     

肝细胞生长因子对卵巢癌细胞侵袭作用的影响

肝细胞生长因子（HGF）与其受体c-met蛋白特异性结合，可激活多条信号传导通路的级联反应，促进细胞增殖、肿瘤血管形成、肿瘤细胞的侵袭等。为了解HGF对卵巢癌细胞浸润转移的促进作用及其对卵巢癌细胞核转录因子（NFKB）通路的传导作用，采用Boyden小室体外侵袭实验观察HGF对卵巢癌细胞株SKOV3细胞侵袭作用的影响，     

微小RNA在卵巢癌中侵袭转移机制的研究进展

微小RNA(micro RNA,miRNA)是一类长约20～22个核苷的非编码RNA分子。miRNA通过调控靶基因影响肿瘤细胞的分化、增殖、转移及细胞坏死。大量研究提示miRNA与人类恶性肿瘤有关,其在卵巢癌组织中表达往往存在异常。卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,90%以上的卵巢癌是上皮性癌,5年生存率仅30%,因卵巢癌早期多无明显症状,故在诊断时,肿瘤发生转移率高。卵巢癌的侵袭转移机制涉及多种物质及通路,有大量研究表明肿瘤干细胞相关miRNA、上皮-间充质转换相关miRNA、细胞外基质相关miRNA以及血管形成相关miRNA与卵巢癌侵袭、转移过程有关,其在卵巢癌组织中的异常表达能通过调控下游物质的表达,从而参与卵巢癌的发生发展及侵袭转移。综述miRNA在卵巢癌中侵袭转移相关机制方面的研究。     

MUC16在卵巢癌发生发展中的研究进展

MUC16,又名CA125,是一种表达于各类上皮细胞表面的高分子量糖蛋白,主要发挥保护和修复上皮的作用。MUC16是早期诊断上皮性卵巢癌的重要肿瘤指标,广泛应用于临床。近来研究发现,MUC16的异常表达与卵巢癌的不良预后和发生发展密切相关。MUC16可以通过与间皮素结合促进卵巢癌远处转移,可以通过抑制肿瘤细胞和免疫细胞形成免疫突触帮助卵巢癌细胞实现免疫逃逸。MUC16还可以通过在卵巢癌中的过表达来影响肿瘤细胞的上皮间质转化（EMT）、增殖、迁移和转移,促进卵巢癌的发生发展。尽管有关MUC16与卵巢癌的研究逐渐取得进展,但MUC16的生化结构及其在卵巢癌中具体作用机制仍处于研究阶段。综述MUC16的生化结构及其在卵巢癌细胞的免疫逃逸和卵巢癌增殖、迁移、侵袭和转移中的研究进展,旨在为卵巢癌的治疗提供新的靶点。     

MicroRNAs调控卵巢癌干细胞影响卵巢癌转移的研究进展

卵巢癌患者的死亡率居妇科肿瘤首位,腹腔内广泛转移是引起患者死亡的主因。卵巢癌干细胞(OCSCs)是少量具有自我更新、多向分化、无限增殖能力的细胞,在卵巢癌的发生和转移过程中起着重要作用。MicroRNAs是一类非编码单链小分子RNA,在转录后水平调控靶mRNA翻译而影响基因表达,也可通过调控肿瘤相关基因在肿瘤发生、发展中起癌基因或抑癌基因的作用。MicroRNAs表达异常可改变OCSCs的干细胞特性及其转移能力,进而影响卵巢癌的转移。近年两者在卵巢癌转移中的作用成为研究热点,现将有关MicroRNAs调控OCSCs的干细胞特性及通过调控OCSCs影响卵巢癌转移机制的研究做一综述。     

溶血磷脂酸受体在卵巢癌细胞系3AO、OVCAR3、SKOV3及卵巢癌组织中的表达

目的:研究溶血磷脂酸受体在人卵巢癌细胞系和人卵巢癌组织中蛋白的表达。方法:用免疫细胞化学和免疫组织化学法检测LPA1,LPA2和LPA3蛋白在人卵巢癌细胞系3AO、OVCAR3、SKOV3和人卵巢癌组织中的表达水平。结果:免疫细胞化学显示LPA1,LPA2和LPA3蛋白在人卵巢癌细胞系中均有表达;免疫组织化学显示LPA1蛋白在正常卵巢上皮和卵巢良性肿瘤中高表达,LPA2和LPA3蛋白在人卵巢癌组织中高表达。结论:LPA1,LPA2和LPA3在人卵巢癌细胞系和人卵巢癌组织中均有广泛表达;LPA2,LPA可能与卵巢癌的发生发展密切相关。     

Lysophosphatidic acid induces focal adhesion assembly through Rho/Rho-associated kinase pathway in human ovarian cancer cells

OBJECTIVE: The level of lysophosphatidic acid (LPA) is elevated in patients with ovarian cancer, and LPA has been reported to have a pivotal role in cancer dissemination. In the current study, the effect of LPA on the motility of ovarian cancer cells was investigated. METHODS: We analyzed the effects of LPA on the migration activity, the focal adhesion formation, and the tyrosine phosphorylation of focal adhesion proteins in human ovarian cancer cell lines Caov-3 and OVCAR-3. Inhibitors of the small GTPase Rho, one of its downstream effectors (Rho-associated kinase (ROCK)), myosin light chain kinase (MLCK), and myosin light chain (MLC) phosphatase were used to examine the mechanism of LPA-induced cellular effects. RESULTS: LPA enhanced the migration of ovarian cancer cells and facilitated their invasion. Rho and ROCK played essential roles in the migratory process, as evidenced by the inhibition of migration and focal adhesion formation of cancer cells by Clostridium botulinum C3 exoenzyme (C3), an inhibitor of Rho, or Y-27632, an inhibitor of ROCK. LPA also evoked the formation of focal adhesions and tyrosine phosphorylation of focal adhesion kinase and paxillin, all of which were inhibited by C3 or Y-27632. CONCLUSION: These results suggest that LPA induced the migration of ovarian cancer cells, at least in part, through accelerated formation of focal adhesions mediated by Rho/ROCK-induced actomyosin contractility. This study may provide the basis for new therapies to control the metastasis of ovarian cancer.     

长链非编码RNA在卵巢癌增殖和侵袭中的作用机制

卵巢癌是妇科较为常见的恶性肿瘤之一,发病率较高,仅次于宫颈癌和子宫内膜癌。大多数卵巢癌患者确诊时已是中晚期。研究显示,长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）在调控卵巢癌的进展尤其是增殖侵袭中发挥着重要作用。多种lncRNA在卵巢癌组织和细胞中高表达或低表达,通过调控下游信号通路、分子海绵作用激活下游靶向分子、调控蛋白的表达等方式促进或抑制卵巢癌的增殖侵袭。敲除或沉默高表达的lncRNA能抑制卵巢癌的增殖侵袭,这些都可能是卵巢癌诊断和治疗的靶点。有些lncRNA还与卵巢癌的分期、淋巴结转移、生存期等预后因素相关,其也可能是预测预后和结局的标志物。综述lncRNA在卵巢癌增殖侵袭中的作用机制,以期为卵巢癌的诊断和靶向治疗提供依据。     

组织蛋白酶L基因与卵巢上皮性癌细胞侵袭及转移的关系

目的 构建组织蛋白酶L(CTSL)基因的真核表达质粒,通过体外实验研究CTSL基因与卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞侵袭、转移的关系.方法 采用逆转录(RT)-PCR技术从卵巢癌组织总RNA中扩增CTSL基因的cDNA全长,克隆至pMD18-T载体上;酶切、纯化CTSL基因后与pcDNA3.1载体连接,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-CTSL.应用脂质体介导的基因转染技术将重组质粒转染卵巢癌HO8910细胞,RT-PCR技术和蛋白印迹法分别检验CTSL mRNA和蛋白的表达情况,细胞增殖能力测定分别采用四甲基偶氮唑蓝法和集落形成实验,细胞周期检测、细胞体外侵袭、转移、黏附能力测定分别采用流式细胞仪、细胞体外侵袭重建基底膜实验、穿膜小室(transwell小室)实验、体外黏附实验.结果 RT-PCR和蛋白印迹法结果证实,HO8910细胞转染pcDNA3.1-CTSL质粒后有CTSL基因和蛋白的表达.HO8910-CTSL细胞的生长速度加快,但与对照的HO8910-pcDNA3.1及HO8910细胞分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05).HO8910-CTSL细胞的S+G2+M期细胞比例为37.9%,与HO8910-pcDNA3.1细胞及HO8910细胞(分别为32.9%、31.8%)比较虽有增加,但差异均无统计学意义(P>0.05).HO8910-CTSL细胞的侵袭、转移能力增加(分别为0.34±0.18、1.252±0.114),与HO8910-pcDNA3.1细胞(分别为0.17±0.04、0.486±0.027)及HO8910细胞(分别为0.16±0.05、0.459±0.674)分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);HO8910-CTSL细胞的黏附能力(0.16±0.04)与HO8910-pcDNA3.1细胞(0.19±0.04)及HO8910细胞(0.19±0.03)比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 CTSL基因真核表达质粒转染使卵巢癌细胞的体外侵袭和转移能力增加,有可能成为抗卵巢癌侵袭和转移的分子靶点.     

肿瘤转移抑制基因kai1对卵巢癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的 :探讨肿瘤转移抑制基因kai1对卵巢癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法 :脂质体介导kai1cDNA转染高转移性人卵巢癌细胞系HO 891 0PM ,免疫细胞化学S P法检测转染前后细胞内kai1蛋白的表达。用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法、平板克隆形成实验观察kai1基因对细胞增殖能力的影响 ,经细胞粘附实验、体外侵袭力实验比较转染前后细胞侵袭能力的变化。结果 :转染kai1cDNA后HO 891 0PM细胞内可检测到kai1蛋白的稳定表达 ,细胞增殖能力较前无明显变化 ,侵袭能力明显下降。结论 :外源性肿瘤转移抑制基因kai1可通过脂质体有效转染高转移性人卵巢癌细胞系HO 891 0PM ,降低其侵袭能力 ,有望成为卵巢癌基因治疗的新的候选基因     

尿激酶型纤溶酶原激活因子介导的卵巢上皮癌细胞浸润转移体外的实验研究

目地:探讨尿激酶型纤溶酶原激活因子在卵巢上皮癌浸润转移中的作用机制。方法:用RT-PCR技术从人卵巢上皮癌组织总RNA中逆转录uPA基因cDNA全长,克隆至pGEM-T Easy Vector,鉴定后与真核表达载体PCMV-HA连接,酶切及测序。用脂质体法将重组质粒DNA转染至SKOV3细胞。加压筛选并培养PCMV-HA-uPA及对照细胞。分别用RT-PCR和W estern blot方法检测转染前后SKOV3细胞uPA的表达。细胞增殖能力测定用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验,细胞周期测定用流式细胞仪法,细胞体外侵袭,迁移和黏附能力测定分别采用Matrigel Invasion,TranswellM igration和Adhersion Assay方法。结果:(1)uPA阳性表达能介导SKOV3细胞克隆形成,与对照组细胞的差异有统计学意义(P<0.05);(2)uPA阳性表达能介导SKOV3细胞的细胞周期中S期比例增加,与对照组细胞的差异有统计学意义(P<0.05);(3)uPA阳性表达介导SK-OV3细胞的体外侵袭,迁移和黏附能力均明显强于对照细胞株,差异有统计学意义(P=0.0002,<0.0001和0.0049)。结论:uPA通过促进肿瘤细胞侵袭,迁移和黏附能力在卵巢上皮癌浸润转移中起了重要作用。     

Fatty acid composition of lysophosphatidic acid and lysophosphatidylinositol in plasma from patients with ovarian cancer and other gynecological diseases

OBJECTIVE: We previously reported that plasma levels of total lysophosphatidic acid (LPA) represented a potential biomarker for ovarian cancer and other gynecological cancers [1]. However, total LPA is composed of different LPA species with distinct fatty acid chains. The major objective of the current study, therefore, was to determine whether one or more specific fatty acid LPA species was associated with disease or disease staging. If this was determined, these species could be useful in further improving the sensitivity and/or specificity of this biomarker for the diagnosis and/or prognosis of the disease. Because lysophosphatidylinositol (LPI) co-migrates with LPA, this study represents the analysis of combined molecular species from both lysolipid classes. METHODS: The patient population, sample collection, and analyses have been reported previously [1]. Lipids were hydrolyzed from the LPA band on thin-layer chromatography plates. The following individual fatty acid species were analyzed by gas chromatography: palmitic acid (16:0), stearic acid (18:0), oleic acid (18:1), linoleic acid (18:2), arachidonic acid (20:4), and docosahexaenoic acid (22:6). The LPA/LPI fatty acid composition levels were analyzed and compared with disease status. RESULTS: Distinct plasma LPA/LPI fatty acid chain species were not associated with ovarian or other gynecological cancers, compared to patients with benign gynecological disease or healthy controls. However, an increased presence of unsaturated fatty acids in plasma LPA/LPI was found in patients with late-stage or recurrent ovarian cancer and possibly with other gynecological cancers. CONCLUSIONS: Analysis of individual fatty acid species present in plasma LPA/LPI do not appear to enhance the sensitivity or specificity of total LPA/LPI as a marker for gynecological cancer detection. However, our results suggest that increased LPA/LPI species with unsaturated fatty acid chains may be associated with late-stage or recurrent ovarian cancer.