角膜缘干细胞移植治疗兔眼表碱烧伤的实验研究

目的 :探讨眼表碱烧伤后行角膜缘干细胞移植术的疗效 ,并与单纯行角膜移植术组作比较。方法 :在 16只兔双眼上制作碱烧伤模型 ,1d后 ,右眼行异体板层角膜缘干细胞移植术 ,左眼行异体板层角膜移植术 ,术后观察 6月 ,根据术眼的角膜新生血管分级、植片的混浊度、水肿度来计算移植排斥反应指数 (RI) ,以RI值判断植片的存活情况。结果 :行异体板层角膜缘干细胞移植术的 16眼中有 14眼RI <9,治愈率达 87.5 % ;行单纯异体板层角膜移植的 16眼中 6眼RI值 <9,有效率 3 7.5 % ;两者相比有显著性差异 (P <0 .0 0 1)。两组的新生血管数、植片的混浊度、水肿度及RI值均有显著性差异。结论 :含干细胞的异体角膜缘移植治疗眼表碱烧伤的疗效明显优于单纯异体角膜移植 ,是一种较有效的方法。     

兔眼表碱烧伤后复明治疗的实验

目的:评估角膜缘移植、丝裂霉素、血管抑素对眼表碱烧伤术后免疫排斥反应的抑制作用。方法:建立兔眼表碱烧伤模型,5个实验组分别行角膜移植、角膜缘移植、丝裂霉素、血管抑素及联合治疗。观察180d的角膜新生血管、混浊度、水肿度、免疫排斥反应情况并行免疫组织化学检测。结果:新生血管、角膜混浊度、角膜水肿度、角膜排斥反应指数、角膜生存率各组均具有显著性差异;免疫反应指数大于9的样本均检测到IgG型免疫复合物沉积于角膜组织中,正常角膜未见IC的沉积。结论:角膜缘移植联合丝裂霉素和血管抑素治疗眼表碱烧伤具有良好的疗效。     

不同浓度血管抑素抑制大鼠角膜血管的新生

背景：血管抑素在角膜中是否抑制组织中的新生血管生长尚不清楚。 目的：观察血管抑素溶液对大鼠角膜新生血管生长的作用。 方法：24只大鼠制备左眼碱烧伤角膜新生血管模型,随机抽签法分为4组,对照组给予生理盐水,25,50,75 mg/L AS组分别给与25,50,75 mg/L AS血管抑素溶液滴眼,4次/d至实验结束。 结果与结论：造模后第3天各组角膜均可见少量血管新生,但对照组角膜新生血管生长较其他3组明显。3~7 d,各组角膜新生血管生长速度加快,对照组角膜新生血管粗大。烧伤后14 d,对照组角膜新生血管仍然粗大未见明显消退,各浓度组较前消退明显。碱烧伤后不同时间点各浓度组角膜新生血管面积较对照组少(P < 0.05),75mg/L AS组碱烧伤14 d各时间新生血管面积较其他3组减少(P < 0.05)。Real-Time PCR结果显示：各浓度组间CD31 mRNA表达差异均有显著性意义(P < 0.01)。Western blot结果显示血管抑素作用大鼠后,各浓度组角膜组织的CD31表达均较对照组降低,且随着血管抑素溶液浓度的增加而减少。提示血管抑素能够阻止角膜新生血管的生长。     

兔角膜碱烧伤模型房水中肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子表达与姜黄素的抑制

背景：稳定的角膜新生血管动物模型是研究角膜新生血管调控机制,姜黄素对碱烧伤角膜新生血管具有抑制作用和保护作用。 目的：探讨姜黄素对碱烧伤角膜新生血管模型中肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子表达的影响,为防治角膜新生血管提供理论依据。 方法：纳入33只新西兰大耳白兔,随机取3只设为正常组,其余30只建立兔角膜碱烧伤诱发角膜新生血管模型,右眼设为对照组给予生理盐水,左眼设为干预组给予姜黄素,裂隙灯观察角膜新生血管生长及角膜混浊情况,酶联免疫吸附实验检测肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子在房水中的表达。 结果：正常组没有角膜新生血管生成。与对照组比较,干预组角膜新生血管受到抑制且角膜混浊较轻(P < 0.05)。房水肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子在3组中均有表达,对照组和干预组明显高于正常组,但干预组低于对照组(P < 0.05)。说明姜黄素可以有效降低角膜碱烧伤后房水肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子的表达进而抑制兔角膜碱烧伤后角膜新生血管的生长。     

色素上皮衍生因子对角膜碱烧伤后新生血管形成的抑制

背景：角膜新生血管导致角膜透明性降低,造成严重的视觉障碍。色素上皮衍生因子是一种内源性血管生成抑制剂,其对于角膜新生血管是否具有抑制作用尚不清楚。 目的：探索局部运用色素上皮衍生因子对大鼠角膜碱烧伤后角膜新生血管的抑制作用。 方法：将20只大鼠随机分为生理盐水组与色素上皮衍生因子组,每组10只。用NaOH溶液将大鼠右眼角膜烧伤诱导产生新生血管。碱烧伤后2组每日分别给予生理盐水和色素上皮衍生因子点眼,并采用裂隙灯显微镜观察和测量各组角膜新生血管生长情况。碱烧伤后12 d处死大鼠,将角膜组织固定切片,行苏木精-伊红染色观察,并进行免疫组织化学染色检测各组大鼠角膜血管内皮生长因子和CD31的表达。 结果与结论：大鼠角膜碱烧伤后3,7,12 d,色素上皮衍生因子组大鼠角膜新生血管面积均小于生理盐水组(P < 0.05)。角膜碱烧伤后12 d,苏木精-伊红染色显示生理盐水组大鼠角膜产生大量新生血管,角膜组织结构紊乱;色素上皮衍生因子组新生血管较少,角膜组织结构趋于整齐。角膜碱烧伤后12 d,免疫组织化学染色示生理盐水组大鼠角膜上皮和基质层可见血管内皮生长因子大量表达,角膜基质层可见血管内皮生长因子和CD31大量表达;色素上皮衍生因子组新生血管稀少,CD31表达较弱。证实局部应用色素上皮衍生因子可有效抑制大鼠角膜化学伤后的血管新生。     

颗粒状角膜营养不良一家系三例

先证者男,48岁。因双眼“近看发花”就诊。患者15~16岁时发现视力下降,曾配眼镜无效。全身检查均正常。眼部检查:远视力:右眼0.1,左眼0.2。矫正不应。近视力:右眼0.1,左眼0.1。矫正:右眼:0.33×+150D,左眼:0.5×+150D。眼压:右眼18mmHg,左眼19mmHg(非接触眼压计)。双眼结膜无充血,双眼角膜对称性中央部实质层有较密集、不规则、灰色点片状混浊。混浊间角膜透明,边界清楚,周边部大约有2~3mm透明区,角膜表面较光滑。双眼瞳孔等大、等圆,双眼晶体、玻璃体透明,双眼底正常。家系调查见图1。先证者的儿子,21岁。与父亲病史相同。全身检查均正常…     

血管内皮生长因子C在小鼠碱烧伤角膜内的表达及意义

目的观察血管内皮生长因子C(VEGF-C)在小鼠角膜碱烧伤后不同时间段角膜组织内的表达情况,探讨VEGF-C在小鼠角膜碱烧伤后新生淋巴管形成过程中的作用。方法制作小鼠角膜碱烧伤模型,分别于碱烧伤后1d、3d、5d、7d、12d和18d取材。采用免疫组化法(SP),观察VEGF-C在正常角膜和碱烧伤后不同时间段角膜组织内的表达情况。应用淋巴管内皮透明质酸受体(LYVE-1)标记淋巴管,观察小鼠碱烧伤角膜内新生淋巴管的形成情况。结果在正常小鼠角膜组织内,VEGF-C表达于角膜上皮层和内皮层。在碱烧伤角膜内,VEGF-C主要表达于角膜基质内入侵的炎性细胞和角膜上皮层细胞,并且表达增高,于碱烧伤后3d,VEGF-C的表达达到高峰(P<0.01)。碱烧伤后7d,VEGF-C的表达下降至正常水平,可见阳性表达LYVE-1的处于开放状态的新生淋巴管。结论VEGF-C可能参与小鼠角膜碱烧伤后角膜新生淋巴管形成过程。     

血管内皮生长因子D在小鼠碱烧伤后角膜的表达及其作用

目的观察血管内皮生长因子D(VEGF-D)在小鼠角膜碱烧伤后不同时间角膜组织内的表达,探讨VEGF-D在小鼠角膜碱烧伤后新生淋巴管形成过程中的作用。方法制作小鼠角膜碱烧伤模型,分别于碱烧伤后1d、3d、5d、7d、12d和18d取材。应用免疫组化SP法观察VEGF-D在正常角膜和碱烧伤后不同时间角膜内的表达,应用淋巴管内皮透明质酸受体1(LYVE-1)标记淋巴管,观察小鼠碱烧伤角膜内新生淋巴管的形成情况。结果碱烧伤后1d、3d、5d,角膜内VEGF-D表达水平明显高于正常角膜(P<0.01),于碱烧伤后3d,表达达到高峰。碱烧伤后7d,VEGF-D的表达下降至正常水平。在碱烧伤角膜内,可见阳性表达LYVE-1的新生淋巴管。结论 VEGF-D过表达可能参与小鼠角膜碱烧伤后新生淋巴管形成过程。     

Avastin对小鼠角膜新生血管形成和TGF-β1表达的影响

目的探讨Avastin对小鼠角膜新生血管形成和转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)表达的影响。方法制作小鼠角膜碱烧伤模型,随机分为碱烧伤组和Avastin治疗组,碱烧伤组连续两周内每日左氧氟沙星滴眼液滴眼3次,Avastin治疗组连续两周内应用25mg/ml Avastin结膜下隔日注射5μl+每日左氧氟沙星滴眼液滴眼3次,分别于碱烧伤后3d、7d和12d取材。体视显微镜观察角膜新生血管形成情况,应用HE染色法观察角膜组织的损伤情况,采用免疫组化法观察TGF-β1在碱烧伤后不同时间段角膜组织内的表达情况。结果在不同时间段,Avastin治疗组角膜新生血管的形成均少于碱烧伤组。在正常小鼠角膜组织内,TGF-β1表达于角膜上皮层和内皮层。在碱烧伤对照组角膜内,TGF-β1主要表达于角膜上皮细胞和角膜基质内入侵的炎性细胞,在碱烧伤后3d,TGF-β1的表达达到高峰(P0.05),在碱烧伤后12d,TGF-β1的表达恢复至正常水平。在Avastin治疗组角膜内,各时间段TGF-β1的表达均低于对照组。结论 Avastin能够抑制小鼠碱烧伤后角膜新生血管的形成,其机制可能与下调碱烧伤角膜组织TGF-β1的表达相关。     

角膜干细胞重建眼表后泪膜稳定性改变的试验研究

目的：研究角膜缘干细胞重建眼表术后泪膜生理功能改变，探讨利用角膜缘干细胞移植重建眼表的有效性和评价指标。方法：以健康雄性新西兰兔为实验对象，取左眼角膜缘干细胞体外培养，然后进行眼表重建，观察泪膜生理功能改变情况。结果：采用羊膜为载体培养角膜缘干细胞，移植修复眼表结构后，眼表细胞形态与烧伤前相似；泪膜破裂时间测试，修复后与烧伤后有显著差异（P<0.05），修复后与烧伤前无显著差异（P>0.05）。结论：利用角膜缘干细胞培养可能是重建眼表有效途径，修复后细胞结构形态和泪膜生理功能恢复良好；眼表细胞结构形态分析和泪膜破裂时间是良好的眼表重建疗效分析指标。     

Reconstruction of damaged corneas by transplantation of autologous limbal epithelial cells

BACKGROUND: Stevens-Johnson syndrome, ocular pemphigoid, and thermal or chemical burns can cause scarring and opacification of the cornea and loss of vision. Transplantation of epithelial cells from the limbus of the contralateral cornea can restore useful vision. However, this procedure requires a large limbal graft from the healthy eye and is not possible in patients who have bilateral lesions. METHODS: We took specimens of limbal epithelial cells from the healthy contralateral eyes of six patients with severe unilateral corneal disease. The epithelial cells were cultured and expanded on amniotic membrane. The amniotic membrane, together with the sheet of limbal epithelial cells, was transplanted to the denuded corneal surface of the damaged eye after superficial keratectomy to remove fibrovascular ingrowth. The mean (+/-SD) follow-up period was 15+/-2 months. RESULTS: Complete reepithelialization of the corneal surface occurred within two to four days of transplantation in all six eyes receiving transplants. By one month, the ocular surface was covered with corneal epithelium, and the clarity of the cornea was improved. In five of the six eyes receiving transplants (83 percent), the mean visual acuity improved from 20/112 to 20/45. In one patient with a chemical burn who had total opacification of the cornea, the acuity improved from the ability to count fingers at 40 cm to 20/200. No patient had recurrent neovascularization or inflammation in the transplanted area during the follow-up period. CONCLUSIONS: Transplantation of autologous limbal epithelial cells cultured on amniotic membrane is a simple and effective method of reconstructing the corneal surface and restoring useful vision in patients with unilateral deficiency of limbal epithelial cells.     

Treatment of severe ocular-surface disorders with corneal epithelial stem-cell transplantation.

BACKGROUND: Conditions that destroy the limbal area of the peripheral cornea, such as the Stevens-Johnson syndrome, ocular pemphigoid, and chemical and thermal injuries, can deplete stem cells of the corneal epithelium. The result is scarring and opacification of the normally clear cornea. Standard corneal transplantation cannot treat this form of functional blindness. METHODS: We performed and evaluated 70 transplantations of corneal epithelial stem cells from cadaveric eyes into 43 eyes of 39 patients with severe ocular-surface disorders and limbal dysfunction. Medical treatment had failed in all patients. The patients had a mean preoperative visual acuity of 0.004 (only being able to count the number of fingers presented by the examiner) in the affected eyes, which satisfies the criteria for legal blindness in most countries. In 28 eyes, we also performed standard corneal transplantation. Stem-cell transplantations were performed as many as four times on 1 eye if the initial results were not satisfactory; 19 eyes had multiple transplantations. Patients were followed for at least one year after transplantation. RESULTS: A mean of 1163 days after stem-cell transplantation, 22 of the 43 eyes (51 percent) had corneal epithelialization; of the 22 eyes, 7 eyes had corneal stromal edema and 15 eyes had clear corneas. Mean visual acuity improved from 0.004 to 0.02 (vision sufficient to distinguish the largest symbol on the visual-acuity chart from a distance of 1 m) (P<0.001). The 15 eyes in which the cornea remained clear had a final mean visual acuity of 0.11 (the ability to distinguish the largest symbol from a distance of 5 m). Complications of the first transplantation included persistent defects in the corneal epithelium in 26 eyes, ocular hypertension in 16 eyes, and rejection of the corneal graft in 13 of 28 eyes. The epithelial defects eventually healed in all but two of the eyes. CONCLUSIONS: Transplantation of corneal epithelial stem cells can restore useful vision in some patients with severe ocular-surface disorders.     

辐照灭菌冷冻干燥羊膜修复碱烧伤

背景：经辐照灭菌的冷冻干燥羊膜便于保存和使用,但羊膜经这种方式处理后其活性是否会降低、其临床疗效是否会受到影响至今仍鲜有报道。 目的：观察辐照灭菌后的冷冻干燥羊膜对兔角膜碱烧伤的修复作用。 方法：取健康成年白兔9只,均用1 mol/L 氢氧化钠烧伤角膜后,左侧眼设为羊膜组植入辐照灭菌后的冷冻干燥的羊膜,右侧眼设为对照组不植入羊膜。植入后30 d内裂隙灯显微镜每日观察角膜透明度、角膜新生血管及角膜上皮修复情况。 结果与结论：羊膜植入后30 d,羊膜组角膜透明度、新生血管及角膜上皮修复情况明显优于对照组(P < 0.05),角膜上皮愈合好,基质纤维排列更为整齐,炎细胞浸润程度轻,新生血管更少。结果证实,兔角膜碱烧伤后植入辐照灭菌后的冷冻干燥羊膜可减轻角膜炎性反应,促进角膜上皮修复,减少角膜新生血管形成。     

缝线法构建兔角膜新生血管模型

目的 比较不同缝线及缝合方式对兔角膜新生血管（CNV）模型的诱导效果。 方法 健康新西兰大白兔 45只,应用角膜缝线法制作CNV模型,根据缝线及缝合方式的不同随机平均分成5组,裂隙灯观察CNV生长趋势并摄片记录。筛选新生血管诱导稳定有效者,于角膜缝线前、缝合后7 d和14 d分别抽取动物房水,ELISA法检测血管内皮生长因子（VEGF）蛋白含量,并于相同时间点随机处死实验兔各3只,取角膜行HE染色观察组织学变化,免疫荧光染色观察VEGF表达。 结果 8-0缝线单套环平行（A1）和垂直缝合组（A2）角膜缝线分别于8 d和14 d后脱落,血管萎缩,模型制作失败;10-0缝线双套环平行（B1）和垂直缝合组（B2）14 d时分别于角膜缘见稀疏和短簇状血管,CNV诱导效率不高。10-0缝线3套环放射状缝合组（B3）CNV生长旺盛,呈束状,房水VEGF表达较缝线前增强,14 d 高于7 d。光学显微镜检查显示缝线后7 d时,B3组角膜水肿,基质CNV。VEGF免疫荧光染色见少量着色;14 d时,B3组角膜基质CNV及VEGF免疫荧光染色均较7 d时增多。 结论 角膜缝线法可诱导兔角膜CNV模型;10-0线3套环缝合法（B3）诱导CNV稳定有效,为有效诱导方法。     

胶原润眼液能够加快眼角膜上皮损伤的修复*

背景：Ⅰ型胶原不仅是角膜的主要组成成分,还能对受伤角膜起到营养修复作用,具有很好的药物缓释功能。 目的：了解胶原润眼液对兔损伤角膜的修复作用,并评价其生物安全性。 方法：采用角膜环钻制备兔双眼角膜损伤模型,抗感染处理后,右眼滴胶原润眼液作为实验组,左眼滴生理盐水作为对照组,以结膜分泌物及水肿度、2%荧光素角膜染色评分、损伤愈合率等指标评价胶原润眼液对损伤角膜的修复作用。 结果与结论：对照组兔术后结膜分泌物增多,水肿严重;实验组动物术后结膜分泌物较少,无严重水肿和充血。实验组术后第11天,13天角膜损伤愈合率明显高于对照组(P < 0.05)。体外细胞毒性试验不大于2级反应,且无致敏和刺激反应,结果显示胶原润眼液无生物学危害,能够加快兔损伤角膜的愈合。 关键词：胶原润眼液;角膜;修复;安全性;组织工程 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.03.018      

早期新鲜羊膜移植治疗重度眼热烧伤的临床分析

目的研究早期新鲜羊膜移植术在重度眼热烧伤重建眼表中的临床效果。方法收集整理急性重度眼热烧伤47例55眼，手术组28例28眼（Ⅲ度10眼，Ⅳ度18眼）早期（伤后3周内）行新鲜羊膜移植术，对照组27例27眼（Ⅲ度19眼，Ⅳ度8眼）予药物治疗，比较两种治疗方法的眼表重建效果。结果手术组Ⅲ度10眼术后眼表重建成功；手术组Ⅳ度18眼及对照组24眼丧失正常眼表结构，发生睑球粘连，5眼角膜穿孔，所有眼视力均下降，手术组眼表上皮化时间显著低于对照组（P〈0．05）。结论早期新鲜羊膜移植术可作为重度眼热烧伤后重建眼表的第一步。