一种结肠炎相关的结肠癌模型的复制

目的:建立一个成功率高、简单、易行、价廉、短期成功的结肠炎相关的结肠癌模型.方法:5周龄ICR♂小鼠320只,随机分为实验组(1-7)和阴性(8)对照组.实验1-3组分别ip10,15,20 mg/kg的1,2-二甲肼(DMH)1 wk后,再给予小鼠饮用含20 g/L的右旋葡聚糖苷钠(DSS)饮用水1 wk.实验4-6组的小鼠仅通过ip给予10,15,20 mg/kg的DMH.实验7组小鼠则只饮用含20 g/L DSS的饮用水,第8组小鼠不给予任何处理.每周记录小鼠体质量及进食量,在4,9,13 wk分别处死部分小鼠以观察小鼠的结肠炎癌变情况,并于20 wk处死剩余小鼠.结果:ip DMH(10,15,20 mg/kg)1 wk后,再饮用含20 g/L DSS的饮用水1 wk 4 wk可见40%小鼠便血.1 wk后,便血消失.至9 wk时,约有30%的小鼠再次出现便血体征.13 wk时,约10%的小鼠出现脱肛现象.20 wk时,40%左右的小鼠出现脱肛现象.在20 wk 100% ♂ ICR小鼠出现结肠腺癌,称取脾脏、胸腺以及结肠质量,结果发现,脾脏、结肠质量显著增加,胸腺质量明显减少,与对照组小鼠相比有显著性差异(脾脏质量:0.64±0.03,0.75±0.03,0.78±0.01 g vs 0.16±0.05 g,P＜0.01;结肠质量:0.93±0.06,0.96±0.02,0.01±0.06 g vs 0.31±0.06 g,P＜0.01;胸腺质量:0.027±0.001 gvs 0.045±0.004 g,P＜0.05;0.026±0.002 g vs0.045±0.004 g,P＜0.05;0.016±0.003 g vs0.045±0.004 g,P＜0.01).结论:致癌剂DMH和致炎剂DSS可诱导ICR小鼠结肠腺癌的形成,较好的模拟了结肠炎癌变过程,方法价廉、简便、易行.     

罗格列酮对大鼠溃疡性结肠炎肠黏膜NF-κB,ICAM-1表达的影响

目的:探讨罗格列酮对大鼠溃疡性结肠炎肠黏膜核转录因子-κB(NF-κB),细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法:应用三硝基苯磺酸(TNB)/乙醇灌肠制备大鼠溃疡性结肠炎模型.实验设正常对照组,模型对照组,阳性药物组(柳氮磺吡啶SASP组,100mg/kg),罗格列酮组(2,4,8mg/kg),每天灌胃给药1次,给药时间从造模后第2天开始至实验结束共8d,观察大鼠疾病活动指数(DAI)和结肠黏膜损伤指数(CMDI),生化法检测大鼠结肠组织髓过氧化酶(MPO)活性,免疫组化法检测大鼠肠黏膜NF-κBp65和ICAM-1蛋白的表达.结果:与正常组相比,模型组DAI、CMDI评分及结肠组织MPO活性明显升高(2.11±1.29vs0.11±0.17,2.67±0.82vs0.33±0.52,1.26±0.36U/gvs0.27±0.07U/g,P<0.01),结肠黏膜NF-κBp65及ICAM-1表达明显增强(0.7081±0.0671vs0.2293±0.0474;0.4846±0.0366vs0.1783±0.0201,P<0.01).罗格列酮中、高剂量组DAI,CMDI评分及MPO活性较模型组有明显下降(DAI:1.11±0.50,0.61±0.25vs2.11±1.29,P<0.05;CMDI:1.67±0.52,1.17±0.75vs2.67±0.82,P<0.05;MPO:0.82±0.13,0.51±0.10U/gvs1.26±0.36U/g,P<0.01),NF-κB及ICAM-1表达也有不同程度降低(NF-κB:0.4544±0.0379,0.2577±0.0131vs0.7081±0.0671,P<0.01;ICAM-1:0.3854±0.0277,0.2830±0.0234vs0.4846±0.0366,P<0.01).大鼠结肠黏膜NF-κB的表达与ICAM-1表达呈正相关(r=0.927,P<0.01),ICAM-1的表达与结肠组织MPO活性也呈正相关(r=0.580,P<0.01).结论:罗格列酮对大鼠溃疡性结肠炎有保护作用,其作用机制可能与抑制NF-κB活化,减少黏附分子ICAM-1产生以及降低中性粒细胞浸润有关.     

半夏泻心汤抑制DMH/DSS诱导的结肠炎相关性结肠癌的发生

目的:观察半夏泻心汤对DMH/DSS诱导的结肠炎向结肠癌转变的抑制作用.方法:♂ICR小鼠65只,随机分为正常组、模型组和半夏泻心汤3个剂量(100,200,400 mg/ kg)给药组.采用腹腔注射1,2-二甲肼20 mg/kg及饮用含20 g/L的右旋葡聚糖苷钠复制结肠炎相关的小鼠结肠癌.除模型组20只小鼠,其余30只存活小鼠在出现第二次便血时分别口服给予半夏泻心汤100,200和400 mg/kg进行治疗,1次/d,共11 wk.实验第20周,乙醚麻醉处死小鼠,截取结肠,称重;记录结肠肿瘤数目,取结肠做HE染色:摘取脾脏、胸腺称重.结果:在实验第20周,40%的模型组小鼠出现脱肛,成癌率为85%.半夏泻心汤3个剂量组则未见脱肛小鼠,100 mg/kg组成癌率为20%,200和400 mg/kg成癌率为10%.DMH/DSS诱导的结肠癌小鼠脾脏指数显著升高(6.50±4.08 mg/g vs 4.25±3.39 mg/g,P<0.01),而胸腺指数则明显降低(0.60±0.33 mg/g vs0.71±0.29 mg/g,P<0.05),与对照组相比有显著性差异.半夏泻心汤可明显的对抗结肠癌小鼠胸腺的萎缩(P<0.05),而对脾脏的增大也有明显的治疗作用(P<0.01).病理结果表明,半夏泻心汤成功的将小鼠结肠停留在炎症状态,阻止了结肠炎向结肠癌的转变.结论:半夏泻心汤能够显著地抑制结肠炎向结肠癌的转变,结肠炎的有效治疗是防止结肠癌发生的重要措施.     

青黛颗粒对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜MUC2和iNOS基因表达的影响

目的:观察青黛颗粒对TNBS诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠黏膜黏蛋白(MUC2)及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)基因表达的影响,探讨其治疗UC的可能作用机制.方法:将54只SD实验大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药物治疗组(SASP,500 mg/kg)、青黛颗粒600、900、1 200 mg/kg治疗组.造模后第3天开始灌胃给药,共给药10d.实验第14天,处死大鼠,剖取其病变结肠组织,比较各组大鼠的DAI积分和CMDI评分,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测MUC2及iNOS基因的表达.结果:较模型组青黛颗粒900、1200 mg/kg治疗组能显著降低实验大鼠DAI积分和CMDI评分,上调结肠组织中MUC2的基因表达(2.06±0.70 vs 1.24±0.47;2.34±0.86 vs 1.24±0.47.均P<0.01),且青黛颗粒1 200 mg/kg治疗组能下调iNOS的基因表达(0.35±0.12vs 0.62±0.31.P<0.05).结论:青黛颗粒可能通过上调结肠黏膜MUC2的基因表达并下调iNOS的基因表达而起到抗TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎的作用.     

番石榴叶提取物对三硝基苯磺酸诱导大鼠结肠炎结肠组织的保护作用

目的:研究番石榴叶提取物对大鼠结肠炎组织损伤的保护作用及其机制.方法:用健康Wistar大鼠建立大鼠结肠炎模型,灌胃用药2 wk后,评价大鼠结肠黏膜损伤指数(CMDI),检测结肠组织髓过氧化物酶(MPO)及超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和细胞肿瘤因子(TNF)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-10(IL-10)水平.结果:不同剂量番石榴叶提取物(200,500,800 mg/kg)灌胃均能不同程度降低模型大鼠CMDI(2.62±0.47,2.06±0.54,1.83±0.43 vs 3.15±0.39,P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),MPO活性(2240.78±479.26,2078.42±377.91,1748.85±236.71 nkat/g vs 2695.37±624.79 nkat/g P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),减少MDA含量(2.16±0.41,1.97±0.35,1.96±0.30,P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),提高SOD活性(3618.06±538.44,3756.92±577.45,4197.51±375.74 nkat/g vs 2663.37±603.79,P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),降低TNF(2.65±0.40,2.51±0.47,2.21±0.41 μg/L vs 3.30±0.63 μg/L,P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01)、IL-8(1.20±0.33,1.05±0.24,0.92±0.13 μg/L vs 1.53±0.38 μg/L,P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01)、IL-10(39.36±9.65,50.26±11.32.59.68±13.65 ng/L vs 30.74±12.91 ng/L,P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01)水平,且与用药剂量呈一定量效关系.结论:番石榴叶提取物通过拮抗氧化、免疫调节、损伤修复作用缓解结肠炎大鼠炎症反应,减轻结肠损伤.     

银杏天宝对大鼠实验性结肠炎抗氧化作用的影响

目的:在三硝基苯磺酸灌肠诱导大鼠实验性结肠炎模型中,研究银杏天宝(EGB)的治疗作用及其抗氧化损伤作用的机制.方法:应用三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠制备大鼠实验性结肠炎模型.实验设正常对照组,三硝基苯磺酸模型组,阳性药物对照组(5-ASA group,100 mg/kg),EGB组(200 mg/kg) 4组.观察大鼠肠组织大体形态和组织学评分.生化法检测大鼠肠组织超氧化物歧化酶(SOD),谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA),一氧化氮(NO)含量.免疫组化检测肠组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表达.结果:与模型组相比,EGB组结肠组织iNOS表达明显减少,NO、MDA明显降低(iNOS:19.60%±3.17% vs 81.36%±1.71%;NO:9.20±0.81μmol/g vs 14.77±1.34μmol/g;MDA:3.96±0_35 umol/g vs 6.06±0.39 umol/g;P<0.01):SOD、GSH-Px活性明显升高(SOD:32.52±1.82 kU/g vs 21.90±2.22 kU/g;GSH- Px:49.91±2.59 kU/g vs 41.26±2.90 kU/g;P<0.01).EGB能明显减少大鼠实验性结肠炎模型组大体形态和组织学评分(2.10±0.57vs 3.10±0.57:3.50±0.85 vs 4.7±0.82;P<0.01).结论:EGB可能通过抑制氧自由基反应,抗氧化损伤,抑制NO生成,来减轻结肠炎炎症反应.     

EGCG对乙酸诱导大鼠结肠炎的治疗作用及抗氧化机制

目的:在大鼠结肠炎的模型中,研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)的治疗作用及其抗氧化损伤作用的机制.方法:SD大鼠60只,随机分为正常对照组(n=10)、模型安慰剂组(n=20)、EGCG治疗组(n=15)、柳氮磺吡啶(SASP)治疗组(n=15).正常组常规饲养,模型安慰剂组、EGCG组、SASP组80 g/L乙酸造模后分别予以生理盐水2 mL/d、EGCG 50 mg/(kg·d)、SASP0.25 g/(kg·d)灌胃治疗7 d,观察大鼠活动状态,进食量,体质量,大便性状,大便出血情况,计算疾病活动指数(DAI),判断疗效.第8天处死大鼠并进行结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分,组织学评级,测定组织一氧化氮自由基(NO)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)以及超氧化物歧化酶(SOD)含量.结果:与模型安慰剂组相比,EGCG显著改善DAI(1.1±0.9 vs 3.9±0.4,P＜0.01)、CMDI(1.5±0.9 vs 3.3±0.6,P＜0.05)和组织学评级(4.6±3.1 vs 9.3±2.8,P＜0.01).与SASP组相比,EGCG显著改善DAI(1.1±0.9 vs 3.0±1.2,P＜0.01)、CMDI(1.5±0.9 vs 2.3±0.9,P＜0.05)和组织学评级(4.6±3.1 vs 7.9±4.0,P＜0.05).与模型安慰剂组相比,EGCG组NO含量显著下降(9.1±5.6 μmol/g vs 15.4±5.0μmol/g,P＜0.05),MDA含量也显著下降(0.9±0.6 μmol/gvs 1.5±0.6 μmol/g,P＜0.05),SOD含量显著提高(3090.6±568.4 nkat/mg vs 1373.6±410.1 nkat/mg,P＜0.05).与SASP组相比,EGCG组SOD含量显著提高(3090.6±568.4 nkat/mg vs 1268.6±431.8 nkat/mg,P＜0.05).结论:EGCG可通过抑制氧化损伤减轻结肠炎症反应,且疗效优于传统药物SASP.     

褪黑素对实验性溃疡性结肠炎大鼠肠组织趋化因子IL-8和MCP-1的影响

目的:探讨褪黑素对大鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)炎性损伤的保护作用及对肠组织趋化因子的影响.方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)制备大鼠UC模型,将动物随机分为正常对照组、模型组及褪黑素治疗组(2.5,5.0,10.0 mg/kg)5组.采用Western blot法及免疫组织化学法检测肠组织IL-8和MCP-1蛋白表达,生化方法检测MPO含量,并观察肠道大体形态和和组织学改变.结果:UC模型组IL-8、MCP-1蛋白表达及MPO含量较正常组显著增高(80.3±13.6 vs 12.2±5.4,87.2±7.4 vs 17.3±4.6.3450.7±135.0 nkat/g vs 416.8±73.0 nkat/g,均P<0.01),褪黑素治疗组IL-8、MCP-1蛋白表达,MPO含量(33.5±9.3,37.7±7.2,2150.4±129.0 nkat/g)均明显低于UC模型组(均P<0.01),褪黑素治疗组形态和组织损伤评分指数明显降低(1.6±0.7 vs 6.3±1.4,1.4±0.5 vs 6.24±1.04,均P＜0.01).结论:褪黑素对UC具有良好的保护作用,抑制趋化因子表达可能是其主要的作用机制之一.     

植物乳杆菌对2,4,6-三硝基苯磺酸诱导的小鼠结肠炎的治疗作用

目的:评估益生菌植物乳杆菌(LP)对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导小鼠肠道炎症损伤的治疗作用,并探讨其可能的作用机制.方法:将成年♀Balb/c小鼠随机分成3组:正常对照组(Control组),TNBS灌肠诱导小鼠结肠炎组(TNBS组)和LP干预组(TNBS+LP组).TNBS诱导肠炎模型建立后,给予TNBS+LP组小鼠灌胃LP3wk,其余两组灌胃空白对照PBS液.实验结束后对大鼠一般情况、结肠大体损伤及组织学损伤进行评估,并对各组小鼠结肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性、LTB4含量及促炎细胞因子TNF-α和IFN-γ的表达进行测定.结果:与TNBS诱导的TNBS组相比,LP明显减轻了TNBS诱导的小鼠结肠炎症,表现为疾病活动指数下降(3.37±0.36vs0.97±0.47,P<0.05),结肠大体和组织学评分显著降低(1.11±0.61vs4.62±0.40;1.48±0.40vs5.39±1.12,均P<0.05),且LP显著降低了TNBS诱导的小鼠结肠黏膜内中性粒细胞浸润,这与MPO活性降低相一致(25.14U/g±5.22U/gvs90.3U/g±7.70U/g,P<0.05).此外,LP明显降低了T...     

选择性环氧合酶-2抑制剂塞来昔布在实验性结肠炎中的作用机制

目的　明确选择性环氧合酶 (COX) 2抑制剂—塞来昔布对 2 ,4 ,6 三硝基苯磺酸 (TNBS)诱导的大鼠结肠炎的作用 ,并初步探讨其作用机制。方法　将大鼠分为四组 :第 1组和第 2组为造模组 ,第 3组和第 4组为对照组。用 0 .2 5mlTNBS乙醇溶液 (TNBS浓度 2 5mg/ml,乙醇浓度 5 0 % )灌肠 ,诱导大鼠慢性实验性结肠炎模型。造模组大鼠于造模前 3h开始 ,分别给予塞来昔布 (1.2 5mg/kg ,第 1组 )和蒸馏水 (第 2组 ) ,每天 2次 ,共 7d。第 3组大鼠为正常对照组。第 4组大鼠以塞来昔布 (1.2 5mg/kg)灌胃 ,每天 2次 ,共 7d。于第 7天实验结束时处死所有存活动物 ,观察结肠黏膜的损伤程度 ,同时用放射免疫分析法测定结肠黏膜前列腺素E2 (PGE2 )水平。结果　造模组大鼠结肠损伤积分分别为11.15± 3.30 (第 1组 )和 8.5 0± 2 .82 (第 2组 ) ,均显著高于正常对照组 0 .6 2± 0 .0 9(P值均 <0 .0 1)。第 1组的结肠损伤积分显著高于第 2组 (P <0 .0 5 )。第 3组和第 4组的积分差异无显著性。造模组大鼠结肠黏膜PGE2浓度分别为 (12 .0 0± 4 .33)pg/ μg(第 1组 )和 (17.2 0± 9.6 2 ) pg/ μg(第 2组 ) ,均显著高于正常对照组的 (6 .0 2± 3.39) pg/ μg ,(P值均 <0 .0 5 )。第 1组的PGE2浓度显著低于第 2组 (P <0 .0 5 )