水基微囊化疫苗肠道外接种后可增强小鼠的病毒特异性体液免疫应答

作者对水基微囊提高小鼠肌肉接种小量抗原后特异性IgG水平的能力进行了评价.将5ml牛轮状病毒WC3株的细胞培养液[含1×10~7蚀斑形成单位(pfu)/ml]加到5ml0.68mM藻酸钠或0.68mM硫酸软骨素钠溶液中,然后以约5μm大小的微滴分散到40ml.55mM盐酸精胺中.     

成人志愿者接种Ⅱ型登革热病毒减毒活疫苗(16681-PDK53)后的临床、免疫学和生物学应答

作者对10名成人志愿者皮下接种1ml用原代狗肾细胞传代减毒的Ⅱ型登革热病毒(DEN-2)活疫苗(16681-PDK 53株)[每ml含1.9～2.7×10~4蚀斑形成单位(PFU)]以评价疫苗的安全性、感染性和免疫原性。第1组5人,均未接种过DEN和乙型脑炎(JE)疫苗;第2组5人,未接种过DEN疫苗,但接种过JE疫苗。所有志愿者接种后均未出现体温升     

乙型脑炎减毒活疫苗病毒中国SA14-14-2株在原代狗肾细胞培养中的适应和人用疫苗的制备

作者将乙型脑炎(JE)病毒SA14-14-2株在原代狗肾细胞(PCK)、原代鸭胚细胞(PDE)和恒河猴肺二倍体细胞(FRhI-2)中培养传代,结果在PCK细胞中传4代后,病毒滴度可达6.01og_(10)蚀斑形成单位(PFU)/ml,经进一步传代仍可维持该滴度,因此,选择PCK细胞作为制备疫苗种子病毒的细胞基质.疫苗种子病毒(PCK-7)在LLC-MK2细胞内的蚀斑形态为均匀的小型蚀斑,而亲本株的蚀斑则大小不一.但在高温培养时,根     

一株新的温度敏感性无毒力狂犬病病毒突变株的特性

作者从狂犬病病毒标准攻击株(CVS)的蚀斑纯化克隆中分离出一个温度敏感性突变株tsGl,其糖蛋白中的第132位亮氨酸由苯丙氨酸所取代.tsGl的表型为F~+,即在非受纳温度(NPT)时病毒的转录、复制和蛋白合成能力与野毒株相似.tsGl是第一个表现为对成年小鼠肌肉注射后完全无毒力,并具有很高保护力CVSts突变株.该突变株具有如下特点:(1)尽管在33℃时病毒滴度正常,但在38.5℃时不能形成蚀斑.BHK-21细胞的BSR克隆感染该病     

无小鼠神经毒力的乙型脑炎病毒/登革病毒1型嵌合病毒的筛选与序列分析

目的  采用蚀斑纯化法筛选对小鼠无神经毒力的乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）/登革病毒（dengue virus,DENV）1型嵌合病毒（JD1）纯化株,分析影响JD1小鼠神经毒力的相关位点。方法  将JD1在乳地鼠肾细胞中进行3轮蚀斑纯化,检测JD1纯化株对小鼠的脑内神经毒力。然后提取无神经毒力纯化株的基因组RNA,用逆转录PCR分段扩增全基因组序列并进行序列测定。将测序结果分别与原DENV-1 的前膜-包膜蛋白和JEV骨架病毒株SA-14-14-2的基因序列进行比对。选取2个无神经毒力纯化株进行小鼠免疫保护实验。采用单侧t检验对结果进行比较。结果  经过3轮蚀斑纯化后,获得大、中、小3种蚀斑形态的6个JD1纯化株。3个纯化株对小鼠无神经毒力,小鼠脑内注射后全部存活;1株神经毒力较弱,70%以上小鼠存活;2株具有强神经毒力,小鼠全部死亡。测序结果显示,对小鼠无神经毒力的3个纯化株存在2处相同的氨基酸突变。将其中2个纯化株JD1-PP-61和JD1-PP-31腹腔免疫小鼠后,再用1 000半数致死量DENV-1鼠脑适应株进行脑内攻击。JD1-PP-61能较好地保护小鼠抵抗病毒攻击,仅20.0%小鼠死亡（t=7.237,P<0.001）;JD1-PP-31保护效果稍弱,41.9 %小鼠死亡（t=4.752,P<0.01）。结论  通过蚀斑纯化筛选出对小鼠无神经毒力的JD1纯化株,并发现了可能与神经毒力减弱相关的位点。     

BaIb/c小鼠及其衍生杂交小鼠腹水中单克隆抗体产量的比较

本文作者将Balb/c近亲繁殖鼠系与两株远缘繁殖小鼠系Swiss-Webster或MF_1杂交,用于提高杂交瘤腹水产量.作者使用6周龄雄性Balb/c小鼠和11周龄杂交鼠,每只腹腔注射0.5ml降植烷,第7天腹腔注射1×10~6杂交瘤细胞,并记录小鼠性别、腹水产量及实体瘤的产生,并用病毒中和试验、荧光抗体试验及放射免疫试     

抗HBsAg的单克隆抗体用于HBsAg的自动化检测

作者用经亲和层析法纯化的HBsAg免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合。选得3株分泌抗-HBs的杂交瘤细胞。此3株细胞分泌的抗体具有HBsAg a决定簇特异性,均属小鼠IgGl亚类。其中一株杂交瘤细胞(K1/3/2)用被动血凝试验测得其细胞培养液中抗-HBs的血凝滴度为2×10~4,小鼠腹水中抗-HBs的血凝滴度为10~7。腹水抗体经(NH_4)_2SO_4沉淀,DEAE-Seph-     

环硫雄醇抗人乳腺癌和子宫颈癌细胞生长的作用

环硫雄醇(Epitiostanol)学名:2α,3α-环硫-5α-雄甾-17β醇,据报道有抗癌作用。最近我们在国内首次人工合成环硫雄醇纯品,并以免疫抑制小鼠及人乳腺癌细胞株(BCap-37)和子宫颈癌细胞株(HeLa)为模型,进行了抗癌活性的研究。实验方法与结果一、剂量反应试验:BCap-37及HeLa细胞传代并各接种21瓶(3×10~5细胞/瓶),随机分成7组,每3瓶一组;置37℃温箱培养24小时后更换新鲜培养液,分别加入0、50、100、250、500、1000μg/ml的环硫雄醇及50ml蒸馏水;在37℃温箱内作用12小时后以苔盼蓝排除法计算各剂量组的细胞存活率,取存活率50％对应剂量作为实验剂量。细胞存活率=(存活细胞数+修正数)/(3×10~5)×100％ (修正数=3×10~5-空白组细胞存活数)本实验结果取500μg/ml为实验剂量。     

人白细胞介素2的大规模制备和纯化

作者应用12-0-+四酰佛波醇13-乙酸(TPA)和钙离子载体A23187激活灰黄层淋巴细胞以大规模制备并纯化人白细胞介素2(IL-2)。方法如下:(1)TPA和A23187溶解于无水乙醇,浓度分别为20μg/ml及100μg/ml。(2)每一灰黄层得自献血者24小时内450ml全血,每次试验共需50个灰黄层;体积为1600～1800ml,约含1×10~(11)白细胞。(3)用血细胞洗脱仪去除灰黄层内的红细胞,11次实验去除90%的红细胞,并可使淋巴细胞与粒细胞的比率有所升高。从而解决了应用灰黄层作为大规模生产IL-2的人淋巴细胞的来源。随后用羟乙基淀粉(HES)梯度离心进一     

实验性多价ISCOM亚单位疫苗诱导中和人和牛呼吸道合胞病毒的抗体

用羊肾(OK)细胞系培养人呼吸道合胞病毒Long(RS)株和牛RS病毒A-51908株.细胞在加有50μg庆大霉素与5%胎牛血清的Hanks 199和最低必需培养基中生长.采用微滴板以OK细胞进行病毒滴定.细胞按密度为1×10~5/ml接种并在5%CO_2中培养.将25μl10倍稀释的病毒液加入各孔,经2小时吸附后,各孔再加0.15ml无血清培养基,微滴板在37℃个培育3天,然后用倒式     

小鼠对乙型脑炎减毒疫苗株SA14-14-2的免疫应答

中国使用的乙型脑炎（JE）减毒活疫苗株SA14-14-2是由野毒株SA14减毒而来。SA14-14-2株在小鼠中的神经毒力明显低于SA14株。本文作者将SA14和SA14-14-2株在BHK-21细胞内蚀斑纯化后再在C6/36细胞内传3代,分别得到SA(V）和SA(A）株。对4周龄ICR品系小鼠腹腔接种10~4空斑形成单位（PFU）SA(V）或SA（A）,于接种后不同时间取脑、脾和血液,用BHK-21细胞蚀斑法     

短小棒状杆菌免疫后可以看到粒细胞介导的巨噬细胞活化作用。

作者用短小棒状杆菌(CP)免疫小鼠,以阐明中性粒细胞在巨噬细胞被激活过程中的作用。实验采用贴壁巨噬细胞毒试验和细胞化学分析等方法,证明吞食CP的中性粒细胞有激活巨噬细胞的作用。试验用6～8周龄AB6F1小鼠,腹腔免疫CP700μg/0.1ml后5小时,将分离出的2～5×10~6个炎症中性粒细胞腹腔注射到正常小鼠。4天后收集受     

重组人αA/D干扰素对小鼠Meth-A肉瘤的抗肿瘤作用

本文报道了纯化的αA/D干扰素(IFNαA/D)对小鼠皮下移植肉瘤的抗肿瘤作用。证明了瘤内注射效果大于全身治疗效果,并发现注射IFNαA/D后小鼠血清中α_1-酸性糖蛋白的含量显著增加。作者将甲基胆蒽诱发的小鼠成纤维肉瘤细胞(Meth-A)0.05ml(含1×10~6个细胞)皮下接种到8周龄雌性BALB/c同系小鼠体     

丙酮处理的百日咳菌苗:一种安全有效的新菌苗

作者将百日咳杆菌134或509株接种到Bordet-Gengou斜面培养基中传代,然后在Verwey液体培养基于35℃摇荡培养.离心去除上清,将沉淀物悬浮在生理盐水中.取1份含160×10~9菌/ml悬液加3倍经Seitz过     

对呼吸道合胞病毒亚单位疫苗局部免疫的体液、粘膜和细胞免疫应答

本文用霍乱毒素B链(CTB)作为佐剂在小鼠体内评价了呼吸道合胞病毒(RSV)融合(F)蛋白局部免疫作用.免疫4周龄CD1小鼠、每组4～6只,亚单位疫苗鼻内接种(inl)10μl(含F蛋白2μg和CTB5～10μg),肌肉接种(im)100μl(只含F蛋白2μg),在0和4周各免疫1次,活病毒疫苗inl 50μl[含5×10~5蚀斑形成单位(pfu)],只免疫1次.最后一次免疫后4周用RSV10~6pfu inl攻击,取攻击前的血清检测抗体,攻击后5天的鼻洗液(NW)和支气管肺泡灌洗液(BAL)滴定病毒效价和抗体.     

由转录抑制剂处理的外周血单个核细胞产生的一种新型人体干扰素

外周血单个核细胞(PBMC)在不同的诱生剂作用下能产生两种干扰素(IFN):IFN-α和IFN-γ。作者发现,PBMC经转录抑制剂放线菌素D(ACD)和二呋喃核糖苯并咪唑(DRB)处理后可产生IFN样蛋白(ILP)。用Picoll-Hypaque从正常人外周血中分离出PBMC,用含2%胎牛血清的RPMI1640培养液配成5×10~6/ml悬液,经20μg/ml放线菌酮加5μg/ml ACD或50μg/ml DRB处理1小时,洗去药物后,以1×10~6/ml浓度再悬于预温培养液中,37℃培养过夜。用常规试验检测培养上清液中IFN活性。结果表明,ACD诱生的ILP抗病毒效价     

狂犬病病毒在Mc Coy细胞引起细胞病变

作者用来自退形性变关关节炎患者的膝关节滑膜细胞McCoy株感染狂犬病病毒株,并用Vero细胞作为对照。结果提示Mc Coy细胞不仅较Vero细胞敏感,而且在感染后24～72小时可见细胞病变,收液滴度高1～2个对数(log10)。将BHK_(21)细胞适应的巴斯德固定毒毒株(PV)在Mc Coy上传代至第3代,收液病毒滴度可达1.4±0.8×10~7MICLD_(50)/0.03ml。     

一种预防狂犬病的重组人腺病毒疫苗

作者将克隆在pBR322质粒中的ERA株狂犬病毒糖蛋白结构基因插入到质粒pSV2×3的SV40启动子和poly A附加位点之间,然后将此带有SV40启动子和polyA尾的狂犬病毒糖蛋白基因插入到质粒pFGd×1中人腺病毒5型(Ad5)基因的E3缺失区,从而构成重组人腺病毒质粒(pBCRG)。与Ad5野毒株的EcoR Ⅰ酶切片段共同转录到293细胞复制出带狂犬病毒糖蛋白基因的重组人腺病毒(AdRG1)。经两次蚀斑纯化后得到表达狂犬病毒糖蛋白的AdRG1,然后培养于Hela或KB细胞,再经氯化铯密度梯度离心纯化,接种小鼠和狗。人腺病毒在小鼠细胞中的复制能力很差,在狗细胞中则不能产生感染性病毒,但是重组的人腺病毒显然可以感染小鼠和狗,     

用于发展合成口服疫苗的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的表位图

不耐热肠毒素B亚单位(LT-B)含有引起LT-特异性抗体应答的大部分优势免疫表位.作者用天然LT和重组LT-B免疫小鼠,检测分泌物和血清中抗LT-B抗体应答的特性,并确定抗LT-B的T细胞或B细胞的表位图,以期构建既能刺激粘膜又能产生血清抗LT-B抗体应答的合成肽.作者从产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)H10407株及大肠杆菌K-12株JM83转化体中分别制备LT及重组LT-B,并在都柏林沙门菌中表达重组LT-B.小鼠或于0天口服含25μgLT的磷酸缓冲盐水(PBS)0.25ml,或于0、1和2天各口服含10~(10)CFU都柏林沙门菌EL23株的PBSO.25ml,或于0、7和14天各免疫含50μg合成肽的PBSO.25ml.采集粪浸液及血清,用ELISA测定抗LT-B抗体.体外刺激LT-B特异性T细胞以评估LT-B特异性T细胞的增殖和细胞因子分布.通过细胞因子特异性ELISA检测由LT     

水痘-带状疱疹病毒亚单位候选疫苗的特性和免疫原性

作者选用MRC-5细胞及水痘-带状疱疹病毒(VZV)Hallworth株作为制备疫苗的细胞系和病毒株,通过去污剂和甲醛处理,蔗糖超速离心和丙酮沉淀制备出每剂分别含210、240、250和280μg蛋白(相当于1×10~7VZV感染细胞)的四批疫苗.该法保留了VZV蛋白和一些特异性糖蛋白的免疫原性,并使病毒DNA小于20pg/250μg蛋白(假定为1剂