功能化多壁碳纳米管对L02细胞的作用

目的 探讨羧基化及羟基化多壁碳纳米管对肝细胞的毒性及相关机制.方法 利用透射电镜、扫描电镜、X-射线光电子能谱仪对原始多壁碳纳米管、羧基化多壁碳纳米管和羟基化多壁碳纳米管进行表征.将浓度分别为12.5、25、50、100、200μg/ml 的3种碳纳米管分别与人正常肝细胞系L02细胞共育24 、48 、72h.采用水溶性四氮唑法进行细胞毒性评价,用2,7-二氯荧光黄双乙酸盐法检测细胞内活性氧(ROS)的生成.结果 透射电镜显示3种碳纳米管平均管径均为10～20nm,长度均为10～30μm;扫描电镜显示碳纳米管形貌相似;X-射线光电子能谱仪分析显示功能化多壁碳纳米管分别在289和286ev处特征峰峰值明显增高.水溶性四氮唑法检测显示碳纳米管的细胞毒性作用呈现浓度依赖性并与作用时间具有一定关系.羧基化多壁碳纳米管比原始多壁碳纳米管及羟基化多壁碳纳米管的细胞毒性小.诱导细胞内ROS升高的次序为原始多壁碳纳米管>羧基化多壁碳纳米管>羟基化多壁碳纳米管;碳纳米管诱导细胞内活性氧含量与共育时间有关:碳纳米管与细胞作用36 h以内时,细胞内ROS含量随时间逐渐增加,36h后细胞内ROS含量随作用时间延长逐渐降低.结论 羧基化多壁碳纳米管比原始多壁碳纳米管在低浓度时具有更好的生物相容性,羟基化多壁碳纳米管比原始多壁碳纳米管在48h 后表现出稍好的生物相容性.不同化学表面性质的碳纳米管对细胞活力的影响不同,其与细胞的相互作用可能存在不同机制.     

流式细胞技术分析多壁碳纳米管对人多药耐药性胶质瘤细胞活力的影响

目的:建立荧光探针染色-流式细胞检测术(FCM)的方法用于分析多壁碳纳米管(MWCNTs)对人多药耐药性( MDR)胶质瘤细胞活力的影响。方法:将人MDR胶质瘤细胞给予不同浓度的MWCNTs处理24 h。随后以一系列反映细胞功能不同方面的荧光探针(JC-1、R123、FDA和PI)在原位（in situ）和非原位(ex...     

多壁碳纳米管对小鼠肝和肺细胞蛋白质氧化损伤作用研究

目的 探索多壁碳纳米管对机体蛋白质的氧化损伤作用.方法 将20只老鼠随机分成4组,3个染尘组,1个对照组,用腹腔注射法进行1次性染尘,3个染尘组分别注入0.1、0.2、0.4 mg/ml的多壁碳纳米管(粒径20～40nm)颗粒悬浮液1ml.对照组注入等体积的生理盐水,染毒5天后测定肝脏和肺组织中的蛋白质羰基含量,比较不同浓度的多壁碳纳米管对肝和肺部蛋白质的氧化损伤作用.结果 不同浓度的碳纳米管染尘组小鼠与对照组相比较,肝脏组织蛋白质羰基含量在0.2mg/ml和0.4mg/ml染毒条件下都有显著性差异(P＜0.05).肺组织羰基含量在0.4mg/ml染毒条件下有极显著差异(P＜0.01).在其他浓度条件下都没有统计学意义(P＞0.05).结论 多壁碳纳米管对小鼠肝脏和肺部组织有一定的氧化损伤毒性作用.     

Scara3介导巨噬细胞对多壁碳纳米管摄取和炎症细胞因子产生的影响

目的 研究清道夫受体A成员3(Scara3)在多壁碳纳米管(MWCNT)摄取和细胞因子产生中的作用.方法 在存在或不存在血清的条件下,比较MWCNT刺激后的对照组细胞(NC组)和敲低组细胞(Scara3 k/d组)中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-lβ及IL-6的表达、MWCNT的摄取.结果 与存在血清条件...     

多壁碳纳米管和富勒烯碳60对P-糖蛋白和多药耐药相关蛋白转运功能的影响

目的:比较多壁碳纳米管(MWCNTs)和富勒烯碳60(C60)对P-糖蛋白(Pgp)和多药耐药相关蛋白(MRP)转运活性的影响.方法:将表达Pgp和MRP的大鼠星形胶质细胞分别以MWCNTs和C60处理24 h.以流式细胞术检测细胞对PgP特异性底物罗丹明123和MRP特异性底物荧光素的摄取、潴留和外排转运动力学.并以透射电子显微镜观察细胞对两种材料的内化.结果:MWCNTs对罗丹明123和荧光素的摄取无明显影响,但浓度依赖性地增加两种底物在细胞内的潴留.动力学分析也表明MWCNTs明显降低细胞对两种底物的外排速率.与MWCNTs相比,C60对两种底物的摄取、潴留以及外排速率无明显影响.结论:MWCNTs可抑制Pgp和MRP介导的外排转运.不同的纳米结构可使碳的同素异形体表现出截然不同的细胞效应.     

芒果苷对淋巴瘤Raji细胞增殖、侵袭及相关基因Tiaml表达的影响

目的:观察芒果苷对人淋巴瘤Raji细胞增殖、侵袭能力及T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)表达的影响,以探讨芒果苷抗淋巴瘤的初步作用机制.方法:用MTT法检测芒果苷对人淋巴瘤Raji细胞增殖的影响,用Transwell侵袭实验检测芒果苷对Raji细胞侵袭能力的抑制作用,用RT-PCR法检测芒果苷作用Raji细胞后对Tiam1的mRNA表达的影响.结果:MTT法发现,不同浓度的芒果苷分别与Raji细胞共同孵育72 h后,芒果苷对Raji细胞增殖抑制作用具有明显的剂量和时间依赖性.Transwell侵袭实验发现,用不同药物浓度的芒果苷作用Raji细胞24 h后,可抑制:Raji细胞穿透Transwell小室,随着药物浓度的增加其穿透滤膜的细胞数明显具有剂量依赖性.分别用不同浓度的芒果苷作用Raji细胞24 h后,发现Tiaml的mRNA表达量明显减少,且呈明显的量效关系.结论:芒果苷能抑制人淋巴瘤Raji细胞的增殖和侵袭,其机制可能与同细胞侵袭有密切关系的Yiam1的mRNA表达下调有关.     

p53RFP 表达载体的构建及其对HEK293A细胞增殖的抑制作用

  目的 构建p53RFP 表达载体,观察p53RFP 表达上调对HEK293A细胞生长的影响。方法 利用DNA克隆技术,将人p53RFP基因的编码序列克隆至质粒pcDNA 4/Myc-HisA,经限制性酶切、DNA测序鉴定重组载体。质粒扩增提取,经脂质体介导法转染HEK293A细胞,实时定量RT-PCR、Western blot检测转染后p53RFP mRNA及蛋白的表达水平。采用CCK-8检测p53RFP 表达上调对HEK293A细胞增殖的影响。结果 p53RFP转染后其mRNA及蛋白表达水平均显著上调;p53RFP转染后72 h、96 h细胞增殖受到显著抑制（P<0.01)。结论 成功构建p53RFP表达载体pcDNA 4/-p53RFP,并可在HEK293A细胞有效表达,其表达可抑制HEK293A细胞增殖。     

不同浓度米非司酮对体外培养子宫肌瘤细胞生长的影响

目的：观察米非司酮对体外培养子宫肌瘤细胞的作用。方法：采用绘制细胞生长曲线和MTT法检测了解不同浓度米非司酮对体外培养子宫肌瘤细胞生长的影响。结果：低浓度米非司酮对子宫肌瘤细胞无抑制作用，当药物浓度达到10—6mol／L时其作用才表现出来，随着浓度的增加，其抑制作用增强。结论：米非司酮对子宫肌瘤细胞的作用具有浓度依赖关系。     

转录因子CTCF对人肝癌干细胞及细胞增殖的影响

目的 探讨CCCTC结合因子 （CTCF）蛋白对人肝癌细胞 （HepG2）的肿瘤干细胞的影响以及对HepG2和CNE1 （鼻咽癌细胞系）细胞生存能力的影响。方法 构建pEGFP-N1/CTCF、CTCF shRNA和GFP-shRNA质粒,转染至HepG2和CNE1细胞后,以RT-PCR及Western blot 检测CTCF mRNA和蛋白的表达。采用流式细胞术检测转染CTCF-shRNA质粒后48 h的HepG2细胞中携带表面抗原CD90肿瘤干细胞的比例,以转染GFP-shRNA的HepG2细胞和野生型HepG2细胞为对照。采用MTT方法分别检测转染CTCF过表达重组质粒及CTCF-shRNA质粒后24、48、72 h HepG2和CNE1细胞的生存能力。 结果 pEGFP-N1/CTCF转染后增加HepG2和CNE1细胞中CTCF mRNA和蛋白的表达（与pEGFP-N1相比,P<0.05）,CTCF-shRNA转染则降低表达（GFP-shRNA相比,P<0.05）。流式细胞仪检测结果显示,CD90 +细胞的检出率在转染CTCF-shRNA质粒细胞 〔(1.733 0±0.417 7)%〕高于野生型HepG2细胞 〔(0.575 0±0.062 9)%〕及转染对照GFP-shRNA质粒细胞 〔(0.350 0±0.086 6)%〕 （P<0.05）;MTT实验结果显示CTCF的表达改变对HepG2和CNE1 细胞的生存能力的影响不明显 （P>0.05）。结论 CTCF可抑制人肝癌干细胞生成,对HepG2和CNE1细胞生长无明显影响。     

多壁碳纳米管抑制RAW264.7巨噬细胞的吞噬功能

目的 观察多壁碳纳米管（MWCNT）对巨噬细胞吞噬功能的影响.方法 采用常规细胞培养技术培养RAW264.7巨噬细胞;用流式细胞术定量检测RAW264.7巨噬细胞吞噬异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌（FITC-tagged E.coli k-12）的情况.结果 MWCNT剂量依赖性地抑制RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌,随着MWCNT浓度的增加,RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌的量（用平均荧光强度表示）降低.此外,MWCNT抑制RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌亦呈时间依赖性：用MWCNT（75 μg/ml）孵育RAW264.7细胞12h后,RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌的量与对照组相比降低了约70.4％ （P ＜0.01）,同时参与吞噬活动的RAW264.7细胞的百分比也从对照组的98.6％降低到了92.4％ （P＜0.05）.即使用低剂量的MWCNT（25 μg/ml）孵育RAW264.7细胞较长时间（24h）后,RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌的量与对照组相比仍降低了约77.1％ （P ＜0.01）,同时参与吞噬活动的RAW264.7细胞的百分比也从71.2％降低到了43.4％ （P ＜0.01）.用脂多糖（LPS,10μg/ml）激活RAW264.7细胞后,其吞噬能力明显增强,而MWCNT仍可剂量依赖性地抑制LPS激活的RAW264.7细胞的吞噬能力,与LPS组相比,MWCNT（75 μg/ml）和LPS共孵育组吞噬大肠杆菌的量降低了70.9％ （P ＜0.01）.结论 MWCNT可明显抑制RAW264.7巨噬细胞的吞噬功能.     

糜酶途径对人脐动脉平滑肌细胞增殖及细胞内ERK1/2表达的影响

目的从细胞和分子水平探讨糜酶途径对平滑肌细胞(SMC)增殖的影响及其可能机制。方法以血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)刺激SMC的生长,并通过卡托普利、糜酶抑素及氯沙坦分别阻断血管紧张素转换酶途径、糜酶途径及AT1受体,用MTT法检测各组SMC的增殖情况,用Western blot检测各组SMC内细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的表达变化。结果AngⅠ组、卡托普利组、糜酶抑素组、氯沙坦组与对照组相比SMC均增殖活跃(P<0.05),糜酶抑素组、氯沙坦组与AngⅠ组相比明显抑制SMC的增殖(P<0.05)。各组SMC内ERK1/2表达量无明显变化(P>0.05)。结论糜酶对SMC的增殖起重要作用,其分子机制有待进一步研究。     

HEK293细胞内源性电压门控钾离子通道电生理学特性研究

目的探讨人胚胎肾细胞(HEK293细胞)内源性电压门控钾通道的电生理特性,避免HEK293细胞上内源性离子通道对外源性离子通道表达时的干扰。方法利用全细胞膜片钳技术分析了HEK293细胞内源性电压门控钾通道的电生理特性。结果在HEK293细胞上去极化电压从-80 mV开始可触发1个外向电流。在+100 mV时电流为(422.78±68.87)pA,电流密度为(21.91±3.20)pA/pF。钾通道阻断剂四乙胺(tetraethylammonium,TEA)、4-氨基吡啶(4-aminopyri-dine,4-AP),在将细胞外液钾浓度由4 mmol/L提高到40 mmol/L时,对外向电流有影响。结论正常培养的HEK293细胞本身有内源性的钾通道。该外向电流可能包括了IK、IK1、IKur和Ito。     

脱氢表雄酮对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨脱氢表雄酮对大鼠血管平滑肌细胞活性及细胞周期的影响。方法培养大鼠胸大动脉血管平滑肌细胞系,血小板源性生长因子(PDGF)刺激细胞增殖,采用CCK-8方法观察不同浓度脱氢表雄酮对血管平滑肌细胞活性的影响,用流式细胞分析法检测细胞周期分布。结果1.0、2.5、5.0μg/LPDGF增强大鼠血管平滑肌细胞活性,0.1、1.0、10、100nM脱氢表雄酮抑制细胞活性,两者的作用随浓度增加而增强;脱氢表雄酮可抑制PDGF的作用。脱氢表雄酮的作用增加G1期的细胞数量。结论脱氢表雄酮通过抑制细胞周期的进展,而减少血管平滑肌细胞的增殖。     

白黎芦醇对人晶状体上皮细胞增殖的影响

探讨白黎芦醇(Res)对人晶状体上皮细胞(HLEC)增殖的影响。体外培养HLEC 24h,加入重组人碱性成纤维细胞生长因子(终浓度20μg/L)使HLEC处于增殖状态。MTT比色法检测不同浓度Res作用于增殖状态的HLEC 24h及25mg/L Res作用于增殖状态HLEC 6h、12h、24h、48h对细胞增殖的影响。结果表明不同浓度的Res,25mg/L Res于不同时间对增殖状态的HLEC有明显的抑制作用,并具有时间及剂量依赖关系。提示Res能够明显抑制HLEC增殖,有望成为防治后发性白内障的有效药物。     

川芎嗪对人肾癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 分析不同浓度川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）对人肾癌细胞系（786-O）增殖及凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法 体外培养786-O细胞,与不同浓度川芎嗪溶液（0.5mmol/L、5mmol/L）及溶剂组（DMSO组）作用24、48和72h后,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖率;细胞计数法检测药物作用48h后的细胞数量变化;DAPI染色观察药物作用48h后细胞核形态;半定量RT-PCR技术和Western blot法检测药物作用48h后凋亡相关基因在转录和翻译水平的改变。结果 随着川芎嗪药物浓度的增加,786-O细胞增殖率显著降低,凋亡率增加,细胞数量也显著减少,且胞核出现皱缩或肿胀,核裂增多;凋亡相关基因AIF、caspase-3在转录及翻译水平上均显著增强,无论与空白对照组还是溶剂对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 本研究证实TMP可以显著抑制人肾癌细胞系786-O细胞的增殖,促进其凋亡,为中药抗癌方面的研究提供实验室证据。     

人参二醇组皂甙对肾小管细胞增殖的影响

目的　探讨人参二醇组皂甙 (Panaxadiolsaponins ,PDS)对肾小管细胞增殖的影响。方法　应用噻唑蓝 (thia zollblue ,MTT)染色法观察PDS对正常的和庆大霉素 (Gentamicin ,GM)损伤的肾小管细胞增殖的影响。结果和结论　在一定浓度范围内 (5～ 2 5 μg/ml)PDS促进正常肾小管细胞增殖 ,10 μg/mlPDS作用最明显。PDS浓度过高 (>75μg/ml)则抑制其生长 (P <0 .0 5 )。适量PDS可促进庆大霉素损伤肾小管细胞的增殖