成人急性白血病p16基因的纯合缺失及甲基化研究

目的　观察成人急性白血病p16基因的纯合缺失及甲基化的情况。方法　用PCR法对成人急性白血病患者骨髓标本进行p16基因第 1、第 2外显子纯合缺失及甲基化检测。结果　 1) 71例成人急性白血病患者中p16基因纯合缺失 2例 ,均为B ALL ,AML及正常对照组p16基因未见纯合缺失 ;2 ) 2 8例ALL中 ,5例发生异常甲基化 ;43例ANLL中 ,有 7例发生了异常甲基化。结论　p16基因缺失、异常甲基化可能与白血病的发生及预后有关     

慢性粒细胞白血病急变与p16及降钙素基因关系的研究

目的　探讨p16基因纯合缺失、降钙素基因 (CT基因 )高度甲基化与慢性粒细胞白血病(CML)急变之间的关系。方法　分别采用半定量多重PCR、半定量PCR检测了 2 0例正常人和 5 3例CML患者p16基因纯合缺失和CT基因高度甲基化。结果　在 5 3例CML中 ,慢性期组、急粒变组、急淋变组、混合细胞急变组 ,p16基因纯合缺失、CT基因高度甲基化的阳性率分别为 0 % (0 / 2 0 )、6 2 %(1/ 16 )、6 6 7(8/ 12 )、40 0 % (2 / 5 )和 10 0 (2 / 2 0 )、6 8 8% (11/ 16 )、16 7% (2 / 12 )、40 0 % (2 / 5 )。结论CML急淋变、急粒变分别与p16基因纯合缺失、CT基因高度甲基化存在密切关系 ,而混合细胞急变与两种基因同时异常有关。同时检测这两种基因异常 ,有助于预测CML早期发生急变。     

子宫内膜癌中p16基因缺失及CpG岛甲基化的研究

目的　研究子宫内膜癌中 p16基因缺失及CpG岛甲基化情况。 方法　用PCR技术检测 p16基因在子宫内膜癌中的纯合性缺失及第一外显子异常甲基化。结果　 36例癌组织中 9例发生基因缺失 ,12例发生甲基化 ,未发现基因缺失与甲基化同时存在的病例。结论　 1.p16基因缺失与子宫内膜癌组织学分级严重程度和临床分期呈正相关 ;2 .5’CpG甲基化可能是 p16基因失活的重要机理 ,参与子宫内膜癌发生、发展。     

急性白血病P16基因缺失的意义

目的 探讨周期素依赖性激酶4抑制因子基因（p16）缺失在急性白血病中的意义。方法 采用PCR方法对43例急性淋巴细胞白血病（ALL）,36例急性非淋巴细胞白血病（ANLL）中p16基因的纯合缺失进行了研究。结果 21例ALL存在p16基因纯合缺失,3例ANLL存在p16基因纯合缺失。ALL p16基因缺失率明显高于ANLL（P＜0．05）,p15基因缺失的ALL病人有较高的复发率。结论 ALLp16基因缺失率较高,p16基因缺失之ALL预后不良。     

脑胶质瘤 p16基因的纯合性缺失、高甲基化、突变及表达

目的：研究p16基因在脑胶质瘤中的纯合性缺失、高甲基化和突变等结构变化及其与表达之间的关系。方法：应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR)和PCR甲基化银染分析技术（PCR-methylation assay with silver staining,PCR-MASS)对50例脑胶质瘤标本进行了p16基因纯合性缺失和甲基化检测；用PCR－SSCP和DNA测序技术进行了p16基因突变分析，用免疫组化检测了p16蛋白的表达。结果：50例脑胶质瘤中23例p16蛋白表达阳性，27例表达阴性，表达缺失率54％；9例（18％）纯合性缺失、7例（14％）高甲基化、2例（4％）突变。结论：p16基因在脑胶质瘤中有多种形式的结构异常，其结构的变化使p16蛋白表达障碍。p16基因纯合性缺失和高甲基化是基因失活的重要机制，在脑胶质瘤的发生、发展中起重要作用。     

乳腺癌组织中p16基因变异及CpG岛甲基化状态的研究

目的探讨p16基因在乳腺癌中的纯合缺失、突变和甲基化的改变及与乳腺癌发生、发展的关系.方法采用PCR缺失分析、PCR-SSCP及甲基化敏感内切酶-PCR分析方法检测p16基因在39例乳腺癌组织变化状况,并结合临床病理资料进行分析.结果39例乳腺癌组织有6例出现p16基因纯合缺失,3例发生p16基因突变,p16基因变异频率为15.4%,5'CpG岛11例发生甲基化,甲基化率为28.2%.10例良性乳腺病组织中未发现p16基因改变和甲基化.p16基因变异频率、甲基化状态与临床分期和淋巴结转移密切相关.结论p16基因变异、甲基化是乳腺癌中常见的分子改变,它们在乳腺癌的发生、发展过程中扮演着重要的角色.     

脑胶质瘤p15基因缺失及5′CPG岛甲基化研究

目的　探讨p15基因变异及其与脑胶质瘤的发生、恶性进展的关系。方法　利用PCR和PCR -based甲基化检测技术检测了5 6例脑胶质瘤中p15基因外显子 1缺失及 5′CPG岛甲基化情况。结果　 43例高级别的脑胶质瘤中 ,14例发生了p15基因缺失( 3 2 6% ) ,而 13例低级别的脑胶质瘤中无一例发生p15基因缺失 ,差异具有显著性 (P <0 0 5 )。 1例低级别的脑胶质瘤、3例高级别的脑胶质瘤发生了p15基因 5′CPG岛甲基化。结论　p15基因异常可能参与脑胶质瘤的发生、恶性进展。基因纯合缺失是脑胶质瘤中p15基因失活的主要机制。     

脑胶质瘤p 15 基因缺失及5′CPG 岛甲基化研究

 目的　探讨 p1 5基因变异及其与脑胶质瘤的发生、恶性进展的关系。方法　利用 PCR和 PCR- based甲基化检测技术检测了 56例脑胶质瘤中 p1 5基因外显子 1缺失及 5′CPG岛甲基化情况。结果　 43例高级别的脑胶质瘤中 ,1 4例发生了 p1 5基因缺失 ( 32 .6% ) ,而 1 3例低级别的脑胶质瘤中无一例发生 p1 5基因缺失 ,差异具有显著性 ( P<0 .0 5)。 1例低级别的脑胶质瘤、3例高级别的脑胶质瘤发生了 p1 5基因 5′CPG岛甲基化。结论　 p1 5基因异常可能参与脑胶质瘤的发生、恶性进展。基因纯合缺失是脑胶质瘤中 p1 5基因失活的主要机制.     

肾癌中p16基因状态的研究

 目的　研究肾癌中 p16基因状态与肾癌的关系。 方法　用PCR技术检测MTS1/ p16基因在肾癌中的外显子缺失及第一外显子异常甲基化。结果　 33例癌组织中 7例发生基因缺失 ,10例发生甲基化 ,未发现基因缺失与甲基化同时存在的病例 ,p16基因缺失与肾癌组织学分级严重程度和临床分期呈正相关 ;甲基化集中在分期早 ,分化好的病例。结论　 1.p16基因缺失是晚期事件 ,与预后有关 ;2 .p16基因甲基化可能是肾癌发生的早期事件     

子宫内膜癌p16/MTS1基因失活的研究

目的　探讨 p16 /MTS1基因在子宫内膜癌组织的表达及意义。 方法　采用显微切割 聚合酶链反应方法 ,对 2 9例子宫内膜癌组织和癌旁正常组织中 p16 /MTS1基因纯合缺失进行检测。并用Fisher精确检验的方法 ,对p16 /MTS1基因纯合缺失与临床病理关系进行统计分析。结果　 2 9例子宫内膜癌组织 ,p16 /MTS1基因纯合缺失率为 2 4.14 %。Ⅰ期纯合缺失率为 2 4.0 0 % ,Ⅱ期纯合缺失率为 3 3 .3 3 %。结论　p16 /MTS1基因纯合缺失与子宫内膜癌的发生有关。     

子宫内膜癌p16基因突变及蛋白表达异常的分子学探讨

目的　研究 p16基因的突变及蛋白表达异常在人子宫内膜癌发生中的作用。方法　应用 PCR- SSCP、DNA测序及免疫组化对 4 1例子宫内膜癌中 p16基因第二外显子进行检测 ,研究 p16基因的蛋白表达情况。结果　4 1例子宫内膜癌中 12例存在 p16基因第二外显子 5 2 2 bp的纯合缺失 ,10例存在点突变 (二个突变位点相同 ) ,突变位点之一为第 12 6密码子碱基 GTC→ AAT(错义突变 ) ,另一突变点为 12 7密码子 GCA→ GCG(同义突变 )。缺失及突变共占 5 3.7%。 12例第二外显子缺失标本全部呈现 p16蛋白表达阴性 ,10例点突变标本有 9例出现 p16蛋白表达积分下降呈弱阳性 ,p16蛋白表达异常占 5 6 .0 %。结论　 p16基因的突变及蛋白表达异常与子宫内膜癌的发生有明显相关性     

胰腺癌组织中p16基因缺失及其对p16蛋白表达的影响

目的 探讨胰腺癌组织中p16基因缺失状态及其对p16蛋白表达的影响。方法 采用聚合酶链反应技术分别检测经显微切割方法获取的p16蛋白免疫组化染色阳性和阴性的胰腺癌组织中p16基因纯合性缺失状态并将结果与p16蛋白表达之间的关系进行分析。结果 32例胰腺癌中分别有20例（62．5％）和21例（65．6％）表现为p16蛋白表达丢失和p16基因纯合性缺失，其中有5例发生于p16基因的第1外显子，12例缺失发生于第2外显子，1例发生于第3外显子，另有3例同时发生于第1和第2外显子。此外还发现无p16蛋白表达的胰腺癌组织发生p16基因纯合性缺失的比例（18／20，90．0％）高于有p16蛋白表达的胰腺癌（3／12，25．0％）；在无p16蛋白表达并伴有p16基因缺失的7例胰腺癌病人中仅有1例生存期超过5mo，而二者均无异常的3例胰腺癌的生存期均超过8mo。结论 胰腺癌组织中的p16基因纯合性缺失可以影响p16蛋白的表达，促使胰腺癌病人的预后更差。     

非小细胞肺癌p16基因甲基化及缺失的研究

目的 研究p16基因在非小细胞肺癌组织中的甲基化和缺失情况，探讨其在肺癌诊断中的价值。方法 应用甲基化相关的PCR及双重PCR，检测50例肺癌组织和54例正常肺组织中p16基因第1外显子5′端启动子区域CpG岛甲基化及第2外显子缺失情况。结果 p16基因在非小细胞肺癌组织中甲基化率为32.0%(16/50)。缺失率为28.0%(14/50);54例正常肺组织甲基化率为3.7%(2/54)，缺失率为0，二组比较，甲基化率（Fisher's exact=0.000)及缺失率（Fisher's exact=0.000)均有显著性差异。结论 甲基化和缺失是非小细胞肺癌p16基因失活的主要形式，检测p16基因甲基化和缺失状态可能有助于肺癌的诊断。     

子宫内膜癌中p16基因状态对端粒酶活性的影响

目的探讨子宫内膜癌中p16基因状态对端粒酶活性的影响。方法用PCR技术检测癌组织中p16基因的纯合性缺失及第一外显子异常甲基化,用原位杂交法检测端粒酶的表达。结果36例癌组织中,9例发生p16基因缺失,12例发生甲基化,未发现基因缺失与甲基化同时存在的病例;29例内膜癌端粒酶表达阳性,阳性率为80.56%。9例基因缺失标本中均有端粒酶的阳性表达,p16甲基化与否对端粒酶的表达影响无差异,但端粒酶阳性率在p16基因失活组明显高于p16基因未失活组。结论p16基因失活可以导致激活端粒酶端粒,p16基因失活的不同状态端粒酶激活的影响存在差异。     

葡萄胎中CDKN2A基因纯合性缺失和突变的研究

目的：探讨细胞周期依赖性激酶抑制基因（CDKN2A基因，包括p16^INK4a和p14^ARF基因）外显子1、2的纯合性缺失和突变情况与葡萄胎发生的关系。方法：对38例葡萄胎和30例早孕绒毛的新鲜组织标本进行基因组DNA抽提、PCR扩增．而后应用变性高效液相色谱分析（DHPLC）的方法对扩增产物进行突变检测。结果：1）38例葡萄胎组织样本中．5例发生p16^INK4a基因外显子1的纯合性缺失．其纯合性缺失率为13．16％；而30例早孕绒毛组织标本中．未发现p16^INK4a基因外显子1的纯合性缺失。p16^INK4a外显子1的纯合性缺失率在早孕绒毛组织和葡萄胎组织中差异具有统计学意义（P=0．036）；2）38例葡萄胎组织样本和30例早孕绒毛组织样本中，无一例发生p14^ARF基因外显子1和p16^INK4a外显子2的纯合性缺失：3）经DHPLC检测，38例葡萄胎组织样本和30例早孕绒毛组织样本中，p16^INK4a基因外显子1、2和p14^ARF基因外显子1扩增产物的所有谱图均为单一峰型，未检测到任何位点的突变发生。结论：p16^INK4a基因外显子1的纯合性缺失与葡萄胎的发生具有一定的相关性；在葡萄胎中，CDKN2A基因的遗传变异主要是由于此基因的纯合性缺失造成的，突变可能不是此基因变异的主要形式。     

子宫内膜癌p16／MTS1基因失活的研究

目的:探讨p16/MTS1基因在子官内膜癌组织的表达及意义.方法:采用显微切割-聚合酶链反应方法,对29例子宫内膜癌组织和癌旁正常组织中p16/MTS1基因纯合缺失进行检测.并用Fisher精确检验的方法,对p16/MTS1基因纯合缺失与临床病理关系进行统计分析.结果:29例子宫内膜癌组织,p16/MTS1基因纯合缺失率为24.14%.Ⅰ期纯合缺失率为24.00%,Ⅱ期纯合缺失率为33.33%.结论:p16/MTS1基因纯合缺失与子宫内膜癌的发生有关.     

甲状腺肿瘤中p16基因甲基化及p16蛋白的表达

目的探讨甲状腺肿瘤细胞中p16基因异常甲基化及p16蛋白的表达。方法采用甲基化敏感的限制性内切酶SmaI消化DNA，PCR扩增p16基因外显子1，分析60例甲状腺肿瘤中p16基因外显子15′CpG岛异常甲基化，采用免疫组化Envision法检测60例甲状腺肿瘤标本细胞中p16蛋白的表达。结果60例甲状腺肿瘤中p16基因外显子。5′CpG岛异常甲基化率为15．0％（9／60）。30例甲状腺癌中为30．0％（9／30）；30例腺瘤中无异常甲基化，组间比较差异有显著性（P〈0．001）。60例甲状腺肿瘤中p16蛋白阳性表达率为46．7％／60）。30例腺瘤中p16蛋白阳性表达率为60．0％（18／30）；30例甲状腺癌中为33．3％（10／30），组间较差异有显著性（P〈0．05）。结论p16基因外显子t5′CpG岛异常甲基化与甲状腺癌的发生、发展有关，其主要机制可能与甲状腺恶性肿瘤中p16基因失活导致P16蛋白表达缺失有关。     

INK4系列抑癌基因纯合子缺失、甲基化与白血病预后的实验研究

 目的　研究INK4系列抑癌基因纯合子缺失、甲基化与白血病预后的关系。方法　采用聚合酶链反应（PCR）研究p16基因家族在白血病中纯合子缺失,应用甲基化敏感限制内切酶HpaⅡ结合PCR技术研究白血病患者p16、p15、p18、p19 基因甲基化状况,用单因素、多因素Logistic回归分析其基因失活与急性白血病（AL）预后的关系。结果　基因表达组治疗有效27例（84.38 %）,基因失活组治疗有效11例（28.95 %）,基因表达组治疗有效率明显高于基因失活组（P＜0.001）。单因素、多因素Logistic回归分析结果显示p16、p15 基因失活化疗有效率明显低于基因表达组。结论　p16、p15基因失活可作为AL病程进展、复发、预后的指标之一。     

p16基因突变与子宫内膜癌关系的研究

 目的　研究 p16基因的突变在子宫内膜癌发生、发展中的作用。 方法　应用PCR SSCP及DNA测序对 4 0例子宫内膜癌中 p16基因第二外显子缺失及序列改变进行研究。 结果　 4 0例子宫内膜癌中 12例存在 p16基因的第二外显子 5 2 2bp的纯合缺失 ,10例存在点突变 (突变位点相同 ) ,突变位点之一为第 12 6密码子硷基GTC→AAT(错义突变 ) ,另一突变位点为第 12 7密码子GCA→GCG(同义突变 ) ,缺失及突变共占 5 5 %。结论　p16基因的突变与子宫内膜癌的发生有明显的相关性。     

肝癌患者p16基因甲基化与DNMTs表达相关性分析

目的:研究p16基因启动子区域异常甲基化所导致的基因表达异常在肝癌形成过程中的作用,探讨p16基因甲基化与DNMTs(DNMT1、DNMT2、DNMT3A和DNMT3B)表达之间的相关性。方法:检测肝癌患者癌组织、癌旁组织和肝硬化组织中p16基因的异常甲基化状态及p16、DNMTs基因mRNA的表达水平;采用甲基化特异性PCR技术检测甲基化状态,荧光定量技术检测mRNA的表达。结果:p16基因在肝癌组织、肝硬化组织和癌旁组织中的甲基化率分别为70.5%(31/44)、37.1%(13/35)和9.1%(4/44),肝癌组织和肝硬化组织中的甲基化改变与癌旁组织比较差异有统计学意义,P<0.01。31例甲基化阳性组织中17例p16基因表达降低或缺失,13例甲基化阴性组织中2例基因表达降低或缺失,甲基化阳性与阴性的p16基因表达水平存在明显差异。癌组织和肝硬化组织中4种DNMT mRNA水平均高于相应癌旁组织。其中DNMT1、DNMT3A和DNMT3BmRNA的表达水平差异有统计学意义,DNMT1:P值分别为0.009和0.020;DNMT3A:P值分别为0.005和0.010;DNMT3B:P值分别为0.039和0.036。DNMT2mRNA的表达水平虽然高于相应癌旁组织,但差异无统计学意义,P值分别为0.120和0.350。DNMT1、DNMT 3A和DNMT3B的表达与p16甲基化有相关性,P值分别为0.013、0.025和0.041。结论:p16基因甲基化是肝癌的早期、频发事件,其改变是其基因表达下降甚至失活的重要原因。DNMTs活性的改变可能促进p16基因的异常甲基化。