渴络欣胶囊对db/db小鼠早期糖尿病视网膜病的防治作用研究

探讨渴络欣胶囊对db/db小鼠早期糖尿病视网膜病(diabetic retinopathy,DR)的改善作用。采用目前国际公认的8周龄雄性(45～55 g)db/db自发性糖尿病小鼠动物模型,每周称取体质量和空腹血糖1次,根据体质量灌胃给药。渴络欣低、中、高剂量组灌胃剂量分别为780,1 560,3 120 mg·kg~(-1)·d~(-1);羟苯磺酸钙组灌胃剂量为195 mg·kg~(-1)·d~(-1);对照组和模型组均灌胃相等体积生理盐水;各组连续给药20周。灌胃结束后,进行视网膜光学相干断层扫描,眼底荧光血管造影和视网膜电图。小鼠摘取眼球,分离视网膜,制作石蜡切片,HE染色;免疫组化检测视网膜胶质纤维酸性蛋白表达。渴络欣胶囊对db/db小鼠体质量和空腹血糖并无显著调节作用。相干断层实验结果表明,渴络欣胶囊能够显著改善小鼠视网膜神经节层和内丛状层的厚度;眼底荧光造影结果表明,渴络欣胶囊能够一定程度改善早期糖尿病视网膜病微血管数量;ERG实验表明渴络欣胶囊能够改善DR早期视网膜功能。视网膜组织病理切片染色证实渴络欣胶囊能够一定程度改善各层细胞排列不规则、水肿,免疫组化实验结果显示各组视网膜组织并未出现明显的胶质化。该研究结果表明,渴络欣胶囊能够显著降低db/db糖尿病小鼠视网膜神经节层和内丛状层的厚度;改善DR早期视网膜功能;改善视网膜各层水肿、排列紊乱等。提示渴络欣胶囊能够防治早期糖尿病视网膜病,这为临床上渴络欣治疗糖尿病视网膜病提供了实验依据。     

三七总皂苷对新生血管性视网膜病变的干预效应及机制研究＊

目的探讨三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对视网膜新生血管性病变进程中视网膜神经血管单元病理改变的干预效应和机制,为三七及三七皂苷制剂临床应用于相关视网膜病变的治疗提供部分实验和理论依据。方法本课题采用氧诱导视网膜病变(Oxygen induced retinopathy,OIR)小鼠模型,将7天龄(Postnatal 7,P7)C57/BL6J小鼠根据体质量随机分为正常对照组(NC组),OIR模型组(OIR组)和PNS治疗组(PNS组),造模后从P12开始腹腔注射给药,根据不同的实验内容调整给药天数。于P7、P12、P19、P26和P33测量小鼠的体质量,于P19和P33应用小动物视网膜成像显微镜活体采集视网膜及血管图像,并定量分析;于P33应用全视网膜眼电图Ganzfeld ERG系统进行小鼠视网膜电图波形采集,对a波和b波振幅进行分析;于P46和P66将小鼠处死,取眼球制作眼杯,冰冻切片后进行胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫组织化学分析;于P13和P15处死小鼠,取视网膜组织,采用Real-time PCR分析各组视网膜抗血管内皮生长因子A(Vascular endothelial growth factor A,VEGFA)、血管内皮细胞钙粘蛋白(Vascular endothelial-cadherin,VE-cadherin)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL^-1β)的mRNA表达水平。结果(1)NC组、OIR组和PNS组的小鼠在生长发育中不同天龄的体质量无统计学差异(P>0.05)。(2)P19 OIR组小鼠视网膜血管荧光素钠渗漏面积显著大于NC组(P<0.05),而PNS组渗漏面积显著小于OIR组(P<0.05)。(3)P33 OIR组小鼠视网膜动脉迂曲指数(Retinal artery tortuosity index,RAT index)显著大于NC组(P<0.05),而PNS组显著小于OIR组(P<0.05)。(4)OIR组小鼠b波振幅与NC组相比有统计学差异(P<0.05);PNS组b波振幅与OIR组相比有统计学差异(P<0.05)。(5)P46和P66 OIR组小鼠视网膜Müller细胞GFAP免疫阳性明显增强,并可达内核层和外核层,PNS组GFAP免疫阳性和NC组相近,未见GFAP的免疫阳性异常。(6)P13和P15 OIR组小鼠视网膜中,PNS对VEGFA和IL^-1β的mRNA水平无明显干预作用(P>0.05),但可显著上调VE-cadherin mRNA水平(P<0.05),显著下调TNF-αmRNA水平(P<0.05)。结论PNS对缺氧诱导的视网膜病变相关神经血管单元异常具有一定的干预效应,可能与其显著上调视网膜VE-cadherin的表达水平,下调TNF-α的表达水平有关。     

前列消对BPH模型大鼠前列腺HIF1-α、VEGF表达的影响

目的 明确前列消调节低氧诱导因子1-α(HIF1-α)、血管内皮生长因子(VEGF)治疗前列腺增生(BPH)模型大鼠的作用及机制。方法 将60只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、前列消高、中、低剂量组和西药组。除正常组外，其他各组以手术去势后皮下注射丙酸睾酮(5 mg·kg^-1·d^-1),连续30 d,建立前列腺增生模型。造模完成后，相应给药治疗21 d。取材大鼠前列腺组织，HE染色法观察前列腺组织增生病理变化；免疫组化、免疫荧光法检测血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)、血管内皮生长因子受体1(VEGFR1)表达评估血管新生；Western blot检测低氧诱导因子1-α(HIF1-α)、VEGF caspase表达量，RT-PCR检测大鼠前列腺组织HIF1-α、VEGF caspase-9 mRNA的表达量。结果 与正常组比较，模型组前列腺体积显著性增大，CD31、VEGFR1含量增加，提示腺体内有明显血管增生；经治疗后，前列消高、中剂量组及西药组前列腺体积缩小，降低CD31、VEGFR1含量，HIF1-α、VEGFR caspas...     

芪灯明目胶囊及有效组分对糖尿病视网膜病变大鼠的影响及机制研究

目的:研究芪灯明目胶囊对糖尿病视网膜病变大鼠新生血管形成、炎症反应及氧化应激的影响,探讨芪灯明目胶囊治疗糖尿病视网膜病变可能的作用机制。方法:采用高脂饲料喂养合并腹腔注射链脲佐菌素(STZ)40 mg/kg诱导糖尿病视网膜病变大鼠模型,模型大鼠随机分为模型对照组、羟苯磺酸钙组(150 mg/kg)、芪灯明目胶囊组(600 mg/kg)、葛根总异黄酮组(421 mg/kg)、灯盏细辛总黄酮组(136 mg/kg)、黄芪总皂苷组(43 mg/kg),另设正常对照组。进行体重及血糖的常规监测;造模成功后,连续灌胃给药10周后酶联免疫法测定血清缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和血浆超氧化物歧化酶1(SOD1)含量;硝酸盐还原酶法测定血清一氧化氮(NO)含量,竞争性酶联免疫法测定血浆丙二醛(MDA)含量。结果:芪灯明目胶囊及各有效组分对糖尿病视网膜病变模型大鼠体重、血糖均无明显影响。与正常对照组比较,模型大鼠HIF-1α、VEGF、ANGⅡ、ICAM-1、MDA含量显著增加,SOD1含量显著降低;与模型组比较,芪灯明目胶囊组HIF-1α、VEGF、ANGⅡ、MDA含量显著降低,SOD1含量显著升高;葛根总异黄酮组VEGF、MDA含量显著降低,SOD1含量显著升高;灯盏细辛总黄酮组VEGF、ANGⅡ含量显著降低;黄芪总皂苷组MDA含量显著降低;各给药组对炎症因子均无明显影响。主成分分析表明,模型组与正常对照组有较明显区别,阳性药及复方对疾病均有明显的回调作用,单味药中以葛根总异黄酮疗效最强。结论:芪灯明目胶囊对糖尿病视网膜病变大鼠的保护作用可能主要与抑制氧化应激损伤及新生血管的形成有关。     

通心络抑制KK/Upj-Ay小鼠视网膜组织HIF-1a/VEGF/VEGFR-2表达

目的:观察通心络对自发糖尿病KK/Upj-Ay小鼠视网膜组织缺氧诱导因子-1a(HIF-1a),血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)基因及蛋白表达的影响,探讨通心络对糖尿病视网膜病变的保护机制。方法:40只KK/Upj-Ay小鼠随机分为模型组和通心络低、中、高剂量组(通心络生药1,2,4 g·kg-1,ig给药12周),实验以C57BL/6小鼠为正常组。用血液黏度仪测定全血黏度和血浆黏度、红细胞变形聚集仪测定红细胞聚集指数;应用实时荧光定量PCR法检测各组小鼠视网膜组织中VEGF和VEGFR2的基因表达;Western blot法检测视网膜组织中HIF-1a,VEGF,VEGFR2蛋白的表达。结果:与正常组C57BL/6小鼠比较,模型组小鼠全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数明显升高(P0.01);与模型组比较,应用通心络中、高剂量治疗的KK/Upj-Ay小鼠红细胞聚集指数明显降低(P0.05,P0.01);高剂量通心络组的低切全血黏度降低(P0.05),血浆黏度较模型组也显著降低(P0.01)。模型组小鼠视网膜组织HIF-1a,VEGF,VEGFR2蛋白和VEGF,VEGFR2 mRNA表达较正常组明显增高(P0.01);通心络ig治疗后,各剂量组HIF-1a,VEGF,VEGFR2 mRNA和蛋白表达水平均较模型组明显下降(P0.01)。结论:通心络可抑制自发性糖尿病小鼠视网膜组织HIF-1a/VEGF/VEGFR-2信号途径,此作用可能与其改善糖尿病血液流变学相关。     

银杏叶提取物对缺氧状态下牛视网膜血管内皮细胞增殖的影响

目的观察不同浓度银杏叶提取物对缺氧状态下视网膜血管内皮细胞增殖的影响。方法取第7代牛视网膜血管内皮细胞用于实验,采用二氯化钴(CoCl2)建立细胞化学缺氧模型,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测血管内皮细胞的增殖情况。结果在CoCl2所诱导的化学缺氧下,视网膜血管内皮细胞增殖减少。与缺氧组比较,0.001、0.01、0.1μg/ml银杏叶提取物组作用24 h及48 h后,血管内皮细胞光密度值均增加(P<0.05)。结论银杏叶提取物对缺氧状态下的视网膜血管内皮细胞有明显的促进增殖作用,其作用与银杏叶提取物的剂量有关。     

新风胶囊对佐剂关节炎大鼠滑膜组织缺氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子的影响

目的探讨新风胶囊治疗类风湿关节炎抗血管新生的可能作用机制。方法 50只SD大鼠随机为正常对照组、模型对照组、甲氨蝶呤组、雷公藤多苷片组、新风胶囊组,每组10只。除正常对照组外,其余各组均采用弗氏完全佐剂建立佐剂关节炎大鼠模型。造模后第19天,新风胶囊组给予新风胶囊溶液2.4 g/kg灌胃,雷公藤多苷片组给予雷公藤多苷片溶液10 mg/kg灌胃,均每天1次;甲氨蝶呤组给予甲氨蝶呤溶液3mg/kg灌胃,每周1次;正常对照组、模型对照组给予1.0g/kg生理盐水灌胃,每天1次,各组均灌胃30天。比较各组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数及滑膜组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,并进行滑膜微血管密度(MVD)计数。结果与正常对照组比较,模型对照组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数升高,滑膜组织MVD计数、VEGF、HIF-1α表达显著升高(P0.01);与模型对照组比较,甲氨蝶呤组、雷公藤多苷片组及新风胶囊组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数降低,滑膜组织MVD计数、VEGF、HIF-1α表达显著降低(P0.05或P0.01);并且新风胶囊组HIF-1α较甲氨蝶呤组、雷公藤多苷片组降低明显,VEGF较甲氨蝶呤组降低明显(P0.05)。结论新风胶囊通过降低大鼠滑膜组织VEGF、HIF-1α的表达发挥抑制滑膜血管新生的作用。     

穴位注射川芎嗪抑制氧诱导小鼠视网膜新生血管形成的实验研究

目的探讨穴位注射川芎嗪抑制氧诱导小鼠视网膜新生血管形成的作用。方法将60只C57BL/6J小鼠的健康幼鼠(出生后7 d),随机分为正常对照组、模型对照组(A组)、穴位注射组(B组)、全身用药组(C组),每组15只。除正常对照组外,其余3组于75%高氧环境中饲养5 d,建立氧诱导的视网膜新生血管病变幼鼠模型。B组、C组分别予穴位注射和鼠尾静脉注射川芎嗪稀释液,A组予鼠尾静脉注射等体积的生理盐水。采用双抗体夹心法测定血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)含量,光学显微镜下观察视网膜新生血管内皮细胞核数目。结果 1.血清VEGF含量:正常对照组(9.28±1.26)μg/L、B组(13.35±2.41)μg/L、C组(12.37±3.11)μg/L,均低于A组(18.31±4.33)μg/L,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05);B组与C组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2.视网膜新生血管内皮细胞核数:A、B、C组均可见视网膜新生血管芽,发生率为100%。正常对照组及A、B、C组的新生血管细胞核数分别为6.56±3.41、130.83±41.63、68.39±32.07、59.39+21.78。A组明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01);B组、C组均低于A组,差异有统计学意义(P<0.05);B组与C组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论川芎嗪能减少血管增生性视网膜病变小鼠的血清VEGF含量,抑制氧诱导小鼠视网膜新生血管形成。川芎嗪穴位注射可有效作用于视网膜新生血管病变。     

柿叶黄酮对KKAy小鼠视网膜病变CTGF,VEGF,HIF-1α的影响

目的:观察柿叶黄酮对KKAy小鼠糖尿病视网膜病变(DR)结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF),血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),以及低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的影响及其保护机制。方法:取30只8周龄C57BL6/J小鼠作为正常组,另取150只8周龄雄性KKAy小鼠随机分为KKAy模型组、柿叶黄酮高、中、低剂量组、羟苯磺酸钙组,每组各30只小鼠。柿叶黄酮高、中、低剂量组分别给予柿叶黄酮(50,100,200 mg·kg~(-1)·d~(-1))ig,羟苯磺酸钙组给予羟苯磺酸钙230 mg·kg~(-1)·d~(-1)ig,KKAy模型组及正常组给予等量生理盐水灌胃,共16周。检测血糖(FBG),糖化血红蛋白(GHb),血液流变学指标;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测法检测视网膜内CTGF,VEGF,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测HIF-1α的表达。苏木素-伊红(HE)染色观察视网膜组织损伤情况,TUNEL检测视网膜细胞凋亡程度。结果:与正常组小鼠比较,KKAy模型组小鼠的血糖显著升高,GHb的水平显著降低(P0.01),视网膜CTGF,VEGF和HIF-1α的表达显著增加(P0.01),视网膜组织结构损伤严重。经过16周给药,与KKAy模型组比较,柿叶黄酮中、高剂量组小鼠的血糖显著降低(P0.01),GHb的水平显著提高(P0.01),视网膜CTGF,VEGF和HIF-1α的表达及明显减少(P0.05,P0.01),视网膜组织损伤情况改善明显。结论:柿叶黄酮对KKAy小鼠DR具有保护作用,其机制可能与调节视网膜内CTGF,VEGF和,HIF-1α的表达有关。     

射干麻黄汤对慢性哮喘大鼠缺氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子表达及气道重塑的影响

目的:探讨射干麻黄汤对慢性哮喘大鼠气道重塑和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法:40只雄性SD大鼠按随机数字表法分成4组,每组10只:即哮喘模型组(A组)、射干麻黄汤低剂量组(B组)、射干麻黄汤高剂量组(C组)、正常对照组(D组).采用卵蛋白(OVA)致敏及反复激发建立哮喘大鼠模型,同时B,C组在每次雾化前30 min分别予以射干麻黄汤ig(分别为0.96,3.84 g·kg-1)进行干预,A,D组则同时予以等量生理盐水ig,共8周.采用医学图像分析软件测定支气管总管壁厚度(Wat/Pbm)、气管内壁厚度(Wai/Pbm)及气道平滑肌厚度(Wam/Pbm).免疫组化检测气道壁HIF-1α,VEGF蛋白的表达,RT-PCR观察大鼠肺组织内HIF-1α,VEGF mRNA的表达.结果:图像分析显示,模型组Wat/Pbm,Wai/Pbm,Wam/Pbm分别为(68.19±4.48),( 38.27±1.62),(7.61±1.33) μm2/μm,正常组分别为(34.76±1.38),( 16.25±2.20),(2.89±0.45)μm2/μm,模型组与正常组比较有显著性差异(P＜0.05).经射干麻黄汤低、高剂量治疗后与模型组比较均有显著降低,差异有显著性(P＜0.05).免疫组化及RT-PCR结果显示,模型组肺组织HIF -1α,VEGF mRNA及HIF-1α,VEGF蛋白的表达增高,与对照组比较,有显著性差异(P＜0.05).射干麻黄汤组H1F-1α,VEGF mRNA及HIF-1α,VEGF蛋白的表达降低,与模型组相比,有显著性差异(P＜0.05).结论:射干麻黄汤可抑制哮喘大鼠气道重塑的发生,其机制可能与下调HIF-1α及VEGF的表达有关,且其抑制哮喘气道重塑的程度与射干麻黄汤的剂量呈正相关.