| 结合内标的小鼠诺如病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 袁文,王静,赵维波,张钰,郭鹏举,黄韧.结合内标的小鼠诺如病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用[J].实验动物与比较医学,2015,23(1):49-56. |
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| 作者姓名： | 袁文 王静 赵维波 张钰 郭鹏举 黄韧 |
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| 作者单位： | 广东省实验动物监测所,广东省实验动物监测所,广东省实验动物监测所,广东省实验动物监测所,广东省实验动物监测所,广东省实验动物监测所 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划（编号：2013BAK11B01）；广东省科技计划项目（编号：2011B040200010）；广东省科技计划项目（编号：2012B010300026） |
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| 摘 要： | 目的 建立一种快速、特异、敏感的荧光定量RT-PCR检测方法，用于小鼠诺如病毒（Murine Norovirus，MNV）的检测。方法 根据MNV ORF1-ORF2结合区域中保守序列设计一对特异性引物和Taqman探针，同时设计和制备了内标用于监控假阴性，建立含有内标的荧光定量RT-PCR检测体系，通过优化，得到最佳反应体系和反应条件；构建质粒标准品并以之为模板绘制标准曲线；进行特异性、敏感性和重复性试验，最后用建立的方法检测344份小鼠临床样本，验证在临床应用中的效果。结果 该方法特异性强，与小鼠肝炎病毒、小鼠脑脊髓炎病毒、仙台病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒Ⅲ型、出血热病毒和淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒不发生交叉反应。构建的荧光定量标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系相关系数R2＝0.9986，可以检测到10拷贝/μL的质粒标准品，对MNV活病毒检测可检测到1.78?0-2 TCID50/mL的病毒，检测灵敏度比常规RT-PCR高10倍，比病毒分离高100倍。对5份样品进行5次批内和批间重复检测，检测结果变异系数均小于2%。通过对344份临床样品检测，检测到阳性样品103份，阳性率29.94%。有5份样本结果为假阴性。 结论 本研究建立的MNV荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好，由于加入了内标, 能有效地监控假阴性的出现，适合用于MNV日常监测、临床诊断和流行病学调查。
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| 关 键 词： | 小鼠诺如病毒（MNV） 荧光定量RT-PCR 内标 |
| 收稿时间： | 2014/7/30 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2014/9/13 0:00:00 |
Establishment and application of a fluorescence real-time RT-PCR assay with an internal control for detection of murine norovirus |
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| YUAN Wen,WANG Jing,ZHAO Wei-bo,ZHANG Yu,GUO Peng-ju and HUANG Ren.Establishment and application of a fluorescence real-time RT-PCR assay with an internal control for detection of murine norovirus[J].Laboratory Animal and Comparative Medicine,2015,23(1):49-56. |
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| Authors: | YUAN Wen WANG Jing ZHAO Wei-bo ZHANG Yu GUO Peng-ju and HUANG Ren |
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| Affiliation: | Guangdong Key Laboratory of Laboratory Animals, Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute, Guangzhou 510663, China;Guangdong Key Laboratory of Laboratory Animals, Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute, Guangzhou 510663, China;Guangdong Key Laboratory of Laboratory Animals, Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute, Guangzhou 510663, China;Guangdong Key Laboratory of Laboratory Animals, Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute, Guangzhou 510663, China;Guangdong Key Laboratory of Laboratory Animals, Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute, Guangzhou 510663, China;Guangdong Key Laboratory of Laboratory Animals, Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute, Guangzhou 510663, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Mouse norovirus (MNV) Real-time RT-PCR Internal control |
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