| 仙台病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 周洁,赵丽娟,陶凌云,倪丽菊,高诚,陈洪岩.仙台病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立[J].实验动物与比较医学,2016,24(3):293-298. |
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| 作者姓名： | 周洁 赵丽娟 陶凌云 倪丽菊 高诚 陈洪岩 |
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| 作者单位： | 上海实验动物研究中心,扬州大学兽医学院,上海实验动物研究中心,上海实验动物研究中心,上海实验动物研究中心,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物研究中心 |
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| 基金项目： | 上海市科委科技创新行动计划 |
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| 摘 要： | 目的: 建立一种快捷、灵敏的检测方法，即反转录-环介导等温扩增方法(RT-LAMP)用于仙台病毒(SeV)的检测。方法: 根据GenBank 公布的SeV序列，在其保守区域设计了多套LAMP引物，利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320C仪监测反应进程并筛选最佳引物、反应条件，建立对SeV核酸进行特异性扩增的RT-LAMP 检测方法，并可通过加入目测荧光检测试剂肉眼判断结果。对所建立的方法进行了敏感性、特异性评估并对92份样品进行了检测。结果: 该方法在63℃恒温下作用60min，SeV RNA获得了高效率的特异性扩增，与其余常见小鼠病毒无交叉反应；其敏感性高，最低检出量为2.1TCID50SeV，比RT-PCR方法高102倍。在反应结束后加入荧光检测试剂肉眼判断结果，与RealTime Turbidimeter LA-320 仪监测结果一致。通过对92份样品的RT-LAMP，RT-PCR和间接ELISA方法的检测比对，三者符合率为100%。 结论: 本研究建立的SV RT- LAMP 检测方法具有快速、特异、灵敏,操作简单的特点，具有良好的应用前景。
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| 关 键 词： | 仙台病毒 RT-LAMP 检测方法 |
| 收稿时间： | 2016/2/2 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2016/3/30 0:00:00 |
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